Name: 22C 3를 사용 하 여 반대로 PD L1 항 체 생 검 및 비 작은 세포 폐 암 환자에서 세포학 샘플에 집중 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 배우세요 22C3 항체 농축액을 이용한 비소세포폐암 생검 및 세포학 샘플의 PD-L1 면역조직화학염색법. 이 기술은 면역요법 환자 선별을 위한 신뢰할 수 있는 검사를 제공합니다.

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이 연구는 머 크 & 주식, Inc., 케 닐 워스, 뉴저지, 미국에 의해 후 원했다. Funders 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 결정 게시 또는 원고의 준비에 아무런 역할을 했다.

모든 절차 지역 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 (인간 연구 윤리 위원회, 센터 Hospitalier 대학 드 니스/Tumorothèque BB-0033-00025).
참고:이 프로토콜은 특별히 조정 (autostainer 여기,로 테이블의 자료를 참조 함) 상용 자동된 IHC 염색기에 22C 3 항 체 집중의 사용에 대 한 종양 생 검 및 세포학 샘플.
1입니다. 종양 조직 샘플의 준비
<ol><li>종양 조직 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 (NBF)는 카세트에 수정 했다. 참고: 인접 폐 종양에서 종양 조직은 상계, 온건한 진정에서 pulmonologist, 또는 폐 전문가 의해 수행에 의해 일반적으로 얻어진 다. 주변 병 변 및 확산 폐 질환에 대 한 transbronchial 또는 바늘 생 검 표시 됩니다. 이 절차는 일반적으로 수술 실 또는 집중 치료 단위에서 수행 됩니다.</li>
	<li>파라핀에 카세트를 포함 합니다. 참고: 고정 관류 또는 바로 다음 해 부, 침수에 의해 달성 될 수 있다 하며 일반적으로 8-10 h. 통 볼륨 15-20 x 견본 볼륨 보다 높은 해야 합니다. 그것은 overfixation 항에의 하면 때문에 10 h 이상에 대 한 생 검 조직을 해결 하기 위해 권장 하지 않습니다. 고정 속도 실 온에서 약 1 m m/h.</li>
	<li>조직 프로세서에 왁 스로 고정된 조직 샘플을 침투 ( 재료의 표참조). 참고: 탈수는 70%, 85%, 그리고 90% 농도 증가 함께 3 알코올 목욕에서 수행 됩니다. 물 3 마지막 절대 알코올 목욕에 의해 마지막으로 제거 됩니다. 청소는 3 톨루엔 목욕 그리고 뜨거운 왁 스 탕 (44-60 ° C)에 왁 스 침투에서 수행 됩니다.</li>
	<li>녹은 파라핀으로 가득 금형 내부 조직 포함 ( 재료의 표참조) 응고를 기다립니다.</li>
	<li>톰에 3 μ m의 두께에 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면도.</li>
	<li>이동 충전 된 현미경 유리 파라핀 리본 슬라이드 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>건조 1 h 37 ° c.에 대 한 슬라이드 참고: 조직 섹션 2-8 ° C (선호)에서 또는 실내 온도에 저장 antigenicity, 보존 하 고 단면 15 d 내 얼룩에 25 ° C까지.</li>
</ol>2입니다. 세포학 샘플의 준비
<ol><li>
방부 제 솔루션에서 기관지 빨 래를 수집 (재료의 표 참조). 참고:이 위해 표준 상계 기술이 사용 됩니다.<ol>
<li>게 수 샘플링을 기관지의 분포. 깨끗 한 용기에 세척을 수집 합니다. 레이블 환자와 컨테이너의 첫 번째 그리고 마지막 이름, 생년월일, 및 견본 원본.</li>
	</ol>
</li>
	<li>50 mL 원뿔 튜브를 기관지 빨 래를 전송 하 고 DL Dithiothreitol의 2 세대 추가 30 분, 관 동 ( 재료의 표참조), 분말 및 다음 실 온에서 5 분 동안 250 x g 에서 원심.</li>
	<li>상쾌한을 제거 하 고 mucolytic 솔루션의 10 mL을 추가 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>중간 속도 (레벨 9)에서 20 분에 대 한 샘플을 동요 하 고 실 온에서 5 분 동안 250 x g 에서 원심.</li>
	<li>상쾌한을 제거 하 고 10%를 포함 하는 컬렉션 튜브에 셀 펠 릿 입금 NBF.</li>
	<li>셀 블록 준비 시 약 4 방울을 추가 ( 재료의 표참조) 셀 펠 릿을.</li>
	<li>카세트에 셀 펠 릿, 10%에서 그것을 수정 NBF, 및 파라핀-포함할 셀 블록 준비 및 단면 (1.1-1.7 단계 참조).</li>
</ol>3. PD L1 얼룩 분석 결과
<ol><li>autostainer와 컴퓨터에 전환 합니다.</li>
	<li>Autostainer 아이콘을 두 번 클릭 합니다 하 고 사용자를 선택 합니다.</li>
	<li>'만들기 레이블' 에 그리고 '프로토콜 '을 클릭 합니다.</li>
	<li>22C 3 프로토콜 두 번 클릭. 참고: 프로토콜은 처음 설치 autostainer의 컴퓨터에 ' 프로토콜 만들기 '를 클릭 하 여. 전체 프로토콜 보충 파일 1로 제공 됩니다.</li>
	<li>라벨에 환자의 ID를 작성 하 고 '인쇄'클릭.</li>
	<li>슬라이드에 라벨을 스틱.</li>
	<li>선택한 윈도우의 버튼을 눌러 슬라이드 서랍을 엽니다.</li>
	<li>레이블이 지정 된 슬라이드 업 및 내부를 직면 하 고 라벨 열 패드에 넣습니다.</li>
	<li>슬라이드 서랍을 닫습니다.</li>
	<li>디스펜서에서 뚜껑을 제거 하 고 로드 시 약 시 약의 선반에.</li>
	<li>염색기의 후드를 열고 시 약 회전 목마 만드는 그들이 맞는 위치에 있는지에 선반을 배치.</li>
	<li>후드를 닫습니다.</li>
	<li>소프트웨어 악기를 사용 하 고 '실행'을 클릭에 클릭 합니다.</li>
	<li>IHC 프로시저의 끝에, 수도 물과 청소 솔루션의 한 방울 몇 초 동안 슬라이드를 씻어.</li>
	<li>몇 초 동안 에탄올 100%의 한 목욕 및 에탄올 95%의 두 번째 목욕 슬라이드를 rehydrate.</li>
	<li>장소는 coverslip의 자동된 로딩을 위한 coverslipping 기계에 슬라이드.</li>
</ol>4. PD L1 얼룩의 해석
참고: 정규화 된 병리학 자 PD L1 IHC 시험의 해석을 수행 해야 합니다.
<ol><li>환자의 표본 검사 전에 긍정적이 고 부정적인 컨트롤을 분석 하 여 PD L1 얼룩의 품질을 평가 합니다. 참고: 환자의 표본에서 얻은 결과 컨트롤의 얼룩이 지는 것은 용납할 수 없는 경우 잘못 된 간주 됩니다.</li>
	<li>최소 100 가능한 종양 세포는 현미경의 존재를 확인 합니다. 참고: 보고서 때 환자의 표본은 100 미만 종양 세포.</li>
	<li>4 X의 낮은 확대, 모든 잘 보존 된 긍정적인 및 부정적인 종양 분야를 평가 합니다. 참고: 낮은 확대율에서 부분 막 얼룩 또는 약한 강도 (1 +) 막 얼룩 어려울 수 있습니다 인식 하.</li>
	<li>부분적 또는 완전 한 세포 막 얼룩 점수. 참고: 세포질 얼룩 해석에서 제외 될 수 있다.</li>
	<li>모든 종양 세포 종양이 잘 보존 된 지역에 상대적으로 PD L1 긍정적인 종양 세포의 비율을 평가 하 여 TPS를 계산 합니다. 참고: 가능한 종양 세포만 시험 되어야 한다. 모든 다른 세포 등의 요소, 면역 세포, 회 저 성 세포, 정상 세포, 및 유물, 검사에서 제외 해야 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li>
<li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated%2C+PD-L1-positive%2C+advanced+non-small-cell+lung+cancer+%28KEYNOTE-010%29%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li>
<li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li>
<li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced%2C+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer%3A+a+randomised%2C+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li>
<li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing%3A+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li>
<li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li>
<li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer%3A+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li>
<li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTsao%2C+MS+%22IASLC+ATLAS+of+PD-L1+Immunohistochemistry+Testing+in+Lung+Cancer%22">IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer</a>. , International Association for the Study of Lung Cancer (IASLC) Press. (2017).</li>
<li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Cancer%22%5BJournal%5D)">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li>
<li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023(2017).</li>
<li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li>
<li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Immunohistochemistry+%26+Molecular+Morphology%22%5BJournal%5D)">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li>
<li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li>
<li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma%3A+Comparison+among+cytology%2C+small+biopsy%2C+and+surgical+resection+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li>
<li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li>
<li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

우리 22C 3 PD L1 항 체 집중을 사용 하 여 해당 임상 검증 된 상용 테스트10,11에 그것을 비교 하 여 최적화 된 LDT를 확인 했습니다. 22C 3 집중 항 체 기반 LDT 생 (~ 100%)과 세포학 (~ 95%) 표본 ≥1 %TPS 50% 포인트 인하 하는 TPS에서 PD L1 IHC 22C 3 분석 결과 사용 하 여 결정 하는 PD L1 IHC 식에 비해 사이 높은 일치 율을 보였다. 최근 폐암의 연구에 대 한 국제 협회에 의해 권장로 PD L1 긍정적인 영역 같아야 약 10 PD L1 부정적인 샘플, 10 PD L1 긍정적인 예제, 및 20 샘플의 선형 동적 범위는 임상 검증 PD L1 IHC8을 테스트 합니다. 우리는 120 biopsies을 70 세포학 샘플에 유효성 검사 연구 수행. 전반적으로, 일치는 양성, 표본, 또는 종양 조직학 유형의 컷오프 TPS ...

최근 임상 시험 pembrolizumab는 인간 답게 단일 클로 널 IgG4 카파 isotype 항 체 (PD-1) 프로그램 된 세포 죽음 1 사이의 상호 작용을 차단 하 고 그것의 ligands, PD L1 및 l 2 PD 환자의 치료에서의 효능 입증 고급 NSCLC1,2,,34.
현재, pembrolizumab 두 치료 순진한 환자 50 %와 표 피 성장 인자 수용 체 (EGFR) 없거나 anaplastic 림프 종 키나 제 (ALK) 게놈 종양 착오3의 PD L1 식이 TPS에에서 PD L1 표현 NSCLC의 치료에 대 한 승인 이전에 대 한 ≥11의 PD L1 TPS와 환자 치료.
PD L1 단백질 표정 IHC에서 검색 널리 예측 바이오 마커 분석 결과로 안티-PD-1/PD-L1 요법를 사용 했다. Pembrolizumab 임상 시험에서 포 르 말린 고정 파라핀 포함 (FFPE) 조직 샘플으로 얻은 PD L1 TPS PD L1 IHC 22C 3 동반자 분석 결과5를 사용 하 여 결정 되었다. 이 분석 결과 미국 식품의 약 청 (FDA)에 의해 승인 되었습니다 하 고 종양 PD L1 TPS5의 결정에 대 한 유럽에서 CE 표시 되었습니다.
22C 3 항 체 집중 사용 LDTs와 PD L1 TPS의 안정적이 고 높은 품질 평가 기관에서 추가 글로벌 옵션 pembrolizumab에 대 한 환자 자격에 관한 임상 결정을 지원 하기 위해 필수적입니다. 치료입니다. 병 리 실험실의 많은 동행자 진단 PD L1 IHC 22C 3 분석 결과에 대 한 액세스를 필요가 없습니다. 따라서, 안정적이 고 일관 된 LDTs 호환, 널리 IHC autostainer 플랫폼의 개발은 필수적입니다.
또한, LDTs NSCLC 환자에서 자주 사용할 수 있는 유일한 견본 유형 세포학 샘플을 사용 하 여 설정할 필요가 있다. PD L1 IHC 22C 3 동반자 분석 결과 상계 100 종양 세포를 생성 하는 경우에 절제, 중 핵 바늘 생 검, 그리고 bronchoscopies에 대 한 유효성이 검사 됩니다. 위의 샘플 종류 자주 얻을 수 있습니다, 비록 세포학 샘플은 보다 쉽게 수집 되며 일부 기관6,7에 가장 일반적으로 사용 가능한 샘플 종류. 그러나, 현재는 아무 검증된 진단 분석 결과 세포학 샘플;에 PD L1 식의 평가에 사용할 수 있는 안정적인 LDTs 세포학 샘플와 호환 것 이다 더 높은-품질 PD L1 테스트 용이 하 게.
또한,는 LDT의 임상 유효성 검사를 설정 하는 경우는 IHC 해당 임상 검증 된 상용 테스트8에 유사한 방법으로 수행 되어야 한다. 예를 들어, 몇 가지 중요 한 단계는 항 체 적정, 전처리 지연, 보육 시간, 증폭 시스템9등 직렬 섹션에 동일한 신호를 확인 되어야 한다.
우리는 최근 22C 3 항 체 집중 종양 생 검 및 세포학 샘플10,11PD L1 식을 사용 하 여 최적화 된 LDT를 개발 했다. 우리는 LDT 대 "금 표준" PD L1 IHC 22C 3 분석 결과10,11와 높은 일치 발견. 이 임상 검증된 프로토콜 신뢰할 수 있는, 높은-품질 PD L1 세계적으로 지역 전역에 걸쳐 테스트를 지원 합니다.

<table><tbody><tr><td>NovaPrep HQ1</td><td>Novacyt</td><td>NA</td><td>세포학 검체용 방부제 솔루션</td></tr><tr><td>Novaprep&reg; HQ+ B</td><td>Novacyt</td><td>NA</td><td>점액 분해 솔루션</td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP 6</td><td>Sakura</td><td>6042 VIP 6</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek TEC 5 조직 임베딩 콘솔 시스템</td><td>Sakura</td><td>5229 TEC 5</td><td></td></tr><tr><td>현미경 유리 슬라이드 SuperFrost Plus</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr><tr><td>DL-디티오트레이톨 분말</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3801</td><td></td></tr><tr><td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-889-410</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cytoblock</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>7401150</td><td></td></tr><tr><td>22C3 anti-PD-L1 농축 항체</td><td>Agilent Dako</td><td>#M365329</td><td></td></tr><tr><td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td><td>Agilent Dako</td><td>SK006</td><td></td></tr><tr><td>Autostainer Link 48</td><td>Agilent Dako</td><td>AS480</td><td></td></tr><tr><td>BenchMark ULTRA 자동 염색기</td><td>, Ventana</td><td>#750-600</td><td></td></tr><tr><td>OptiView HQ, 범용 링커</td>, <td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>OptiView, HRP 멀티머</td>, <td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr>, <tr><td>OptiView 증폭 H2O2</td><td>Ventana</td><td>#760-099</td><td></td></tr>, <tr><td>OptiView 증폭기</td>, <td>Ventana</td><td>#760-099</td><td></td></tr>, <tr><td>OptiView 증폭 멀티머</td><td>Ventana</td><td>#760-100</td><td></td></tr><tr><td>OptiView DAB</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>OptiView 구리</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin II</td><td>Ventana</td><td>#790-2208</td><td></td></tr><tr><td>블루잉 시약</td><td>Ventana</td><td>#760-2037</td><td></td></tr><tr><td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td><td>Ventana</td><td>#950-124</td><td></td></tr><tr><td>티슈텍 필름 커버슬리퍼</td><td>사쿠라</td><td>4742</td><td></td></tr></tbody></table>

22c 3를 사용 하 여 반대로 pd l1 항 체 생 검 및 비 작은 세포 폐 암 환자에서 세포학 샘플에 집중

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Pembrolizumab monotherapy PD-L1-표현 고급 비 작은 세포 폐암 (NSCLC) 환자의 첫 번째 및 두 번째 라인 치료에 대 한 승인 되었습니다. PD L1 식 PD L1 immunohistochemistry (IHC) 22C 3 동행자 진단 분석 결과 함께 테스트 점수 (TPS), 종양 조직에 검증 된 종양 비율을 제공 하. 우리는 최적화 된 실험실 개발 테스트 (LDT) 생 검과 세포학 표본에 대 한 널리 IHC autostainer에 22C 3 항 체 (Ab) 집중을 사용 하는 개발. PD L1 TPS 120 쌍된 전체 종양 조직 단면도 및 생 검 견본 평가 되었다 고 70 쌍 생 검 및 세포학 샘플 (기관지 세척, n = 40; 흉 울트라 바이올렛 effusions, n = 30). 집중 기반 LDT 보여주 세포학 생 (~ 100%)와 높은 색인 속도 (~ 95%) 표본 두 TPS에서 PD L1 IHC 22C 3 동반자 분석 결과 사용 하 여 결정 하는 PD L1 IHC 식에 비해 22C 3 Ab 컷 포인트 (≥1%, 50%). 22C 3 Ab 집중을 사용 하 여 두 종양 조직 및 세포학 표본, PD L1 식을 결정 하려면 여기, 최적화 된 LDT NSCLC 환자의 치료에 대 한 자격을 평가 하기 위해 실험실 전세계의 능력을 확장 됩니다. pembrolizumab monotherapy 안정적이 고 재현 가능한 방식입니다.

여기, 그리고 세부 사항에 설명 된 대로이 그룹의 최근 간행물10,11에서 제시 하는 절차를 사용 하 여 최적화 된 LDT 외과 수술 환자에서 120 보관 FFPE NSCLC 생 샘플 임상 검증 되었다 파스퇴르 대학 병원에서 생 검 또는 절제 니스, 2007 년 3 월 및 3 월 2016 사이. 또한, 세포학 샘플의 PD L1 식의 평가 위한 TPS 70 쌍된 조직 생 검 견본 및 기관지 세척에서 준비 된 셀 블록에 평가 되었다 (n = 40) 또는 흉 막 울트라 바이올렛 effusions (n = 30) (수집는 파스퇴르에서 대학 병원, 7 월 2014와 11 월 2016 사이 좋은). 모든 슬라이드 갓 잘라 고 24 시간 이내 스테인드.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-p...

안정적이 고 재현 가능한 방식으로 pembrolizumab, 치료에 대 한 폐암 환자의 자격을 평가 하는 전세계 실험실의 기능을 확장 하려면 우리 22C 3 항 체 집중에는 널리 사용 하는 분석 결과 개발 생 검과 세포학 표본에 대 한 immunohistochemical autostainer

22C 3를 사용 하 여 반대로 PD L1 항 체 생 검 및 비 작은 세포 폐 암 환자에서 세포학 샘플에 집중

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

이러한 방법은 종양 조직 과 세포학 표본 모두에서 PD-L1 발현을 결정하기 위해 22C3 항체 농축액을 이용하여 면역요법을 위한 비소세포 폐암 환자의 선택을 신뢰할 수 있고 재현가능한 방식으로 평가하는 실험실의 능력을 확대할 것이다. 이 기술의 주요 장점은 금 본위제 분석과 매우 일치하며 전 세계 지역에서 신뢰할 수있는 고품질 PD-L1 테스트를 지원할 것이라는 것입니다. 일반적으로, 이 방법에 새로운 병리학자는 때때로 관찰된 과립 염색 때문에 투쟁할 것입니다.더욱이, 인간 세포의 염색은 금 본위제로 관찰된 것보다 다소 강렬하다. 따라서 병리학자의 훈련은 22C3 LDT로 PD-L1 염색의 정확한 해석을 얻기 위하여 필요합니다. 절차를 시연하는 것은 부인이 될 것입니다.마라메 하밀라, 내 실험실에서 기술자. 시작하려면 종양 조직을 카세트에 10% 중성 완충 된 포르말린으로 수정하고 텍스트 프로토콜에 설명 된 대로 파라핀에 카세트를 포함시킴을 포함하십시오. 용융 파라핀으로 채워진 몰드 내부에 침투 된 조직을 포함.파라핀이 고화될 때까지 조직이 금형에 머무르게 하십시오. 그 후, 3 마이크로미터의 두께로 파라핀 임베디드 조직을 절제하기 위해 마이크로토메를 사용한다. 파라핀 리본을 양충전 유리 현미경 슬라이드로 옮기.그런 다음 슬라이드를 섭씨 37도에서 1 시간 동안 건조시하십시오. 첫째, 방부제 용액으로 기관지 세척을 수집합니다. 세탁을 50밀리리터 원내 튜브로 옮기십시오.DL-Dithiothreitol 2 그램을 추가하고 튜브를 30 분 동안 소용돌이치고 실온에서 5 분 동안 250 배 g의 원심분리기를 제공합니다. 상체를 제거하고 점막 용액의 10 밀리리터를 추가합니다. 샘플을 20분 동안 중간 속도로 흔들고 원심분리기를 실온에서 5분 동안 250배 g로 흔들어 줍니다.그 후, 상체를 제거하고 세포 펠릿을 10% 중성 버퍼링 포르말린을 포함하는 수집 튜브에 증정한다. 셀 블록 준비 제의 네 방울을 추가합니다. 셀 펠릿을 카세트로 옮기습니다.이전에 종양 조직 샘플을 준비하기 위해 설명된 프로세스를 사용하여 파라핀 포함 및 단면에 대한 세포 펠릿을 수정합니다. 시작하려면 자동 스테인러와 컴퓨터에 전원을 공급합니다. 자동 염색자 아이콘을 두 번 클릭하고 사용자를 선택합니다.레이블 만들기를 클릭한 다음 프로토콜에서 클릭합니다. 22C3 프로토콜을 두 번 클릭합니다. 환자의 ID를 입력하고 인쇄를 클릭합니다.이 후 레이블을 슬라이드에 붙입니다. 선택한 슬라이드 서랍의 버튼을 눌러 열고 라벨이 있는 슬라이드를 열 패드에 놓고 라벨이 위쪽으로 향하고 있습니다. 슬라이드 서랍을 닫습니다.다음으로 디스펜서에서 캡을 제거합니다. 시약 랙에 시약을 로드합니다. 스테너의 후드를 열고 시약 회전 목마에 시약 랙을 놓고 제대로 맞고 제자리에 고정한 다음 후드를 닫습니다.소프트웨어에서 사용할 계측기를 클릭한 다음 실행 실행을 클릭합니다. IHC 절차가 끝나면 한 방울의 세척 용액과 함께 수돗물을 사용하여 슬라이드를 몇 초 동안 헹구십시오. 각각 몇 초 동안 두 개의 에탄올 욕조에 순차적으로 침전하여 슬라이드를 탈수한 다음 슬라이드를 커버슬립 기계에 넣고 커버 슬립을 자동으로 로드합니다.PD-L1 염색의 품질을 평가하기 시작하려면 환자 표본을 검사하기 전에 양수 및 음수 대조군을 분석합니다. 현미경을 사용하여, 적어도 100개의 실행 가능한 종양 세포의 존재를 확인합니다. 4배의 낮은 배율에서 잘 보존된 모든 양수 및 음수 종양 부위를 평가합니다.그 후, 부분 또는 완전한 세포막 염색점수를 매기고 잘 보존된 종양 부위에 존재하는 모든 종양 세포에 비해 PD-L1 양성 종양 세포의 비율을 평가하여 종양 비율 점수를 계산한다. 이 연구에서는, 종양 비율 점수 또는 TPS는 기관지 세차또는 흉막 삼포액으로부터 제조된 세포 블록에 있는 쌍조직 생검 견본을 위해 평가됩니다. 생검 시편을 이용한 대표적인 염색 패턴은 PD-L1 IHC 22C3 동반자 분석과 비교하여 22C3 항체 농축액을 비교하는 데 사용된다.TPS 점수의 상관관계를 연속 변수로 측정하는 데 사용되는 인트라클래스 상관관계 계수는 LDT와 금본위제 사이의 99%이다. 세포학 시편을 이용한 대표적인 염색 패턴은 또한 PD-L1 IHC 22C3 동반자 분석과 22C3 항체 농축액을 비교하는 데 사용된다. LDT와 생검 및 세포학 샘플의 일치속도는 TPS 컷 포인트 중 하나를 사용할 때 95% 이상입니다.TPS를 연속 변수로 사용하는 동안 클래스 내 상관 관계 계수는 0.88에서 0.90 사이입니다. 일단 마스터되면, 이 기술은 조직 과 세포학 견본 둘 다에 대한 양성 또는 종양 조직학에 대한 차단을 평가하는 금 본위제와 높은 일치비율을 줍니다. 이 절차를 시도하는 동안, 시료는 HE 슬라이드에 대한 참조로 평가되어야하며 면역 세포를 평가하기 위한 보완적인 얼룩이 종양 세포에서만 PD-L1 발현의 오해를 배제하기 위해 수행될 수 있음을 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 미세 바늘 생검, EUS-FNAs 또는 기관지 브러시와 같은 다른 표본을 평가할 수 있습니다. 클리닉에서 설정 한 후, 분석 견고성은 인증을 추구하여 시간이 지남에 따라 유지되어야하며, 표준 운영 절차를 따르고, 정기적으로 외부 품질 평가 계획에 참여하여. 이 비디오를 본 후, 비소세포 폐암 환자로부터 생검 및 세포학 샘플모두에서 널리 이용 가능한 IHC 오토스테너에 22C3 항 PD-L1 항체 농축을 사용하여 최적화된 프로토콜을 구현하는 방법에 대한 좋은 이해를 가져야 한다.

using-22c3-anti-pd-l1-antibody-concentrate-on-biopsy-cytology-samples

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

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