Name: 만능 줄기 세포 유래 Teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: 배우세요 외부 빔 방사선 치료법을 사용하여 소동물 모델에서 만능 줄기 세포 유래 테라토마를 선택적으로 표적하고 치료하는 방법을. 이 기술은 정상 조직 손상을 최소화하면서 종양을 효과적으로 치료할 수 있습니다.

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저자는 국립 연구소의 건강 R01 HL134830 (PKN), K08 HL135343 (KS), 및 5F32HL134221를 감사 하 고 싶습니다 (JWR); 하 워드 휴즈 의학 연구소 (ASL); 그리고 그들의 지원에 대 한 스탠포드 심장 혈관 연구소 (ASL).

이 동물 실험 승인 하 고 제도적 검토 보드와 스탠포드 대학에서 실험실 동물 관리에 관리 패널에서 수행 했다.
1. Ipsc의 세포 배양
<ol><li>인간의 Ipsc lentiviral 프로그래밍 6 잘 플레이트 지하실 멤브레인 매트릭스 (예: matrigel, 라고도 매트릭스 hereon) 코팅에 의해 파생 된 성장.</li>
	<li>매일 변경 풍부한 문화 매체와 Ipsc의 미디어 (참조 테이블의 자료) 37 ° C, 5% CO2배양.</li>
	<li>일단 셀 도달 80-90% 합류 (약 매 4 일), 추가 재조합 세포 분리 효소의 1 mL ( 재료의 표참조) 당 잘 하 고 5 분 동안 37 ° C에서 품 어.</li>
	<li>5 분 후 pipetting으로 우물에서 세포를 분리 하 고 15 mL 튜브에 그들을 전송 300 x g에서 원심.</li>
	<li>원심, 후는 상쾌한 발음 고 풍부한 문화 매체로 셀 펠 릿 resuspend 1:1,000 희석에서 Y27632 억제 물 농축 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>천연된 셀의 셀 수를 수행 하 고 4 × 1052 x 105 의 밀도에서 매트릭스 코팅 6 잘 플레이트에 셀 replate.</li>
</ol>2. 더블-퓨전 취재 원 유전자와 Ipsc의 변환
<ol><li>Ipsc 루틴에 의하여 6 잘 플레이트에 통과 하 고 풍부한 문화 매체 추가 (참조 테이블의 재료) 포함 6 µ g/mL hexadimethrine 평범한 사람. 참고: 이상적인 식민지 크기는 200-400 셀/식민지 최고 변환 효율을 얻을.</li>
	<li>자동 비활성화 lentivirus 들고 반딧불 luciferase 및 녹색 형광 단백질 (FLuc eGFP) 남서 29 회전자 앙금 원심 분리에 의해 인간의 유비퀴틴 promotor-c 구동 50000 x g 2 h 4 ° c.에 대 한 집중</li>
	<li>6 잘 플레이트 10의 감염 (MOI)의 다양성에 있는 Ipsc을 바이러스 집중을 추가 하 고 5% CO2에서 37 ° C에서 밤새 품 어. 참고: 감염의 다양성 (FACS) 스캔 정렬 형광 활성화 된 세포에 의해 분석 하는 단위체 형광 단백질의 식에 의해 결정 되었다.</li>
	<li>다음 날, 실 온에서 6 분에 대 한 300 x g 에서 iPSC 6 잘 플레이트의 원심 분리 하 여 바이러스를 제거 합니다.</li>
	<li>매일 풍부한 문화 매체와 미디어를 변경 ( 재료의 표참조) 및 프로토콜에 의하여 통행. EGFP에 대 한 대략적인 변환 효율을 결정 하는 형광 현미경을 사용 합니다.</li>
	<li>30-40%의 효율성은 FACS 정렬에 충분 합니다. 경우 30-40% 이상 익스프레스 eGFP eGFP 표현 hiPSCs FACS를 진행 합니다.</li>
	<li>Ex vivo FLuc 활동 확인을 잘 당 5000 세포의 밀도에 FACS에 의해 정렬 GFP를 표현 하는 셀 접시.</li>
	<li>품 어 transduced 셀 및 비 불리고 세포 (부정적인 제어 될 것입니다) 생물 발광 기자와 프로브 D-소 (100 μmol/L) 6 헤 미 판 spectrofluorometer와 생물 발광을 측정.</li>
</ol>3. Immunodeficient 쥐에서 기형종 형성 등 측면에서 Psc의 이식
<ol><li>재조합 세포 분리 효소 혼합 문화 (섹션 2 참조)에서 더블-퓨전 취재 원 유전자 (GFP FLuc)으로 불리고 인간의 Ipsc를 포함 하는 6-잘 접시 당 1 mL을 추가 하 고 5 분 동안 품 어.</li>
	<li>잠복기, 후 피 펫 포부와 식에 의해 셀 분산. 문화 매체의 동일한 볼륨을 추가 하 고 4 분 250 x g 에서 원심.</li>
	<li>원심 분리를 완료 한 후 표면에 뜨는 솔루션을 발음 하 고 행렬의 30 µ L에서 셀 펠 릿 resuspend 한 주입 전에 그것의 생존 능력을 유지 하기 위해 얼음에 놓습니다. hemocytometer를 사용 하 여 1 x 106 셀의 수확을 확인 합니다.</li>
	<li>더블-퓨전 리포터 유전자 transfected 세포를 활용 하 여, 매트릭스의 30 µ L에서 (2 절)에서 더블-긍정적인 FACS 세포를 일시 중단 합니다.</li>
	<li>8-10 주 athymic 누드 마우스 1 L/min 산소 2 %isoflurance 사용 하 여 마 취를 유발 하 고 산소의 1 L/min로 유지 보수 2 %isoflurane 날짜를 사용 하 여.</li>
	<li>셀/매트릭스 혼합물을 주사 28.5 G 주사기를 사용 하 여 총 5 x 103 5 x 106 셀 (주입 당 약 100 ul)를의 주사에 대 한 목표 측면에서 피하 공간으로 (참조 테이블의 재료) 서 스 펜 션.</li>
	<li>연장된 기간 및 큰 종양의 성장 예측에 대 한 마우스를 유지 하려는 경우 더 꼬리 사출 사이트를 고려 하십시오.</li>
	<li>마 취 동물 외래까지 온수 패드에 복구할 수 있습니다 (일반적으로 < 1 h) 호흡 속도의 모니터링, 외래까지 발가락의 색깔을 피부.</li>
</ol>4. 생물 발광 기형종 성장 및 세포 생존을 평가 하기 위해 이식된 세포의 (BLI) 이미징
<ol><li>접종 후 원하는 timepoints에 375 mg/kg는 쥐로 기자 프로브 D 소의의 복 (IP) 주사를 수행 합니다.</li>
	<li>IP 주사, 이미지는 생물 발광 후 10 분 30 분 1 분 수집 윈도우를 사용 하 여 5 분 간격에 대 한 마 취 동물 (3.5에 설명 된 단계로 수행 됨)에 신호. 참고: 주간 이미지 인수 하는 것이 좋습니다. 마 취 동안 유지 영상 제공 함으로써 isoflurane 통해 코 콘 흡입.</li>
	<li>데이터 분석에 대 한 관심 (ROI) 영역 씨 신호에 그리고, 다음, 계량 단위로 스테라디안 (/sr 광자/s/cm2) 당 평방 센티미터 당 초당 최대 광자의 방출에 수집 시간에 대 한 정상화.</li>
</ol>5. 기형종 방사선 전 임상 이미지 기반 Irradiator (그림 1)를 사용 하 여
<ol><li>100% 산소 1 L/min의 유량에서 isoflurane 2%를 사용 하 여 최저의 상자에 마우스 anesthetize 마우스는 완전히 마 취 후 이미지 기반 사전 임상 irradiator의 침대에 전송 ( 재료의 표참조). 2 %isoflurane 마 취 유지 지속적으로 통해 코 콘.</li>
	<li>400 프로젝션 이미지 40 kVp, 2 mA x 선 빔를 사용 하 여 360 ° 이상으로 마이크로-CT 이미지를 수집 하 고 그 0.2 m m의 등방성 픽셀 크기와 체적 이미지로 재구성.</li>
	<li>RT_Image 소프트웨어 패키지 (http://rtimage.sourceforge.net/)를 사용 하 여 마이크로-CT 이미지를 사용 하 여 방사선 치료를 계획 하 고 치료를 수행 합니다. 참고: 두 개의 225 kVp x 선 광선, 마우스의 나머지의 표면 굽 도리 널 고 살려주는 기본 내장 하면서 표면 대상 기형종 통과 지향 사용 된 치료 계획에 의하여 이루어져 있다. 광선에 대 한 노출 시간이 대상 종양의 센터에서 복용량은 6 Gy를 분기별 시스템 교정 데이터에 따라 조정 됩니다.</li>
	<li>대상 종양에 18 Gy의 총을 제공 하는 3 연속적인 일에 처리 과정을 반복 합니다.</li>
	<li>동물 들 표준 치료 후 유지 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

전 임상 데이터와 "줄기 세포 관광"의 피해자에서 일화 적인 사례 teratomas를 개발의 위험 PSC 치료23와 관련 된 심각한 단점이 되는지 확인 합니다. 방지 하 고 치료 하는 줄기 세포 치료와 관련 된 종양 약 위험 주의 접근의 발달은, 그러므로, 재생 줄기 세포 치료의 임상 번역 촉진에 중요 한 단계. 이 문서에서 우리는 PSC 관련 teratomas EBRT를 사용 하 여 마우스 모델에서의 치료 대상으로 하는 방법을 설명 하 고 씨 이미지를 사용 하 여 조사 종양의 동적 위축 보여주었다.
우리 인간의 Ipsc 활용 lentivirus 메서드를 프로그래밍 하 여 만든 고 정리 teratomas vivo에서 형성 누드 마우스 모델에 주입. 누드 마우스를 사용 하 여 셀의 간 종 주입 초기 면역성 거부를 방지합니다. 면역 결핍 쥐를 사용 하 여 potentiates tumorigenic 잠재력, 동안 동일한 프로토콜 immunoc...

조직 재생을 위한 줄기 세포 치료의 개발이 발생 했습니다 장벽 수를 지난 몇 십년에 효율적인 임상 배포에 대 한 노력을 방해. 이러한 장애물에 전달, 줄기 세포 immunogenicity 및 양식 teratomas1종양 약 잠재력의 사이트에서 가난한 셀 보존을 포함 됩니다. Tumorigenicity은 특정 임상 관심사의 줄기 세포 이식 받는 사람2를 손상 시킬 수 있습니다. 종양의 형성 때문에 관계가 없는 줄기 세포 주사의 계정은 이미 여러 임상 설정3,,45에 보고 되었습니다. 기형종 형성을 위한 잠재력은 가장 자주 만능 줄기 세포 (PSC) 개발에서 임상 관심사를 인용 했다 지연 및 여러 높은 프로필 배아 줄기 세포 (ESC)의 취소 귀착되 고 유도 만능 줄기 세포 (iPSC) 실험6,7,,89. 따라서, 이러한 의원 성 종양 발생 해야 적절 한 치료를 제공 하는 쪽으로 전용 변환 조사에 대 한 긴급 한 필요는 있다.
날짜 하려면, 줄기 세포 비행 제어를 대부분 전략 tumorigenic 잠재적인2,10Psc의 수를 줄임에 집중 했다. 불행 하 게도, (예를 들어., 1 x 104 1 x 105 셀11) 잔여 세포 수가 적은 검출 한계 보다 훨씬 현재 사용할 수 있는 분석12, 에 의해 인용 된다 기형종 형성에 필요한 13. 이러한 preseparation 메서드를 사용 하 여 다른 제한 등 낮은 효율 및 높은 비용, 새로운 조직 공학 접근, 및 세포의 잠재적인 손상에 대 한 적절 하지 않을 수 있습니다 단일 셀 정지에 대 한 의존도 생존 그리고 engraftment입니다.
몇 연구 치료 옵션 다음 기형종 형성 언급. 아마도 가장 잘 공부 전략으로 줄기 세포14,15"자살" 유전자의 결합 이다. 이 방법은 유전자 줄기 세포를 유도할 수 있는 apoptosis 활성화 유전자 주입된 셀 teratomas를 생산 하는 경우 그로 인하여 구조 접근을 제공 하는 약리 자극 postinjection에 의해 활성화 될 수 있는 통합 조작 포함. 그러나이 방법은,,의 Psc와 약물 저항16의 점진적 개발에 대 한 잠재력의 유전 수정 오프 대상 결과 포함 하 여 중요 한 단점이 있습니다 겪고 있다. 이와 비슷한 방식을 안티 apoptotic 통로17의 억제를 통해 Psc의 선택적 세포 죽음을 유도 하는 작은 분자를 이용 한다. 다른 그룹의 세포 죽음 같은 podocalyxin 같은 단백질 1 (PODXL)18pluripotency 표면 표식에 대 한 항 체를 사용 하 여 Psc의 대상 있다. 작은 분자 또는 항 체의 타이밍 너무 일찍 배달 하 고 있습니다 너무 늦게 전달 하는 경우 치료 효능 부족 Psc의 치료 가능성에 상당한 영향을 의미 합니다. 또한, 작은 분자와이 패션에 사용 되는 항 체의 조직 효과 하지 공부 되었습니다.
이러한 종양을 치료 하는 대체 접근 외부 광속 방사선 요법 (EBRT)를 사용 하 여 의존 하고있다. EBRT 현재19단단한 종양 치료에 고용 기본 형식 중 하나입니다. 등각 EBRT 기형종 주소 지정을 위해 이상적이 게 만들어서 정상 조직에 손상을 피하고 있는 동안 병 적인 구조의 향상 된 타겟팅 EBRT, 양성자 빔과 정위 적 radiosurgery의 개발을 포함 하 여 혁신 활성화 해부학 적인 몸의 민감한 구조20에 형성입니다. 또한,이 방법은 유전자 조작 이나 둘 다 추가적인 임상 안전 함께 고민 하는, 줄기 세포의 바이러스 성 변환 방지 및 효능 우려15. 마지막으로, 마이크로-균 장치에 진보는 설치류21에 EBRT의 응용 프로그램을 사용할 수 있습니다.
이 문서에서 우리는 인간의 Ipsc 쥐에 주입 하 여 기형종 형성의 작은 동물 모델을 만드는 방법을 보여 줍니다. 우리 다음 선택적으로 이러한 종양 vivo에서 주위 조직에 최소한의 피해를 근절 하기 위해 EBRT를 적용 하는 방법을 보여 줍니다. 이 방법은 생물학 분자 및 펩 티 드의 조직 배달은 Psc의 유전자 조작의 대상 오프 효과 피하는 동안 PSC 파생 teratomas에 대 한 타겟된 치료를 제공 합니다. 조사 가능한 목적, 생물 발광 영상 (씨)를 통해 방사선 치료 종양 응답을 추적 취재 원 유전자와 줄기 세포 transduce 위해를 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>유도 만능 줄기 세포 제어 라인</td><td>Stanford University</td><td>Nguyen Lab</td><td>세포 배양 iPSC</td></tr><tr><td>Corning matrigel 기저막 매트릭스 354234</td><td>Fisher Scientific</td><td>CB-40234</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Essential 8 배양 배지</td><td>ATCC-The global bioresource center</td><td>30-2203</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Tryple E</td><td>Gibco</td><td>12605-036</td><td>의 세포 배양iPSC</td></tr><tr><td>Y27632 억제제 2 HCL (ROCK Inhibitor)</td>의 세포 배양 <td>Fisher Scientific</td><td>S104950MG</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>렌티바이러스</td><td>Cyagen</td><td>P170721-1001cjn</td>의 세포 배양 <td>이중 융합 리포터 유전자를 이용한 iPSC 형질도입</td></tr><tr><td>폴리르브레네 감염/형질주입 시약</td><td>Millipore Sigma</td><td>TR-1003-G</td><td>이중 융합 리포터 유전자</td></tr><tr><td>를 이용한 iPSC 형질도입유비퀴틴 프로모터에 의해 구동되는 Fluc-eGFP 리포터 유전자</td><td>스탠포드 대학교</td><td>샘 갬비르 연구소 이중</td><td>융합 리포터 유전자를 이용한 iPSC의 형질도입</td></tr><tr><td>D-루시페린</td><td>퍼킨 엘머</td><td>122799</td><td>이중 융합 리포터 유전자와 BLI</td></tr><tr><td>유세포 분석기 (BD FACSARIA III)</td>를 이용한 iPSC의 형질도입 (BD FACSARIA III)<td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>FACSAria</td><td>이중 융합 리포터 유전자를 사용한 iPSC의 트랜스duction</td></tr><tr><td>(Glomax Navigator System)</td><td>Promega Bio Systems, Sunnyvale, CA</td><td>GM2000</td><td>이중 융합 리포터 유전자를 이용한 iPSC 트랜스duction</td></tr><tr><td>Xenogen IVIS 200&nbsp;</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>BLI</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CDS019936</td><td>조사</td></tr><tr><td>X-Rad SmART 이미지 유도 조사기&nbsp;</td><td>Precision X-ray Inc., North Branford, CT</td><td>X-Rad SmART</td><td>조사</td></tr><tr><td>RT_Image 소프트웨어 패키지</td><td>Stanford University (http://rtimage.sourceforge.net/)</td><td>RT_Image v0.2&beta;</td><td>방사선 조사</td></tr></tbody></table>

만능 줄기 세포 유래 teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

"줄기 세포 관광," 전세계 줄기 세포의 관계가 없는 이식의 피해자의 증가 줄기 세포 이식의 안전에 대 한 우려를 제기 했다. Teratomas 아직도 이식 시 잔여 미 분화 줄기 세포의 존재에서 발생할 수 있습니다 또는에 자발적인 돌연변이에서 분화의 이식 분화 보다는 미 분화 세포는 일반적인 관행, 비록 셀입니다. 줄기 세포 치료는 종종 해부학 민감한 사이트에 전달 됩니다, 때문에 작은 종양 임상, 실명, 마비, 인지 이상, 그리고 심장 혈관 장애의 결과로 파괴 될 수 있습니다. 이 사이트에 대 한 외과 액세스 제한, 몇 가지 치료 옵션과 함께 환자를 떠나 있을 수 있습니다. 줄기 세포 비행 제어는, 따라서, 줄기 세포 치료의 임상 번역에 대 한 중요 한입니다.
외부 빔 방사선 장기 주변에 부상을 최소화 하면서 기형종 부담을 줄이려면 타겟된 치료 제공의 효과적인 수단을 제공 합니다. 또한,이 방법은 유전자 조작 방지 또는 줄기 세포는 바이러스 성 변환 추가 임상 안전성 및 효능 우려와 관련 된. 여기, 우리는 쥐에 있는 pluripotent 줄기 세포 유래 teratomas를 만들려고 하 고 선택적으로 이러한 종양 vivo에서 ablate을 외부 빔 방사선 치료를 적용 하는 프로토콜을 설명 합니다.

일반적으로 주입 된 쥐 씨 (그림 2)를 영상으로 확인 4-8 주 후 기형종 성장 형성을 시연할 예정 이다. 종양은 luciferase 신호 (그림 2)에서 크게 감소의 결과로 주어진 셀 납품 후 1 개월 18 Gy의 누적 복용량 방사선 때 극적으로 축소 됩니다. 중요 한 것은, 정상 조직의 조사 사이트에서 5mm를 가져온 어떤 상당한 피해 (그림 3)에 표시 되지 않습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58115/58115fig1.jpg"> 그림 1: EBRT와 종양의 치료에 대 한 프로토콜의 도식.</str...

만능 줄기 세포 유래 teratomas 위한 치료 전략에 대 한 연구는 줄기 세포 치료의 임상 번역 중요 합니다. 여기, 우리 첫째, 쥐에서 그리고, 선택적으로 대상 줄기 세포 유래 teratomas를 생성 하 고 생체 조건 작은 동물 irradiator를 사용 하 여 이러한 종양을 치료 하는 프로토콜을 설명 합니다.

만능 줄기 세포 유래 Teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

이 절차의 전반적인 목표는 작은 동물 외부 빔 방사선 요법의 생체 내 효과의 평가를 위해 마우스에서 줄기 세포 유래 성각기를 선택적으로 표적으로 하는 것이다. 외부 방사선 빔 치료의 주요 장점은 체계적으로 전달 된 치료의 오프 타겟 부작용을 피하는 줄기 세포 관련 성소에 대한 표적 요법이라는 것입니다. 외부 빔 방사선 요법의 어드밴스는 정상 조직에 손상을 피하면서 작은 성소의 특정 표적을 가능하게했으며,이 치료는 방사선에 민감한 성소 를 치료하는 데 이상적입니다.이 방법은 세포 치료를 위한 최적화 전략에 대한 통찰력을 제공할 뿐만 아니라 인간 치료에 임상적으로 적용될 가능성이 있습니다. 먼저 iPSC가 들어 있는 6웰 플레이트를 복용합니다. 면역결핍동물에서 테트라토마 형성을 유도하기 위해 실온에서 5분 간 배양하는 이중 융합 기자 유전자로 변형된 인간 유도만능 줄기세포를 함유하는 6웰 플레이트의 웰당 재조합 세포 해리 효소 믹스의 1밀리리터를 첨가한다.인큐베이션의 끝에서 배관에 의해 세포를 분산시키고 각 웰에 세포 배양 배지의 동일한 볼륨을 추가하여 효소 반응을 중지한다. 계산을 위해 15 밀리리터 원판 튜브에서 단일 셀 서스펜션을 당깁니다. 원심분리가 완료되면, 상류체를 흡인하고 30 마이크로리터의 Matrigel 매트릭스 용액으로 펠릿을 재보종하여 튜브를 얼음 위에 놓습니다.이중 융합 보고원 전도 세포를 활용하는 경우, 이러한 이중 양성 영향 세포는 또한 매트릭스의 30 마이크로리터에서 중단되어야 한다. 다음으로, 각 세포 집단을 28.5 게이지 바늘을 장착한 1밀리리터 주사기에 적재하고 각 마취8주에서 10주 된 아티믹 누드 수신자 마우스에 발가락 핀치에 대한 반응이 부족한지 확인합니다. 이어서, 각 받는 동물의 등갈 측면에 하나의 세포 매트릭스 혼합물을 피하한다.접종 후 적절한 실험 시점에서 각 수령인에게 1킬로그램당 375 밀리그램을 주입합니다. 10분 후 각 마취 기자 프로브의 생물 발광 신호는 표준 생체 발광 이미징 프로토콜에 따라 5분 간격으로 1분 간의 획득 창을 사용하여 30분 동안 동물을 주입했습니다. 기종 조사의 경우, 적절한 실험 시간 지점에서, 먼저 이미지 유도 전임상 조사기의 침대에 마취 된 받는 동물을 배치하고 40 피크 킬로전압, 2 밀리암프 엑스레이 빔을 사용하여 360도 이상의 400 프로젝션 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 이미지 세트를 획득하고, isotropic 크기의 부피 영상으로 이미지를 재구성합니다.성수기의 체적 이미지를 재구성하는 것이 중요합니다. 이 심상은 주변 조직의 오프 타겟 방사선을 최소화하면서, 단지 성수기에게 치료의 특정 납품을 위한 방사선 처리를 계획하는 것을 도울 것입니다. 그런 다음 마이크로 CT 이미지와 RT 이미지 소프트웨어 패키지를 사용하여 방사선 처리 프로토콜을 계획합니다.표적 종양에 총 18개의 회색을 전달하기 위해 3일 연속 치료를 투여한다. 주입된 마우스는 전형적으로 생물 발광 화상 진찰에 의해 확인된 종양 세포 주입 후에 4주에서 eigth 주를 기적으로 보여줍니다. 세포 전달 후 한 달 후 18개의 회색의 누적으로 조사되면 종양이 급격히 수축되어 루시파아제 신호가 현저히 감소하게 된다.중요한 것은, 이 심상이 보여주듯이, 조사된 사이트에서 5밀리리터를 수확한 일반적인 조직 생검은 어떤 중요한 손상을 지속하지 않는 것처럼 보이지 않습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 생체 내에서 줄기 세포 유래 기종을 만들고 외부 빔 방사선으로 효과적이고 안전하게 치료하는 방법에 대한 명확한 이해가 있어야 합니다. 이 간단한 접근은 인접한 조직을 피하면서 표적 종양을 조사하기 위하여 방사선 광선 치료의 시리즈가 처방될 수 있던 후에 피사체의 고해상도 CT 심상을 취득하는 것을 요구합니다.방사선 작업은 매우 위험할 수 있으며 적절한 방패를 사용하는 것과 같은 예방 조치는 항상 이 절차를 수행하는 동안 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

targeted-selective-treatment-pluripotent-stem-cell-derived-teratomas

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

인간 pluripotent 줄기 세포 (hPSCs)은 다양한 질병을 치료하기 위해 무수히 많은 가능성이 있습니다. 이러한 세포의 유틸리티들은 신체의 모든 세포 유형으로 구별 수있다는 사실에있다. 여기 hPSCs의 pluripotence을 설명하는 데 사용됩니다 teratoma 분석을 설명합니다.

Testis 캡슐의 Teratoma 생성

이 문서의 목적은 chemoradiation 연구를위한 orthotopic glioblastoma 모델의 사용을 설명하는 것입니다. 이 문서에서는 이온 주입, 세포 가공 불구하고 이동하고 intracranial 모델을 사용하여 마우스의 방사선 치료합니다.

Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

이 비디오는 종양 치료를 위해 면역접합체와 방사선 리간드를 투여하는 사전 표적 방사선 면역 요법 또는 PRIT의 기술을 설명합니다. 이 방사성 면역 요법은 건강한 조직에 대한 방사선량을 줄이고 항체 기반 벡터와 호환되지 않는 반감기가 매우 낮은 방사성 핵종을 사용합니다.

사전 표적 방사선 면역 요법: 종양에 치료용 방사성 핵종을 표적 전달하는 방법

우리는 이와 같은 강력한 광열 치료 에이전트 기능, 구조에 의존 형광 자기 담금질 독특한 광열 속성이 porphysomes라는 새로운 내장 다기능 nanovesicles을 개발. 우리는 고압 압출을 사용하여 porphysomes을 공식화하고 이종 이식 종양 모델에서 자신의 광열 치료 효과를 조사 하였다.

한 분, Porphysomes를 사용하여 하위 한 와트 광열 종양 절제, 내장 다기능 Nanovesicles

차 침략 동 소성 방광 암 이종 이식을 접종하는 설치 방법은 개복 수술과 방광의 동원을 필요로한다. 이 절차는, 마우스에 상당한 이환율을 입히고 기술적으로 어렵고 시간 소모적이다. 따라서 우리는 경피적 접근 방식은 초음파 안내를 이용하는, 높은 정밀도를 개발했다.

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

줄기 세포는 내재 된 종양 향성으로 인해 뇌종양 치료제로서 유망한 치료제입니다. 비 침습적 비강 내 줄기 세포 전달은 혈액 뇌 장벽을 우회하여 임상 번역의 가능성을 보여줍니다. 이 기사는 신경 교종 마우스 모델에서 비강 줄기 세포 전달의 기본 원리를 요약합니다.

마우스 모델에서 아교 모세포종에 치료 용 줄기 세포 비강 전달

과거에 작은 동물 조사 대상 잘 delineated 종양 볼륨 수 없이 일반적으로 수행 되었다. 목표는 쥐에서 인간 세포종의 치료를 모방 했다. 작은 동물 조사 플랫폼을 사용 하 여, 우리는 MRI 기반 3D 등각 방사선 조사 전 임상 설정에서 애완 동물 기반 하위 볼륨 증폭을 수행.

애완 동물 및 MRI 유도 세포종 쥐 모델의 방사선 마이크로 irradiator를 사용 하 여

여기, 우리는 암에 대 한 신뢰할 수 있는 전 임상 모델을 만드는 생물학 관련 사이트에서 초음파 유도 신경 (NB) 및 Ewing의 육 (ES) 세포의 주입을 활용 (설립 세포 및 종양 환자에서 파생 된 셀) 프로토콜 제시 연구입니다.

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

이 프로토콜 합성 및 트랜스-cyclooctene (TCO)의 특성에 설명 합니다-항 체와 177루 표시 tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT)에 대 한 수정. 또한, 그것은 자세히 biodistribution vivo에서 및 colorectal 암의 murine 모델에 경도 치료 연구에 대 한 이러한 두 가지 구조를 사용 하 여를 설명합니다.

Pretargeted Radioimmunotherapy 역 전자 수요 Diels 오리 나무 반응에 따라

여기서는 정확성과 효율성을 최적화하기 위해 사내에서 개발한 알고리즘을 사용하여 쥐 교모세포종 모델에서 전임상 양전자 방출 단층 촬영 기반 방사선 요법을 수행하는 프로토콜을 제시합니다.

작은 동물 방사선 연구 플랫폼을 사용하여 교모 세포종 쥐 모델에서 양전자 방출 단층 촬영 기반 용량 페인팅 방사선 요법

교모세포종은 파괴적인 형태의 원발성 뇌암이며, 레이저 간질성 열 요법은 수술이 불가능한 교모세포종에 대한 기존 외과적 절제술의 유망한 대안으로 부상하고 있습니다. 이 프로토콜은 치료 효과 또는 보조 및 조합 치료를 연구하는 데 사용할 수 있는 최적화된 전임상 마우스 모델을 설명합니다.

교모세포종의 레이저 간질성 열처리 치료를 위한 면역 역량 있는 쥐 모델

배우세요 외부 빔 방사선 치료법을 사용하여 소동물 모델에서 만능 줄기 세포 유래 테라토마를 선택적으로 표적하고 치료하는 방법을. 이 기술은 정상 조직 손상을 최소화하면서 종양을 효과적으로 치료할 수 있습니다.

만능 줄기 세포 유래 Teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료

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