만능 줄기 세포 유래 Teratomas 외부 빔 방사선을 사용 하 여 작은 동물 모델에서의 타겟 및 선택적 치료

이 절차의 전반적인 목표는 작은 동물 외부 빔 방사선 요법의 생체 내 효과의 평가를 위해 마우스에서 줄기 세포 유래 성각기를 선택적으로 표적으로 하는 것이다. 외부 방사선 빔 치료의 주요 장점은 체계적으로 전달 된 치료의 오프 타겟 부작용을 피하는 줄기 세포 관련 성소에 대한 표적 요법이라는 것입니다. 외부 빔 방사선 요법의 어드밴스는 정상 조직에 손상을 피하면서 작은 성소의 특정 표적을 가능하게했으며,이 치료는 방사선에 민감한 성소 를 치료하는 데 이상적입니다.

이 방법은 세포 치료를 위한 최적화 전략에 대한 통찰력을 제공할 뿐만 아니라 인간 치료에 임상적으로 적용될 가능성이 있습니다. 먼저 iPSC가 들어 있는 6웰 플레이트를 복용합니다. 면역결핍동물에서 테트라토마 형성을 유도하기 위해 실온에서 5분 간 배양하는 이중 융합 기자 유전자로 변형된 인간 유도만능 줄기세포를 함유하는 6웰 플레이트의 웰당 재조합 세포 해리 효소 믹스의 1밀리리터를 첨가한다.

인큐베이션의 끝에서 배관에 의해 세포를 분산시키고 각 웰에 세포 배양 배지의 동일한 볼륨을 추가하여 효소 반응을 중지한다. 계산을 위해 15 밀리리터 원판 튜브에서 단일 셀 서스펜션을 당깁니다. 원심분리가 완료되면, 상류체를 흡인하고 30 마이크로리터의 Matrigel 매트릭스 용액으로 펠릿을 재보종하여 튜브를 얼음 위에 놓습니다.

이중 융합 보고원 전도 세포를 활용하는 경우, 이러한 이중 양성 영향 세포는 또한 매트릭스의 30 마이크로리터에서 중단되어야 한다. 다음으로, 각 세포 집단을 28.5 게이지 바늘을 장착한 1밀리리터 주사기에 적재하고 각 마취8주에서 10주 된 아티믹 누드 수신자 마우스에 발가락 핀치에 대한 반응이 부족한지 확인합니다. 이어서, 각 받는 동물의 등갈 측면에 하나의 세포 매트릭스 혼합물을 피하한다.

접종 후 적절한 실험 시점에서 각 수령인에게 1킬로그램당 375 밀리그램을 주입합니다. 10분 후 각 마취 기자 프로브의 생물 발광 신호는 표준 생체 발광 이미징 프로토콜에 따라 5분 간격으로 1분 간의 획득 창을 사용하여 30분 동안 동물을 주입했습니다. 기종 조사의 경우, 적절한 실험 시간 지점에서, 먼저 이미지 유도 전임상 조사기의 침대에 마취 된 받는 동물을 배치하고 40 피크 킬로전압, 2 밀리암프 엑스레이 빔을 사용하여 360도 이상의 400 프로젝션 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 이미지 세트를 획득하고, isotropic 크기의 부피 영상으로 이미지를 재구성합니다.

성수기의 체적 이미지를 재구성하는 것이 중요합니다. 이 심상은 주변 조직의 오프 타겟 방사선을 최소화하면서, 단지 성수기에게 치료의 특정 납품을 위한 방사선 처리를 계획하는 것을 도울 것입니다. 그런 다음 마이크로 CT 이미지와 RT 이미지 소프트웨어 패키지를 사용하여 방사선 처리 프로토콜을 계획합니다.

표적 종양에 총 18개의 회색을 전달하기 위해 3일 연속 치료를 투여한다. 주입된 마우스는 전형적으로 생물 발광 화상 진찰에 의해 확인된 종양 세포 주입 후에 4주에서 eigth 주를 기적으로 보여줍니다. 세포 전달 후 한 달 후 18개의 회색의 누적으로 조사되면 종양이 급격히 수축되어 루시파아제 신호가 현저히 감소하게 된다.

중요한 것은, 이 심상이 보여주듯이, 조사된 사이트에서 5밀리리터를 수확한 일반적인 조직 생검은 어떤 중요한 손상을 지속하지 않는 것처럼 보이지 않습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 생체 내에서 줄기 세포 유래 기종을 만들고 외부 빔 방사선으로 효과적이고 안전하게 치료하는 방법에 대한 명확한 이해가 있어야 합니다. 이 간단한 접근은 인접한 조직을 피하면서 표적 종양을 조사하기 위하여 방사선 광선 치료의 시리즈가 처방될 수 있던 후에 피사체의 고해상도 CT 심상을 취득하는 것을 요구합니다.

방사선 작업은 매우 위험할 수 있으며 적절한 방패를 사용하는 것과 같은 예방 조치는 항상 이 절차를 수행하는 동안 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.