Name: Kynurenine 및 Kynurenic 산의 고성능 액체 크로마토그래피 측정: 생화학 인식 및 쥐에 수 면에 관한 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 학습하세요 쥐 뇌와 혈장에서 kynurenine 및 kynurenic acid를 HPLC로 측정하는 생화학적 방법을 통해 정신질환 관련 신경대사물질 변화를 연구하는 기법을. 이 방법은 신경과학 연구에 유용합니다.

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현재 학문 건강의 국가 학회 (R01 NS102209)와 클레어 E. 포브스 신뢰에서 기부금에 의해 부분적으로 투자 되었다.

<ol><li>Leklem, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+aspects+of+tryptophan+metabolism+in+humans+and+other+species%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Quantitative aspects of tryptophan metabolism in humans and other species: a review.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 24 (6), 659-672 (1971).</li>
<li>Pocivavsek, A., Notarangelo, F. M., Wu, H. Q., Bruno, J. P., Schwarcz, R. Astrocytes as Pharmacological Targets in the Treatment of Schizophrenia: Focus on Kynurenic Acid. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128009819000250">Modeling the Psychophathological Dimensions of Schizophrenia - From Molecules to Behavior</a>. Pletnikov, M. V., Waddington, J. L. , Elsevier, Academic Press. London, San Diego, Waltham, Oxford. 423-443 (2016).</li>
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<li>Perkins, M. N., Stone, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+iontophoretic+investigation+of+the+actions+of+convulsant+kynurenines+and+their+interaction+with+the+endogenous+excitant+quinolinic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">An iontophoretic investigation of the actions of convulsant kynurenines and their interaction with the endogenous excitant quinolinic acid.</a> Brain Research. 247 (1), 184-187 (1982).</li>
<li>DiNatale, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+is+a+potent+endogenous+aryl+hydrocarbon+receptor+ligand+that+synergistically+induces+interleukin-6+in+the+presence+of+inflammatory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid is a potent endogenous aryl hydrocarbon receptor ligand that synergistically induces interleukin-6 in the presence of inflammatory signaling.</a> Toxicological Sciences. 115 (1), 89-97 (2010).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+as+a+ligand+for+orphan+G+protein-coupled+receptor+GPR35%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid as a ligand for orphan G protein-coupled receptor GPR35.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (31), 22021-22028 (2006).</li>
<li>Alexander, K. S., Wu, H. Q., Schwarcz, R., Bruno, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+elevations+of+brain+kynurenic+acid+impair+cognitive+flexibility%3A+normalization+by+the+alpha7+positive+modulator+galantamine%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berlin%29%22%5BJournal%5D)">Acute elevations of brain kynurenic acid impair cognitive flexibility: normalization by the alpha7 positive modulator galantamine.</a> Psychopharmacology (Berlin). 220 (3), 627-637 (2012).</li>
<li>Chess, A. C., Landers, A. M., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-kynurenine+treatment+alters+contextual+fear+conditioning+and+context+discrimination+but+not+cue-specific+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">L-kynurenine treatment alters contextual fear conditioning and context discrimination but not cue-specific fear conditioning.</a> Behavioural Brain Research. 201 (2), 325-331 (2009).</li>
<li>Chess, A. C., Simoni, M. K., Alling, T. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevations+of+endogenous+kynurenic+acid+produce+spatial+working+memory+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Elevations of endogenous kynurenic acid produce spatial working memory deficits.</a> Schizophrenia Bulletin. 33 (3), 797-804 (2007).</li>
<li>Pocivavsek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+endogenous+kynurenic+acid+control+hippocampal+glutamate+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in endogenous kynurenic acid control hippocampal glutamate and memory.</a> Neuropsychopharmacology. 36 (11), 2357-2367 (2011).</li>
<li>Pocivavsek, A., Baratta, A. M., Mong, J. A., Viechweg, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Kynurenine+Challenge+Disrupts+Sleep-Wake+Architecture+and+Impairs+Contextual+Memory+in+Adult+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Acute Kynurenine Challenge Disrupts Sleep-Wake Architecture and Impairs Contextual Memory in Adult Rats.</a> Sleep. 40 (11), (2017).</li>
<li>Halassa, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+modulation+of+sleep+homeostasis+and+cognitive+consequences+of+sleep+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Astrocytic modulation of sleep homeostasis and cognitive consequences of sleep loss.</a> Neuron. 61 (2), 213-219 (2009).</li>
<li>Erhardt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+levels+are+elevated+in+the+cerebrospinal+fluid+of+patients+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia.</a> Neuroscience Letters. 313 (1-2), 96-98 (2001).</li>
<li>Linderholm, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+levels+of+kynurenine+and+kynurenic+acid+in+the+CSF+of+patients+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Increased levels of kynurenine and kynurenic acid in the CSF of patients with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 38 (3), 426-432 (2012).</li>
<li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+kynurenine+pathway+metabolism+in+the+prefrontal+cortex+of+individuals+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Impaired kynurenine pathway metabolism in the prefrontal cortex of individuals with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 37 (6), 1147-1156 (2011).</li>
<li>Schwarcz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+cortical+kynurenate+content+in+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Increased cortical kynurenate content in schizophrenia.</a> Biological Psychiatry. 50 (7), 521-530 (2001).</li>
<li>Pocivavsek, A., Rowland, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Neuroscience+Illuminates+Causal+Relationship+Between+Sleep+and+Memory%3A+Translating+to+Schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Basic Neuroscience Illuminates Causal Relationship Between Sleep and Memory: Translating to Schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 44 (1), 7-14 (2018).</li>
<li>Shibata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorimetric+micro-determination+of+kynurenic+acid%2C+an+endogenous+blocker+of+neurotoxicity%2C+by+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography%22%5BJournal%5D)">Fluorimetric micro-determination of kynurenic acid, an endogenous blocker of neurotoxicity, by high-performance liquid chromatography.</a> Journal of Chromatography. 430 (2), 376-380 (1988).</li>
<li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+consolidation+during+sleep%3A+a+neurophysiological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sleep+Research%22%5BJournal%5D)">Memory consolidation during sleep: a neurophysiological perspective.</a> Journal of Sleep Research. 7, 17-23 (1998).</li>
<li>Graves, L. A., Heller, E. A., Pack, A. I., Abel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+selectively+impairs+memory+consolidation+for+contextual+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation selectively impairs memory consolidation for contextual fear conditioning.</a> Learning & Memory. 10 (3), 168-176 (2003).</li>
<li>Yamashita, M., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tryptophan+circuit+in+fatigue%3A+From+blood+to+brain+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tryptophan circuit in fatigue: From blood to brain and cognition.</a> Brain Research. 1675, 116-126 (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

주변 kynurenine 관리 후 두뇌에 있는 KYNA의 신뢰할 수 있는 평가, 결합 하 고 생 화 학적 및 기능 실험 해석 중요 하다. 여기, 우리는 새로운 사용자가 플라즈마 kynurenine 및 KYNA 쥐의 뇌를 측정 하기 위한 효과적인 방법을 설정 하도록 허용 하는 상세한 프로토콜 제시. 플라스마에 kynurenine의 측정 확인 정확한 주입 및 KYNA 대사 산물의 측정 확인 두뇌에 de novo 종합. 설명된 fluorometric HPLC 방법에 맞게 시바타18, Zn2 +, 정확 하 게 nanomolar 범위에서 두뇌에 생 양의 KYNA 검색 하는 기능을 포함 하 여 존재 KYNA derivatize의 몇몇 이점이 있다 . 또한, 메서드는 프로토콜에 설명 된 대로 여기 및 방출의 fluorometric 파장을 조정 하 여 micromolar 범위에 플라스마에 있는 bioprecursor kynurenine를 검출 하기 위하여 적응 되었...

KP는 필수 아미노산 트립토판1의 거의 95% 저하 합니다. 포유류 두뇌에서 kynurenine 이다로 효소 kynurenine aminotransferase (KAT) II2로 주로 neuroactive 작은 분자 KYNA에 대사입니다. KYNA 뇌2,3,4, α7nACh와 NMDA 수용 체에 길 항 근으로 작동 하 고 또한 대상 aryl 탄화수소 수용 체 (a h R) 등 G-단백질 수용 체 신호 결합 수용 체 35 (GPR35)5 ,6. 실험 동물에서 뇌 KYNA 고도 행동 분석 실험2,7,8,,910 의 그들의 인지에 관한 퍼포먼스를 손상 표시 되었습니다. . 신흥 가설 제안 KYNA 따라서 변조 수 면의 신경 생물학에서에 더 사이토 파생 분자의 역할을 지 원하는 수 면-각 성 동작11, 영향에 의해 인지 기능 조절에 필수적인 역할 재생 및 인식12.
임상, KYNA 고도 발견 되었습니다 척수 및 사후 뇌 조직에서 정신 분열 증13,,1415,16, 쇠 약 정신 장애를 가진 환자에서 인지 장애가 특징. 정신 분열 증 환자는 또한 종종 병17을 악화 수 있습니다 수 면 방해에 의해 괴 롭 혀. 이 불 쌍 한 결과 정신 분열 증 및 다른 치료에 대 한 새로운 치료의 발전으로 이어질 수 있습니다 변조 수 면과 인식, 학습 및 메모리, 사이 특히 관계에 KP 신진 대사와 KYNA의 역할을 이해 정신과 질병
KP 대사 산물의 측정에 대 한 안정적이 고 일관 된 방법을 다양 한 기관에서 신흥 연구 KP 생물학의 과학적 이해에 통합 될 수을 보장 하기 위해서 중요 하다. 현재, 우리는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 쥐 플라스마에서 kynurenine 및 쥐 두뇌에 있는 KYNA를 측정 하는 방법론을 설명 합니다. 현재 프로토콜을 만드는 존재 Zn2 +fluorimetric 검색의 사용, 시바타18 등 최근 적응 하 고 허용 후 열 시 약으로 500 m m 아연 아세테이트와 derivatize을 최적화 된에 의해 처음 개발 되었다 생, nanomolar 양의 KYNA 뇌11탐지 합니다.
현재 프로토콜에 설명 된 대로 드 노 보 생 KYNA 생산을 자극, 직접적인 bioprecursor kynurenine intraperitoneally 주입 (i.p.) 쥐에서. KYNA 생산의 정도 확인 하는 생 화 확 적인 평가 함께, hippocampal 종속 메모리 (수동 회피 패러다임)에 도전 하는 kynurenine의 영향 및 수 면-각 성 건축 (EEG 및 EMG 신호) 이기도 조사11. 이러한 기술 조합은 kynurenine 도전에서 vivo에서 쥐에서의 생 화 학적 및 기능적 영향의 연구에 대 한 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Wistar rats</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>성인 남성, 250-350 g</td></tr><tr><td>L-키누레닌 황산염</td><td>Sai Advantium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur C18 컬럼 (4 mm x 150 mm)</td><td>Dr. Maisch GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EZ Clips</td><td>Stoelting Co.</td><td>59022</td><td></td></tr><tr><td>장착 재료 나사</td><td>PlasticsOne</td><td>00-96 X 1/16</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합</td>사 <td>MedRep Express</td><td>699B</td><td>CP Medical Monomid Black Nylon Sutures, 4-0, P-3, 18", BOX of 12</td></tr><tr><td>Absorbable Sutures</td><td>Ethicon</td><td>J310H</td><td>4-0 Coated Vicryl Violet 1X27'' SH-1</td></tr><tr><td>Dental Cement</td><td>Stoelting Co.</td><td>51458</td><td></td></tr><tr><td>드릴 비트</td><td>Stoelting Co.</td><td>514551</td><td>0.45 mm</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Alliance HPLC system</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E2695 분리 모듈</td><td>Waters</td><td>176269503</td><td></td></tr><tr><td>2475 형광 검출기</td><td>Waters</td><td></td><td></td>186247500</tr><tr><td>칼럼 후 시약 관리자</td><td>Waters</td><td>725000556</td><td></td></tr><tr><td>Lenovo 컴퓨터</td><td>Waters</td><td>668000249</td><td></td></tr><tr><td>Empower 소프트웨어</td><td>Waters</td><td>176706100</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Passive avoidance box for rat</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Extra tall MDF sound attenuating cubicle</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-018MD</td><td>내부: 22" (W) x 22" (H) x 16" (D)</td></tr> <tr><td>Center channel modulator shuttle box chamber</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MC</td><td></td></tr><tr><td>쥐용 스테인리스 스틸 그리드 바닥</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-GF</td><td></td></tr><tr><td>자동 단두대 도어</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010B-S</td><td></td></tr><tr><td>쥐용 퀵 디스커넥트 셔틀 그리드 바닥 하네스</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-QD</td><td></td></tr><tr><td>자극 조명, 1" 흰색 렌즈, 모듈식 패널에 장착</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-221M</td><td></td></tr><tr><td>Sonalert 모듈, 랫 챔버용 볼륨 조절 장치</td><td>포함 MedAssociates</td><td>ENV-223AM</td><td></td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 입력/16 출력 패키지</td><td>MedAssociates</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>셔틀 박스용 8채널 IR 제어</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-253C</td><td></td></tr><tr><td>적외선 소스 및 덱터 어레이 스트립</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-256</td><td></td></tr><tr><td>탁상용 인터페이스 캐비닛, 120V 60Hz</td><td>MedAssociates</td><td>SG-6080C</td><td></td></tr><tr><td>이중 범위 정전류 혐오 자극 모듈</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-410B</td><td></td></tr><tr><td>솔리드 스테이트 그리드 바닥 스크램블러 모듈</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-412</td><td></td></tr><tr><td>듀얼 A/B 쇼크 제어 모듈</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-415</td><td></td></tr><tr><td>2' 3-Pin mini-molex 확장</td><td>MedAssociates</td><td>SG-216A-2</td><td></td></tr><tr><td>10' 쇼크 출력 케이블, DB-9 M/F</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219G-10</td><td></td></tr><tr><td>셔틀 쇼크 제어 케이블 15', 6</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219SA</td><td></td></tr><tr><td>소형 테이블탑 캐비닛 및 전원 공급 장치, 120 V 60 Hz</td><td>MedAssociates</td><td>SG-6080D</td><td></td></tr><tr><td>PCI 인터페이스 패키지</td><td>MedAssociates</td><td>DIG-700P2-R2</td><td></td></tr><tr><td>셔틀 박스 회피 유틸리티 패키지</td><td>MedAssociates</td><td>SOF-700RA-7</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Sleep-Wake Monitoring Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ponehmah software</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PNP-P3P-610</td><td></td></tr><tr><td>MX2 8 소스 수집 인터페이스</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PNM-P3P-MX204</td><td></td></tr><tr><td>Dell 컴퓨터, Optiplex 7020, Windows 7, 64비트</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0112-013</td><td></td></tr><tr><td>Dell 19인치 컴퓨터 모니터</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0113-001</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 케이지용 수신기, 8x</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>272-6001-001</td><td></td></tr><tr><td>Cisco RV130 VPN 라우터</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>RV130</td><td></td></tr><tr><td>매트릭스 2.0</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0119-001</td><td></td></tr><tr><td>네트워크 스위치</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>SG200-08P</td><td></td></tr><tr><td>Neuroscore software</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0171-CFG</td><td></td></tr><tr><td>2개의 생체전위 채널 송신기, 모델 TL11M2-F40-EET</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>270-0134-001</td><td></td></tr></tbody></table>

kynurenine 및 kynurenic 산의 고성능 액체 크로마토그래피 측정: 생화학 인식 및 쥐에 수 면에 관한

A High-performance Liquid Chromatography Measurement of Kynurenine and Kynurenic Acid: Relating Biochemistry to Cognition and Sleep in Rats

트립토판 저하의 kynurenine 통로 (KP) 정신 장애에 연루 되었습니다. 특히, 사이토 파생 된 대사 산물 kynurenic 산 (KYNA), 두 N에 적-메 틸-d-aspartate (NMDA)와 α7 nicotinic 아 세 틸 콜린 (α7nACh) 수용 체, 건강과 질병에 있는 인지 과정에 연루 되어 있다. KYNA 레벨은 정신 분열 증을 가진 환자의 두뇌에서 상승로 glutamatergic 및 해 수용 체에서 오작동 인지 기능 장애, 질병의 병리학의 핵심 도메인 관련 원인이 될 여겨진다. KYNA는 정신 분열 증을 가진 개인에서 pathophysiologically 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다. 그것은 직접 bioprecursor kynurenine와 동물을 치료 하 여 설치류 두뇌에 내 인 성 KYNA 상승 수 그리고 쥐에 전 임상 연구는 급성 고도 KYNA에 그들의 학습 및 메모리 프로세스 영향을 미칠 수 증명. 현재 프로토콜이 실험 방법을 자세히 설명 하 고 혈액 kynurenine 수준 및 뇌 KYNA 형성 (를 사용 하 여 고성능 액체 크로마토그래피), a)는 생 화 확 적인 분석을 결합 하 여 b) 행동 테스트를 조사 하는 hippocampal 종속 컨텍스트 메모리 (수동 회피 패러다임), 그리고 c) 수 면-각 성 행동 [뇌 파 (EEG)와 치십시오 (EMG) 신호를 결합 하는 telemetric 녹음]의 평가 쥐에서. 함께 찍은, 높은 KYNA, 수 면, 그리고 인식 사이의 관계를 공부 했다, 그리고이 프로토콜 kynurenine 상승 및 KYNA 형성에서 vivo에서 쥐에서의 함수 결과 이해 하는 실험적인 접근 방식을 자세하게에서 설명 합니다. 이 프로토콜의 변화를 통해 얻은 결과 KP와 KYNA 수 면과 건강 및 질병 상태에서 인식 변조에 중추적인 역할을 봉사 하는 가설을 테스트 합니다.

KYNA 뇌를 높이 방법으로 복 kynurenine 주사를 사용 하 여 유효성을 검사 하려면 조직의 HPLC 분석 수행 되었다. 표준 곡선 (그림 1) 관련된 소프트웨어를 사용 하 고 조직 샘플의 정량화에 대 한 허용에 건설 되었다. Kynurenine 및 KYNA에 대 한 대표 chromatograms는 그림 2에 표시 됩니다. Kynurenine 6 분의 보존 기간에 관찰 되었다 그리고 KYNA 11 분의 보존 기간을 했다. 관찰 하기 위해 KP 역학, kynurenine의 100 mg/kg이이 프로토콜에서 관리 하 고 조직 주입, 또는 2 또는 4 h 후 주입 (그림 3a)는 즉시 다음 수집 된. 플라즈마 kynurenine (그림 3b)와 hippoca...

Kynurenine 통로 (KP) neuroactive metabolites 변경 정신 질병에 연루 됩니다. 변경 된 kynurenine 통로 신진 대사에서 vivo에서 설치류에서의 기능적인 결과 조사 하 고 새로운 치료 접근을 명료 하 게 하는 것을 도울 수 있다. 현재 프로토콜 쥐에 심각한 kynurenine 도전의 영향을 조사 하기 위해 생 화 학적 및 행동 접근을 결합 합니다.

Kynurenine 및 Kynurenic 산의 고성능 액체 크로마토그래피 측정: 생화학 인식 및 쥐에 수 면에 관한

The kynurenine pathway (KP) of tryptophan degradation has been implicated in psychiatric disorders. Specifically, the astrocyte-derived metabolite ...

이 방법은 생화학적, 행동적 접근 방식을 결합하여 쥐에서 급성 키누레닌 챌린지의 영향에 대한 신경 과학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐의 뇌와 혈장에서 키누레닌 경로 대사 산물을 측정하기 위한 신뢰할 수 있고 일관된 방법을 제공한다는 것입니다. 이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 학생 연구 조교인 Carly Fabian이 맡을 것입니다.복강내 키누레닌 투여 후 적절한 실험 종료 시점에서, 냉동 수확된 혈장을 젖은 얼음에서 해동하고 해동된 샘플을 초순수로 희석합니다. 100마이크로리터의 희석된 샘플을 6% 과염소산 25마이크로리터의 개별 용기에 넣고 샘플을 원심분리하여 소용돌이칩니다. 그런 다음 키누레닌 및 키누렌산 측정을 위해 각 튜브에서 100마이크로리터의 상등액을 개별 250마이크로리터 마이크로 원심분리 튜브로 옮깁니다.뇌 샘플에서 키누렌산을 측정하려면 냉동 수확된 뇌 샘플을 드라이아이스에서 해동하고 정확한 분석 저울에서 각 샘플의 무게를 개별적으로 측정합니다. 모든 샘플의 무게를 측정한 후 튜브를 젖은 얼음 위로 옮기고 각 조직 샘플을 초순수로 1:10 중량비로 희석한 다음 초음파 처리기로 균질화합니다. 각 샘플 슬러리의 100마이크로리터를 새 튜브에 부분 표본으로 추출한 다음 볼텍싱 및 원심분리를 위해 25마이크로리터의 25% 과염소산을 추가합니다.그런 다음 키누렌산 측정을 위해 100마이크로리터의 상등액을 개별 250마이크로리터 마이크로 원심분리 튜브로 옮깁니다. 키누레닌 분석을 위한 고성능 액체 크로마토그래피 또는 HPLC를 준비하려면 먼저 개별 HPLC 흡입 튜브를 이동상, 초순수 및 100% 아세토니트릴 용기에 넣습니다. 그런 다음 분당 0.5ml의 속도로 5%아세토니트릴과 95%초순수를 실행하도록 기기를 프로그래밍하고 HPLC 기계가 20-30분 동안 작동하도록 합니다.안정적인 압력과 기준선에 도달하면 용액 조성을 5% 아세토니트릴 및 95% 아세트산 나트륨 이동상으로 변경하고 기기를 다시 30분 동안 평형화합니다. 기기가 평형을 이루는 동안 l을 켭니다.amp 형광 검출기에서. 유도체화에 앞서, 이동상 포스트 컬럼과 결합된 연동 펌프를 통해 아연 아세테이트 용액을 별도로 펌핑하고 포스트 컬럼 펌프를 약 500psi의 안정적인 압력에 도달할 때까지 약 20분 동안 분당 0.1밀리리터의 유속으로 켭니다.기기가 분석을 수행할 준비가 되면 시스템 소프트웨어를 설정하여 샘플 염기서열 파라미터를 제어하고 여러 샘플의 자동 주입을 허용합니다. Run Sample(샘플 실행) 화면에서 File(파일)을 클릭하고 새 창에서 Create New Sample Set(빈 영역 선택)으로 드래그합니다. 모든 표준물질과 샘플을 실행해야 하는 순서대로 개별적으로 나열하고, 표준물질은 시퀀스의 시작과 끝에서 분석됩니다.기능 열에서 표준물질과 샘플을 지정하고 5개의 샘플마다 물을 주입하도록 프로그램을 설정합니다. 각 샘플의 실행 시간을 15분으로 설정하고 표준물질에서 20마이크로리터의 샘플을 주입한 다음 실험적으로 적합한 20마이크로리터의 혈장 샘플과 30마이크로리터의 뇌 균질화 샘플을 주입합니다. 그런 다음 측정되는 화합물에 따라 excitation 및 emission 파장을 설정하고 시퀀스를 실행합니다.데이터를 정량화하려면 Browse Project(프로젝트 찾아보기) 화면을 열고 Sample Sets(Sample Sets) 탭에서 정량화할 Sample Set를 두 번 클릭합니다. 주입 목록에서 모든 표준을 강조 표시하고 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하여 새 창에서 Process'를 선택합니다. 그런 다음 드롭다운 메뉴를 사용하여 Calibrate and Quantitate(보정 및 정량화)를 선택하고 모든 표준물질을 다시 강조 표시한 다음 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하고 Review(검토)를 선택합니다.크로마토그램이 열리면 각 표준물질을 적분 및 보정하여 표준 곡선을 생성합니다.그런 다음 Sample Sets' 탭으로 돌아가서 Sample Set을 두 번 클릭하여 정량 분석 및 검토하고, 각 샘플을 통합 및 정량화하여 이전에 생성된 표준 곡선을 기반으로 각 샘플의 농도를 출력합니다. 키누레닌을 투여한 동물에서 채취한 조직 샘플의 HPLC 분석은 키누레닌 머무름 시간이 약 6분이고 키누렌산 머무름 시간이 약 11분임을 밝혔습니다. 혈장 키누레닌과 해마 키누렌산의 정량화는 급성 키누레닌 주사가 뇌 키누렌산 수치를 증가시키며, 주사 후 2시간에 최고치에 도달하고 주사 후 4시간에 기준선으로 복귀하는 것을 보여줍니다.수동적 회피 패러다임 훈련 시험에서는 집단 차이가 관찰되지 않았지만, 대조군 동물은 시험 시험 중 어두운 면으로 들어가기 위한 잠복기가 크게 증가하여 맥락 학습을 나타내는 반면, 24시간 전에 키누레닌을 주입한 동물은 동일한 잠복기 증가를 보이지 않아 학습의 결핍을 보여줍니다. 또한, 가벼운 단계 동안 급성 키누레닌 상승이 수면-각성 구조에 미치는 영향에 대한 평가는 키누레닌 주사 후 첫 2시간 동안 총 빠른 안구 운동 수면 시간이 감소하는 것을 나타냅니다. 이러한 데이터는 이 기간 동안 깨어 있는 시간이 증가하고 급속하지 않은 안구 운동 수면이 약간 감소하는 것으로 반영되며, 급성 키누레닌 상승이 수면-각성 역학에도 장애를 일으킨다는 것을 보여줍니다.이 절차에 따라 인지 및 수면을 조절하는 데 있어 상승된 키누렌산 형성의 역할에 대한 추가 질문에 답하기 위해 행동 분석과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

절차는 뇌파, electromyogram, 그리고 뇌성 젖산 농도를 모니터링하는 동안 optogenetically 뇌성 대뇌 피질의 피라미드 뉴런의 활동을 조작하기위한 설명되어 있습니다. 사람들이 자연 수면 / 웨이크주기를 받아야 동안 실험 녹음 케이블 테 더링 마우스에 수행됩니다. Optogenetic 장비는 우리의 실험실에서 조립, 녹화 장비는 상업적으로 사용할 수 있습니다.

동시 Electroencephalography, 설치류 대뇌 피질의 젖산 농도와 Neuronal 활동 Optogenetic 조작의 실시간 측정

이 비디오는 마취된 마우스에 뇌파(EEG) 및 근전도(EMG) 전극 어셈블리를 이식하는 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로세스에는 입체 프레임에 마우스를 고정하고, 두개골의 정중선을 절개하고, 전극을 위한 구멍을 뚫고, 신호 기록을 위해 전극 장치를 고정하는 작업이 포함됩니다. 복구 후 기록된 신호를 사용하여 마우스의 수면-절전 모드 해제 동작을 분석합니다.

뇌파 및 근전도 기록을 통한 마우스의 수면 행동 분석

자유롭게 행동하는 쥐에서 뇌파(EEG)와 근전도(EMG)를 기록하는 것은 행동 및 생리학을 수면 및 각성과 연관시키는 중요한 단계입니다. 본 명세서에 기술된 실험 프로토콜은 마우스에서 EEG 및 EMG 기록을 획득하기 위한 케이블-기반 시스템을 제공한다.

마우스 절전 모드를 측정 등사 기록 절차

Synaptosomal 도파민 통풍 관 및 고성능 액체 크로마토그래피 분석 대표 실험 도구 마우스에서 도파민 항상성 도파민 운송업 자의 기능과 striatal 조직에서 도파민의 수준을 평가 하 여 조사를 각각. 여기 선물이 도파민 조직 콘텐츠를 측정 하 고 도파민 운송업 자의 기능을 평가 하는 프로토콜.

고성능 액체 크로마토그래피 분석 및 Synaptosomal 도파민 통풍 관의 사용에 의해 쥐에서 Dopaminergic 항상성의 평가

선물이 3 monoamine 신경 전달 물질의 동시 결정 하 고 두 유아 소변에 그들의 대사 산물의 전기 화학 검출 (ECD) 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 결합 하 여 편리한 고체 상 추출. 우리 또한 유아에 대 한 뇌 손상의 조기 진단에 대 한 잠재적인 biomarker로 대사 산물 MHPG를 식별합니다.

추출 및 카 테 콜 아민 신경 전달 물질과 그들의 대사 산물의 고압 액체 크로마토그래피로 분석 하는 편리한 방법

활동 기반 홈 케이지 모니터링 통해 수 면을 측정 하는 높은 처리량 방법을 설명 합니다. 이 방법은 전통적인 뇌 파 기반 방법에 비해 이점이 있습니다. 그것은 잘 총 수 면 기간 결정에 대 한 유효성을 검사 하 고 인간 질병의 설치류 모델에서 수 면을 모니터링 하는 강력한 도구가 될 수 있습니다.

수 면 기간 설치류의 비 침범 성, 높은 처리량 결정

여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

수면 손실과 일주기 불일치는 수많은 운영 사고와 사고에 기여합니다. 피로를 완화하기 위한 대책 및 작업 스케줄링 설계의 효과는 운영 환경에서 평가하기가 어려울 수 있습니다. 이 원고는 복잡한 운영 환경에서 수면, 일주기, 피로 및 성능 데이터를 수집하는 방법을 요약합니다.

복잡한 운영 환경에서 절전, 일주기, 피로 및 성능 데이터 수집

여기에서, 우리는 뮌헨 ChronoType 설문지, 금 표준 circadian 상 biomarkers 및 actigraphic 측정에 근거를 둔 circadian 표현형 단으로 참가자의 정확한 분류에 따라 성과에 있는 일주 리듬을 조사하는 방법을 제시합니다.

실제 세계에서 인간 Circadian 현상형 및 일주 성능 테스트

여기에 설명된 항암세포 배양으로부터 수집된 배지에서 키누레닌 통로(kynurenine, 3-하이드록시키누레닌, 크산, 3-하이드록산, 3-하이드록산산)에서 생성된 4개의 상이한 트립토판 대사산물의 결정 프로토콜이 단일 사각폴 황색술과 결합된 액체 염색체 배양으로부터 수집된다.

암 세포 배양에서 수집된 매체에서 액체 크로마토그래피 질량 분광법에 의해 분석된 선택된 Kynurenines의 동시 정량화

학습하세요 쥐 뇌와 혈장에서 kynurenine 및 kynurenic acid를 HPLC로 측정하는 생화학적 방법을 통해 정신질환 관련 신경대사물질 변화를 연구하는 기법을. 이 방법은 신경과학 연구에 유용합니다.

Kynurenine 및 Kynurenic 산의 고성능 액체 크로마토그래피 측정: 생화학 인식 및 쥐에 수 면에 관한

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