Name: 쥐에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군 장황 하는 실버 나노 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 학습하세요 은 나노입자를 이용한 신생아 쥐 담관 폐쇄증 치료법을. 이 기술은 신생아 쥐 모델에서 간 기능 개선과 염증 감소를 확인할 수 있어 소아 간질환 연구에 활용됩니다.

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여기 사용 AgNPs C. M. 체 화학의 부, 홍콩의 대학에 선물 했다. 이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (No. 81600399) 및 과학 기술 프로젝트의 광저우 (No.201707010014)에 의해 투자 되었다.

모든 동물 실험 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 Sun 야만 센 대학 실험실 동물 센터 (#IACUC-DB-16-0602)의 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 담 즙이 폐쇄 증 마우스 모델 구축
<ol><li>압력가 마로 소독 차 우 광고 libitum에 대 한 액세스와 25 ° C에서 12 h 다크/라이트 사이클에서 특정 병원 체 자유로운 환경에서 임신 BALB/c 마우스를 유지.</li>
	<li>준비 하려면 RRV 스트레인 MMU 18006, MA104 세포에 바이러스를 증폭 하 고 상 패 분석 결과19바이러스 titers을 측정 한다. 참고: MA104 셀 교양 Dulbecco의 수정된이 글의 중간 (DMEM)에 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 인큐베이터에 함께 포함 된 5% CO2습도 분위기. 증폭 단계는 간략하게 아래 설명 됩니다.<ol>
<li>MA104 세포를 감염 (1.5 x 107) 30 ml 혈 청 자유로운 매체의 트립 신 활성화 RRV [1.5 x 106 플 라크 형성 단위 (PFU)]와 150 cm2 문화 플라스 크에. 5% CO2와 37 ° C에서 습도 인큐베이터에서 3 일 동안 감염 된 세포를 품 어.</li>
		<li>각 단계를 동결 하 고, 셀 녹고 다시 실내 온도;-80 ° C 냉장고에서 20 분으로 3 그리고 freeze-thaw 주기에 의해 문화 플라스 크에 감염 된 세포를 lyse 셀 관련 바이러스 입자는 상쾌한에 발표할 예정 이다. 그런 다음, 수집 하 고 표면에 뜨는 문화와 세포 lysate 15 mL 원뿔 튜브로 전송.</li>
		<li>저속 원심 분리 (300 x g 3 분 4 ° C에서)에 의해은 lysate에서 큰 세포질 파편을 제거 합니다. 그런 다음, 동물 실험에 대 한 새로운 15 mL 원뿔 튜브로 바이러스 (약 6 mL)를 포함 하는 상쾌한 전송. 참고:는 RRV는 titered, aliquoted, 그리고 저장 또는 사용 확대의 추가 라운드에 대 한 준비 다음. 실내 온도에 장기간 노출; 바이러스 감염 용량을 감소 시킬 것 이다 바이러스와 얼음에 배치 한다-80 ° C에 또는 액체 질소에 저장.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부하 작은 볼륨 (1 mL) 인슐린에 RRV 신생아 마우스 주입에 대 한 29 G 바늘 주사 통. 참고: 체적 주사기의 두꺼운 바늘 쉽게 이어질 마약 누설.</li>
	<li>출생의 24 시간 이내 각 신생아 20 µ L 105 PFU/mL RRV 루트를 통해 i.p.; x 1.2의 관리 같은 양의 식 염 수를 사용 하 여 제어. 참고:이 실험에 사용 되는 주사기는 1 mL 인슐린 주사기. 다른 이유로 인해 첫 2 일 안에 죽 었 다 그들의 어머니에 의해 지 루 하지 했다 감염 된 생쥐는 분석에 포함 되지 않았다.</li>
	<li>모든 신생아 쥐를 밀접 하 게 관찰 하 고 매일 그들을 무게. 일반적으로, RRV 접종 후 6 일에 황 달에 귀, 피부, 대변 된다 찰 흙 색, 나타나고 모피 된다 기름, 바 모델;의 설립 제안 이러한 증상에 대 한 확인 하십시오. 참고: 바 H & E와 immunohistochemical 진술서와 함께 간 조직 섹션 검사 하 여 확인할 수 있습니다. 바 마우스는 AgNP 치료에 대 한 준비 다음. 주의: 현대 인간과 동물 RV 긴장, Biosafety 수준 2 (BSL-2) 조건 하에서 처리 해야 합니다 사용 하기 위해 제공 하는 프로토콜이입니다.</li>
</ol>2.은 나노 입자 합성
<ol><li>준비 하 고 앞에서 설명한12,20AgNPs 특성. 참고: 준비 및는 AgNPs의 세부 사항은 설명 출판물에 화학의 부, 홍콩의 대학12,20에서 C. M. 체의 팀에 의해. 솔루션의 최종 농도가 1 m m 이었다. AgNPs의 평균 직경은 10 nm (5 ~ 15까지 nm) 및 전자 현미경 검사 법에 의해 확인.</li>
</ol>3. 실버 나노 콜라겐 혼합물의 준비
참고: AgNP 콜라겐 혼합 준비 되 고 이전21 을 설명 하 고 4 ° c.에 저장 된 특징 얼음에 모든 절차를 수행 해야 합니다.
<ol><li>첫째, 콜라겐 준비 490 µ L의 추가 나 1.5 mL 튜브에 콜라겐 (4 mg/mL)를 입력 하 고 얼음에 그것을 배치.</li>
	<li>콜라겐을 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS, 10 배)의 100 µ L을 추가 하 고는 피 펫을 함께 섞는다.<ol>
<li>10 x PBS 버퍼 1 리터를 준비 하려면 80 g의 NaCl, KCl의 2 세대 및 35.8 g Na2HPO4. 의 결합 12 H2O KH2포4 와 게 실 온에서 버퍼의 2.4 g.</li>
	</ol>
</li>
	<li>다음, 위의 솔루션에 NaOH (0.2 M)의 10 µ L를 추가 합니다.<ol>
<li>0.2 M NaOH를 준비 하려면 증류수 1 l의 NaOH 파우더 8 g을 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>마지막으로, 콜라겐을 AgNPs (1mm)의 400 µ L을 추가 하 고는 피 펫과 그들을 믹스. 참고: 추가 AgNPs 마지막도 혼합 합니다. AgNP 콜라겐 혼합 4 ° C에 저장 한다 그렇지 않으면, 그것은 쉽게 실 온에서 고형화 한다.</li>
</ol>4. 마우스 주입 방법
<ol><li>AgNP 콜라겐 혼합의 50 µ L의 i.p. 주사로 치료 RRV 그룹에 감염 된 신생아 쥐 황 달;의 외관 후에 관리 두 번째 주사를 3 d 나중을 수행 합니다. 참고: 컨트롤 RRV (감염된 제어) 그룹에서 마우스는 같은 양의 염 분, 고 치료 받지 일반 컨트롤 그룹에 있는 마우스.</li>
	<li>주사의 시작 부분에 마우스의 다리 반지 손가락으로 비스듬히 오른쪽 허벅지 위에 누르고 15 ° 각도 (그림 1)에서 천천히 바늘을 소개. 간 (그림 2), 약 0.5 cm에서의 낮은 가장자리의 표면에 도달, 주입 AgNP 콜라겐 혼합; 그런 다음, 천천히 바늘을 철회 한다. 참고: 조심, 주사기로 공기를 소개 후, 신생아 마우스 살해 될 수 있습니다. 신생아 쥐에 왼쪽된 복 부에는 위장과 비장 그리고 위는 우유의 가득. 이 쪽에서 주사를 관리 하는 경우 바늘 쉽게 복 부 구멍, 또는 출혈을 일으키는 비장 흘러 우유를 일으키는 원인이 되는 중 위를 입력할 수 있습니다. 주의: 모든 손가락 부상을 방지 하 여 바늘 뚜껑을 교체, 바늘, 제거 및 sharps 컨테이너에 반드시 바늘을 주의.</li>
	<li>모든 주사 후 쥐 AgNP 콜라겐 혼합 젤 하 고 사출 사이트 사슬에서 어머니를 방지 하기 위해 수 있도록 10 분에 대 한 그들의 감 금 소 밖으로 유지. 다음, 그들의 감 금 소에는 마우스를 반환 합니다.</li>
	<li>관찰 하 고 생존 율 뿐 아니라 황 달 및 몸 무게를 포함 하 여 매일, 모든 마우스의 실제 모습을 기록.</li>
</ol>5. 혈액 샘플 컬렉션
참고: 약 120 µ L의 혈액 샘플은 심장에 바늘을 삽입 하 여 수집 됩니다. 원심, 후 혈 청 수집된 (약 70 µ L) 간 기능 테스트입니다. 혈액 컬렉션 메서드는 다음과 같습니다.
<ol><li>9와 12 일 RRV 접종 (이 AgNP 치료 후 3 일) 후에 쥐를 anesthetize 사용 하 여 0.5-2.5 %sevoflurane.</li>
	<li>마우스의 사지를 고정 하 고 75% 알코올로 위와 더 낮은 복 부를 소독.</li>
	<li>절단 하 여 마우스 피부, 근육, 그리고 중간 선 따라 복 막에는 칼이 위; 횡 경 막 노출 멸 균 면봉을 사용 하 여 횡 경 막 근육을 완전히 폭로 위장을 제거.</li>
	<li>(1 mL 언로드된 인슐린 주사기)와 심장의 좌 심 실에 바늘을 삽입 하 고 최대 혈액 볼륨을 주사기 플런저를 천천히 당겨 다시. 다음, 1.5 mL 튜브에 혈액을 전송.</li>
	<li>실 온에서 30 분 동안 서 서 400 x g에 5 분 동안 원심을 튜브를 허용 합니다. 그런 다음, 전송 피 펫을 사용 하 여 수집 하 고 저장 추가 사용에 대 한 혈 청. 참고: 횡 경 막, 횡 경 막 결함은 쉽게 매, 죽음, 그리고 혈액 응고, 혈액 샘플 수집 하지 이어질으로 손상 하지 마십시오.</li>
</ol>6. 생 화 확 적인 매개 변수 검색
<ol><li>혈 청 생화학 매개 변수 검색 단계 5.5에서에서 수집 된를 사용 합니다.</li>
	<li>자동된 생화학 분석기를 사용 하 여 다음 생 화 확 적인 매개 변수 검색: 알라닌 aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), 알칼리 성 인산 가수분해 효소 (높은 산), 총 단백질 (TP), (장백의) 알 부 민, 글로불린 (GLO), 총 빌리 루빈 (TBIL), 직접 빌리 루빈 (DBIL), 간접 빌리 루빈 (IBIL), 그리고 총 담 즙 산 (미정).</li>
</ol>7. extrahepatic Cholangiography Extrahepatic 담 즙 덕트 Patency 관찰 하
주: 해 부 현미경 아래에서 전체 프로세스를 수행 합니다.
<ol><li>완벽 하 게 간, 쓸 개, 그리고 extrahepatic 담 관 면봉으로 노출 합니다.</li>
	<li>관찰 하 고 간 및 담 즙 관 해 부 현미경의 외관 사진.</li>
	<li>안과 집게를 사용 하 여 담 낭의 바닥을 부드럽게.</li>
	<li>메 틸 렌 블루 솔루션 (0.05 wt.% H2O) 1 mL 주사기를 로드 합니다. 천천히; 쓸 개 구멍에 주사기 바늘을 삽입 그리고 안과 집게와 바늘을 잡고 천천히 methylene 청색의 10-20 µ L를 달 이다.</li>
	<li>파란색 공장 extrahepatic 담 관을 통해 전달 여부를 현미경으로 관찰 하 고 사진을.</li>
</ol>8. Hematoxylin에 오신 얼룩이 신선한 간 샘플의 수집
<ol><li>신선한 마우스 간 조직 하룻밤에 수정 10% 포 르 말린.</li>
	<li>다음, 파라핀에 고정된 간 조직을 포함 하 고 그들을 섹션.</li>
	<li>섹션 dewax, (증류수, 각각 5 분 동안에 100%, 95%, 80% 및 70% 에탄올) 같은 에탄올 시리즈와 함께 rehydrate, 얼룩 hematoxylin으로 조직을 섹션, 1% 염 산 알코올 차별화에 그들을 주제 및 마지막으로, 얼룩은 함께 오신 섹션입니다.</li>
	<li>마지막으로, 40 X 현미경 간 histopathology를 관찰 합니다.</li>
</ol>9. 되며 오신 얼룩진 조직 단면도의 Immunohistochemical 얼룩
<ol><li>Dewaxing 섹션 재 후, 트리 스-EDTA 버퍼 (10 mM Tris 기지, 1 m m EDTA, pH 9.0)에 섹션을 잠수와 95 ° c.에서 10 분 동안 전자 레인지에 난방 항 원 복구 수행</li>
	<li>3% 과산화 수소 솔루션 10 분에 대 한 조직 단면도 노출 하 여 내 인 성 과산화 효소를 제거 합니다.</li>
	<li>일반적인 바인딩 차단 5% 염소 혈 청으로 섹션을 처리 합니다.</li>
	<li>1 차 항 체 토끼 마우스 NKG2D 추가 (1: 100) 섹션, 그리고 하룻밤 4 ° c.에 품 어</li>
	<li>실 온에서 30 분에 대 한 적절 한 보조 항 (HRP 표시 된 고분자 반대로 토끼 시스템)와 섹션을 품 어.</li>
	<li>3, 3'-diaminobenzidine (DAB) chromogen로를 사용 하 여 얼룩 immunohistochemical 시각화.</li>
	<li>40 X 현미경 아래 섹션을 확인 하 고 이미지를 원하는 대로 분석을 진행.</li>
</ol>10. 흐름 Cytometric 분석
<ol><li>부드럽게 말하다 간 조직, 70 µ m 셀 스 트레이너를 통해 그것을 전달 하 고, 그것을 원심에서 4 분 4 ° C에서 270 x g 2 x.</li>
	<li>셀 펠 릿 RPMI 1640 매체에서 resuspend 및 2 색 면역 형광 단일 클론 항 체를 사용 하 여 분석.</li>
	<li>세포 형질 fluorescein isothiocyanate와 phycoerythrin 활용 된 안티-NKp46 (NK 세포, 1:1, 000)를 포함 하 여 특정 세포 표면 마커를 사용 하 여 수행 및 안티-CD4 (T-셀 하위; 1:1, 000), 교류 cytometer 함께 데이터를 분석 하 고 교류 cytometry 데이터 분석 소프트웨어와 함께</li>
	<li>앞 으로/사이드 분산형, 어떤 배경 형광에 대 한 하 고 개별 항 체에서 형광 신호에 따라 보조 분석 데이터를 대상에 isotype 컨트롤에 따라 게이트 따라 세포 인구를 선택 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

AgNPs 전시 강력한 넓 스펙트럼 항균 특성 및 강한 침투성22; 또한, 그들은 항균 의료 제품23의 범위를 생산 하는 데 사용 됩니다. 그러나, AgNPs는 일단 그들은 장기에 축적 하 고이 속성은 독성 효과24,25이어질 수 있습니다 취소 하는 데 시간이 오래 걸릴 수 있습니다. 이전 연구는 쥐 실험에서 단일 i.v. 주입 후 급성 독성과 AgNPs의 genotoxicity 검사 하 고 결과 보였다 AgNPs 급성 간 및 신장 손상 발생할 수 있습니다. AgNPs는 thymus, 비장17등 주요 면역계 장기에 축적. 이 마우스 바 모델 AgNPs는 치료 ameliorated NK 세포 억제에 의해 부분적으로 중재를 제안 하는 우리의 데이터 바 증후군. 그러나, AgNPs의 장기 효과 마우스 개...

바는 cholestasis 영구적인 황 달 특징의 한 형태 이며, 간 이식의 부재에 높은 사망률을 있다. 바이러스 성 감염 바의 병 인에 밀접 하 게 연관 된다. 세포, reovirus, 그리고로 모두 바1,2,3병원 균으로 제안 되었습니다. 추가-intrahepatic 및 담 관, 담 즙 상피 세포 apoptosis, 포털에서 선 동적인 세포 침투를 선도 대 한 면역 dysregulation 신생아 기간 동안 바이러스 감염에 대 한 미숙한 면역 시스템의 응답 결과 지역, intrahepatic 및 extrahepatic 담 관 방해, 그리고 마지막으로, 간 섬유 증4,,56.
학사 연구에 대 한 일반적으로 사용 되 동물 모델에서는 붉은 털으로 타 바이러스 (RRV)와 신생아 마우스의 접종 합니다. 마우스는 일반적으로 낮은 몸 무게 및 acholic 변 5-6 일 후 황 달 개발. 질병 과정에서 면역 반응의 역할은 중요, 특히 자연적인 살인자 (NK) 세포; 안티 NKG2D 항 체로이 셀의 소모는 크게 바-손상7감소 시킨다. 게다가, 다른 세포, CD4 포함+ T 세포, CD8+ T 세포, 수지상 세포, 및 규정 하는 T 세포 모두 표시 되었습니다 질병8,9,,1011에 역할을. 모든 데이터는 학사 과정에서 면역 시스템의 필수적인 자연 제안.
나노 (AgNPs)는 몇 가지 전염 성 질환, 세균 감염12 등 바이러스 감염13,,1415에 대 한 유익한 효과를 입증 되었습니다. 그러나, 피부과 사용 이외의 몇 가지 연구는 사용 AgNPs 임상 치료에 그들의 잠재적인 독성 때문에 주로. 동물 실험에서 연구팀은 일반적으로 구두16 통해 AgNPs 관리 또는 정 맥 주사 방법17의 효능을 공부 했다. 그러나, 다른 연구원 AgNPs 관리 통해 신생아 마우스에 복 (i.p.) 주사 실험을 간단 하 고 빠른 방법을 선도 하 고 간 및 담 즙 관 동안에 더 직접적인 영향의 효능 공부 면역 시스템과 같은 다른 시스템에 독성을 감소. AgNPs NK 세포 활동18; 영향을 보였다합니다 따라서, 우리는 바 마우스 모델에서 AgNPs 관리 통해 i.p. 주입의 치료 효과 시험 했다.

<table><tbody><tr><td>BALB/c 마우스</td><td>광동 의학 실험 동물 센터</td><td>SYXK2017-0174</td><td>동물 실험</td></tr><tr><td>붉은털 로타바이러스 (RRV)</td><td></td><td>ATCC ATCC&nbsp; VR-1739</td><td>담즙 폐쇄증 마우스 모델</td></tr><tr><td>MA104 세포</td><td>ATCC</td><td>ATCC&nbsp; CRL-2378.1</td><td>실험실 전용</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fisher</td><td>10569010</td><td>포유류 세포 배양</td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>Thermo Fisher</td><td>10099141</td><td>포유류 세포 배양</td></tr><tr><td>콜라겐 유형</td><td>I CORNING</td><td>354236</td><td>연구용</td></tr><tr><td>PBS 완충액</td><td>OXOID</td><td>BR0014G</td><td>세척</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma</td><td>1310-73-2</td><td>pH 값</td></tr><tr><td>조정 AgNP</td><td></td><td></td><td>Antibacterial 참고: AgNps는 홍콩 대학교 화학과의 CM Che. 교수의 선물이었습니다.</td></tr><tr><td>인슐린 주사기(통합 바늘 포함</td>) <td>BD</td><td>9161635S</td><td>의료용</td></tr><tr><td>15 mL 원심분리기 튜브</td><td>Corning</td><td>430791</td><td>실험실 전용</td></tr><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>GEB</td><td>CT0200-B-N</td><td>실험실 전용</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE-Ci</td><td>실험실용</td></tr><tr><td>해부/생체 내 현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ 1000</td><td>실험실용</td></tr><tr><td>안티-마우스 NKp46 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-3351</td><td>연구용</td></tr><tr><td>전용 안티-마우스 CD4 PE-Cyanine5</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>연구용</td></tr><tr><td>전용 단클론 마우스 Anti-Human CD4</td><td>DAKO</td><td>20001673</td><td>연구용</td></tr><tr><td>전용 anti-NKG2D</td><td>RD</td><td>MAB1547</td><td>연구용</td></tr><tr><td>BD FACSCanto 유세포 분석기</td><td>BD Biosciences</td><td>FACS Canto Plus</td><td>실험실 전용</td></tr></tbody></table>

쥐에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군 장황 하는 실버 나노 방법

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

담 즙이 폐쇄 증 (바)의 병 인은 아직 완전히 이해 하는 아이 들에 있는 높은 사망률과 염의 심각한 유형입니다. 바이러스 성 감염 원인 중 하나 있을 수 있습니다. 학사 학위를 공부에 대 한 사용 되는 전형적인 동물 모델 붉은 털으로 타 바이러스와 신생아 마우스 접종으로 설정 됩니다. 나노 항균 및 항 바이러스 효과; 발휘 표시 되었습니다. 바 마우스 모델에서 그들의 기능은이 연구에서 평가 됩니다. 현재, 바 동물 실험, 바 쥐의 증상을 개선 하는 데 사용 하는 방법을 통해 음식이 나 다른 약물을 주어진 일반적으로 증상 치료입니다. 이 연구의 목적은 쥐에서 바 증후군은 나노 입자의 복 주입 장황 하는 새로운 방법을 설명 하 고은 나노 젤 배합을 준비 하기 위한 자세한 방법을 제공입니다. 이 메서드는 간단 하 고 광범위 하 게 적용 하며 바, 뿐만 아니라 임상 치료 메커니즘을 연구 하는 데 사용할 수 있습니다. 쥐 전시 황 달 때 바 마우스 모델에 따라, 준비 된은 나노 젤 낮은 간 표면에 intraperitoneally 주입 됩니다. 생존 상태를 관찰 하 고 생화학 지표 및 간 histopathology 검사. 이 메서드는 두 바 모델 및 소설 바 트리 트 먼 트의 설립의 더 직관적인 이해를 수 있습니다.

설치 바 마우스 모델을 기반으로, 감염 된 신생아 쥐 관리 되었다 준비 AgNP 콜라겐 혼합물 2의 i.p. 주사 황 달 전시 후 x. 마우스 생존은 매일, 확인 하 고 간 기능 검사, 간 병 리, 그리고 cytometry 수행 했다. 치료 컨트롤 바 쥐에 비해, AgNP 처리 쥐 감소 황 달 그리고 유지 하는 그들의 정상적인 몸 무게 (그림 3). 빌리 루빈 물질 대사 및 간장 transaminase 레벨 정상 제어 값, AgNPs는 크게 (표 1) 간 기능 개선 제안에 떨어졌다. Methylene 청색 얼룩과 extrahepatic cholangiography (그림 4) AgNP 치료 후 담 즙 덕트 patency 확인. H &amp; E 염색 (그림 5) 마우스 컨트롤 마우스...

이 문서는 장황 실험 담 즙이 폐쇄 증 마우스 모델에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군에 대 한은 나노 입자에 따라 하는 방법을 자세하게에서 설명 합니다. 시 약 준비 과정 및 신생아 마우스 주입 기술을 이해 신생아 마우스 모델 연구에 사용 되는 방법에 익숙해지도록 연구 하는 데 도움이 됩니다.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

이러한 방법은 담즙 atresia의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 질병, 병기 및 치료에 대한 BA 보기. 이 기술의 주요 장점은 신생아 마우스 주입 기술이 연구원이 다른 신생아 마우스 모델 연구를위한 방법에 익숙해지는 데 도움이 된다는 것입니다.이 기술의 의미는 BA 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 이 방법은 BA 치료에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 일반적으로 이 방법으로 신생아 마우스의 작은 크기가 주입 공정의 구축을 초래할 수 있기 때문에 이 방법으로 이 방법으로 적용될 수 있다. 마우스 모델에 담즙 증쇠를 확립하기 위해, 29 게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 인슐린 주사기에 rhesus rotovirus를 적재하고, 20마이크로리터의 20마이크로리터에서 5번플라크 형성 유닛에 1.2배의 바이러스를 전달하여 24시간 이내에 각각 신천시 마다 신생물에 대한 수정된 이글 매체를 제공합니다. 그런 다음 신생아를 어머니에게 돌려 보내 매일 모니터링하고 계량하십시오.신생아 동물이 황달의 징후를 보이기 시작하면, 동물당 50 마이크로리터의 29 게이지 바늘을 장착 한 밀리리터 주사기를 적재하고 링 핑거를 사용하여 jadiced 동물의 다리를 오른쪽 허벅지 위에 비스듬히 누르는 다정한 동물의 다리를 누릅니다. 천천히 15도 각도로 바늘을 회합에 삽입하고, 간 하부 가장자리의 표면에 도달하면 은 나노 입자 콜라겐 혼합물을 주입한다. 모든 혼합물을 주입했을 때, 천천히 바늘을 제거하고 콜라겐이 고화하고 어머니가 주입 부위를 핥는 것을 방지하기 위해 10 분 동안 동물이 휴식을 취할 수 있게합니다.그런 다음 매일 모니터링을 위해 마우스를 케이지로 돌려놓습니다. 접종 후 9일 또는 12일째에 75%에탄올로 상하 복부를 살균하고 감염된 마우스의 사지를 고정시합니다. 피부, 근육 및 복막은 중진선을 따라 xyphoid에 열고 멸균 면봉을 사용하여 위장관을 제거하여 횡격막을 완전히 노출시킵니다.언로드된 1밀리리터 인슐린 주사기의 바늘을 심장의 왼쪽 심실로 삽입하고 주사기 플런저를 천천히 철회하여 최대 혈액 량을 얻습니다. 실온에서 30분 동안 1.5 밀리리터 튜브로 혈액을 옮기고 적혈구를 원심분리에 의해 펠릿을 전달한다. 그런 다음 나중에 분석을 위해 혈청을 수집합니다.외형 담낭의 경우 면봉을 사용하여 간, 담낭 및 외간 담관을 완전히 노출하십시오. 해부 현미경으로 간과 담관의 모양을 촬영 한 후

a-silver-nanoparticle-method-for-ameliorating-biliary-atresia

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

microbubbles의 Insonation는 유망 감소 시간 평균 음향 파워에서 종양 절제의 전략뿐만 아니라 치료제의 타겟으로 전달됩니다. 현재 연구의 목적은 피하 C6 gliomas가 아닌 열 microvascular 박리 및 페이로드 전송을 극대화하기 위해 낮은 듀티 사이클 초음파 pulsing 전략과 nanocarriers을 개발하는 것입니다.

명암 초음파 마약 베어링 Nanoparticle 배달 및 Microvascular 절제를 통해 마우스에서 Gliomas의 치료 타겟

출처: Kim, BD, et al. 다형 교모세포종 동물 모델에서 올리고뉴클레오티드 페이로드의 나노입자 전달. J. Vis. 경험. (2024년)이 비디오는 교모세포종 보유 마우스에 치료용 나노입자를 정맥 주사하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 혈액-뇌 장벽을 가로질러 표적 전달을 가능하게 하고 뇌종양에서 나노입자 생체분포 및 치료 효능을 평가하기 위한 비침습적 이미징을 지원합니다.

쥐 교모세포종 모델에서 치료용 나노입자의 정맥 투여

담즙 흐름의 중단은 형태학적 변화의 특징적인 시간 의존적 순서와 함께 심각한 염증성 담즙 유발성 간 손상을 초래합니다. 여기에서는 21일에서 28일 후에 강한 섬유화 반응을 유도할 수 있는 마우스의 총담관 수술 결찰에 대한 프로토콜을 제시합니다.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

여기, 선물이 간 부상 및 설치류에서 중생의 외과 모델로 부분 담 관 결 찰.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

간 생 검 임상 설정에서 무알코올 steatohepatitis (steatosis, 염증, 열기구, hepatocyte 및 섬유 증)의 단계를 평가 하는 데 사용 됩니다. 여기, 우리는 평가 방식으로 더 많은 치료제의 임상 시험 정렬 있도록 조직학 분석을 위해 사용 될 수 있는 쥐에 지속 가능 간 생 검을 보여 줍니다.

무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의

우리는 담도 폐쇄증(BA)에 대한 바이러스 유발 간 섬유증 기계론적 연구에 적합한 동물 모델과 향후 BA 치료를 위한 플랫폼을 제공하는 만성 간 섬유증의 마우스 모델을 확립했습니다.

담도 폐쇄증 연구를 위한 만성 간 섬유증의 마우스 모델

여기에 제시된 것은 활막 염증, 활막 증식, 혈관 증식 등을 포함한 II형 콜라겐분해효소 유도 골관절염 마우스의 급성 증상을 효과적으로 개선하기 위해 은 나노 입자를 사용하기 위한 프로토콜입니다.

은 나노 입자를 사용한 마우스의 골관절염 개선

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

부분 2/3(66%) 간절제술의 마우스 모델은 문헌에 잘 설명되어 있지만, 간 이식 후 소형 증후군을 모방한 더 확장된 간절제술은 거의 사용되지 않았습니다. 우리는 건강한 마우스에서 약 50%의 수술 후 치사율을 초래하는 마우스 모델에서 확장된 78% 간 절제술 절차에 대해 설명합니다.

마우스 수술 모델에서 확장된 78% 간절제술

이 기사는 산후, 청소년 및 런트 성인 마우스에 대해 최대 총 150μL의 후불동 주사에 대한 프로토콜과 동반 비디오를 제공합니다. 이 시술은 꼬리 정맥 주입이 불가능한 작은 마우스(15g)의 주사에 특히 적합합니다.

Retrobulbar Sinus 주사에 의한 출생 후, 청소년 및 Runted 성인 마우스에 대한 체계적인 치료

혈액-뇌 장벽은 치료법이 없는 질병인 교모세포종에 대한 치료법을 전달하는 데 중요한 장애물입니다. 여기에서, 우리는 크기 덕분에 이러한 생리적 장벽을 우회하고 종양에 축적될 수 있는 in vivo image-guided iron oxide therapeutic nano platform을 보고합니다.

Glioblastoma multiforme animal model에서 oligonucleotide payload의 나노입자 전달

학습하세요 은 나노입자를 이용한 신생아 쥐 담관 폐쇄증 치료법을. 이 기술은 신생아 쥐 모델에서 간 기능 개선과 염증 감소를 확인할 수 있어 소아 간질환 연구에 활용됩니다.

쥐에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군 장황 하는 실버 나노 방법

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