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Biopanning에서 t 7 살 균 소의 양이 많은 PCR
Biopanning에서 t 7 살 균 소의 양이 많은 PCR
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JoVE Journal Immunology and Infection
Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

Biopanning에서 t 7 살 균 소의 양이 많은 PCR

Full Text
11,655 Views
05:42 min
September 27, 2018

DOI: 10.3791/58165-v

Xiujuan Peng1, Jasmim Leal1, Rashmi Mohanty1, Melissa Soto1, Debadyuti Ghosh1

1Division of Molecular Pharmaceutics and Drug Delivery, College of Pharmacy,University of Texas at Austin

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a reproducible and efficient quantitative PCR (qPCR) method for enumerating T7 bacteriophage. The protocol includes genomic DNA preparation, PCR reaction setup, cycling conditions, and data analysis.

Key Study Components

Area of Science

  • Virology
  • Microbiology
  • Diagnostics

Background

  • Enumeration of bacteriophages is crucial for various applications.
  • Traditional assays may not be feasible for large sample sizes.
  • Accurate quantification aids in diagnostics and therapeutics.
  • This method addresses key challenges in the field.

Purpose of Study

  • To provide a time-efficient method for quantifying T7 bacteriophage.
  • To enhance the accuracy of bacteriophage enumeration.
  • To facilitate research in phage display biopanning experiments.

Methods Used

  • Preparation of phage genomic DNA.
  • Designing specific primers for PCR.
  • Serial dilution of reference T7 phage DNA.
  • Setting up qPCR reactions and analyzing data.

Main Results

  • The method allows for accurate quantification of bacteriophages.
  • It supports the analysis of multiple samples efficiently.
  • Demonstrated by graduate students in a laboratory setting.
  • Facilitates advancements in bacteriophage-based diagnostics.

Conclusions

  • The qPCR method is a valuable tool in virology and microbiology.
  • It addresses limitations of traditional bacteriophage assays.
  • Promotes further research and application of bacteriophages.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this qPCR method?
The main advantage is its time efficiency and accuracy in quantifying large numbers of samples.
Who demonstrated the procedure?
The procedure was demonstrated by graduate students Rashmi Mohanty and Jasmim Leal.
What is the significance of enumerating bacteriophages?
Enumerating bacteriophages is crucial for diagnostics and therapeutic applications in virology.
How is the T7 phage DNA prepared?
T7 phage DNA is prepared by obtaining a stock concentration and performing serial dilutions.
What are the applications of this method?
This method can be applied in phage display biopanning experiments and bacteriophage-based diagnostics.
What challenges does this method address?
It addresses the challenges of accurate quantification and analysis of complex samples.

재현, 정확 하 고 시간이 효율적인 정량 PCR (정량) 방법 살 균 소 T7 열거 하는 여기에 설명 되어 있습니다. 프로토콜에는 살 균 소 게놈 DNA 준비, PCR 반응 준비, 정량 자전거 조건, 및 정량 데이터 분석 명확 하 게 설명합니다.

이 방법은 복잡한 견본 및 박테리오파지 기지를 둔 진단 및 치료에서 박테리오파지의 열거와 관련있는 바이러스학 및 미생물학 필드에 있는 중요한 문제점을 대답하는 것을 도울 수 있었습니다. 이 기술의 주요 장점은 파지 디스플레이 바이오패닝 실험에서 많은 수의 샘플을 시간 효율적이고 정확한 정량화를 가능하게 한다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 라시미 모한티와 제 실험실대학원생 인 Jasmim Leal이 될 것입니다.

프라이머를 설계하고 재고 농도를 생성한 후, 마이크로리터 당 0.1 마이크로그램의 농도로 참조 T7 파지 DNA를 얻을 수 있습니다. 초순수수를 사용하여 마이크로리터 당 100만 펨토그램에서 0.2 밀리리터 PCR 튜브의 마이크로리터 당 1펨토그램에 이르는 이 DNA를 10배 연속 희석시킵니다. 각 농도의 20 마이크로리터를 준비하여 파이펫 팁을 변경하고 희석의 각 단계 사이에 튜브를 소용돌이치게 하십시오.

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