Name: 꿀벌에서 두뇌 Homogenate에서 Phospholipase C 활동의 탐지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: 학습하세요 꿀벌 뇌 조직에서 phospholipase C 활성을 측정하는 생화학 분석법을 통해 신경과학 및 행동 생물학 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 뇌 기능과 행동의 관계를 이해하는 데 활용됩니다.

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그림 4B - 4 D Suenami 외 에서 수정 된 생물학 오픈의 허가 함께 24 . 저자는 허가 대 한 게시자에 감사. 이 작품은 쇼타 Suenami와 료 미야자키 인간 프론티어 과학 프로그램 (RGY0077/2016)에 의해 지원 되었다.

1입니다. 구하고 꿀벌의 캡처
<ol><li>꿀벌 식민지는 현지 대리점에서 구입.</li>
	<li>곤충 그물을 사용 하 여, 그들의 뒷 다리에 꽃가루 가방 하이브를 반환 하는 사실을 꿀벌 잡아. 표준 50 mL 플라스틱 원뿔 튜브에 꿀벌을 전송 하 고 캡 튜브 (그림 1). 얼음이 꿀벌을 anesthetize에 튜브를 넣어. 참고: 양 봉 벌 침 방지 하기 위해 지정 된 재킷을 착용 하십시오. 간호 꿀벌 실험에 따라 수집 될 수 있습니다. 간호사 꿀벌을 잡으려고 왁 스 빗에 꿀벌의 행동을 관찰 하 고 브루 드 셀 날개 또는 핀셋을 사용 하 여 흉부 애벌레 먹이 그들의 머리를 찌를 간호사 꿀벌을 잡아. 그런 다음, 꿀벌 50 mL 플라스틱 튜브로, 튜브, 모자 놓고 1.2 단계에서 언급 한 얼음에 넣어.</li>
	<li>무작위로 12 채집을 캡처하십시오. 참고:이 프로토콜 6 많은 결과 많은 당 두 꿀벌을 사용 합니다. 여러 개의 꿀벌 1 개의 관에 잡힐 수 있습니다 및 각 주차장에 꿀벌 나중 결합으로 하나의 튜브에 꿀벌의 수, 중요 하지 않다 (단계 3.1.1 참조). 튜브에 고온 부상 꿀벌 튜브 멋진 여름에 계속.</li>
</ol>2입니다. 꿀벌 뇌의 해 부
<ol><li>실험실에서 anesthetize 꿀벌을 적어도 30 분6 얼음에 50 mL 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>치과 왁 스의 조각을 반 접어 해 부 무대를 준비 하려면 (결과 크기는 약 3.5 x 7.5 c m) 플라스틱 접시 (60 x 15 m m)에 그것을 밀어. 참고: 접힌된 왁 스 단단히 곤충 핀을 보유 하고있다.</li>
	<li>쌍 안 현미경에서 핀셋으로 자사의 시체에서 꿀벌의 머리를 분리 하 고 상승 위치 (그림 2A)에 머리의 앞쪽을 각 안테나의 기지에서 곤충 핀을 삽입 하 여 치과 왁 스에 그것을 해결 합니다. 참고: 세척 소독된 물 또는 에탄올을 사용 하 여 사용 하기 전에 핀셋.</li>
	<li>그것을 충당 하기 위해 머리에 충분 일 분 해결책 (0.13 mol/L NaCl, 5 mmol/L KCl, 그리고 1 mmol/L CaCl2-2 H2O)를 붓는 다. 머리는 솔루션에 뜨는 경우는 핀으로 다시 머리 피어스. 얼음 처럼 차가운 식 염 수 솔루션을 사용 하 여 필요한 경우. 참고: 그러나,이 찬 염 없이 작동합니다.</li>
	<li>핀셋 (그림 2B)를 사용 하 여 안테나를 제거 합니다.</li>
	<li>안테나의 고 경도 화합물 눈, 메스를 사용 하 여 테두리에 기지 근처 가로 컷을 확인 합니다. 다음, 머리의 상단에서 가로 잘라를 확인 하십시오. (그림 2C) 뇌에 창을 열려면 표 피를 제거 합니다. 참고: 필요한 경우 에탄올 또는 사용 하기 전에 소독된 물 메스를 씻어.</li>
	<li>ocelli를 한다 (그림 2D) 핀셋을 사용 하 여 뇌의 앞쪽 표면에는 retinae를 제거 합니다.</li>
	<li>확장 겹 눈의 테두리에서 잘라 dorsally ventrally, 메스 (그림 2E)를 사용 하 여 합니다. 다음, 바로 아래 눈 표 피 (그림 2F) 핀셋을 삽입 하 여 겹 눈의 표 피와 retinae 사이 결합 조직의 제거.</li>
	<li>겹 눈의 표 피를 삭제 합니다. 핀셋으로 겹 눈의 retinae의 지 느 러 미 끝을 선택 하 고 신중 하 게 retinae (그림 2G)을 벗기다 복 부 방향으로 핀셋을 이동.</li>
	<li>조심 스럽게 핀셋 (그림 2H)를 사용 하 여 뇌의 앞쪽 표면에 남아 있는 기관 제거.</li>
	<li>두뇌 사이 조직, 핀셋를 사용 하 여 주위 결합 조직을 잘라내어 머리 캡슐 (그림 2H)에서 뇌를 해 부.</li>
	<li>(그림 2나) 핀셋을 사용 하 여 두뇌의 후부 표면에 한다 벗기십시오.</li>
	<li>메스를 사용 하 여 잘라는 MBs 및 MBs (그림 2J)의 일부인 수직 엽 옆 다른 두뇌 지구 사이 연결.</li>
	<li>해 부 MBs 장소와 남은 뇌 조직을 1.5 mL 튜브에 빠르게 드라이 아이스 나 액체 질소 (그림 2K) 그들을 동결. -80 ° C에서 냉동된 조직 사용까지 저장 합니다. 참고: 지정 된 장갑과 찬 화상 및 질 식 방지 하기 위해 환기와 액체 질소를 처리 합니다. 드라이 아이스도 장갑과 신중 하 게 처리 되어야 합니다. 프로토콜 여기 일시 중지 될 수 있습니다. 해 부 및 저장 조직 되어야 하는 뇌의 단백질 저하를 방지 하려면 한 번에 한 벌을 수행.</li>
</ol>3입니다. 뇌 Homogenates의 준비
<ol><li>균질 버퍼 이루어진 50 mmol/L HEPES의 10 µ L 추가-코 (pH 7.2), 70 mmol/L KCl, 및 1.0 mmol/L CaCl2 는 냉동에 뇌 조직 그리고 수동으로 플라스틱 유 봉과 압력을 적용 하 여 1.5 mL 튜브에 조직 균질. 조직 적어도 200 스트로크 x. 참고: 얼음 3에 설명 된 조작을 수행 합니다. 유 봉 오른쪽 맞춤을 사용 하 여 충분히 조직 부 관에는 쉽게 균질 버퍼에 부동.<ol>
<li>무 균된 조직 솔루션에에서 다음 조직에 전송 하 고 같은 방식으로 조직을 균질. 참고: 각 많은 꿀벌이이 단계에서 결합 됩니다. 이 프로토콜 6 많이 사용합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>균질 버퍼의 30 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>약 900 x g27 와 4 ° C에서 10 분 동안 무 균된 조직 샘플을 원심</li>
	<li>새로운 1.5 mL 튜브에는 상쾌한을 전송 하 고 다시 약 9500 g27 와 4 ° c.에 20 분 동안 원심</li>
	<li>새로운 1.5 mL 튜브에 상쾌한 장소. 사용까지-20 ° C에서 homogenate를 저장 합니다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	<li>Bicinchoninic 산 (BCA) 분석 결과 사용 하 여 단백질 농도 결정 합니다.<ol>
<li>(따라서에 homogenate diluting eightfold) 멸 균 물의 17.5 µ L로는 homogenate의 2.5 µ L를 희석 하 고 모든 희석된 homogenate를 사용 합니다. 참고: 샘플링 homogenate는 micropipette를 사용 하 여 그것의 높은 점성 때문에 신중 하 게 수행 되어야 합니다.</li>
		<li>사용 하 여 0, 0.1, 0.2, 0.4, 1.0, 및 2.0 mg/mL 소 혈 청 알 부 민 (BSA)의 20 µ L에 표준으로 BCA 분석 결과 수행 합니다. 참고: 변경의 필요에 따라 BCA 분석 결과 규모 homogenate 표준 샘플의 볼륨에 따라. 프로토콜 여기 일시 중지 될 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. PLC 반응 두뇌 Homogenates에서
<ol><li>50 µ / L에서 소독된 물에 녹아 있는 fluorogenic 기판 WH-1526 의 재고 솔루션을 준비 하 고-80 ° c.에 그것을 저장합니다 참고: 퇴색을 방지 하기 위해 호 일 기판을 포함 하는 솔루션을 커버 합니다.</li>
	<li>반응 혼합물의 10 µ L에서 다음 구성 달성 하기 위해 필요한 볼륨에 반응 premixture 준비: 50 mmol/L HEPES-코 (pH 7.2), 70 mmol/L KCl, 1.0 mmol/L CaCl2, 2.0 mmol/L dithiothreitol, 50 mg/L BSA, 및 12.5 µ / L WH-15.</li>
	<li>필요한 경우 균질 버퍼, homogenate 희석.</li>
	<li>혼합 반응 premixture와 반응 혼합물의 10 µ L의 최종 볼륨을 달성 하기 위해 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR) 튜브에 있는 단백질의 1.3 µ g를 포함 하는 homogenate.<ol>
<li>통계 분석에 대 한 두 가지 유형의 제어 혼합물 준비: homogenate 하지만 혼합물 (컨트롤 1), 혼합물으로 하지 ㅁ-15와 반대로 (제어 혼합물 2). 참고: 반응 혼합물과 단백질 저하와 PLC의 반응을 방지 하기 위해 얼음에 제어 섞어 준비 합니다. 제어 혼합물 1과 2는 각각 homogenate 및 무료 기판, 형광을 검출 하는 데 사용 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>튜브를 제거 하 고 25 ° c.에 30 분 동안 열 cycler에서 품 어</li>
	<li>25 mmol/L 에틸렌 글리콜 비스 (β-aminoethylether)의 2 µ L을 추가 하 여 반응을 중지-N, N, N', N'-tetraacetic 산. 참고: 적절 한 단백질 양의 반응 시간 실험 마다 다릅니다. 따라서, 반응 조건 최적화, 그것 형광 선형으로 증가 될 때까지 단백질 양과 보육 시간을 변경 하 여 예비 실험 단계 4.1 5.3에서에서 설명한 절차를 반복 하 여 필요할 수 있습니다. 참고로, 다른 두뇌 지구에서 파생 된 homogenate을 사용 하는 경우 반응 보통 작동 선형 1.3 µ g 또는 30 분, 하지만 선형 단백질의 더 적은 단백질의 적어도 2.7 µ g 또는 90 분의 또는 lo는 보육 시간 감소 nger입니다.</li>
</ol>5. PLC 활동에서 발생 하는 형광의 탐지
<ol><li>반응 혼합물 및 약 310 x g28 에서 5 분에 대 한 제어 혼합물 centrifuge 고 384-잘 microplate 형광 검출에 대 한 적용에 다른 우물에는 상쾌한의 10 µ L를 전송. 참고: 페이딩 및 먼지와 오염을 방지 하기 위해 호 일 접시 커버.</li>
	<li>플러시는 microplate에 대 한 원심 분리기를 사용 하 여 미 판.</li>
	<li>Microplate 리더에 접시를 설정 하 고 기술 3 중으로 형광을 검출. 참고: 여기 및 방출 파장은 344 및 530 nm, 각각. (Microplate 리더)에 따라 해당 하는 경우 혼합 5 샘플 혼합물 각 검색 전에 s. 프로토콜은 여기 중지 될 수 있습니다.</li>
</ol>6. 테스트 Pharmacologic 에이전트의 금지 조치의
<ol><li>Edelfosine와 네오 마이 신에 적절 한 농도의 재고 솔루션을 준비 하 고 사용까지 그들을 저장: 5.0 mmol/L에-20 ° C; edelfosine 550 mmol/L와 4 ° C에서 네오 마이 신</li>
	<li>설명 된 대로 반응 premixture를 준비할 때 단계에서 4.2., 적절 한 최종 농도 달성 하기 위해 premixture에 억제제를 추가: edelfosine, 1.0 mmol/L; 네오 마이 신, 0.55 m m o l/l.</li>
	<li>4.4 단계에서 반응 premixture 하 고 적절 한 제어 혼합물에는 homogenate를 추가 합니다.<ol>
<li>세 가지 유형의 제어 혼합물 준비: 제어 혼합물 1;는 homogenate와 억제제, 하지만 하지 기판 투입 기판 및 억제제만 하지 homogenate 제어 혼합물 2;로 추가 그리고 억제 물, 하지만 하지는 homogenate 또는 기판 제어 혼합물 3로.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PLC 반응 및 형광 단계 4.5 5.3에에서 설명 된 대로의 검출을 수행 합니다.</li>
</ol>7. 통계 분석
<ol><li>섹션 4에서에서 설명한 혼합물을 사용 하 여 PLC 활동의 탐지를 위해 다음과 같이 homogenate 또는 무료 기판에서 방출 하는 형광을 빼서 PLC와 기판 사이의 반응에서 파생 하는 형광을 계산 합니다. 플로리다 (PLC 활동) = Fl (반응 믹스)-{Fl (ctrl 1) + Fl (ctrl 2)} ​ 참고: Fl (PLC 활동), 플로리다 (반응 믹스), 플로리다 (ctrl 1)와 플로리다 (ctrl 2) PLC 활동에서 파생 된 진실 fide 형광을 나타내는, 형광 검출 반응 혼합물, 및 제어 혼합물에 1, 2, 각각.<ol>
<li>4.1-5.3, 단계에서 설명한 대로 혼합물에서 형광 측정 후 단계 7.1에서에서 방정식 그리고 플로리다 (PLC 활동) 각 homogenate에 대 한 기술 3 중의 뜻에 따라 플로리다 (PLC 활동)을 계산 합니다.</li>
		<li>7.1.1 단계에서 얻은 기술 3 중의 평균 Fl (PLC 활동)를 사용 하, 생물 복제는 MBs와 다른 두뇌 지역 평균 Fl (PLC 활동)를 다시 계산 하 고 뇌 조직 간의 값을 비교.</li>
	</ol>
</li>
	<li>억제제 섹션 6에에서 설명 된 혼합물을 사용 하 여 존재 PLC 활동의 시험, 형광 homogenate, 기판와 억제 물 사이 반응에서 파생 된 다음과 같이 계산 합니다. Fl (와 억제제 PLC 활동) = Fl (반응 믹스)-{Fl (ctrl 1) + Fl (ctrl 2)} + Fl (ctrl 3) 참고: 여기, Fl (와 억제제 PLC 활동)는 진실 fide 형광 PLC는 억제제의 활동에서 유래한. Fl (반응 믹스), 플로리다 (ctrl 1), 플로리다 (ctrl 2)와 플로리다 (ctrl 3) 형광 신호 제어 혼합물 1, 반응 혼합물에서 감지 제어 혼합물 2, 및 제어 혼합물 3, 각각 있습니다.<ol>
<li>혼합 단계 6.1 6.4에에서 설명 된 대로에 형광 측정 후 단계 7.2에서에서 방정식에 따라 Fl (와 억제제 PLC 활동)을 계산 합니다. 그런 다음, 각 homogenate에 대 한 기술 3 중의 평균 Fl (와 억제제 PLC 활동)를 얻을.</li>
		<li>7.2.1 단계에서 계산한 평균 값을 사용 하 여, 각 뇌 조직에서 파생 된 생물 복제의 의미 Fl (와 억제제 PLC 활동)를 계산 합니다. Fl (와 억제제 PLC 활동)과 7.1.2 각 뇌 조직에 단계에서 얻은 Fl (PLC 활동)를 비교 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinston%2C+ML+%22The+Biology+of+the+Honey+Bee%22">The Biology of the Honey Bee</a>. , Harvard University Press. Cambridge, MA. (1991).</li>
<li>Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+and+non-associative+plasticity+in+Kenyon+cells+of+the+honeybee+mushroom+body%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Systems+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Associative and non-associative plasticity in Kenyon cells of the honeybee mushroom body.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 2, 3(2008).</li>
<li>Müßig, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+disruption+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR1+in+the+honeybee+brain+selectively+impairs+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation.</a> The Journal of Neuroscience. 30 (23), 7817-7825 (2010).</li>
<li>Devaud, J. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+substrate+for+higher-order+learning+in+an+insect%3A+mushroom+bodies+are+necessary+for+configural+discriminations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neural substrate for higher-order learning in an insect: mushroom bodies are necessary for configural discriminations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), E5854-E5862 (2015).</li>
<li>Grünbaum, L., Müller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+specific+olfactory+memory+leads+to+a+long-lasting+activation+of+protein+kinase+C+in+the+antennal+lobe+of+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction of a specific olfactory memory leads to a long-lasting activation of protein kinase C in the antennal lobe of the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 18 (11), 4384-4392 (1998).</li>
<li>Kamikouchi, A., Takeuchi, H., Sawata, M., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentrated+expression+of+Ca2%2B%2Fcalmodulin-dependent+protein+kinase+II+and+protein+kinase+C+in+the+mushroom+bodies+of+the+brain+of+the+honeybee+Apis+mellifera+L%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Concentrated expression of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II and protein kinase C in the mushroom bodies of the brain of the honeybee Apis mellifera L.</a> The Journal of Comparative Neurology. 417 (4), 501-510 (2000).</li>
<li>Sen Sarma, M., Rodriguez-Zas, S. L., Hong, F., Zhong, S., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+profiling+of+central+nervous+system+regions+in+three+species+of+honey+bee+during+dance+communication+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic profiling of central nervous system regions in three species of honey bee during dance communication behavior.</a> PLoS ONE. 4 (7), e6408(2009).</li>
<li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+analysis+of+the+expression+of+futsch%2C+tau%2C+and+MESK2+homologues+in+the+brain+of+the+European+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization analysis of the expression of futsch, tau, and MESK2 homologues in the brain of the European honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 5 (2), e9213(2010).</li>
<li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+middle-type+Kenyon+cells+in+the+honeybee+brain+revealed+by+area-preferential+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Novel middle-type Kenyon cells in the honeybee brain revealed by area-preferential gene expression analysis.</a> PLoS ONE. 8 (8), e71732(2013).</li>
<li>Pasch, E., Muenz, T. S., Rössler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CaMKII+is+differentially+localized+in+synaptic+regions+of+kenyon+cells+within+the+mushroom+bodies+of+the+honeybee+brain%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">CaMKII is differentially localized in synaptic regions of kenyon cells within the mushroom bodies of the honeybee brain.</a> The Journal of Comparative Neurology. 519 (18), 3700-3712 (2011).</li>
<li>Suenami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+differentiation+of+Kenyon+cell+subtypes+using+three+mushroom+body-preferential+genes+during+metamorphosis+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Analysis of the differentiation of Kenyon cell subtypes using three mushroom body-preferential genes during metamorphosis in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 11 (6), e0157841(2016).</li>
<li>Farooqui, T., Robinson, K., Vaessin, H., Smith, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+early+olfactory+processing+by+an+octopaminergic+reinforcement+pathway+in+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Modulation of early olfactory processing by an octopaminergic reinforcement pathway in the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (12), 5370-5380 (2003).</li>
<li>Matsumoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-gated+channels%2C+calmodulin%2C+adenylyl+cyclase%2C+and+calcium%2Fcalmodulin-dependent+protein+kinase+II+are+required+for+late%2C+but+not+early%2C+long-term+memory+formation+in+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-gated channels, calmodulin, adenylyl cyclase, and calcium/calmodulin-dependent protein kinase II are required for late, but not early, long-term memory formation in the honeybee.</a> Learning & Memory. 21 (5), 272-286 (2014).</li>
<li>Scholl, C., Kübert, N., Muenz, T. S., Rössler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CaMKII+knockdown+affects+both+early+and+late+phases+of+olfactory+long-term+memory+in+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">CaMKII knockdown affects both early and late phases of olfactory long-term memory in the honeybee.</a> Journal of Experimental Biology. 218, 3788-3796 (2015).</li>
<li>Miyata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficient+long-term+synaptic+depression+in+the+rostral+cerebellum+correlated+with+impaired+motor+learning+in+phospholipase+C+%CE%B24+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Deficient long-term synaptic depression in the rostral cerebellum correlated with impaired motor learning in phospholipase C β4 mutant mice.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (10), 1945-1954 (2001).</li>
<li>Koh, H. -Y., Kim, D., Lee, J., Lee, S., Shin, H. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+social+behavior+and+sensorimotor+gating+in+mice+lacking+phospholipase+C%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Deficits in social behavior and sensorimotor gating in mice lacking phospholipase Cβ1.</a> Genes, Brain and Behavior. 7 (1), 120-128 (2008).</li>
<li>Quan, W. -X., et al. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0941950012000735">Characteristics of behaviors and prepulse inhibition in phospholipase Cε-/- mice.</a> Neurology,Psychiatry and Brain Research. 18 (4), 169-174 (2012).</li>
<li>Rioult-Pedotti, M. -S., Pekanovic, A., Atiemo, C. O., Marshall, J., Luft, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+promotes+motor+cortex+plasticity+and+motor+skill+learning+via+PLC+activation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dopamine promotes motor cortex plasticity and motor skill learning via PLC activation.</a> PLoS ONE. 10 (5), e0124986(2015).</li>
<li>Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+in+neurons%3A+molecular+mechanisms+and+cellular+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling in neurons: molecular mechanisms and cellular consequences.</a> Science. 268 (5208), 239-247 (1995).</li>
<li>Smrcka, A. V., Brown, J. H., Holz, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+phospholipase+C%CE%B5+in+physiological+phosphoinositide+signaling+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Role of phospholipase Cε in physiological phosphoinositide signaling networks.</a> Cellular Signalling. 24 (6), 1333-1343 (2012).</li>
<li>Dusaban, S. S., Brown, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLC%CE%B5+mediated+sustained+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Biological+Regulation%22%5BJournal%5D)">PLCε mediated sustained signaling pathways.</a> Advances in Biological Regulation. 57, 17-23 (2015).</li>
<li>Elgersma, Y., Sweatt, J. D., Giese, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+genetic+approaches+to+investigating+calcium%2Fcalmodulin-dependent+protein+kinase+II+function+in+plasticity+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mouse genetic approaches to investigating calcium/calmodulin-dependent protein kinase II function in plasticity and cognition.</a> The Journal of Neuroscience. 24 (39), 8410-8415 (2004).</li>
<li>Giese, K. P., Mizuno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+protein+kinases+in+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">The roles of protein kinases in learning and memory.</a> Learning & Memory. 20 (10), 540-552 (2013).</li>
<li>Suenami, S., Iino, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+inhibition+of+phospholipase+C+in+the+brain+attenuates+early+memory+formation+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Open%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic inhibition of phospholipase C in the brain attenuates early memory formation in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> Biology Open. 7 (1), pii: bio028191 (2018).</li>
<li>Zhu, L., McKay, R. R., Shortridge, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+phospholipase+C+encoded+by+the+norpA+gene+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of phospholipase C encoded by the norpA gene of Drosophila melanogaster.</a> The Journal of Biological Chemistry. 268 (21), 15994-16001 (1993).</li>
<li>Huang, W., Hicks, S. N., Sondek, J., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fluorogenic%2C+small+molecule+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">A fluorogenic, small molecule reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> ACS Chemical Biology. 6 (3), 223-228 (2011).</li>
<li>Yoshioka, T., Inoue, H., Hotta, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+phosphatidylinositol+phosphodiesterase+in+the+head+of+a+Drosophila+visual+mutant%2C+norpA+%28no+receptor+potential+A%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Absence of phosphatidylinositol phosphodiesterase in the head of a Drosophila visual mutant, norpA (no receptor potential A).</a> The Journal of Biochemistry. 97 (4), 1251-1254 (1985).</li>
<li>Janjanam, J., Chandaka, G. K., Kotla, S., Rao, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLC%CE%B23+mediates+cortactin+interaction+with+WAVE2+in+MCP1-induced+actin+polymerization+and+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">PLCβ3 mediates cortactin interaction with WAVE2 in MCP1-induced actin polymerization and cell migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 26 (25), 4589-4606 (2015).</li>
<li>Fiala, A., Müller, U., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+downregulation+of+protein+kinase+A+during+olfactory+learning+using+antisense+technique+impairs+long-term+memory+formation+in+the+honeybee%2C+Apis+mellifera%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reversible downregulation of protein kinase A during olfactory learning using antisense technique impairs long-term memory formation in the honeybee, Apis mellifera.</a> The Journal of Neuroscience. 19 (22), 10125-10134 (1999).</li>
<li>Thamm, M., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKG+in+honey+bees%3A+spatial+expression%2C+Amfor+gene+expression%2C+sucrose+responsiveness%2C+and+division+of+labor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">PKG in honey bees: spatial expression, Amfor gene expression, sucrose responsiveness, and division of labor.</a> The Journal of Comparative Neurology. 522 (8), 1786-1799 (2014).</li>
<li>Balfanz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+transmembrane+adenylyl+cyclases+from+the+honeybee+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochemistry+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of transmembrane adenylyl cyclases from the honeybee brain.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (6), 435-445 (2012).</li>
<li>Lopez, I., Mak, E. C., Ding, J., Hamm, H. E., Lomasney, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11022047">A novel bifunctional phospholipase C that is regulated by Gα12 and stimulates the Ras/mitogen-activated protein kinase pathway.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (4), 2758-2765 (2001).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+membrane-associated%2C+fluorogenic+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A membrane-associated, fluorogenic reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 293 (5), 1728-1735 (2018).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

단백질 활동의 생화학 검사는 심히 중요 한 효소의 활동 억제제, 기판 등 다양 한 분자에 의해 영향을 함께 따라서, 변경할 수 있습니다 때문에 두뇌에 신호 분자를 이해 하기 위한 동물 행동 (예, 학습 및 메모리)5. 꿀벌 연구, 순환 앰프 종속 단백질 키 니 아 제 A, 순환 GMP 종속 단백질 키 니 아 제, PKC, phosphorylated CaMKII, 및 adenylate 있고 같은 효소에 따라 다양 한 두뇌 지구에서 차동 표현 될 보고 immunohistochemistry5,10,29,,3031. 그러나 뇌 영역 간의 효소 활동에 차이, 단지 부분적으로 보고<sup cl...

유럽 꿀벌 (Apis mellifera L.)는 eusocial 곤충, 그리고 여성 꿀벌 표시 노동의 연령에 따라과 계급 종속 복제. 예를 들어 '노동자' 라고 하는 꿀벌의 메 마른 계급, 젊은 개인이 오래 된 것 들 꼴 꿀 및 꽃가루 하이브1밖에 서 하는 동안이 broods 피드. 학습 및 메모리 채집 반복적으로 음식 소스와 그들의 둥지 사이 앞뒤로 이동 해야 합니다 때문에 좋은 음식 소스 춤을 통해 그들의 nestmates의 위치를 의사 소통 능력은, 꿀벌의 삶에 매우 중요 하다 통신1. 이전 학문 설명 MB, 곤충에 더 높은 두뇌 센터는 꿀벌2,,34의 학습 및 기억 능력에 관여 했다. 차동 표현한 유전자와 단백질 꿀벌5,6,7,8,,910 의 다양 한 두뇌 지역에서 발견 되었습니다. 11, 각 뇌 영역의 독특한 기능 관련 제안. 약리학 적인 억제 또는 관심사의 단백질의 활성화는 꿀벌 행동12,,1314에 단백질의 기능을 잘 사용된 접근, 그것은 알 모든 약물 여부 꿀벌 두뇌의 다른 지역에서 기능적 효과 있다. 같은 약물의 기능 유효성 검사 행동 약리학의 연구에서 결론을 강화 것입니다.
여기, 우리는 PLC, 마우스 인식15,,1617,18에 연루 효소 중 하나에 집중 한다. PLC는 칼슘을 이노 시 톨 1,4,5-trisphosphate (IP3) 및 diacylglycerol (DAG)19,,2021에 phosphatidylinositol 4, 5 bisphosphate (핍2)를 저하 하 여 신호를 트리거합니다. IP3 IP3 수용 체 (ER), 바인딩과 그물에 응급실에서 칼슘 이온의 출시로 이어지는 열립니다. 나온된 칼슘 calmodulin와 칼슘 calmodulin 인당 단백질 키 니 아 II (CaMKII)와 단백질 키 니 아 제 C (PKC) DAG의 존재를 활성화합니다. 두 단백질 kinases는 학습 및 메모리22,23,이 과정에서 PLC의 참여와 참여. Plc는 하위 유형, PLCβ, PLCγ, PLCε,20그들의 구조 따라 등으로 분류 됩니다. 각 PLC 하위 컨텍스트20에서 활성화 되 고 그 하위 인코딩 유전자 차동 다른 조직에 표현 됩니다. 우리는 이전 증명 꿀벌 MBs 유전자는 나머지 뇌 영역24, 보다 높은 수준에서 PLCβ 및 PLCε 하위 인코딩 익스프레스 고 두 팬 PLC 억제제 (edelfosine, 네오 마이 신 황산 [네오 마이 신])에서 PLC 활동 감소 다른 지역 두뇌와, 참으로, 꿀벌24의 학습 및 기억 능력에 영향을 미칠.
전통적으로, PLC의 효소 활동 방사선된 핍225, 적절 한 훈련, 장비 및 시설 필요를 사용 하 여 측정 되었습니다 했다. 최근, PLC의 합성 fluorogenic 기판 설립된26, 표준 실험실에서 PLC 활동을 평가 하기 쉽게 되었습니다. 여기, 우리 fluorogenic 기판을 사용 하 여 꿀벌의 다른 뇌 영역에 PLC 활동을 감지 하 고 이후에이 조직에 PLC에 edelfosine의 네오 마이 신 억제 효과 테스트 하는 자세한 프로토콜을 제시. 프로토콜 기본 조작만 필요, 그것은 꿀벌 다른 사회적 작업에 할당 된 다른 조직에서 PLC 활동 또는 뇌의 연구에 적용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Pierce BCA 단백질 분석 키트</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23227</td><td>단백질 농도 측정을 위한 시약 키트</td></tr><tr><td>Pierce 소 혈청 알부민 표준 앰플 2mg/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23209</td><td>BCA 분석에 사용되는 표준 샘플</td></tr><tr><td>파라핀 왁스</td><td>GC</td><td>13B1X00155000141</td><td>해부 단계로 사용되는 치과용 왁스</td></tr><tr><td>곤충 핀</td><td>Shiga</td><td>No. 0</td><td>스테인리스, 솔리드 헤드</td></tr><tr><td>PLCglow</td><td>KXT Bio</td><td>KCH-0001</td> PLC 384웰 마이크로플레이트<td>의 형광 기판</td></tr><tr><td></td><td>Corning</td><td>4511</td><td>저용량, 검은색 원형 바닥판</td></tr><tr><td>Gemini EM 마이크로플레이트 리더</td><td>분자 장치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Edelfosine</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201021</td><td>pan-PLC 억제제</td></tr><tr><td>Neomycin 황산염</td><td>Santa Cruz 생명 공학</td><td>sc-3573</td><td>pan-PLC 억제제</td></tr></tbody></table>

꿀벌에서 두뇌 homogenate에서 phospholipase c 활동의 탐지

Detection of Phospholipase C Activity in the Brain Homogenate from the Honeybee

꿀벌은 복잡 한 행동과 학습, 메모리, 및 분업 등 더 높은 두뇌 기능을 평가 하기 위한 모형 유기 체. 버섯 몸 (MB)은 복잡 한 꿀벌 행동의 신경 기질 수 제안 더 높은 두뇌 센터 이다. 이전 연구 유전자와 단백질을 차동는 MBs 및 다른 뇌 영역에 표시 됩니다 확인, 각 지역에 있는 단백질의 활동은 아직 완전히 이해 되지. 두뇌에 있는이 단백질의 기능을 공개, 약리학 적인 분석 가능한 접근 이지만 약리학 적인 조작 사실 이러한 두뇌 지구에서 단백질 활동 변경 확인을 첫 번째 필요.
우리는 이전 phospholipase C (PLC) 다른 두뇌 지역에 보다 MBs에 인코딩 하는 유전자의 높은 식 식별 하 고 약리학 꿀벌 행동에 PLC의 참여 평가. 그 연구에서 우리는 화학적 두 pharmacologic 에이전트를 테스트 하 고 그들은 PLC는 MBs 및 다른 뇌 영역에서 활동 감소 확인. 여기, 우리는 꿀벌 뇌 homogenate에서 PLC 활동을 검출 하는 방법에 대 한 자세한 설명을 제시. 이 분석 결과 시스템에서 homogenates 서로 다른 뇌 영역에서 파생 된 합성 fluorogenic 기판으로 반응 하 고 PLC 활동에서 발생 하는 형광은 계량 두뇌 지구 사이 비교. 우리는 또한 동일한 시스템을 사용 하 여 PLC 활동에 특정 약물의 억제 효과의 평가 설명 합니다. 이 시스템은 다른 생 형광 화합물 및 분석 결과 구성 요소와 조직의 흡 광도 의해 영향을 가능성이 높습니다, 하지만이 시스템을 사용 하 여 PLC 활동의 측정은 안전 하 고 전통적인 분석 결과 사용 하 여 보다 쉽게는 방사선된 기판을 필요합니다. 간단한 절차와 조작 PLC 활동 두뇌와 다른 사회적 작업에 관련 된 꿀벌의 다른 조직에서 검사 수 있습니다.

Homogenates 뇌에에서 단백질 농도: 우리는 사실을 꿀벌을 사용 하 여 homogenates을 준비. 원래 homogenates에서 계산된 단백질 농도 그림 3에 나와 있습니다. 원래 homogenate에 대략적인 단백질 농도 했다 다음과 같습니다: 1.5 m g/mL는 MBs에서 그리고 다른 두뇌 지역에 2.3 mg/mL. 우리가 사용 하는 많은 당 두 꿀벌 그리고 6 많은 분석 했다.
뇌 Homogenates에서 PLC 활동의 탐지: 파일럿 실험에서 우리는 MBs에서 보다 다른 두뇌 지구에서 높은 형광을 감지. 따라서, 우리는 다른 두뇌 지역의 homogenate를 사용 하 여 예비 실험을 반복 하 고 반응 시간 (즉</e...

꿀벌 두뇌의 다른 지역에서 phospholipase C (PLC)에 pharmacologic 에이전트의 억제 효과 테스트 하려면 우리는 그 지역에서 PLC 활동을 측정 하는 생 화 확 적인 분석 결과 제시. 이 분석 결과 PLC 활동 조직 들 뿐만 아니라 다른 행동을 전시 하는 꿀벌 들을 비교 하는 데 유용 수 있습니다.

꿀벌에서 두뇌 Homogenate에서 Phospholipase C 활동의 탐지

The honeybee is a model organism for evaluating complex behaviors and higher brain function, such as learning, memory, and division of labor. The mushroom ...

이 방법은 다른 뇌 영역에서 PLC 활동이 꿀벌의 뇌 기능에 관여하는지 여부와 방법과 같은 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 이 프로토콜만 기본적인 조작만 필요하기 때문에 표준 실험실 시설을 사용하여 실험을 쉽게 수정할 수 있다는 것입니다. 먼저 꿀벌을 얼음 위에 꿀벌이 들어 있는 50ml 튜브를 30분 간 놓고 꿀벌을 마취시합니다. 다음으로, 치과 왁스 조각을 반으로 접어 서 서 해부 단계를 준비 하 고 플라스틱 접시에 배치 합니다. 쌍안경 현미경의 밑에, 몸에서 꿀벌의 머리를 분리하기 위하여 핀셋을 사용합니다. 그런 다음, 치과 왁스에 머리를 고정하고 상향 위치에 머리의 내부를 유지하기 위해 각 안테나의 바닥에 곤충 핀을 삽입합니다. 다음으로, 그것을 덮기 위해 머리 위에 충분한 식염수 용액을 붓습니다. 핀셋을 사용하면 안테나가 제거됩니다. 그런 다음 메스를 사용하여 안테나의 기지 근처에서 수평 절단을 하고 복합 눈의 경계에서 세로 절단을 합니다. 머리 의 상단에 수평 컷을 확인하고 뇌를 통해 창을 열 수있는 큐티클을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 소과 기관에서 망막 눈을 제거합니다. 그런 다음, 핀셋을 눈 표기 아래에 직접 삽입하여 복합 눈과 망막 눈의 큐티클 사이의 결합 조직을 제거합니다. 그 후, 화합물 눈의 큐티클과 망막 눈을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 남은 기관체를 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 뇌와 조직 주위의 결합 조직을 잘라 헤드 캡슐에서 뇌를 해부합니다. 핀셋을 사용하여 뇌의 후방 표면에서 기관지 껍질을 벗깁니다. 그런 다음 메스를 사용하여 수직 엽 옆에 있는 버섯 몸이나 MB및 기타 뇌 영역 사이의 연결을 잘라냅니다. 해부된 MB와 남은 뇌 조직을 1.5ml 튜브에 넣고 드라이 아이스로 빠르게 얼립니다. 첫째, 냉동 뇌 조직에 균질화 완충제 10ml를 추가합니다. 1.5ml 튜브의 조직을 수동으로 균질화하기 위해 플라스틱 페셀을 사용합니다. 그 후, 균질화된 조직 용액을 제비의 다음 조직으로 옮기고 균질화 과정을 반복한다. 그런 다음 30을 추가합니다.

detection-phospholipase-c-activity-brain-homogenate-from

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 비디오에서는 해양 말미잘인 Anthopleura dowii의 조독 추출물에서 포스포리파아제의 존재를 확인하는 분석을 보여줍니다. 이 분석은 효소 포스포리파아제(Enzyme phospholipase)가 방사형 방식으로 고체 매체에 통합된 인지질을 확산시키고 분해하는 아가로스 겔 확산 기술을 사용합니다.

Phospholipase Activity Assay: Anthopleura dowii 의 조독 추출물에서 Phospholipase 활성을 결정하기 위한 겔 확산 분석

이 비디오에서는 미세유체 플랫폼이라고 하는 지지된 지질 이중층의 포스파티딜에탄올아민 지질에 태그가 지정된 pH 민감 형광 염료를 사용하여 pH 조절 분석을 사용하여 미세유체 패턴의 단백질-포스포이노시티드 상호 작용을 시연합니다. 단백질이 인지질에 결합한 후 pH의 조절은 형광 소멸을 유발합니다.

단백질-포스포이노시티드 상호작용을 검출하기 위해 지원되는 지질 이중층에 대한 pH 조절 분석

단백질 palmitate의 치료뿐만 아니라이 세포 내 단백질 인신 매매의 중요한 조절기입니다. 이것은 많은 시냅스 단백질이 palmitoylated 아르 뉴런에 특별한 관심입니다. 우리는 여러 세포 유형과 조직에 적용 할 수 있습니다 교양 뉴런에 palmitoylated 단백질을 감지하는 간단한 생화학 방법을 사용합니다.

Immunoprecipitation 및 아실-비오틴 거래소 (아베)에 의한 양식 Hippocampal 뉴런의 단백질 Palmitoylation의 감지

PI (4,5) P (2)는 다양한 세포 기능을 조절하지만, 세포 세포막에서의 나노 조직 잘못 이해된다. 라벨 PI 플렉스 트린 상동 도메인에 융합 된 이중 색상 형광 프로브 (4,5) P (2)에 의해, 우리는 나노 미터 스케일에서 (4,5) P 원형질막 2 공간 분포를 PI를 연구하는 새로운 방법을 기술 .

소설 형광 프로브와 플라즈마 막에서 포스파티딜 이노시톨 -4,5- 비스 포스페이트의 단일 분자 슈퍼 해상도 이미징

많은 예측된 (포스포) 리파제는 기질 특이성 및 생리학적 기능과 관련하여 제대로 특성화되지 않았습니다. 여기에서 우리는 효소 활성을 최적화하고, 천연 기질을 검색하고, 이러한 효소에 대한 생리학적 기능을 제안하는 프로토콜을 제공합니다.

리파제 및 포스 후보자에 대한 기질 특이성을 정의

여기서 제시된 프로토콜은 항체 특이성을 시험하기 위해 성인 꿀벌 뇌에서 단백질의 생산을 감소시키기 위한 CRISPR-Cas9 시스템을 사용하는 프로토콜이다.

CRISPR-Cas9를 사용하여 꿀벌 뇌 섹션에서 항 RDL 및 안티 mGlutR1 수용체 항체 테스트

여기서, 우리는 단백질 추출물과 트랜스포파디딜리노시톨 4-인산염이 체외에서인산염을 배출하는지 여부를 결정하기 위해 형광 지질 센서와 리포좀을 사용하는 프로토콜을 설명합니다.

형광 기반 측정 인스파디딜세린/포스파디딜리노시톨 4-인산염 교환 막 간

여기에서, 우리는 바다 말미잘에서 조독 추출물을 얻고 용혈성 및 포스포리파제 활성을 검출하는 프로토콜을 기술한다.

간단한 생물 분석법에 의한 바다 아네몬의 조추출물에서 용혈성 및 포스포리파아제 활성의 확인

면역 조직 화학적 방법은 꿀벌 연구에서 성인 꿀벌의 중추 및 하인두 땀샘에서 세포 사멸 및 괴사 수준을 감지하고 평가하는 데 유용합니다.

꿀벌 조직의 조직학 기초 및 세포 사멸 검출

우리는 기존 기술보다 우수한 감도와 분해능으로 리포솜 막 투과성을 평가하는 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 새로운 캡슐화된 리간드 치환 반응을 사용하여 이 기술은 모델 막에서 포스포리파제 A2 유도 변화를 검출합니다. 표준 분석과 쉽게 통합되는 이 접근 가능한 접근 방식은 막 생물물리학 및 독소 상호 작용 연구를 위한 해상도를 향상시킵니다.

포스파티딜이노시톨 인산염 그룹이 독 PLA2의 멤브란트로픽 작용에 미치는 영향을 조사하기 위한 리포솜 막 투과성 분석

여기에서는 증폭 준비 세포 용해, 재조합효소 중합효소 증폭 및 CRISPR/Cas12a 분석을 사용하여 Lotmaria passim 및 Nosema ceranae 와 같은 꿀벌 병원체에서 DNA를 검출하는 간단하고 빠른 절차를 설명합니다.

RPA/CRISPR/Cas12a 시스템과 결합된 알칼리 용해를 통한 트리파노소마티드 기생충 및 노세마 세라네 의 현장 DNA 검출

학습하세요 꿀벌 뇌 조직에서 phospholipase C 활성을 측정하는 생화학 분석법을 통해 신경과학 및 행동 생물학 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 뇌 기능과 행동의 관계를 이해하는 데 활용됩니다.

꿀벌에서 두뇌 Homogenate에서 Phospholipase C 활동의 탐지

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