Name: 살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: 배우세요 Salmonella와 Shigella 선별을 위한 고처리량 플랫폼을 실시간 PCR과 유도 배양을 결합하여 사용하는 방법입니다. 이 기술은 높은 특이성과 민감도로 병원체를 신속하게 검출할 수 있습니다.

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이 작품은 과학 및 기술 프로그램의 주 하이, 중국 (보조금 번호 20171009E030064), 과학 및 기술 프로그램의 광 동, 중국 (보조금 번호 2015A020211004)는 과학 및 기술 프로그램의 일반 관리에 의해 지원 되었다 질 감독, 검사 및 검역 (보조금 번호 2016IK302, 2017IK224) 중화 인민 공화국의의.

프로토콜은 주 국제 여행 의료 센터의 인간 연구 윤리 위원회에 의해 설정 하는 지침을 따릅니다. 실험 기간 동안 표준 살 균 작업을 사용 하십시오.
1. 문화 미디어 구성 및 준비
<ol><li>영양 국물 준비: 분해 1% 펩, 0.3% 쇠고기 추출 물, 염화 나트륨 0.5%, H2O 포도 당 0.1%, pH 7.5와 오토 클레이 브를 조정 15 분 동안 121 ° C에 그것.</li>
	<li>Selenite Cystine 매체 준비: 분해 펩 0.5%, 0.4% 유 당, 1% 나2HCO3, 0.4% 나트륨 수소 selenite, 0.001% H2O, L-시스 틴 7.0에 pH를 조정 하 고 5 분 동안 끓여.</li>
	<li>준비 된 Xylose Lysine, Deoxycholate 천 (XLD) 배지: 디졸브 0.3% 효 모 추출 물, 0.5 %L-리 신, 0.375 %xylose, 유 당 0.75%, 0.75% 자당, 염화 나트륨 0.5%, 0.008% 페 놀 레드, 0.68% 나트륨 thiosulfate, 0.08% 염화 제 2 철 구 연산 염, 0.25% 나트륨 deoxycholate, H2O, 한 천 1.5% 고 pH 7.4에 조정. 그런 다음 5 분 동안 끓여 고 90 mm 접시에 부 어.</li>
	<li>살 모 넬 라 비 천 배지 준비: 분해 한 천 1.5%, 0.7% 펩과 효 모 추출 물, 선택 시의 약 1.29% H2o. 그런 다음 5 분 동안 끓여 고 90 mm 접시에 부 어.</li>
	<li>영양 한 천 배지 준비: 1% 펩, 0.3% 쇠고기 추출 물, 염화 나트륨 0.5%, H2O, 한 천 1.5%를 녹이 고 pH 7.3 조정. 그런 다음 압력솥 15 분 동안 121 ° C에서 90 mm 접시에 부 어.</li>
	<li>MacConkey agar (MAC) 접시 준비: 분해 펩 2%, 유 당 1%, 0.5% 염화 나트륨, 0.5% 소 담 즙 소금, 0.0025% 중립 빨강, 한 천 1.5%, H2O, 0.0001% 크리스탈 바이올렛 7.2에 pH를 조정 하 고. 그런 다음 압력솥 20 분 동안 115 ° C에서 90 mm 접시에 부 어.</li>
</ol>2. 실시간 PCR
<ol><li>샘플 컬렉션<ol>
<li>환자의 항문에는 항문 면봉을 삽입 3-5 cm 깊이, 주위에 360 ° 회전 하는 고.</li>
		<li>살 균 컬렉션 튜브로 항문 면봉을 넣어. 마크 샘플 id입니다.</li>
		<li>보내기 샘플 실험실 최대한 빨리. 참고: 샘플 24 h 4 ° C에서 저장 될 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>사전 농축<ol>
<li>컬렉션 튜브에서 각 샘플에 영양소 국물의 3 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>인큐베이터에 6 h 36 ° C에서 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>(선택 사항) 혼합 샘플<ol>
<li>각 사전 농축 문화 100 µ L를 수집 하 고 10 개 이상의 샘플 있다면 1.5 mL 튜브에 1 견본의 8-10 샘플을 혼합.</li>
		<li>제대로 표시 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>DNA 추출<ol>
<li>사전 농축 문화 정착, 큰 입자를 허용 하도록 2 분 동안 800 x g에서 원심 그리고 새로운 튜브를 5 분에 12000 x g에서 원심 분리기는 상쾌한 전송 삭제는 상쾌한 포부에 의해.</li>
		<li>DNA 추출 솔루션의 100 µ L를 추가 (0.01 M pH 8.0 트리 스-EDTA, 0.01% Nonidet P 40 (NP40)) 펠 릿을. 1 분 동안 적극적으로 소용돌이입니다.</li>
		<li>건조 욕조에 5 분 동안 100 ° C에서 끓인 다.</li>
		<li>5 분을 위한 12000 x g에서 원심 분리기 상쾌한 성공 실시간 PCR 분석에 대 한 서식 파일을 있을 것입니다 새로운 튜브를 사용 하 여 수집 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>실시간 PCR<ol>
<li>반응 혼합물으로 설치 수행: 각 샘플에 대 한 반응 혼합물, 각 뇌관의 0.4 µ M, 각 프로브 ( 표 1에 시퀀스)27의 0.2 µ M, 5 µ L 단계 2.4.4에서 준비 하는 대로 서식 파일의 x 2의 12.5 µ L을 추가 하 고 사용 ddH2O 총 최대 25 µ L을 추가 하 볼륨입니다.</li>
		<li>다음과 같이 순환 프로그램 설치: 3 분 동안 95 ° C 15 95 ° C의 40 주기 다음 s, 55 ° C 30에 대 한 s, 6-카-fluorescein (FAM)와 신장 단계 (72 ° C)에서 Hexachlorofluorescein (16 진수) 채널에서 34 미 수집 형광 신호를 위한 72 ° C 자동으로 형광 실시간 PCR 기계.</li>
		<li>악기의 지시에 따라 형광 실시간 PCR 기계에 실시간 PCR을 수행 합니다.</li>
		<li>4 단계로 바로 이동 하 고 부정적인 결과 샘플은 살 모 넬 라 종에 대 한 부정적인 팸/HEX 채널에서 발생 하는 경우 부정적인 보고서를 발행 /Shigella 종</li>
		<li>긍정적인 결과 발생 16 진수 및 팸 채널에는 샘플 수 있습니다 살 모 넬 라 종 또는 Shigella 종에 대 한 긍정적인 각각 의미 하는 경우 3.1 및 3.2 단계로 이동 합니다. 참고: 샘플 혼합 수행 단계 2.3에서에서, 다음에 긍정적인 것을 만든 개별 샘플 실시간 PCR 수행 되어야 한다 진짜 긍정적인 샘플 화면을.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 인도 문화
<ol><li>
살 모 넬 라 종 PCR 긍정적인 샘플<ol>
<li>매체에 선택적 문화<ol>
<li>테스트 튜브에서 Selenite Cystine 매체의 5 mL에 사전 농축 문화 100 µ L를 추가 합니다. 인큐베이터에서 18-24 h 36 ° C에서 품 어.</li>
		</ol>
</li>
		<li>접시에 문화를 분리<ol>
<li>마이크로-루프와 문화의 한 루프를 수집 하 고 XLD 접시 또는 살 모 넬 라 비 천 배지 확산. 인큐베이터에서 18-24 h 36 ° C에서 품 어.</li>
		</ol>
</li>
		<li>생 화 확 적인 식별<ol>
<li>XLD 접시 (핑크 식민지/어두운 마음 없이 어두운 식민지, 노란색 식민지/어두운 마음 없이) 또는 살 모 넬 라 비 천 배지 선택 의심 스러운 식민지 (자주색 또는 prunosus 식민지, 부드럽고 둥근) (그림 2).</li>
			<li>악기의 지시에 따라 자동화 된 미생물 식별 시스템에 생화학 식별을 위한 주제 의심 스러운 식민지.</li>
		</ol>
</li>
		<li>혈 청 학적인 특성<ol>
<li>O 항 원 특성<ol>
<li>O 항 원 다 원자가 세라 깨끗 한 슬라이드에 한 방울을 추가 합니다.</li>
				<li>마이크로-루프와 갈기는 세라에 식민지의 한 루프를 수집 합니다.</li>
				<li>흐르는 모래, 처럼 보이는 경우 3.1.4.1.4 단계로 이동 식민지는 세라 (그림 3)에 반응. 그렇지 않으면, 단계 3.1.4.1.5로 이동 합니다.</li>
				<li>O 항 원 여러차례 세라를 사용 하 여 특정 O 항 원 특징 단계 3.1.4.1.1 3.1.4.1.3 단계를 반복.</li>
				<li>바이 세라를 사용 하 여 3.1.4.1.1 3.1.4.1.3 단계를 반복 하십시오. 튜브에서 그 Vi 세라 반응 식민지를 수집 하 고 건조 욕조에 5 분 동안 100 ° C에서 비등. 특정 O 항 원 특징 때까지 5 분을 위한 12000 x g에서 원심 분리기는 펠 릿 및 반복 단계 3.1.4.1.1 3.1.4.1.4 수집 합니다.</li>
			</ol>
</li>
			<li>H 항 원 특성<ol>
<li>H 항 원 다 원자가 세라 깨끗 한 슬라이드에 한 방울을 추가 합니다.</li>
				<li>마이크로-루프와 갈기는 세라에 식민지의 한 루프를 수집 합니다.</li>
				<li>3.1.4.2.4 모래, 흐르는 처럼 보이는 단계에 서는 식민지는 세라에 반응.</li>
				<li>H 항 원 여러차례 세라를 사용 하 여 특정 H 항 원 특징 단계 3.1.4.2.1 3.1.4.2.3 단계를 반복. 참고: 때때로 혈 청 유도 필요할 수 있습니다 두 번째 단계 H 항 원 하. 그렇다면, 다음과 같은 선택적 단계 수행 되어야 한다.</li>
				<li>(선택 사항) 영양 한 천 배지 위에 특정 H 항 혈 청 한 방울을 추가 합니다. 모든 세라 흡수 됩니다 때까지 기다립니다.</li>
				<li>(선택 사항) 특정 H 항 원 세라 흡수는 마이크로 루프와 접시에 확산 식민지의 한 루프를 수집 합니다. 인큐베이터에서 18-24 h 36 ° C에서 품 어.</li>
				<li>(선택 사항) H 항 원 여러차례 세라를 사용 하 여 단계 3.1.4.2.1 3.1.4.2.3 단계를 반복 2 단계 H 항 원 특징입니다.</li>
				<li>단계 4로 이동 합니다.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Shigella 종 PCR 긍정적인 샘플<ol>
<li>접시에 문화를 분리<ol>
<li>마이크로-루프와 사전 농축 문화의 한 루프를 수집 하 고 XLD 접시 또는 MAC 판에 확산. 인큐베이터에서 18-24 h 36 ° C에서 품 어.</li>
		</ol>
</li>
		<li>생 화 확 적인 식별<ol>
<li>XLD 플레이트 (부드럽고, 라운드, 투명 하 고 빨간색 식민지) 또는 맥 플레이트 (부드럽고, 라운드, 직경; 2-3 m m 투명 하 고 무색 식민지에 의심 스러운 식민지를 수집 Shigella sonnei 더 큰 수 있으며 보육 시간 신장으로 핑크 빛 돌) (그림 4).</li>
			<li>악기의 지시에 따라 자동화 된 미생물 식별 시스템에 생화학 식별을 위한 주제 의심 스러운 식민지.</li>
		</ol>
</li>
		<li>혈 청 학적인 특성<ol>
<li>Shigella 종 다 원자가 세라 깨끗 한 슬라이드에 한 방울을 추가 합니다.</li>
			<li>마이크로-루프와 갈기는 세라에 식민지의 한 루프를 수집 합니다.</li>
			<li>3.2.3.4 흐르는 모래, 처럼 보이는 단계에 서는 식민지는 세라에 반응.</li>
			<li>Shigella 종 여러차례 세라를 사용 하 여 특정 Shigella 종 특징 단계 3.2.3.1 3.2.3.3 반복.</li>
			<li>단계 4로 이동 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4입니다. 보고서
<ol><li>위의 결과 따라 긍정적 이거나 부정적인 보고서를 발행.</li>
</ol>

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<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+12+Gastrointestinal+Pathogens+Spectrum+of+Acute+Infectious+Diarrhea+in+a+Sentinel+Hospital%2C+Shenzhen%2C+China%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The 12 Gastrointestinal Pathogens Spectrum of Acute Infectious Diarrhea in a Sentinel Hospital, Shenzhen, China.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1926(2016).</li>
<li>Tariq, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+antimicrobial+resistance+and+integron+association+of+multidrug-resistant+clinical+isolates+of+Shigella+species+from+Faisalabad%2C+Pakistan%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of antimicrobial resistance and integron association of multidrug-resistant clinical isolates of Shigella species from Faisalabad, Pakistan.</a> Canadian Journal of Microbiology. 58 (9), 1047-1054 (2012).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

살 모 넬 라 종부터 /Shigella 종 종종 음식 중독 및 급성 위장염28,29 의 지저분한 구두 전송 관련 된 고 일상적인 방법은 노동 집약적인 또는 소모 7, 우리는 살 모 넬 라 종에 대 한 높은 처리 플랫폼을설명/Shigella 종 심사, 실시간 PCR를 사용 하 여 결합 가이드 문화.
이 플랫폼의 기능을 최대화 하기 위해 고려해 야 할 몇 가지 단계가 있습니다. 첫 번째 영양소 국물 (단계 2.2)에서 샘플의 사전 농축 단계입니다. 비록 아무 사전 농축 단계 명백한 증상, 설사, 등, 그 환자에서 수집 된 대변 샘플에 필요한 일반적인 6 h 사전 농축 단계 여전히 필요 항문 면봉 샘플, 사전 고용 동안 수집 하는 때 그 사람들은 주로 건강 또...

설사 아직도 높은 발생률과 일반적인 건강 문제는 세계적으로1,2율입니다. 일부 환자 (예: 느슨한과 물 변, 화장실에가 서 긴급), 주에 대 한 다양 한 증상을 보여 사망률은 상대적으로 낮은 사회 경제적 영향 매우 높은3,4하 게 하는. 더 심각 하 게, 일부 환자도 치료5경우 과민성 대 장 증후군을 개발할 수 있습니다. 박테리아, 바이러스 및 설사6을 일으킬 수 있는 기생충의 다양 한 종류가 있다입니다. 살 모 넬 라 종 /Shigella 종 급성 위장염7,,89,,1011의 전송에 대 한 가장 흔한 박테리아 중입니다. 따라서, 많은 군 법률이 나 규정 일반 살 모 넬 라 종 발행Shigella 종 음식과 물을 처리 하는 사람들 중 심사 /. 예를 들어 중국 정부 의무 살 모 넬 라 종에 대 한 법률을 발행 했다 /Shigella 종 심사는 일년에 한 번.
살 모 넬 라 종에 대 한 표준 방법 /Shigella 종 탐지는 박테리아 문화. 박테리아 문화 및 연속 생화학 식별 및 혈 청 학적인 특성을 통해 질병 발발 관리 및 항균 프로 파일링 응급 환자 치료를 촉진 수 있는 박테리아의 종류를 확인할 수 있습니다. 12. 그것은 또한 살 모 넬 라 종 중 감염의 소스를 추적 도움이 수 /Shigella 종 발발13. 그러나,이 방법은 노동 집약 (필요한 수동 작업) 고 시간이 (몇 일), 특히 많은 수의 샘플7의 테스트에 대 한입니다. 또한, 비-culturable (VBNC) 살 모 넬 라 종 하지만 가능한 /Shigella 종일부 대변 샘플에 있을 수 있습니다14. 이러한 단점에 비추어 많은 실험실 하려고 살 모 넬 라 종의 검출을 위한 새로운 기술을 개발 /Shigella 종15,16,,1718 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. 이러한 모든 방법을 사용 하는 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR)은 가장 일반적인 핵 산 증폭 검사 (NAAT). 이러한 NAAT 기반 방법의 한 가지 주요 한계는 죽은 박테리아, 심지어 세균 파편 포함 불완전 한 genomic DNA, 긍정적인 결과26, 질병의 정확한 진단에 크게 영향을 미칠 수 있는 게재 될 수 있습니다. 블랑코 외. 그 분자 분석 결과 매우 중요 한, 뿐만 아니라 가능한 살 모 넬 라 부분 게놈 뿐만 아니라 문화, 과거 감염 또는 오염26에서 죽거나 unviable 박테리아를 보여주었다. 따라서, 새로운 기술을 개발 한다.
여기, 우리는 결합 된 NAAT 메서드 및 경작을 기반으로 새로운 방법 설명. 그림 1에서 보듯이,이 새로운 방법 적용 실시간 PCR 처음 상영 하 고 긍정적인 샘플 박테리아 문화 및 식별에 대 한 전송 됩니다.

<table><tbody><tr><td>트리스</td><td>시그마</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>시그마</td><td>798681</td><td></td></tr><tr><td>NP40</td><td>시그마</td><td>11332473001</td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Takara</td><td>9012</td><td></td></tr><tr><td>PrimeSTAR HS (Premix)</td><td>Takara</td><td>R040Q</td><td></td></tr><tr><td>영양 육수</td><td>LandBridge</td><td>CM106</td><td></td></tr><tr><td>영양소 아가르</td><td>LandBridge</td><td>CM107</td><td></td></tr><tr><td>셀레나이트 시스틴 매체</td><td>LandBridge</td><td>CM225</td><td></td></tr><tr><td>XLD</td><td>LandBridge</td><td>CM219</td><td></td></tr><tr><td>MAC&nbsp;</td><td>LandBridge</td><td>CM908</td><td></td></tr><tr><td>Salmonella 발색 한천</td><td>CHROMagar</td><td>SA130</td><td></td></tr><tr><td>Salmonella 진단 혈청</td><td>Tianrun</td><td>SAL60</td><td></td></tr><tr><td>Shigella 진단 혈청</td><td>Tianrun</td><td>SHI54</td><td></td></tr><tr><td>항문 면봉(수집 튜브 플러스)</td><td>Huachenyang</td><td></td><td></td></tr><tr><td>슬라이드</td><td>Mingsheng</td><td>7102</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 루프</td><td>Weierkang</td><td>W511</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Jinghong</td><td>DNP-9082</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td></td><td>AUL SS-325</td><td></td></tr><tr><td>건식 수조</td><td>Jinghong</td><td>KB-20</td><td></td></tr><tr><td>자동 미생물 식별 시스템</td><td>bioM&eacute; rieux</td><td>VITEK2</td><td>다른 동등한 시스템은</td></tr><tr><td>형광등 실시간 PCR 기계</td>, <td>ThermoFisher</td><td>ABI7500</td><td>다른 동등한 기계를 사용할 수 있습니다</td></tr></tbody></table>.

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /shigella 종

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

급성 위장염의 지저분한 구두 전송 시간, 특히 때 감염 발생 합니다 음식과 물을 처리 하는 사람들은 살 모 넬 라 종/Shigella 종에 의해 살 모 넬 라 종/Shigella 종의 검출을 위한 표준 방법은 직접 문화 이지만 노동 집약 및 시간이 걸리는. 여기, 우리가 살 모 넬 라 종/Shigella 종 검사, 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR) 가이드 문화를 함께 사용 하 여에 대 한 높은 처리 플랫폼을 설명 합니다. 두 가지 주요 단계가 있습니다: 실시간 PCR와 인도 문화. 우리 방법의 각 단계를 설명 하는 첫 번째 단계 (실시간 PCR)에 대 한: 컬렉션, 사전 농축, DNA 추출 및 실시간 PCR. 실시간 PCR 결과 긍정적인 경우 (가이드 문화) 2 단계 수행 됩니다: 선택적 문화, 생 화 확 적인 식별 및 serological 특성화. 우리는 또한 그것에서 생성 하는 대표적인 결과를 보여 줍니다. 여기에 설명 된 프로토콜의 살 모 넬 라 종, 특정, 민감한 빠르고 높은 처리량 검열을 위한 가치 있는 플랫폼 될 것 이라고 /Shigella 종

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 프로토콜 적용 된 음식과 물을 처리 하는 사람에서 항문 대변에서Shigella 종 샘플 /.
실시간 PCR 단계에서A, 그림 5같이 있었다 16 진수 채널 혼합된 샘플은 살 모 넬 라 종에 대 한 긍정적인 의미에서 성공적인 증폭 다음 추가 실시간 PCR은 긍정적인 것을 만든 개별 샘플에 실시 됐다. 그림 5B같이 샘플 2 긍정 했다. 따라서, 샘플 2 살 모 넬 라 종의 인도 문화에 대 한 선정 그림 5C, 팸 채널 혼...

살 모 넬 라 종 /Shigella 종 설사에 기인 하는 일반적인 병원 체. 여기, 우리는 살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼을설명/Shigella 종 실시간 PCR를 사용 하 여 결합 가이드 문화.

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

이 방법은 살모넬라와 시겔라의 스크리닝을 위한 높은 처리량 플랫폼을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 반복, 구체적이고 민감하며 높은 처리량입니다. 이 기술은 실시간 PCR 검열이 먼저 적용된 NAAT 빠른 방법과 문화를 결합한 다음 박테리아 문화와 식별을 위해 양성 반응을 보냈습니다.이 방법은 살모넬라와 Shigella 검열에 초점을 맞추고 있더라도, 또한 비브리오스, 황색포도상구균, E.Coli 및 등 세테라와 같은 그밖 병원체에 적용될 수 있습니다. 이 방법의 시각적 데모는 시료의 배경 식물로 인해 올바른 식민지의 선택이 어렵기 때문에 중요합니다. 시작하려면 각 샘플에 3 밀리리터의 영양소 국물을 추가합니다.그런 다음 샘플을 섭씨 36도에서 6시간 동안 배양합니다. 그 후, 원심분리는 2분 동안 800gs에서 사전 농축 문화를 분리한다. 그런 다음, 상체를 새로운 튜브로 옮기고, 원심분리기는 12, 000 gs에서 5분 동안 다시 분리한다.상체를 폐기한 후 펠릿에 DNA 추출 용액 100마이크로리터를 추가합니다. 그런 다음 튜브를 1 분 동안 소용돌이시다. 다음으로, 마른 목욕에서 1, 000섭에서 샘플을 가열합니다.원심분리를 반복한 후, 상신관을 새로운 튜브로 수집합니다. 먼저 반응 혼합물을 만들고 텍스트 프로토콜에 따라 사이클링 프로그램을 설정합니다. 그런 다음 형광 실시간 PCR 기계에서 실시간 PCR을 수행합니다.첫째, 셀레나트 크리스탈 배지의 5밀리리터에 사전 농축 배양의 100 마이크로리터를 추가합니다. 그런 다음 18~24시간 동안 섭씨 36도에서 배양합니다. 다음으로, 문화의 하나의 루프를 수집하고 접시에 확산.그런 다음 18 ~24 시간 동안 섭씨 36도에서 플레이트를 배양합니다. 잠복 후 의심스러운 식민지를 선택하고 접시에 옮기습니다. 18~24시간 동안 섭씨 36도에서 플레이트를 배양합니다.그런 다음 자동화된 미생물 식별 시스템을 사용하여 의심스러운 식민지를 식별합니다. O-항원 특성화를 시작하려면 O 항원 다원체 세라 1방울을 깨끗한 슬라이드에 추가합니다. 콜로니의 루프 하나를 슬라이드로 옮기고 세라로 갈아보세요.박테리아가 흐르는 모래처럼 보이면 항원이 특징일 때까지 O-항원 단원 세라로 이전 치료를 반복하십시오. H-항원 특성화를 시작하려면 H 항원 다원성 세라 한 방울을 깨끗한 슬라이드에 추가합니다. 그런 다음, 식민지의 하나의 루프를 수집하고 세라에 그리드.H-항원 단원 세라를 사용하여 특정 H-항원이 특징화 될 때까지 치료를 반복하십시오. 문화를 분리하려면, 사전 농축 문화의 하나의 루프를 수집하고 접시에 확산. 그런 다음 18 ~24 시간 동안 섭씨 36도에서 장소를 배양하십시오.잠복 후, 접시에 의심스러운 찾고 식민지를 수집합니다. 17~24시간 동안 섭씨 36도에서 플레이트를 배양합니다. 이어서, 식민지를 자동화된 미생물 식별 시스템을 사용하여 생화학적 식별을 적용한다.다음으로, 깨끗한 슬라이드에 시겔라 종 폴리 발렌트 세라 의 한 방울을 적용합니다. 그런 다음 마이크로 루프를 사용하여 박테리아의 일부를 수집하고 세라로 갈아 넣습니다. 마지막으로, 세라가 흐르는 모래와 비슷하다면, Shigella 종 단가 세라를 사용하여 박테리아의 특성화를 더 합니다.이 프로토콜을 사용하여, 환자에게서 대변 견본은 살모넬라와 Shigella 종을 위해 검열되었습니다. 실시간 PCR을 사용하여 HEX 채널에서 성공적인 증폭이 있었는데, 이는 샘플이 살모넬라 종에 대해 양성이었다는 것을 나타냅니다. 추가 실시간 PCR은 샘플 2살살모넬라에 대해 양성이며 유도 된 살모넬라 종 문화를 위해 선택되었다고 지적했습니다.살모넬라 종의 유도 문화에서 분홍색과 보라색 식민지는 별도로 도금되어 생화학적 식별을 받았습니다. 그 결과 샘플 2의 콜로니가 살모넬라 파라티파이 B.를 사용하여 실시간 PCR을 사용했으며, FAM 채널에서 성공적인 증폭이 있었으며, 이는 시겔라 종에 대해 샘플이 양성이었다는 것을 나타낸다. 추가 실시간 PCR은 샘플 10이 Shigella에 대해 긍정적이며 가이드 문화를 위해 선택되었다고 지적했습니다.시겔라 종의 유도 문화에서 분홍색 빨간색과 무색 식민지는 별도로 도금되어 생화학적 식별을 받았습니다. 결과는 견본 10이 Shigella sonnei 단계 II 박테리아를 포함했다는 것을 표시했습니다. 이 절차를 시도하는 동안 시퀀스 변화로 인해 메서드의 한계를 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 직접 문화와 같은 다른 방법은 거짓 부정적인 실시간 PCR 결과를 피하기 위해 수행 될 수 있습니다. 이 기술은 새로운 프로토콜이 양수 비율을 두 배로 늘리고 워크로드와 TAT를 크게 감소시킬 수 있기 때문에 살모넬라 및 Shigella 탐지 분야의 연구자들이 길을 열어줍니다. 살모넬라와 Shigella와 함께 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 개인 보호 장비인 PPE는 이 절차를 수행하는 동안 항상 취해야 합니다.

a-high-throughput-platform-for-screening-salmonella-sppshigella

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

의 액체 기반 culturing 및 분배를위한...

형광등과 높은 처리량 검사 및 Biosensing C. 엘레간스 레인스

우리의 곰팡이 endoglucanase 활동을위한 화면으로 저렴한 비용, 높은 처리량 방법을...

에서 곰팡이 Endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사 대장균</em

출처: 양, Z. 외. 살모넬라 속/시겔라 속 선별을 위한 고처리량 플랫폼 J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 자일로스 라이신 디옥콜레이트(XLD)와 염색성 한천을 이용한 살모넬라 의 선택적 농축과 식별 과정을 보여줍니다. 셀레나이트 육수는 살모넬라 성장을 촉진하는 반면, XLD 한천은 황화수소 생성을 통해 검은 중심 집락을 드러냅니다. 염색 한천은 효소 매개 색소 형성을 통해 동일성을 확인하여 종 단위의 식별을 가능하게 합니다.

자일로스 라이신 디옥시콜레이트와 염색성 한천을 이용한 살모넬라 속의 선택적 풍부화 및 식별

체외 표현형 살모넬라 또는 다른 세균성 협회, 침윤 및 높은 처리량과 식세포에서 복제에 높은 처리량 분석이 개발되었다. 방법은 호스트 병원체 상호 작용에서의 침범 위해 살모넬라 유전자 녹아웃 돌연변이 균주를 평가하기 위해 사용 하였다.

표현형 높은 처리량 분석 살모넬라 엔테 티피 뮤 리움 협회, 침략, 그리고 대 식세포에서의 복제

이 프로토콜의 전반적인 목표는 비용 효율적인, 노트북에 대 한 기능 nanosensors을 합성 하 고의 급속 한 탐지는 자석 및 형광 방출 modalities의 결합을 통해 병원 성 박테리아에 특히 표적으로.

E. 콜라이 O157:H7의 Foodborne 병원 체 검사를 사용 하 여 자기 형광 Nanosensor: 신속한 감지

여기 우리는 적응, 전체 호스트, 호스트 병원 체 상호 작용을 공부 하 고 신약 사용을 활용할 수 있는 도구를 높은 콘텐츠 심사 하는 프로토콜을 설명 합니다.

높은 처리량, 높은 콘텐츠, 액체 기반의 C. 선 충 Pathosystem

여기 우리는 혈 청에서 항 체의 Shigellacidal 활동을 측정 하는 프로토콜을 제시. 혈 청은 박테리아와 외 인 보수, 인 큐베이 팅, 혼합 그리고 반응 혼합물은 한 접시에 도금. 실행 가능한 박테리아는 계산, 자동된 식민지 열거자를 사용 하 고 살 균 titer를 결정 하는 데 사용 되는 식민지를 형성 한다.

높은 처리량 Shigella-특정 살 균 시험

루프 매개 이소성 증폭(LAMP)은 병원체 검출 분야에 대한 폭넓은 관심을 받고 있는 이더스말 핵산 증폭 시험(iNAAT)이다. 여기서, 우리는 동물성 식품에서 살모넬라를 선별하고 문화 격리에서 추정 살모넬라를 확인하는 신속하고 신뢰할 수 있고 강력한 방법으로 다연구소 검증 살모넬라 LAMP 프로토콜을 제시합니다.

동물성 식품에서 살모넬라를 선별하고 문화 격리에서 살모넬라를 확인하기 위한 루프 중재 이더말 증폭

장내 미생물은 특정 또는 보존 메커니즘을 통해 숙주의 건강에 긍정적 또는 부정적 영향을 미칠 수 있습니다. Caenorhabditis elegans 는 그러한 미생물을 스크리닝하는 편리한 플랫폼입니다. 본 프로토콜은 웜 건강의 대용으로 사용되는 선충 스트레스 저항성에 미치는 영향에 대한 48개의 박테리아 분리주의 고처리량 스크리닝을 설명합니다.

Caenorhabditis elegans 건강에 영향을 미치는 미생물 분리물의 고처리량 스크리닝

여기에서는 지능형 고처리량 항균 감도 검사/파지 스크리닝 시스템의 원리, 구조 및 지침을 소개합니다. 그 응용은 중국 산둥성의 가금류에서 분리한 살모넬라균 을 예로 들어 설명합니다. Lar 지수를 계산하고 항생제 내성 평가에 대한 중요성을 종합적으로 논의합니다.

지능형 고처리량 항균 감수성 검사/파지 스크리닝 시스템 적용 및 항생제 내성 LAR 지수

이 프로토콜은 산업 미생물을 위한 표준 고처리량 스크리닝 워크플로우를 제공합니다. 이 과정은 ARTP 돌연변이 유발을 통해 돌연변이 라이브러리를 구축하고, 자동화된 마이크로플루이딕스를 이용한 양성 액상 스크리닝을 수행하며, 이후 결과를 검증하는 과정을 포함합니다. 이 워크플로우의 신뢰성은 고수율 B. coagulans 균주를 스크리닝하여 검증되었습니다.

자동 액상 마이크로플루이딕 플랫폼을 이용한 L-락산을 과생산하는 바실루스 응고 체 돌연변이체의 고처리량 스크리닝

배우세요 Salmonella와 Shigella 선별을 위한 고처리량 플랫폼을 실시간 PCR과 유도 배양을 결합하여 사용하는 방법입니다. 이 기술은 높은 특이성과 민감도로 병원체를 신속하게 검출할 수 있습니다.

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

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