HIV 복제 및 대기 연구를 위한 인간 답게 끄 덕/SCID/IL2rγ^null (hu-NSG) 마우스 모델

이 문제는 HIV/AIDS 연구의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다, 이러한 분자 메커니즘과 HIV 감염의 예후와 같은, 그리고 어떻게 어디서 대기 시간 저수지가 설립. 이 기술의 장점은 비침습적이며, HIV 감염에 취약하고 cART에 수용되는 이식된 인간 줄기 세포를 통해 다중 계보 발달을 치료해야 하는 hu-NSG 마우스를 확립했다는 것입니다. 소화, 인간, 태아, 간 조직, 슬러리 샘플을 멸균, 70 마이크로미터, 나일론, 메쉬 스트레이너를 통해 단일 세포 현탁액을 획득하고 제조업체의 지시에 따라 자기 활성화 셀 정렬에 의해 CD34+HSC를 농축하는 것으로 시작합니다.

카운트 후, 얼음에 신선한 DPBS에서 밀리리터 농도 당 두 번 - 10 - 더 - 일곱 번째 실행 가능한 세포에서 HSC를 다시 중단합니다. 다음으로 전체 신생아 인간 NOD/SCID/감마 또는 NSG 마우스 쓰레기를 멸균, 파이 모양의 조사 케이지에 넣고 세슘-137 방사선 소스에서 200~250센티미터의 감마선으로 동물을 치료합니다. 그런 다음 30 게이지 바늘이 장착 된 맞춤형 해밀턴 80508 50 마이크로 리터 주사기에 세포를로드하고 각 신생아 동물을 5 배에서 5 분의 10 - 5 번째 가능한 인간 CD34 +HSC 및 DPBS의 25 마이크로 리터로 간으로 직접 주입합니다.

감염 후 10~12주, 각 마우스의 레트로 궤도, 말초, 혈액 샘플을 원심분리에 의한 스핀다운하고, 실험적으로 적절하다면 음수 80도 저장을 위해 플라즈마 초강을 미세원심분리관으로 이송한다. HSC 이식 유효성 검사를 위해 적혈구 용해 완충제 200 마이크로리터로 펠릿을 다시 중단하고 실온에서 10분 동안 1.5mm 미세센심분리기 튜브에서 세포 현탁액을 당깁니다. 그런 다음 세척당 DPBS에서 0.5 밀리리터의 신선, 0.01% 소 혈청 알부민 또는 BSA에 대한 원심분리에 의해 나머지 백혈구를 수집한다.

두 번째 세척 후, 100 마이크로리터의 블로킹 칵테일을 섭씨 4도에서 20분 동안 차단한 다음, 1회에서 6분의 1의 세포 농도당 2 마이크로리터의 항체 에 대한 관심 있는 적절한 항체 칵테일라벨링으로 세포를 차단합니다. 섭씨 4도에서 30분 후, 신선한 DPBS+ BSA로 세포를 두 번 세척하고, 샘플당 인간 CD45+CD3+CD14+또는 CD19+세포의 비율을 정량화하기 위해 표준 프로토콜에 따라 세포측정을 유동하여 말초 혈액 샘플을 평가한다. 그런 다음 CD4+대 CD8+T 세포의 비율을 계산하고 표준, 정량적, 역전사, PCR 프로토콜에 따라 플라즈마 샘플에서 바이러스 부하를 평가합니다.

HIV 감염의 효과를 평가하기 위해, 마취, 인간, NSG 마우스에 HIV 베일 바이러스를 전달하여 말초 혈액에 20% 이상의 인간 CD45+세포 집단을, 2주마다 레트로 궤도 출혈을 통해 혈액 샘플을 수집하고 CD4-c-c-1-CD-c.를 분석하여 CD4-c.로 의 혈중 바이러스 를 분석합니다. , 입증 된 바와 같이. 바이러스 억제 유효성 검사를 위해 감염된 인간 NSG 동물에게 신선하고, 결합적, 항레트로바이러스 요법 또는 cART를 4주 동안 매주 가당물로 공급하고, 2주마다 레트로 궤도 출혈을 통해 혈액 샘플을 수집하고 CD4 대 CD8 비율과 플라즈마 바이러스 부하를 모두 분석하였다. 혈장 바이러스 부하가 검출 한계 이하이고 CD4-cd8 비율이 1.5에서 2.5 사이에서 회복될 때 바이러스 리바운드를 소싱하기 위해 cART 철수 후 2주마다 레트로 궤도 출혈을 통해 말초 혈액 샘플을 수집하고 시연된 바와 같이 샘플을 평가한다.

초기 이식 유효성 검사 동안 인간 CD45+셀 수는 20~80%의 범위여야 하며, 인간 백혈구의 하위 집합은 유동 세포 측정 분석에 의한 이산 집단으로 나타나야 합니다. CD4+대 CD8+세포의 비율은 건강한 개인에서 1.5와 2.5 사이 남아 있으며 중요한 CD4+T 세포 고갈은 일반적으로 바이러스 감염시 관찰됩니다. 특히, 건강한 비율은 cART 처리에 응하여 회복됩니다.

혈장 바이러스 하중의 검출은 감염 및 cART 처방의 과정 전반에 걸쳐 정량적 RT PCR에 의해 플롯및 바이러스 전달 및 항 바이러스 치료의 효율을 평가하는 데 사용될 수 있다. 이 방법은 HIV/AIDS 바이러스학 연구 및 치료 개발에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 암, 당뇨병 및 자가 면역 질환과 같은 인간 질환과 관련된 다른 연구에도 적용될 수 있습니다. hu-NSG 마우스 모형 발달은 면역학과 종양학에 있는 연구원이 HIV 만성 감염 및 대기 시간 저수지를 표적으로 하는 기계론 및 치료 연구 결과, 인간에 있는 새로운 기능 장애 그리고 병리를 탐구하는 도로를 포장했습니다.