Name: 질병-특정 항 체의 생성에 대 한 항 원 리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: 배우세요 항원성 리포솜 나노입자를 이용한 B세포 활성화 및 땅콩 알레르기 마우스 모델 개발 방법을. 이 기법은 면역요법 연구와 자가면역 질환 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 연구는 국방부 (W81XWH-16-1-0302 및 W81XWH-16-1-0303)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

<ol><li>Gupta, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence%2C+severity%2C+and+distribution+of+childhood+food+allergy+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">The prevalence, severity, and distribution of childhood food allergy in the United States.</a> Pediatrics. 128 (1), e9-e17 (2011).</li>
<li>Sicherer, S. H., Munoz-Furlong, A., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((US+prevalence+of+self-reported+peanut%2C+tree+nut%2C+and+sesame+allergy%3A+11-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">US prevalence of self-reported peanut, tree nut, and sesame allergy: 11-year follow-up.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (6), 1322-1326 (2010).</li>
<li>Kim, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunotherapy+for+peanut+allergy%3A+clinical+and+immunologic+evidence+of+desensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunotherapy for peanut allergy: clinical and immunologic evidence of desensitization.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 640-646 (2011).</li>
<li>Vickery, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+unresponsiveness+to+peanut+in+subjects+who+have+completed+peanut+oral+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sustained unresponsiveness to peanut in subjects who have completed peanut oral immunotherapy.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 133 (2), 468(2014).</li>
<li>Jones, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunotherapy+for+the+treatment+of+peanut+allergy+in+children+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunotherapy for the treatment of peanut allergy in children and young adults.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (4), 1242(2017).</li>
<li>Varshney, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+controlled+study+of+peanut+oral+immunotherapy%3A+clinical+desensitization+and+modulation+of+the+allergic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">A randomized controlled study of peanut oral immunotherapy: clinical desensitization and modulation of the allergic response.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 654-660 (2011).</li>
<li>Anagnostou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+efficacy+of+oral+immunotherapy+for+the+desensitisation+of+peanut+allergy+in+children+%28STOP+II%29%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Assessing the efficacy of oral immunotherapy for the desensitisation of peanut allergy in children (STOP II): a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet. 383 (9925), 1297-1304 (2014).</li>
<li>Sampson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Varying+Doses+of+Epicutaneous+Immunotherapy+vs+Placebo+on+Reaction+to+Peanut+Protein+Exposure+Among+Patients+With+Peanut+Sensitivity%3A+A+Randomized+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Effect of Varying Doses of Epicutaneous Immunotherapy vs Placebo on Reaction to Peanut Protein Exposure Among Patients With Peanut Sensitivity: A Randomized Clinical Trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 318 (18), 1798-1809 (2017).</li>
<li>Bednar, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD22+Inhibits+Murine+B+Cell+Receptor+Activation+in+a+Human+CD22+Transgenic+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human CD22 Inhibits Murine B Cell Receptor Activation in a Human CD22 Transgenic Mouse Model.</a> Journal Immunology. 199 (9), 3116-3128 (2017).</li>
<li>Macauley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigenic+liposomes+displaying+CD22+ligands+induce+antigen-specific+B+cell+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Antigenic liposomes displaying CD22 ligands induce antigen-specific B cell apoptosis.</a> Journal Clinical Investigation. 123 (7), 3074-3083 (2013).</li>
<li>Orgel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+CD22+on+antigen-specific+B+cells+to+prevent+allergy+to+the+major+peanut+allergen+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Exploiting CD22 on antigen-specific B cells to prevent allergy to the major peanut allergen Ara h 2.</a> Journal Allergy Clinical Immunology. 139 (1), 366-369 (2017).</li>
<li>Smarr, C. B., Hsu, C. L., Byrne, A. J., Miller, S. D., Bryce, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-fixed+leukocytes+tolerize+Th2+responses+in+mouse+models+of+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-fixed leukocytes tolerize Th2 responses in mouse models of allergy.</a> Journal of Immunology. 187 (10), 5090-5098 (2011).</li>
<li>Kulis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2S+albumin+allergens+of+Arachis+hypogaea%2C+Ara+h+2+and+Ara+h+6%2C+are+the+major+elicitors+of+anaphylaxis+and+can+effectively+desensitize+peanut-allergic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">The 2S albumin allergens of Arachis hypogaea, Ara h 2 and Ara h 6, are the major elicitors of anaphylaxis and can effectively desensitize peanut-allergic mice.</a> Clinical and Experimental Allergy. 42 (2), 326-336 (2012).</li>
<li>Dang, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+accuracy+of+peanut+allergy+diagnosis+by+using+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Increasing the accuracy of peanut allergy diagnosis by using Ara h 2.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 129 (4), 1056-1063 (2012).</li>
<li>Loughrey, H. C., Choi, L. S., Cullis, P. R., Bally, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+the+coupling+of+proteins+to+liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for the coupling of proteins to liposomes.</a> Journal Immunological Methods. 132 (1), 25-35 (1990).</li>
<li>Sen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+structure+plays+a+critical+role+in+peanut+allergen+stability+and+may+determine+immunodominant+IgE-binding+epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes.</a> Journal of Immunology. 169 (2), 882-887 (2002).</li>
<li>Krall, N., da Cruz, F. P., Boutureira, O., Bernardes, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-selective+protein-modification+chemistry+for+basic+biology+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Site-selective protein-modification chemistry for basic biology and drug development.</a> Nature Chemistry. 8 (2), 103-113 (2016).</li>
<li>Jimenez-Saiz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifelong+memory+responses+perpetuate+humoral+TH2+immunity+and+anaphylaxis+in+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lifelong memory responses perpetuate humoral TH2 immunity and anaphylaxis in food allergy.</a> Journal Allergy and Clinical Immunology. 140 (6), 1604-1615 (2017).</li>
<li>Moutsoglou, D. M., Dreskin, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Treatment+of+Peanut-Allergic+Mice+with+Bortezomib+Significantly+Reduces+Serum+Anti-Peanut+IgE+but+Does+Not+Affect+Allergic+Symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Prolonged Treatment of Peanut-Allergic Mice with Bortezomib Significantly Reduces Serum Anti-Peanut IgE but Does Not Affect Allergic Symptoms.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 170 (4), 257-261 (2016).</li>
<li>LaMothe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerogenic+Nanoparticles+Induce+Antigen-Specific+Regulatory+T+Cells+and+Provide+Therapeutic+Efficacy+and+Transferrable+Tolerance+against+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Tolerogenic Nanoparticles Induce Antigen-Specific Regulatory T Cells and Provide Therapeutic Efficacy and Transferrable Tolerance against Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 281(2018).</li>
<li>Srivastava, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+peanut+oral+immunotherapy+with+CpG%2Fpeanut+nanoparticles+in+a+murine+model+of+peanut+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Investigation of peanut oral immunotherapy with CpG/peanut nanoparticles in a murine model of peanut allergy.</a> J Allergy Clin Immunol. 138 (2), 536-543 (2016).</li>
<li>Bellinghausen, I., Saloga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+allergic+immune+responses+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Analysis of allergic immune responses in humanized mice.</a> Cellular Immunology. 308, 7-12 (2016).</li>
<li>Pillai, S., Mattoo, H., Cariappa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells and autoimmunity.</a> Curr Opin Immunol. 23 (6), 721-731 (2011).</li>
<li>Mantegazza, R., Cordiglieri, C., Consonni, A., Baggi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myasthenia+gravis%3A+utility+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+General+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of myasthenia gravis: utility and limitations.</a> International Journal of General Medicine. 9, 53-64 (2016).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myasthenia+gravis.+A+murine+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Experimental myasthenia gravis. A murine system.</a> J Exp Med. 151 (1), 204-223 (1980).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linkage+between+the+frequency+of+muscular+weakness+and+loci+that+regulate+immune+responsiveness+in+murine+experimental+myasthenia+gravis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Linkage between the frequency of muscular weakness and loci that regulate immune responsiveness in murine experimental myasthenia gravis.</a> J Exp Med. 152 (3), 507-520 (1980).</li>
<li>Derksen, V., Huizinga, T. W. J., van der Woude, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+autoantibodies+in+the+pathophysiology+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">The role of autoantibodies in the pathophysiology of rheumatoid arthritis.</a> Seminars in Immunopathology. 39 (4), 437-446 (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

여기에 설명 된 메서드는 자주 나노 입자에 단백질의 디스플레이 가능 하 게 지질에 단백질의 활용에 대 한 일반적인 프로토콜. 매우 큰 다중 소 단위 단백질을 위해이 프로토콜 유틸리티를 제한 할 수 있습니다. 이상적인 방법은 biorthogonal 화학 연결 전략을 사용할 수 있도록 특정 태그의 소개 것입니다. Recombinantly 단백질을 표현 하는 경우 PEGylated 지질 상업적으로 사용할 수 있는 끝에 사용할 수 있는 사이트 전략17, 그리고 다양 한 기능 그룹을 사용 하 여 수 있습니다. 따라서,이 프로토콜은 자연적인 근원에서 고립 된 단백질의 연결에 맞도록 하 고 과학자 들은 반드시에 익숙하지 화학 및 생화학 변환의 넓은 범위에 액세스할 수 있습니다.
강조를 해야 칼슘 유출 실험 실행의 핵심 측면에서 세포는 cytometry에 그들을 실행 하기 전에 활성화 되어야 한다 이다. 메 마른 기술 엄격 하 게 사용 하지 않으면,이...

음식 알레르기, 미국에서 어린이의 8%와 지난 유행에서 증가 했다 10 년1. 땅콩에 알레르기 어린이의 1%에 영향을 하 고는 일반적으로 능가 해2. 비록 몇 가지 유망한 임상 시험 진행 구두 immunotherapy (OIT), 설 immunotherapy (슬릿), 및 epicutaneous immunotherapy (EPIT)를 포함 하 여 음식 알레르기의 치료에 대 한 현재 아무 치료 FDA 승인 전략은 땅콩 알레르기 성 개인3,,45,6,7,8믹싱되어에 대 한 따라서, 알레르기 성 개인 엄격 하 게 알레르기를 피하기 위해 알레르기를 방지 해야 합니다. 많은 질문 남아 민감성의 노선 및 음식 알레르기 개발의 메커니즘을 기본.
마우스 모델은 새로운 tolerogenic와 둔감 치료9,10,,1112개발 뿐만 아니라 알레르기의 기계 장치를 공부 하기 위한 유용한 도구입니다. 이것은 특히 사실 때문에 주요 땅콩 알레르기 (Ara h 2; Ah2) 간에 또한 몇몇에서 지배적인 알레르기 설명 마우스 모델13,14. 땅콩 알레르기의 마우스 모델 아니라, 관용의 메커니즘 연구에 귀중 한 동안, 결점은 그 변수 하 수 adjuvants의 사용을 필요로. 더 강력한 immunogens 같은 모델의 본질적인 가변성을 최소화 하기 위해 한 가지 방법은 것입니다. 표시는 알레르기 항 원 리는 또한 효율적으로의 속성을가지고 하는 동안 잠재적으로 B 세포 수용 체 (BCR)를 통해 B 세포를 활성화 하는 능력 때문에 좋은 옵션 때문에 B 세포는 강하게 multivalent 항 원에 의해 활성화 됩니다, 비 구체적으로 항 원 제시 하 여 채택 되 고를 통해 T 세포 격실을 못쓰게 셀.
여기, 우리 동산 손쉬운 및 모듈형 전략을 사용 하 여 자주 나노 입자에 항 원 단백질에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 시연 대리 항, 안티-IgM Fab 조각 사용 하 여, 얼마나 강력한 같은 항 원 리 자극 B 세포 활성화에 있을 수 있습니다. Ah2 항을 표시 하는 항 원 리 수 여 감도의 새로운 마우스 모델을 개발 하기 위해 사용 되었다. 이 모델에서 splenocytes에서 확인 된 땅콩 알레르기 생쥐, 땅콩 전용 메모리 B 및 T 세포를 포함 하는 순진한 congenic 쥐로 전송 됩니다. 메모리 항 체 응답 Ah2에 대하여 항 체를 유도 하기 위하여 받는 쥐로 Ah2 함께 활용 된 리의 주입에 의해 유발 됩니다. 녹는 Ah2 하나만 부스트를 이어서 Ah2 특정 항 체를 야기할 강한 과민 반응이이 마우스는 이후에 Ah2 도전 때. 이 방법은 바람직한 땅콩 알레르기 모델 이며 결과 유틸리티 다른 마우스 모델에서 지시 하는 항 원에 의해 구동 있을 수 있습니다 제안 마우스 알레르기 반응을 겪고 매우 균일 한 방식으로 반응 하 고는 보조를 받지 못한, 알레르기 그리고 아마도 autoantigens입니다.

<table><tbody><tr><td>모델 2110 분획 분취</td>기 <td>BioRad</td><td>7318122</td><td></td></tr><tr><td>콜레스트롤</td><td>시그마</td><td>C8667</td><td>시그마 등급 99%</td></tr><tr><td>SPDP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21857</td><td></td></tr><tr><td>DSPC</td><td>Avanti</td><td>850365</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG 18:0</td><td>Avanti</td><td>880120</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG Maleimide</td><td>Avanti</td><td>880126</td><td></td></tr><tr><td>압출기</td><td>Avanti</td><td>610000</td><td>1 mL 주사기, 홀더/가열 블록 포함</td></tr>, <tr><td>필터 0.1 &마이크로; m</td><td>Avanti</td><td>610005</td><td></td></tr><tr><td>필터 0.8 & 마이크로; m</td><td>Avanti</td><td>610009</td><td></td></tr><tr><td>10mm 필터 지원</td><td>Avanti</td><td>6100014</td><td></td></tr><tr><td>유리 둥근 바닥 플라스크</td><td>시그마</td><td>Z100633</td><td></td></tr><tr><td>턴오버 스토퍼</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-301398</td><td></td></tr><tr><td>튜빙</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-198194</td><td></td></tr><tr><td>Leur Lock</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>k4201634503</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G50 비즈</td><td>GE Life Sciences</td><td>17004201</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G100 비즈</td><td>GE Life Sciences</td><td>17006001</td><td></td></tr><tr><td>열 비활성화 태아 송아지 혈청</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>1x RBC 용해 완충액</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>Indo-1</td><td>Invitrogen</td><td>I1203</td><td></td></tr><tr><td>CD5-PE</td><td>BioLegend</td><td>100608</td><td></td></tr><tr><td>B220-PE-Cy7</td><td>BioLegend</td><td>103222</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>칼슘 및 마그네슘 없는</td>14170112</tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Fab 안티-마우스 IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-007-020</td><td></td></tr><tr><td>F(ab')2 안티-마우스 IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-006-020</td><td></td></tr><tr><td>땅콩 가루</td><td>Golden Peanut Co.</td><td>521271</td><td>12% 지방, 가벼운 로스트, 50% 단백질</td></tr><tr><td>동물 먹이 바늘</td><td>Cadence Science</td><td>7920</td><td>22g x 1.5", 1.25mm - 스트레이트</td></tr><tr><td>마이크로프로브 온도계</td><td>Physitemp</td><td>BAT-12</td><td></td></tr><tr><td>생쥐용 직장 프로브</td><td>Physitemp</td><td>Ret-3</td><td></td></tr><tr><td>콜레라 독소, from Vibrio cholera</td><td>List Biological Laboratories, Inc.</td><td>100B</td><td>아지드가 없는</td></tr><tr><td>BCA 단백질 분석 키트</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>탄산염-중탄산염 완충액</td><td>Sigma</td><td>C3041</td><td></td></tr><tr><td>TMB 정지 용액</td><td>KPL</td><td>50-85-06</td><td></td></tr><tr><td>SureBlue TMB Microwell Peroxidase Substrate</td><td>KPL</td><td>5120-0077</td><td></td></tr><tr><td>96웰 Immulon 4HBX 플레이트</td><td>Thermo Scientific</td><td>3855</td><td></td></tr><tr>정제 된 <td>용해성 Ara h 2</td><td>N /</td><td>A N / A</td> 다음과 <td>같이 정제 : Sen, et al., 2002, Journal of Immunology</td></tr><tr><td>HSA-DNP</td><td>Sigma</td><td>A-6661</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgE anti-DNP</td><td>Accurate Chemical</td><td>BYA60251</td><td></td></tr><tr><td>Sheep anti-Mouse IgE</td><td>The Binding Site</td><td>PC284</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated Donkey anti-Sheep IgG</td><td>Accurate Chemical</td><td>JNS065003</td><td></td></tr><tr><td>NeutrAvidin 단백질, HRP</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31001</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IgG1 안티 DNP</td><td>정확한 화학 물질</td><td>MADNP105</td><td></td></tr><tr><td>HRP 염소 안티 마우스 IgG1</td><td>Southern Biotech</td><td>1070-05</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 인슐린 주사기</td><td>BD</td><td>329412</td><td>U-100 인슐린, 0.40 mm (27 G) x 16.0 mm (5/8")</td></tr> <tr><td>Superfrost 현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-14</td><td>25 mm x 75 mm x 1.0 mm</td></tr><tr><td>ACK 용해 버퍼</td><td>gibco by Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>500</td></tr><tr><td>mL Cell Strainer</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>70 &mu; m 나일론, 화이트, 멸균, 개별 포장</td></tr><tr><td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris 단백질 겔</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td>10 gels</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS buffer, 4x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0008</td><td>250</td></tr><tr><td>mL SeeBlue Plus2 Pre-stained standard</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td>500 &micro; L</td></tr><tr><td>NuPAGE MES/SDS 러닝 버퍼, 20x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0002</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>GelCode Blue</td><td>Stain Thermo Scientific</td><td>24590</td><td>500 mL</td></tr></tbody></table>

질병-특정 항 체의 생성에 대 한 항 원 리

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

항 체 응답은 다양 한 병원 체를 중요 한 보호 면역을 제공합니다. 뿐만 아니라, 어떻게 병원 성 항 체 응답에 알레르기 및 면역 질환 개발 이해 예방 접종에 대 한 강력한 항 체 생성에 높은 관심을 확인 하 고 남아 있습니다. 생성 하는 강력한 항 원 특정 항 체 응답은 아닙니다 사소한. 마우스 모델에서 그것은 종종 유발된 항 체의 수준에 변화의 큰 거래 하는 보조로 예방 접종의 여러 라운드를 필요 합니다. 한 예로 어디 더 강력 하 고 재현할 수 모델 마우스 숫자와 보조의 사용을 최소화 하는 도움이 될 것 이라고 하는 땅콩 알레르기의 마우스 모델에서 이다. 여기에 제시 된 땅콩 알레르기 알레르기의 높은 재현성 마우스 모델이입니다. 두 가지 주요 요인에 의존 하는이 새로운 모델: (1) 항 원 특정 splenocytes adoptively; 쥐의 많은 수에 걸쳐 항 원 특정 메모리 B 및 T 세포의 수를 정상화 순진한 받는 사람 마우스에 땅콩 응 마우스에서 전송 그리고 (2) 받는 사람 마우스 이후 주요 땅콩 알레르기 (Ara h 2)를 표시 하는 자주 나노 입자의 형태에 강한 multivalent immunogen로 밀어 주었다. 이 모델의 주요 장점은 보조의 여러 주사 받은 동물의 수를 최소화 하면서 각 연구에 사용 된 동물의 수를 낮추고 궁극적으로 그것의 재현성. 면역성이 리의 모듈 어셈블리 병원 성 항 체를 포함 하는 다른 알레르기 또는 면역 모델에 상대적으로 손쉬운 적응성을 제공 합니다.

DSPE-PEG(2000) 가진 관심사의 단백질의 활용을 줄이는 증가에서 보여주는 결합형된 단백질에 비해 분자량을 실행 하 여 설명할 수 있습니다. 그림 1A 반대로 마우스 IgM F(ab) 조각 활용의 대표적인 젤 못-DSPE, 변성된 단백질에 대 한 2-3 kDa bandshift를 보여주는 표시 됩니다. 단백질의 약 50%를 수정할 수는 1:1 산출할은 무 겁 고 가벼운 체인의 heterodimer Fab 조각에 달성 했다 그 예상은 나타나는 note. 그림 1B Ah2 활용의 대표적인 젤 못 DSPE 표시 됩니다. B 세포의 칼슘 플럭스를 평가 하기 위해 항 원 리에 의해 자극 두 가지 중요 한: (1) 악기 설정을 캘리포니아2 + 에서 인도-1 형광의 차이 (바이올렛) 바운드 및 언바운드 폼 (파란색)과 (2) 적절 한 참조를 조정 된다...

설명 된 항 원 자주 나노 입자와 자극 B 세포 활성화에서 생체 외에서 그리고 vivo에서에서 그들의 사용의 준비가 이다. 일관 되 고 강력한 항 체 응답 새로운 땅콩 알레르기 모델의 개발을 주도. 항 원 리를 생성 하기 위한 프로토콜은 다른 항 원 및 예방 모델을 확장할 수 있습니다.

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...

이 방법은 백혈구가 어떻게 활성화되고 개별 알러지 유발 물질에 대한 알레르기가 어떻게 발생하는가와 같은 면역학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 견고하고 재현 가능한 알레르기 마우스 모델의 주요 장점은 실험 인구와 더 낮은 차이를 산출하기 위해 적은 마우스를 사용할 수 있다는 것입니다. 면역 반응을 제어하는 새로운 면역 요법은 생체 내 효능을 테스트하는 초기 수단으로 견고한 마우스 모델을 필요로 합니다.따라서, 이 기술의 의미는 알레르기 면역 요법으로 확장됩니다. 이 방법은 알레르기에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만 원치 않는 항체 반응이 질병에 중요한 역할을하는 자가 면역과 같은 다른 시스템에도 적용 될 수 있습니다. 일반적으로, 이 방법에 새로운 개인 때문에 리포소말 나노 입자와 함께 작업하는 경험의 부족 또는 마우스 작업에 필요한 기술에 경험이 부족하기 때문에 투쟁 할 것이다.단백질에 이트로비기능 크로스링커의 2.5 어금니를 추가하고 약 1시간 동안 실온에서 진동 셰이커에 반응을 배치하여 시작합니다. SPDP와 1 시간 배양 후, 100 밀리머 나트륨 아세테이트로 평형 컬럼에 단백질을 탈염하고 분수를 수집합니다. 280나노미터 흡광도를 결정하고 상단 분획을 풀수 있습니다.PBS에서 컬럼을 세척하고 25밀리머 디티오스레이톨 또는 DTT를 풀로 된 단백질 분획에 넣고 5-10분 배양에 넣습니다. 이어서, 단백질과 링커의 어모함에 기초하여 연결 비율을 계산할 수 있도록 단백질의 280 및 343 나노미터 흡광도를 측정한다. 다음으로, PBS 세척 컬럼의 풀링된 분획을 실행하고, 입증된 대로 280나노미터 및 상단 분획 풀링을 측정하기 위한 분획을 수집한다.100x DSPE-PEG2000-Maleimide의 적절한 부피를 단백질에 추가하여 부드러운 소용돌이로 1x, 10배 의 어금다한 최종 농도를 달성합니다. 그런 다음 밀폐된 둥근 바닥 플라스크에서 질소 아래에서 밤새 반응을 실행합니다. 다음 날, 크로스 링크 드엑스트라안 젤 비드 컬럼 위에 단백질을 실행하고, 그들의 사용까지 섭씨 4도에서 지질 연결 단백질의 최종 풀드 분수를 저장합니다.각 지질의 정확한 양이 계산되면 모든 지질을 12 밀리리터 보로실리케이트 유리 테스트 튜브에 결합하고 3 밀리리터 주사기와 튜브를 사용하여 질소로 클로로포름을 조심스럽게 날려 버리십시오. 그런 다음, 하룻밤 사이에 DMSO의 100 마이크로 리터로

antigenic-liposomes-for-generation-of-disease-specific-antibodies

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

입술 (루시페라제 Immunoprecipitation 시스템)를 수행하는 기술적인 측면이 설명되어 있습니다. 전체 접근 방식은 포유 동물 세포에서 Renilla 루시페라제 (Ruc)에 융합 항원을 인코딩 키메라 유전자 표현이 포함됩니다. 원유 Ruc - 항원 추출물 다음 준비하고, 정화없이 항체를 정할 immunoprecipitation의 assays에 근무하고 있습니다.

루시페라제 Immunoprecipitation 시스템 (입술)에 의해 항체 프로파일

출처: Heidbuechel, J. P., Engeland, C. E. 종양 표적 면역 조절을 위한 파라믹소바이러스: Ex Vivo 설계 및 평가. J. Vis. Exp. (2019)본 영상에서는 리포좀을 사용하여 바이러스 안티게놈과 필수 헬퍼 단백질을 인코딩하는 플라스미드를 생산 세포로 전달함으로써 재조합 홍역 바이러스를 생성하는 과정을 보여줍니다. 전사 및 복제된 RNA는 면역 자극 및 형광 리포터 단백질을 발현하는 바이러스 입자의 형성으로 이어집니다. 이후 형광 현미경을 사용하여 씽시튬(syncytia) 형성을 시각화함으로써 재조합 바이러스가 성공적으로 생산되었음을 확인합니다.

면역 자극 단백질을 인코딩하는 재조합 홍역 바이러스의 생성

이 비디오는 항원 리포좀의 활용을 통한 B 세포 활성화 평가를 보여줍니다. 칼슘에 민감한 Indo-1 염료로 처리된 B 세포는 유세포 분석을 사용하여 구별하고 보라색 대 청색 형광 비율을 분석합니다. 세포가 항원 리포좀을 만나면 칼슘 유입을 통해 B 세포 활성화를 유발하여 시간이 지남에 따라 보라색 대 청색 형광 신호 비율을 점진적으로 향상시킵니다.

칼슘-플럭스 분석법을 사용한 항원 리포좀을 사용한 B 세포 활성화 모니터링

이 프로토콜의 목표는 신경 표적 펩타이드가 있는 양이온성/음이온성 리포좀을 CNS 전달 시스템으로 사용하여 siRNA가 BBB를 통과할 수 있도록 하는 것입니다.  siRNA와 같은 치료를 위한 전달 시스템의 최적화는 프리온 및 기타 신경 퇴행성 질환에 대한 더 많은 치료 옵션을 가능하게 할 것입니다.

양이온과 음이온 리포좀을 사용 CNS에 치료의 siRNA 배달

하이브리도마 기술을 기반으로 한 단클론 항체 생성을 위해 최적화된 프로토콜이 제시됩니다. 마우스는 면역접합체로 면역되었습니다. 비장 세포는 PEG와 전기 충격에 의해 불멸의 골수종 세포와 융합되었습니다. 항체 생산 하이브리도마 세포는 HAT 및 항원 특이적 ELISA 스크리닝에 의해 선택되었습니다.

하이 브리 도마 기술에 의해 쥐 단일 클론 항체의 생성

인간의 혈액에서 회람 하는 드문 B 세포에서 시작 인간 항 체의 항 원에 대 한 특정의 생산 하는 방법을 설명 합니다. 이러한 자연 항 체의 생성은 효율적이 고 신속한, 그리고 얻은 항 체 매우 관련된 항 원 사이 차별 수 있습니다.

희귀 한 항 원 특정 B 세포 혈액 순환에서 구별 인간 단일 클론 항 체의 생성

이 문서는 준비와 다양 한 immunoassays에 사용 하기 위해 천연 제품에 대 한 단일 클론 항 체의 평가 대 한 상세한 프로토콜을 제공합니다. 이 절차는 면역을, 세포 융합, 간접 경쟁 ELISA, 긍정적인 복제품와 단일 클로 널 hybridoma 준비를 포함 한다. MALDI – TOF-MS와 ELISA 분석을 사용 하 여 항 체 특성에 대 한 사양도 제공 됩니다.

천연 제품에 대 한 단일 클론 항 체의 생성

여기 우리가 드라이 필름 방식에 기반 하 고 안전에 대 한 사용할 수 있습니다 양이온 nanoliposomes의 생성에 대 한 프로토콜을 설명 하 고 효율적인 전달 체 외에 문자 메신저 RNA.

체 외에서 의 효율적인 배달 양이온 Nanoliposomes의 세대 문자 메신저 RNA

이 프로토콜은 밀 무세포 시스템 및 리포좀을 사용하는 이중층 투석 방법에 의한 고품질 프로테올리포좀의 생산을 위한 효율적인 무세포 방법을 설명합니다. 이 방법은 막 단백질의 기능 분석, 약물 표적 스크리닝 및 항체 개발에 적합한 수단을 제공합니다.

막 단백질을 표적으로 하는 기능 분석 및 항체 개발을 위한 프로테올리포좀의 무세포 생산

여기서는 항원 표시 바이러스 유사 입자(VLP)에서 중화 에피토프를 검출하는 프로토콜을 제시한다. 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-유래 VLP의 면역 침전은 단백질 G-컨쥬게이트 자기 비드에 결합된 봉투 당단백질 특이적 단일 클론 항체를 사용하여 수행된다. 포획된 VLP는 이후 바이러스 성 코어 단백질 개그 특이적 항체를 사용하는 SDS-PAGE 및 서양 블롯 분석을 받게 된다.

포획 분석기를 사용하여 바이러스와 같은 입자(VLP) 기반 백신에 표시되는 항원에서 중화에 민감한 에피토프 검출

배우세요 항원성 리포솜 나노입자를 이용한 B세포 활성화 및 땅콩 알레르기 마우스 모델 개발 방법을. 이 기법은 면역요법 연구와 자가면역 질환 연구에 활용됩니다.

질병-특정 항 체의 생성에 대 한 항 원 리

더 많은 동영상 탐색