절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법
2018년 9월 5일
여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.
이 방법은 파라핀 절편화와 같은 형태학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 절단 및 접는 절차를 절정에 이르게 하고 기존 방법에 의해 요구되는 이송 과정을 피한다는 것입니다. 시작하려면 사전 제조된 모든 부품을 흄 후드에 모으십시오.
클로로포름을 사용하여 그림과 같이 7개의 아크릴 보드를 결합합니다. 최종 제품은 섹션 채널과 수조가 장착된 탱크가 될 것입니다. 아크릴 보드 번호 2의 구멍을 통해 관형 전기 발열체를 설치하십시오.
전기 드릴을 사용하여 7 번 아크릴 보드에 작은 구멍을 뚫고 탱크에 디지털 온도 조절기를 설치하여 탱크의 검은 점으로 표시된 의도 된 수면 높이보다 최소 1cm 아래에 있는지 확인하십시오. 장비를 켜기 전에 전압이 24볼트 미만이 되도록 전압을 조정하십시오. 마이크로톰에서 섹션 쓰레기통을 제거합니다.
다음으로, 중성 실리콘 실런트를 사용하여 섹션 채널을 마이크로톰 블레이드 홀더에 연결하고 블레이드 상단 위로 실런트가 올라가지 않도록 합니다. 클로로포름과 중성 실리콘 실란트가 응고될 시간을 주기 위해 설정을 밤새 건조시킵니다. 다음날 칼날 홀더에 칼날을 설치하십시오.
수조에 물을 추가하고 물 표면이 블레이드 상단에 닿도록 합니다. 기존의 파라핀 절편을 수행한 후 장비를 켜서 개선된 파라핀 절편을 시작하십시오. 온도 감지 스위치를 사용하여 히터를 엽니다.
목표 온도를 섭씨 38도에서 40도 사이로 1시간 동안 설정하여 물을 데웁니다. 칼을 사용하여 파라핀 임베딩으로 얻은 파라핀 블록을 수정합니다. 그런 다음 블록을 마이크로톰의 카세트 cl에 놓습니다.amp, 잠그십시오.
샘플에 빠르게 접근할 수 있도록 두꺼운 부분을 자릅니다. 샘플에 적합한 단면 두께로 조정합니다. 핸드 휠을 돌리면 섹션이 자동으로 섹션 채널과 수조에 로드됩니다.
다음으로, 느리고 균일한 절단 스트로크로 시편을 절단합니다. 섹션을 욕실로 안내하여 일렬로 떠오르도록 합니다. 헤드 섹션이 챔버 벽에 부착되면 브러시 가이드를 사용하여 떠 있는 상태를 유지하십시오.
수조에서 단면이 완전히 펼쳐진 후 핀셋을 사용하여 여러 개를 분리한 다음 현미경 슬라이드에서 집습니다. 슬라이드를 섭씨 42도로 설정된 오븐으로 옮겨 밤새 말리십시오. 그런 다음 슬라이드를 분석할 준비가 될 때까지 실온에서 무기한 보관할 수 있습니다.
분석할 준비가 되면 hematoxylin-eosin 염색을 사용하여 개선된 방법을 사용하여 단면을 평가합니다. 이 연구에서는 성체 쥐 해마 조직, 성체 쥐 신장, 배아 쥐 뇌 및 제브라피시 눈을 위한 파라핀 절편을 준비하는 데 개선된 방법을 사용합니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 새로운 방법은 단면 손실을 방지하고 검사된 조직의 각 유형에서 손상되지 않은 절편의 비율을 증가시킵니다.
전체 시리즈 절편을 수행할 때 이 방법은 테스트된 모든 샘플에서 파라핀 절편 속도를 가속화하는 것으로 나타났습니다. 즉, 이 방법은 기존 방법보다 더 짧은 시간에 더 높은 품질의 파라핀 절편을 제공합니다. 그런 다음 제브라피시 시신경 망막의 일련의 절편을 헤마톡실린-에오신 염색으로 관찰합니다.
개선된 방법에서 수확된 절편은 종래의 파라핀 절편 방법에서 수확된 절편보다 더 나은 무결성을 갖는 것으로 보입니다. 이 두 가지 방법을 비교할 때 대부분의 수확된 절편의 품질에는 큰 차이가 없지만 기존 방법으로 수확된 일부 절편은 상대적으로 품질이 낮은 것으로 보입니다. 클로로포름으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 흄 후드와 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.
이 절차를 시도하는 동안 물을 조심스럽게 추가하고 과도하게 채우지 않도록 하는 것이 중요합니다.
전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요
개요
이 기사는 절단과 부동을 온도 조절 챔버 내에서 결합하여 전통적인 이송 과정의 필요성을 제거하도록 설계된 프로토콜을 제시합니다. 이 수정은 파라핀 단면의 효율성과 무결성을 크게 개선합니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 조직학
- 신경과학
- 파라핀 단면 기술
배경
- 기존의 파라핀 단면은 여러 단계의 이송을 포함하여 종종 단면 손실로 이어집니다.
- 새로운 방법은 과정을 간소화하여 손상되지 않은 단면의 수율을 향상시킵니다.
- 다양한 생물 조직에서의 정확한 형태학적 분석을 위해 개선된 단면 작업이 중요합니다.
연구 목적
- 손상되지 않은 파라핀 단면 수를 증가시키는 프로토콜을 제시합니다.
- 생물학 연구에서 파라핀 단면에 필요한 시간을 줄입니다.
- 마우스 및 제브라피쉬 조직의 더 나은 분석을 용이하게 합니다.
사용된 방법
- 이 기사는 단면 작업을 위한 온도 조절 챔버를 포함하는 방법을 상세히 설명합니다.
- 성인 마우스 해마 조직, 신장, 배아 마우스 뇌, 그리고 제브라피쉬 눈의 파라핀 임베딩 및 단면 작업이 수행되었습니다.
- 장치의 온도 설정 및 특정 설치 단계가 개요되어 있습니다.
- 중요한 단계에는 가열 요소의 주의 깊은 설정 및 단면 작업 절차가 포함됩니다.
- 단면은 평가를 위해 헤마토실린-에오신으로 염색됩니다.
주요 결과
- 이 프로토콜은 기존 방법에 비해 손실이 감소되고 더 높은 품질의 단면을 생성하는 것으로 나타났습니다.
- 다양한 조직 유형에서 향상된 단면 무결성이 관찰되었으며, 특히 제브라피쉬 광학 망막과 마우스 조직에서 두드러집니다.
- 이 방법은 품질을 유지하면서 파라핀 단면 작업 과정을 가속화합니다.
결론
- 이 연구는 조직 샘플의 무결성을 촉진하는 더 효율적인 파라핀 단면 프로토콜을 제공합니다.
- 더 짧은 시간 내에 더 높은 품질의 결과물을 보장함으로써 형태학적 연구를 발전시킵니다.
- 이는 조직학적 분석을 위한 정확한 단면 작업에 의존하는 연구자들에게 중요한 의미가 있습니다.
자주 묻는 질문
Executive Industry Relevance
Paraffin sectioning remains a bottleneck in histology workflows, particularly for high-throughput target validation and phenotypic screening in discovery biology. This method improves section integrity and throughput, reducing technical variability that can confound downstream assay readouts and mechanistic de-risking efforts. By enabling reliable, reproducible tissue preparation, it supports predictive confidence in target engagement studies across neuroscience and oncology models.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses through high-integrity tissue morphology for target localization and pathway analysis.
- Operational Value: Reduces section loss and manual transfer steps, increasing usable tissue yield per experiment.
- Predictive Value: Supports consistent histological readouts critical for target engagement and mechanism-of-action studies.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Produces standardized, intact sections suitable for immunohistochemistry and in situ hybridization assays.
- Operational Value: Streamlines sectioning workflow, allowing junior operators to maintain quality and consistency.
- Assay Readiness: Enables reliable compound evaluation by minimizing tissue artifacts that interfere with signal detection.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Maintains morphological fidelity across disease-relevant systems, including murine and zebrafish tissues.
- Operational Value: Facilitates continuity from discovery through preclinical validation with reduced technical failure.
- Risk Mitigation: Lowers biological noise in longitudinal studies, supporting risk-adjusted advancement decisions.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from early target validation to lead optimization, where reliable histology informs go/no-go decisions.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing via intact tissue sections for target validation and biomarker co-localization.
- Screening: Enhances assay reproducibility by delivering uniform sections for quantitative imaging and staining.
- Analytics: Generates high-quality morphological data enabling accurate comparison across experimental conditions.
- Translational Research: Promotes preclinical continuity through consistent tissue preparation across species and developmental stages.
- Enterprise Reuse: Represents a scalable, low-cost capability applicable across multiple projects and therapeutic areas.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by reducing section loss and improving morphological integrity.
- Operational Value: Standardizes sectioning through simplified equipment and reduced operator dependency.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by accelerating histology workflows and reducing reagent waste from failed sections.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization through reliable histological data for target validation and safety pharmacology.
Implementation Considerations
- Requires basic histology expertise and familiarity with microtome operation and paraffin embedding.
- Needs standard laboratory equipment including microtome, oven, and staining reagents, plus custom acrylic chamber assembly.
- Demands cross-team standardization of section thickness, temperature control, and water bath preparation for reproducibility.
- Adaptation considerations include tissue-specific optimization of cutting speed and section thickness for varied sample densities.
- Practical limitations include safe handling of chloroform during assembly, necessitating fume hood use and proper ventilation.
