절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

이 방법은 파라핀 절편화와 같은 형태학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 절단 및 접는 절차를 절정에 이르게 하고 기존 방법에 의해 요구되는 이송 과정을 피한다는 것입니다. 시작하려면 사전 제조된 모든 부품을 흄 후드에 모으십시오.

클로로포름을 사용하여 그림과 같이 7개의 아크릴 보드를 결합합니다. 최종 제품은 섹션 채널과 수조가 장착된 탱크가 될 것입니다. 아크릴 보드 번호 2의 구멍을 통해 관형 전기 발열체를 설치하십시오.

전기 드릴을 사용하여 7 번 아크릴 보드에 작은 구멍을 뚫고 탱크에 디지털 온도 조절기를 설치하여 탱크의 검은 점으로 표시된 의도 된 수면 높이보다 최소 1cm 아래에 있는지 확인하십시오. 장비를 켜기 전에 전압이 24볼트 미만이 되도록 전압을 조정하십시오. 마이크로톰에서 섹션 쓰레기통을 제거합니다.

다음으로, 중성 실리콘 실런트를 사용하여 섹션 채널을 마이크로톰 블레이드 홀더에 연결하고 블레이드 상단 위로 실런트가 올라가지 않도록 합니다. 클로로포름과 중성 실리콘 실란트가 응고될 시간을 주기 위해 설정을 밤새 건조시킵니다. 다음날 칼날 홀더에 칼날을 설치하십시오.

수조에 물을 추가하고 물 표면이 블레이드 상단에 닿도록 합니다. 기존의 파라핀 절편을 수행한 후 장비를 켜서 개선된 파라핀 절편을 시작하십시오. 온도 감지 스위치를 사용하여 히터를 엽니다.

목표 온도를 섭씨 38도에서 40도 사이로 1시간 동안 설정하여 물을 데웁니다. 칼을 사용하여 파라핀 임베딩으로 얻은 파라핀 블록을 수정합니다. 그런 다음 블록을 마이크로톰의 카세트 cl에 놓습니다.amp, 잠그십시오.

샘플에 빠르게 접근할 수 있도록 두꺼운 부분을 자릅니다. 샘플에 적합한 단면 두께로 조정합니다. 핸드 휠을 돌리면 섹션이 자동으로 섹션 채널과 수조에 로드됩니다.

다음으로, 느리고 균일한 절단 스트로크로 시편을 절단합니다. 섹션을 욕실로 안내하여 일렬로 떠오르도록 합니다. 헤드 섹션이 챔버 벽에 부착되면 브러시 가이드를 사용하여 떠 있는 상태를 유지하십시오.

수조에서 단면이 완전히 펼쳐진 후 핀셋을 사용하여 여러 개를 분리한 다음 현미경 슬라이드에서 집습니다. 슬라이드를 섭씨 42도로 설정된 오븐으로 옮겨 밤새 말리십시오. 그런 다음 슬라이드를 분석할 준비가 될 때까지 실온에서 무기한 보관할 수 있습니다.

분석할 준비가 되면 hematoxylin-eosin 염색을 사용하여 개선된 방법을 사용하여 단면을 평가합니다. 이 연구에서는 성체 쥐 해마 조직, 성체 쥐 신장, 배아 쥐 뇌 및 제브라피시 눈을 위한 파라핀 절편을 준비하는 데 개선된 방법을 사용합니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 새로운 방법은 단면 손실을 방지하고 검사된 조직의 각 유형에서 손상되지 않은 절편의 비율을 증가시킵니다.

전체 시리즈 절편을 수행할 때 이 방법은 테스트된 모든 샘플에서 파라핀 절편 속도를 가속화하는 것으로 나타났습니다. 즉, 이 방법은 기존 방법보다 더 짧은 시간에 더 높은 품질의 파라핀 절편을 제공합니다. 그런 다음 제브라피시 시신경 망막의 일련의 절편을 헤마톡실린-에오신 염색으로 관찰합니다.

개선된 방법에서 수확된 절편은 종래의 파라핀 절편 방법에서 수확된 절편보다 더 나은 무결성을 갖는 것으로 보입니다. 이 두 가지 방법을 비교할 때 대부분의 수확된 절편의 품질에는 큰 차이가 없지만 기존 방법으로 수확된 일부 절편은 상대적으로 품질이 낮은 것으로 보입니다. 클로로포름으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 흄 후드와 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

이 절차를 시도하는 동안 물을 조심스럽게 추가하고 과도하게 채우지 않도록 하는 것이 중요합니다.