Name: 절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min
Description: 학습하세요 파라핀 섹션 절단 및 부동 방법으로 생쥐와 zebrafish 조직의 형태학적 분석을 효율적으로 수행하는 기법입니다. 이 프로토콜은 섹션 손실을 줄이고 완전한 조직 단면 확보율을 높여 연구 시간을 단축합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (보조금 번호 31400936, 31460260)에 의해 지원 되었다, 자연 과학 재단의 장시 성 중국 (20171BAB215020). 우리는 또한이 작업을 지원 하기 위한 난창 대학과 런던 퀸 메리 대학 간의 공동 프로그램을 감사 합니다.

여기에 설명 된 모든 방법은 동물 관리 및 사용 위원회의 남 창 대학에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 장비를 조립 하 고는 톰을 연결
<ol><li>디자인 요구 사항 (보충 그림 1) 당 매개 변수.</li>
	<li>아크릴 보드 제조에 현지 공장에 매개 변수를 제출 합니다.</li>
	<li>순서 대로 모든 부품을 조립: 클로 프롬을 사용 하 여 결합 7 상업 아크릴 보드 탱크로 섹션 채널 및 물 목욕 (그림 1). 주의: 클로 프롬 때 그것은 빛과 산소 독성 물질을 생성 합니다. 증기 두건에서 장치를 조립 한다.</li>
	<li>아크릴 보드 #1 (그림 2A, 화살촉)에 구멍을 통해 전기 요소를 설치 합니다.</li>
	<li>온도 컨트롤러를 설치 하는 전기 드릴을 사용 하 여 #2 아크릴 보드에 작은 구멍을 만들고 온도 검출기 (그림 2A, 화살표)를 설치 합니다. 탱크 (그림 2A)에 디지털 온도 조절기를 설치 합니다. 참고: 온도 검출기는 수 면 아래 1 cm 이내 이어야 한다.</li>
	<li>전원에 대 한 액세스를 제공 하려면 장비를 켜기 전에 24 V는 전압을 조정 합니다.</li>
	<li>톰에서 섹션 쓰레기 트레이 제거 합니다.</li>
	<li>중립 실리콘 실 란 트 (그림 2B)와 톰 블레이드 홀더를 가진 섹션 채널을 연결 합니다. 참고: 오래 된 잎은 쉽게 교체할 수 있도록 블레이드 상단 위에 중립 실리콘 실 란 트를 얼룩 하지 마십시오.</li>
	<li>클로 프롬 및 중립 실리콘 실 란 트 시간을 강화 하기 위해 하룻밤 건조.</li>
	<li>블레이드 블레이드 홀더를 설치 합니다. 물 목욕 (그림 2C)에 물을 붓으십시오. 수 면 그냥 블레이드 (그림 2D, 화살표 머리)의 상단을 터치 한다.</li>
</ol>2. 파라핀 단면
참고: 파편은 종종 왁 스 블록 및 수 면의 위쪽 또는 아래쪽 가장자리에 누적 될. 이 파편 정기적으로 삭제 해야 합니다.
<ol><li>
전통적인 파라핀10단면을 수행 합니다.
	<ol>
<li>로타리 톰에 파라핀 포함 견본을 클램프과 블레이드 홀더에 블레이드를 놓습니다.</li>
		<li>수동 핸들을 표본 섹션.</li>
		<li>38.5 ° C 따뜻한 물 목욕을 sectioned 파라핀 리본을 전송 합니다.</li>
		<li>현미경에 섹션 전개 후 물 표면에서 슬라이드를 선택 합니다.</li>
		<li>하룻밤 건조 오븐에서 42 ° C에 슬라이드.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
향상 된 파라핀 단면 (그림 3)
	<ol>
<li>장치를 켭니다.</li>
		<li>온도 감지 스위치 히터를 열고 40.0 ° C에 미리 따뜻한 물에 1 시간을 38.0 ° C 사이의 대상된 온도 설정 합니다.</li>
		<li>파라핀 포함; 인수 파라핀 블록 수정 그리고 톰의 카세트 클램프에는 파라핀 블록을 놓고 그것을 자물쇠. 참고: 파라핀 블록의 뛰어난 및 하 부 테두리 섹션 리본 호를 형성 하 고 좁은 섹션 채널을 통해 흐름 수 없습니다 되기에서 방지 하기 위해 가로 수정할 수 합니다.</li>
		<li>신속 하 게 절단 두꺼운 섹션으로 샘플을 접근 한다.</li>
		<li>적합 한 섹션 두께 (성인 쥐 두뇌, 성인 마우스 신장, 및 태아 마우스 두뇌 10 µ m, zebrafish 눈 4 µ m)를 조정 합니다. 수동 핸들으로 바뀌고 섹션 섹션 채널 및 목욕에 자동으로 입력 합니다.</li>
		<li>느리고 균일 한 절삭 스트로크 (그림 3A)에 견본 섹션. 참고: 첫 번째 섹션의 Thethickness는 몇 분 동안 중지 되는 수동 핸들 변경 될 것입니다. 일회용 블레이드 섹션 연속 긁힌 자국이 있을 때 대체 되어야 한다.</li>
		<li>(그림 3B, 3c) 라인에서 떠 목욕 실로 섹션 안내. 참고: 경우 head 섹션 챔버 벽에 고착, 부동을 브러시 가이드를 사용 합니다.</li>
		<li>현미경 슬라이드에 섹션을 준수 합니다. 섹션 후 완전히 물 목욕, 핀셋으로 별도 여러 섹션에에서 전개. 다음 그들에서 픽업 현미경 슬라이드 (그림 3D)에 물 목욕. 참고: 섹션 해야 선택 됩니다 물 목욕의 후부에서 섹션 채널 및 물 목욕의 앞쪽에 아직 되지 것입니다 완전히 펼친 대로.</li>
		<li>밤새 42 ° C 오븐에서 그들을 배치 하 여 슬라이드를 건조. 슬라이드 다음 저장할 수 있습니다 실 온에서 무기한.</li>
	</ol>
</li>
	<li>개선된 방법8의 평가 위해 얼룩이 지는 Hematoxylin 오신 (그)를 사용 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23722210">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li>
<li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li>
<li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+printing%3A+Computer-aided+jet-based+3D+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryosectioning+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Cryosectioning tissues.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).</li>
<li>Viebahn, C., Luttenberg, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+anti-roll+plate+as+a+remedy+for+the+ill-effects+of+electrical+charge+during+cryosectioning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).</li>
<li>Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+completely+automated+tissue-sectioning+machine+for+paraffin+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).</li>
<li>Sabaliauskas, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+zebrafish+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li>
<li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid-Cut%3A+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754(2016).</li>
<li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438(2010).</li>
<li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196(2018).</li>
<li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li>
<li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796(2017).</li>
<li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933(2013).</li>
<li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD163%3A+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li>
<li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068(2012).</li>
</ol>

저자는이 장치에 대 한 특허를가지고 하 고 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.

파라핀 섹션 형태를 개선 하 고 기존의 파라핀 단면 동안 시간을 낭비의 문제를 해결, 우리는 향상 된 파라핀 단면 절단 및 전개 방법을 만들었습니다. 이 향상 된 방법은 간단한 장비 섹션 채널, 물 목욕, 온도 감지 스위치 히터에 의존 합니다. 섹션 리본 섹션 채널을 통해 물 목욕을 입력 하 고 자동으로 절단 하는 동안 펼쳐져. 따라서,이 방법은 파라핀 품질과 효율성, 파라핀 성인 마우스 해 마, 성인 마우스 신장, E15.5 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈의 단면에 의해 확인 된 단면을 향상 시킵니다.
전통적인 파라핀 단면 동안 컬링 섹션을 피하기 위해, 많은 조정 되었습니다, 조직 표면 보습, 왁 스 블록을 냉각, 습도, 증가 및 cryosectioning6,7, 결합 등 8; 그러나, 이러한 조...

형태학 연구 생물학 연구에서 중요 하다입니다. 새로운 기술 얼룩 뒤에 그들의 목표는 전체 조직 또는 생물1,2,3, 얇은 섹션으로는 시료를 절단에서 직접 관찰 하는 연구를 허용 했다, 남아 있다 기본 메서드 fornot 유일한 조직 형태 뿐만 아니라 조직에서 직접 대상으로 하는 단백질. 가벼운 현미경 검사 법 사용 하 여 세 가지 섹션 유형: 파라핀, 냉동, 그리고 semithin. 비록 cryosectioning 조직 antigenicity을 보호 하는 것이 일반적 이며 견본 준비는 간단 하다, 가난 하 고 얇은 단면4,5에 대 한 부적 절 한 유지 조직 형태가 이다. 파라핀 단면 전시 잘 보존 된 형태에 대 한 가장 자주 사용 되는 방법입니다. 표본은 완전히 탈수 하 고 왁 스에 포함 된, 파라핀 블록 무기한으로 저장할 수 있습니다. 또한, 파라핀 단면 얇은 섹션 추가 실험에서 생물학 프로브 액세스를 개선 하 고 셀 레이어 오버레이 Z 방향으로 감소 생산 합니다.
그러나, 전통적인 파라핀 단면 지루한 이며 연산자 기술 요구. 파라핀 섹션에는 고정, 탈수, 포함, 절단, 그리고 떠 받 다. 중요 한 것은, 물 목욕을 칼 홀더에서 섹션 리본 전송은 필요 하지만 어려운 주니어 연산자에 대 한입니다. 건조 한 공기에 (서) 특히 섹션 리본 정전기 때문 트위스트 것과 따뜻한 물 표면에 전개 하기 어렵습니다. 섹션을 개선 하기 위해 품질, 얼음 물에 immersing 또는 톰 근처 가습기로 습도 올리는 왁 스 블록을 냉각 톰 블레이드 가공 패스 사이의 노출 된 조직 표면에 보습6,7 권장 . 파라핀 단면을 개선 하기 위한 새로운 방법 등 하이브리드 파라핀 포함, cryosectioning8, 상업 섹션 전송 시스템 지원9. 비록 이러한 방법을 부분적으로 파라핀을 개선 속도 품질, 단면 그들은 단면 훨씬 더 복잡 하 고, 만들고 상업 섹션 전송 시스템은 비싼.
이 프로토콜을 로타리 톰의 블레이드 홀더에 연결 될 수 있는, 저렴 한 간단 하 고 유연한 장비 단계를 만드는 방법을 보여 줍니다. 이 장비는 구성 섹션 채널, 물 목욕, 온도 감지 스위치 히터. 절단 후, 섹션의 수십 섹션 채널을 흘러 하 고 따라서 자동으로 펼쳐지고 직접 물 목욕을 입력 합니다. 이 파라핀 단면 효율을 향상 하 고이 기술을 더 편리 하 게. 이 방법, 더 성인 마우스 hippocampal 섹션, 성인 마우스 신장 섹션, 배아 15.5 일 된 (E15.5) 마우스 뇌 섹션, 및 섹션 짧은 시간에 수확 하 고 형태학 상으로 더 온전 하 게 남아 있었다 성인 zebrafish 눈을 사용 하 여. 이 메서드는 또한 가속된 파라핀 섹션 구별의 손실을 피하 면 서 단면 필요로 하는 다른 조직 샘플에 대 한 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>인큐베이터</td><td>Boekel Scientific</td><td>133000-2</td><td></td></tr><tr><td>에탄올&nbsp;</td><td>Sinopharm 화학 시약 Co., 뚜껑</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>자일렌&nbsp;</td><td>Sinopharm 화학 시약 유</td>한 뚜껑 <td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast</td><td>라이카</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>가열 파라핀 임베딩 모듈</td><td>라이카</td><td></td><td></td></tr><tr><td>상업용 아크릴 보드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리클로로 메탄</td><td>Sinopharm 화학 시약 유한</td> 뚜껑 <td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>관형 전기 발열체 (12 V 200 W)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>온도 조절기(12 V 120 W)</td><td>Mingsuo</td><td>XH-W3002</td><td></td></tr><tr><td>로터리 마이크로톰&nbsp;</td><td>라이카</td><td></td><td></td></tr><tr><td>중성 실리콘 실란트</td><td></td><td></td><td>마이크로톰 나이프 홀더로 수로를 연결</td></tr><tr><td>전압 변압기</td><td>Dearll</td><td>S-250-12</td><td></td></tr><tr><td>일회용 블레이드</td><td>Accu-Edge</td><td>4689</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>에오신&nbsp;</td><td>바소 진단 Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Microslide</td><td>Sail Brand</td><td>7105</td><td></td></tr><tr><td>중립 발삼</td><td>Sinopharm 화학 시약 Co., 뚜껑</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>커버슬립&nbsp;</td><td>Citoglas</td><td>10212424C</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>Xilong Chemical</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 섹션용 수조</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HistoCore Arcadia C&nbsp;- Cold Plate</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라핀 방제 스프레이&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990420</td><td></td></tr></tbody></table>

절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

파라핀 끼워 넣어진 조직의 단면 조직학 및 병 리에 널리 사용 됩니다. 그러나, 그것은 지루한입니다. 이 방법을 개선 하기 위해, 여러 상업 회사 유체 물을 사용 하 여 복잡 한 섹션 전송 시스템을 고안 했다. 단순화 하기 위해이 기술을, 우리가 만든 결합 절단 및 간단한 항 온 챔버; 내 부동 수 제 장비를 사용 하 여 간단한 방법 따라서, 섹션 자동으로 물 표면에 물 목욕을 입력합니다. 성인 쥐 두뇌, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈에서 해 마는 비교에 대 한 전통적인 파라핀 단면 및 제시 방법 모두를 사용 하 여 절단 했다. 통계 분석이 보여줍니다 우리의 개선된 방법 시간을 저장 하 고 높은 품질 섹션을 생산. 또한, 짧은 시간에 전체 견본의 파라핀 단면 주니어 연산자에 대 한 쉽습니다.

개선된 방법 그대로 파라핀 섹션의 수를 증가 했다. 성인 마우스 hippocampal 조직, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 그리고 zebrafish 눈에이 새로운 방법을 테스트 했습니다. 물 탱크에 추가 되었다 그리고 40.0 ° c 38.0 ° C 사이 수 온 유지 되었다 순차적으로 준비 후 조직 샘플, 그들은 구분 하 고 기존의 단면에 비해 했다. 새로운 메서드는 섹션 손실을 피할 하 고 성인 마우스 해 마, 성인 마우스 신장, E15.5 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈 (그림 4A4c, 4E, 4 G)에 그대로 섹션의 비율. 결론적으로, 우리의 방법 섹션 손실을 방지 하 고 견본 당 더 많은 그대로 섹션을 수확 하 여 단면 개선.
개선된 방법 견본 당 소...

여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

이 방법은 파라핀 절편화와 같은 형태학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 절단 및 접는 절차를 절정에 이르게 하고 기존 방법에 의해 요구되는 이송 과정을 피한다는 것입니다. 시작하려면 사전 제조된 모든 부품을 흄 후드에 모으십시오.클로로포름을 사용하여 그림과 같이 7개의 아크릴 보드를 결합합니다. 최종 제품은 섹션 채널과 수조가 장착된 탱크가 될 것입니다. 아크릴 보드 번호 2의 구멍을 통해 관형 전기 발열체를 설치하십시오.전기 드릴을 사용하여 7 번 아크릴 보드에 작은 구멍을 뚫고 탱크에 디지털 온도 조절기를 설치하여 탱크의 검은 점으로 표시된 의도 된 수면 높이보다 최소 1cm 아래에 있는지 확인하십시오. 장비를 켜기 전에 전압이 24볼트 미만이 되도록 전압을 조정하십시오. 마이크로톰에서 섹션 쓰레기통을 제거합니다.다음으로, 중성 실리콘 실런트를 사용하여 섹션 채널을 마이크로톰 블레이드 홀더에 연결하고 블레이드 상단 위로 실런트가 올라가지 않도록 합니다. 클로로포름과 중성 실리콘 실란트가 응고될 시간을 주기 위해 설정을 밤새 건조시킵니다. 다음날 칼날 홀더에 칼날을 설치하십시오.수조에 물을 추가하고 물 표면이 블레이드 상단에 닿도록 합니다. 기존의 파라핀 절편을 수행한 후 장비를 켜서 개선된 파라핀 절편을 시작하십시오. 온도 감지 스위치를 사용하여 히터를 엽니다.목표 온도를 섭씨 38도에서 40도 사이로 1시간 동안 설정하여 물을 데웁니다. 칼을 사용하여 파라핀 임베딩으로 얻은 파라핀 블록을 수정합니다. 그런 다음 블록을 마이크로톰의 카세트 cl에 놓습니다.amp, 잠그십시오.샘플에 빠르게 접근할 수 있도록 두꺼운 부분을 자릅니다. 샘플에 적합한 단면 두께로 조정합니다. 핸드 휠을 돌리면 섹션이 자동으로 섹션 채널과 수조에 로드됩니다.다음으로, 느리고 균일한 절단 스트로크로 시편을 절단합니다. 섹션을 욕실로 안내하여 일렬로 떠오르도록 합니다. 헤드 섹션이 챔버 벽에 부착되면 브러시 가이드를 사용하여 떠 있는 상태를 유지하십시오.수조에서 단면이 완전히 펼쳐진 후 핀셋을 사용하여 여러 개를 분리한 다음 현미경 슬라이드에서 집습니다. 슬라이드를 섭씨 42도로 설정된 오븐으로 옮겨 밤새 말리십시오. 그런 다음 슬라이드를 분석할 준비가 될 때까지 실온에서 무기한 보관할 수 있습니다.분석할 준비가 되면 hematoxylin-eosin 염색을 사용하여 개선된 방법을 사용하여 단면을 평가합니다. 이 연구에서는 성체 쥐 해마 조직, 성체 쥐 신장, 배아 쥐 뇌 및 제브라피시 눈을 위한 파라핀 절편을 준비하는 데 개선된 방법을 사용합니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 새로운 방법은 단면 손실을 방지하고 검사된 조직의 각 유형에서 손상되지 않은 절편의 비율을 증가시킵니다.전체 시리즈 절편을 수행할 때 이 방법은 테스트된 모든 샘플에서 파라핀 절편 속도를 가속화하는 것으로 나타났습니다. 즉, 이 방법은 기존 방법보다 더 짧은 시간에 더 높은 품질의 파라핀 절편을 제공합니다. 그런 다음 제브라피시 시신경 망막의 일련의 절편을 헤마톡실린-에오신 염색으로 관찰합니다.개선된 방법에서 수확된 절편은 종래의 파라핀 절편 방법에서 수확된 절편보다 더 나은 무결성을 갖는 것으로 보입니다. 이 두 가지 방법을 비교할 때 대부분의 수확된 절편의 품질에는 큰 차이가 없지만 기존 방법으로 수확된 일부 절편은 상대적으로 품질이 낮은 것으로 보입니다. 클로로포름으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 흄 후드와 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.이 절차를 시도하는 동안 물을 조심스럽게 추가하고 과도하게 채우지 않도록 하는 것이 중요합니다.

the-cutting-floating-method-for-paraffin-embedded-tissue-for

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

다음 비디오는 포르말린 고정 및 파라핀 임베딩으로 조직의 형태를 보존하는 방법을 설명합니다.

포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직 보존: 조직 형태학 연구 방법

이 비디오에서는 위장관 종양 조직에서 얻은 FFPE 또는 포르말린 고정 파라핀 삽입 절편의 처리를 보여줍니다. 탈파라핀화(deparaffinization) 및 재수화(rehydration) 단계를 통해 후속 분석 응용 분야를 위해 조직 표본을 처리할 수 있습니다.

조직 절편의 탈파라핀화 및 재수화: FFPE 조직 슬라이드에서 파라핀 왁스를 제거한 후 조직 재수화를 하는 2단계 절차

우리는 여성의 생식 기관의 정상 및 형질 전환 상피의 연구에 적합한 난소 유행 패드 이식 분석에 대해 설명합니다. 마우스 지방 패드는 큰 조직 조각의 이식을 허용 수술과 이미징을위한 쉽게 접근 할 수 있으며, 뮐러 기원의 조직에 가장 유리한 기본 환경을 제공합니다.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

이 프로토콜은 난치성 식물 조직에 유용한 간단한 Hybrid-Cut 조직 절편 방법을 설명합니다. 양질의 조직 절편은 해부학적 연구 및 현장 교잡(ISH)을 포함한 기타 생물학적 연구를 가능하게 합니다.

하이브리드 컷 : 난 분해성 식물 조직 샘플에 대한 개선 단면 방법

우리는 성공적으로 슬라이드를 전체 마운트로 고정시킨 유방 조직을 조직 병리학 적 평가를 위해 성공적으로 제거, 가공, 절단 및 착색하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 생식 및 발달 테스트 지침 연구에서 유선 전체 마운트의 수집 및 평가를 촉진 할 수 있습니다.

병변 식별을위한 유선 절개 전체 장착

형광 -제자리 교 잡 (물고기) 종종 histopathology 및 맞춤 의학에서 치료의 선택에 대 한 분자 진단에 필요 합니다. 있도록 고품질 형태 론 적, 분자 그리고 물고기 분석 동일한 견본에서 포스트 고정 단계의 추가 의해 물고기를 제시 하기 전에 새로운 크로스 연결 비, 포 르 말린-무료 조직 정착 액.

H e r 2에 대 한 프로토콜 Cryo 보전 및 포 르 말린 고정의 장점을 결합 하 여 크로스 연결 비, 포 르 말린-무료 조직 정착 액을 사용 하 여 물고기

우리는 고정, 파라핀 포함, 및 미생물 식민지 biofilms 얇은 단면 기술을 설명 합니다. 준비 샘플, biofilm 구조 및 기자 식 패턴 현미경 검사 법에 의해 구상 될 수 있다.

파라핀 포함 및 현미경 분석에 대 한 미생물 식민지 Biofilms의 얇은 단면

우리는 생성, 재배 및 organotypic 조각 murine 폐 종양에서 파생 된의 체계적인 분석에 대 한 메서드를 제공 합니다. 우리는 또한 슬라이스 두께 대 한 최적화 하는 방법과 종양 조각 치료 약물 농도 선택 하는 방법을 설명 합니다.

설립 및 종양 조각의 분석 Explants 진단 테스트에 대 한 전제 조건으로

이 프로토콜은 포르말린-고정된 파라핀-포매된 조직 샘플의 퍼센트 종양 함량을 증가시키는 방법을 제시한다.

종양 거대 해부를 통한 종양 내용 향상

이 논문은 1-3분 이내에 95% 에탄올을 마우스 자궁에 주입하여 사망률이 매우 낮고 자궁 내 유착을 최소화하면서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막을 생산하기 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

학습하세요 파라핀 섹션 절단 및 부동 방법으로 생쥐와 zebrafish 조직의 형태학적 분석을 효율적으로 수행하는 기법입니다. 이 프로토콜은 섹션 손실을 줄이고 완전한 조직 단면 확보율을 높여 연구 시간을 단축합니다.

절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

더 많은 동영상 탐색