2018년 10월 13일
여기는 외상 후 스트레스 장애, 쥐 및 쥐에서의 전 임상 모델 스트레스 강화 된 공포 (SEFL) 학습 실험을 수행 하는 데 필요한 자세한 방법에 설명 합니다. 모델은 파블로프 두려움 컨디셔닝 및 설치류에서 향상 된 두려움의 색인 어의 측면을 활용 합니다.
이 방법은 PTSD의 근본적인 생물학 기계장치를 더 잘 이해하는 방법과 같은 행동 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 견고하고 신뢰할 수 있으며 정량적이며 여러 종에서 수행 될 수 있다는 것입니다. 컨텍스트 A 역할을 하는 공포 컨디셔닝 챔버 1세트를 설정하고, 두 번째 공포 컨디셔닝 챔버세트를 설정하여 컨텍스트 B.Place 외부 소음의 침입을 방지하기 위해 칸막이 에 있는 각 공포 컨디셔닝 챔버를 배치합니다.
그런 다음 각 공포 컨디셔닝 챔버에 그리드 바닥을 배치하여 각 컨텍스트에 대해 다른 그리드 패턴을 사용하여 컨텍스트 간에 바닥 텍스처를 구분합니다. 다음으로 컨텍스트 B에 검은색 플렉시글래스 삼각형 인서트를 배치하여 두 컨텍스트의 내부 레이아웃을 구분합니다. 챔버 벽과 문을 닦고 희석 된 청소 용액으로 그리드 바닥 아래에 팬을 스프레이하십시오.
그리드 플로어를 청소한 후 각 그리드 바닥에 1밀리암페어 또는 하한 진폭 충격을 전달할 수 있는 충격 발생기와 스크램블러를 연결하여 발 충격 전달을 위해 각 그리드 바닥에 충격을 전달합니다. 마지막으로, 멀티미터를 사용하여 각 프로브를 그리드 바닥의 다른 막대에 배치하여 충격 발생기에 의해 전달되는 전류를 테스트하고 원하는 충격 진폭이 생성되는 것을 확인합니다. 첫날에는 그리드 바닥과 가시광선이 있는 컨텍스트 A를 설정합니다.
원하는 충격 진폭을 확인하기 위해 멀티미터가 다른 막대에 부착되어 있는지 확인합니다. 비바리움에서 수레에 놓인 집 케이지의 실험실로 동물을 수송하고, 네 개의 공포 컨디셔닝 챔버에 개별적으로 배치합니다. 마우스 실험의 경우 충격 발생기와 스크램블러를 사용하여 외상 조절 대상을 포함하는 챔버의 그리드 바닥을 통해 무작위로 60 분 이상 제시 된 10 초, 1 밀리암페어 발 충격을 전달하십시오.
쥐 실험의 경우 충격 발생기와 스크램블러를 사용하여 외상 조절 대상을 포함하는 챔버의 그리드 바를 통해 90 분 이상 무작위로 제시 된 15 1 초, 1 밀리암페어 발 충격을 전달하십시오. 쥐에 대 한 90 분 후, 또는 60 마우스 실험에 대 한 분, 그들의 홈 케이지에 모든 동물을 반환 하 고 신속 하 게 vivarium에 반환. 둘째 날, 문맥 A를 설정하고 첫날과 같이 실험실로 동물을 수송한다.
동물을 충격 전달 없이 8분간 컨텍스트 A에 배치하고 전체 세션 동안 의 동작을 녹화합니다. 8분 후, 모든 동물을 집 새장에 돌려보내 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 셋째 날에는 컨텍스트 A와 검은색 삼각형 또는 흰색 곡선 플렉시글라스 인서트에 사용되는 것과 다른 격자 바닥 세트로 컨텍스트 B를 설정합니다.
필요한 경우 적외선 또는 근적외선을 사용하여 챔버를 조명하고 다중계로 충격 진폭을 확인하십시오. 챔버를 닦고 문맥 A.Next에서 사용되지 않는 솔루션으로 그리드 바닥 아래에 팬을 스프레이하고, 비바리움에서 검은 색 플라스틱 욕조의 실험실로 동물을 수송하고, 개별적으로 공포 컨디셔닝 챔버에 배치합니다. 180초 의 기준기 기간 후에, 쥐를 위한 1 개의 1 초, 1 밀리암트 발 충격, 또는 마우스를 위한 1 밀리amp 풋 충격, 모든 동물에게 전달합니다.
그런 다음 충격 전달 후 30 초 후에 모든 동물을 제거하고 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 절차의 4 일째에, 3 일째에 와 같이 컨텍스트 B를 설정합니다. 3일째와 동일한 수송의 실험실로 동물을 수송합니다.
충격 전달 없이 8분 동안 B 컨텍스트에 동물을 배치하고, 세션 내내 비디오 기록이 동결됩니다. 마지막으로, 8 분 후에 모든 동물을 제거하고 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 결과는 외상 조건에 있는 동물이 외상 상황에 공포의 취득을 나타내는 아무 외상 통제에 비해 문맥 A에 있는 동결의 상당히 높은 수준을 보여주었다는 것을 표시합니다.
외상과 외상 동물 모두 서로 다르지 않은 최소한의 동결 수준을 보였습니다. 또한, 외상 동물은 외상 통제가 없는 것에 비해 충격 반응성이 낮았으며, 외상 동물은 외상 조절에 비해 더 큰 동결을 보였으며, 이는 외상 스트레스에 노출되어 가벼운 스트레스자 직후에 두려움을 증가시켰음을 나타낸다. 이 절차에 따라, 높은 플러스 미로 같은 다른 방법, 오픈 필드, 그리고 밝은 어두운 상자 는 외상이 불안 과 같은 표현형에 미치는 영향과 같은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다.
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본 논문은 설치류의 외상 후 스트레스 장애(PTSD) 연구를 위한 전임상 모델인 스트레스 강화 공포 학습(SEFL) 실험의 방법론을 설명합니다. 이 접근법은 파블로프 공포 조건화(Pavlovian fear conditioning)를 통합하며, 정지 행동(freezing behavior)을 통해 공포 반응을 평가합니다.
스트레스 강화 공포 학습(SEFL)은 PTSD 표적 검증과 관련된 공포 조절 장애 메커니즘을 조사하기 위한 강력한 전임상 모델을 제공합니다. 이 모델은 트라우마로 유도된 공포 학습의 민감화를 정량적으로 평가할 수 있게 하여, 초기 발견 단계에서 메커니즘적 리스크 감소를 지원합니다. SEFL은 급성 스트레스 이후의 장기적 공포 과기억 현상을 재현함으로써, 질환 관련 시스템 내에서의 표적 결합 및 경로 조절 능력을 평가하는 데 도움을 줍니다.
SEFL은 표적 가설 검증부터 리드 최적화, 그리고 전임상 효능 평가에 이르는 발굴 연속체(discovery continuum) 내에 위치하며, 특히 공포 및 스트레스 반응을 조절하는 CNS 표적에 적용됩니다.