Name: 스트레스 강화 된 두려움 학습, 외상 후 스트레스 장애의 강력한 설치류 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: 학습하세요 외상 후 스트레스 장애 연구를 위한 스트레스 강화 두려움 학습 방법을 쥐와 래트에서 수행하는 법을. 이 기법은 견고하고 신뢰할 수 있으며 정량적 데이터를 제공합니다.

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이 작품에 의해 국립 연구소의 건강 R01AA026530 (MSF), 두뇌 및 행동 건강 (MSF), NRSA-F32 MH10721201A1 및 NARSAD 26612 (AKR), NSF DGE-1650604 (SG) Staglin 센터 투자 되었다.

1입니다. 과목
<ol><li>쥐<ol>
<li>주문 약 90 일 이전 및 단일 보관 표준 쥐 감 금 소에 있을 때 도착 하 쥐. 참고: 단일 하우징이 좋습니다 그룹 주택 생산 다양성 때문에 특히 스트레스 노출 다음 홈 장에 동물 간의 상호 작용으로. 남성 및 여성 쥐에, 긴 에반스와 Sprague Dawley 쥐, 및 쥐 19 일7,10어린 SEFL 증명 되었습니다.</li>
		<li>무작위로 두 개 이상 조건에 동물을 할당: 외상 (n = 8) 아무 외상 (n = 8) (참조 Rau 외. 5 추가적인 제어 조건에 대 한).</li>
	</ol>
</li>
	<li>마우스<ol>
<li>쥐 때 약 60 일 이전 및 단일 보관 표준 마우스 케이지 들은 도착 주문. 단일 집 실험 기간 내내 뿐만 아니라 외상 전에 적어도 4 주 동안 쥐.</li>
		<li>무작위로 두 개 이상 조건에 동물을 할당: 외상 (n = 8) 아무 외상 (n = 8).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 장비 설치
<ol><li>A 문맥과 두려움 컨디셔닝 챔버의 두 번째 집합 컨텍스트 B 역할을 역할을 한 세트 두려움 컨디셔닝 챔버의 설정 ( 자료 표참조). 외부 잡음의 침입을 방지 하기 위해 소리 약하게 칸막이 안에서 각 두려움 컨디셔닝 챔버를 배치 ( 자료 표참조).<ol>
<li>(예: 오버 헤드 백악관 빛) 가시광선으로 챔버를 조명 하는 방법 컨텍스트 ( 자료 표참조)를 제공 하는 챔버에 존재 있는지 확인 합니다.</li>
		<li>다른 솔루션은 각 동물 사이 챔버를 청소 하 고 각 챔버에 대 한 다른 냄새를 제공할 수 있도록 (예., 청소 솔루션 및 1% 초 산 희석). 참고: 중요 한 동물에서 생성 된 냄새 제거11수 이다.</li>
		<li>두 컨텍스트 내부 레이아웃을 차별화 하는 데 컨텍스트 b에서 플라스틱 삽입을 배치 합니다. 검은 유리 야 삼각형 삽입 것이 좋습니다. 또는 흰색 플라스틱 시트를 사용 하 여 곡선된 뒤 벽을 만들 ( 자료 표참조).</li>
		<li>컨디셔닝 챔버 footshock 배달, 컨텍스트 ( 자료 표참조) 사이 바닥 텍스처를 차별화 하는 데 각 컨텍스트에 대 한 다른 그리드 패턴을 사용 하 여 각 두려움에 표 층을 배치 합니다. 참고: 평면 격자 (모든 바 단일 평면에 배열)를 포함 하는 충분히 고유한 그리드 패턴 격자 (바 두 오프셋된 수평 평면에 배열), 정열 하 고 번갈아 격자 (바 단일 평면에만의 다양 한 배열 직경)입니다.</li>
		<li>배설물을 수집 하 각 표 층 아래 깨끗 한 금속 냄비를 놓습니다. 팬 청소 솔루션 향기 ( 자료 표참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>각 컨텍스트에 대 한 정확한 타이밍 및 footshock 납품의 진폭을 제공 합니다.<ol>
<li>충격 생성기 및 변환기 footshock 배달에 대 한 각 격자 층을 1 mA 또는 낮은 진폭 충격을 전달할 수 있는 연결 ( 자료 표참조). 참고: 충격 발전기와 기 챔버를 약하게 하는 소리에 구멍을 통해 표 층에 발전기 및 변환기 연결 케이블로 챔버, 약하게 하는 소리 이외에 거주 해야 합니다. 이 씹는, 솔루션, 기타 등등때문에 손상이 되지 것입니다.</li>
		<li>멀티 미터를 사용 하 여 표 층의 다른 바에 각 프로브를 배치 하 고 원하는 충격 진폭 ( 자료 표참조)을 생산 하는를 확인 하 여 충격 생성기에 의해 전달 되 고 현재 테스트.</li>
		<li>타이밍 및 충격 전달 (예: 컴퓨터 소프트웨어)의 진폭을 제어 하기 위한 방법 제공 ( 자료 테이블참조) 인지 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>비디오-녹음 각 동물 실험 각 세션에 대 한 방법 제공 ( 자료 테이블참조) 인지 확인 합니다. 참고: 그것은 모두 1) 때 약 실 보이는 빛에 의해 조명 되 고 2) 때 약 실 어두운 기록 하는 데 필요한 것입니다. 후자 중 나이트 비전 카메라를 사용 하 여 또는 계몽 및 적외선 또는 근 적외선 빛을 사용 하 여 어두운된 약 실 기록 수행할 수 있습니다.</li>
	<li>컨텍스트 b는 물고기에서 동물을 수송 하는 독특한 방법을 더 두 컨텍스트를 차별화 하는 데 사용할 수 있는지 확인 합니다. 참고: 검은 플라스틱 욕조 (38 x 30 x 24 cm) 같은 방법으로 분할 하는 동안 4 개의 구획 또는 깨끗 한 빈 새 장을 성공적으로 사용 되었습니다, 그리고 분명히 다른 홈 케이지 다른 전송 상자 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>3. SEFL 쥐와 쥐에 대 한 절차
<ol><li>부드럽게는 homecage에서 그들을 제거 하는 것을 누른 SEFL 절차를 시작 하기 전에 적어도 7 일 동안 60-90 초에 대 한 각 모든 설치류를 매일 처리 합니다.</li>
	<li>SEFL 절차의 주 1, 컨텍스트 A에서에서 주제 그들은 외상 성 스트레스를 받을 것 이다 장소.<ol>
<li>표 층의 1 세트를 가진 컨텍스트 A 설정 (예., 평면 격자) 가시광선으로 챔버를 조명 하는 고.</li>
		<li>멀티 미터를 사용 하 여 표 층의 다른 바에 각 프로브를 배치 하 고 원하는 충격 진폭 생산 확인 하 여 충격 생성기에 의해 전달 되 고 현재 테스트. 참고: 손상 또는 막대의 부식 약하거나 고르지 못한 충격 배달 될 수 있습니다. 벽을 따라 표 감동 소변 등 액체 수 있습니다 또한 저하 충격 전달.</li>
		<li>챔버 벽과 문을 닦 고 하나의 솔루션으로 표 층 아래 팬 스프레이 (예., 청소 해결책 희석). 참고: 이것은 이전 동물에서 냄새를 제거 하는 데 필요한입니다.</li>
		<li>자신의 집 새에 실험 룸에는 물고기에서 전송 동물 공포 컨디셔닝 챔버로 개별적으로 카트 및 장소에 배치합니다. 만 하나를 라운드의 (두려움 컨디셔닝 챔버의 수에 의해 결정) 하는 동물 실험을 한 번에. 참고: 피하기 위해 혼동 한다 때문에 순서 또는 타이밍, 각 라운드 외상 및 외상 조건 없는 동물을 포함 해야 합니다.</li>
		<li>쥐 실험을를 사용 하 여 충격 생성기 및 기 90 분 동안 무작위로 제시 15 1-s, 1 footshocks 제공 (ISI를 평균 6 분 =) 외상 조건 과목을 포함 하는 챔버의 그리드 바 통해. 충격 전달 없이 90 분 동안 아무 외상 컨트롤 같은 맥락을 노출 합니다.</li>
		<li>마우스 실험을를 사용 하 여 충격 생성기 및 기 무작위로 제시 60 분 이상 10 1-s, 1 footshocks 제공 (ISI를 평균 6 분 =) 외상 조건 과목을 포함 하는 챔버의 표 층을 통해. 충격 전달 없이 60 분 동안 아무 외상 컨트롤 같은 맥락을 노출 합니다.</li>
		<li>90 분 (쥐 실험) 또는 60 분 (마우스 실험), 후 그들의 homecages에 모든 동물을 반환 하 고 신속 하 게는 물고기를 반환 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>원하는 경우 SEFL 절차의 주 2, 외상 컨텍스트에 두려움을 평가 합니다.<ol>
<li>컨텍스트 A 주 1으로 설정 합니다.</li>
		<li>1 일에 자신의 집 새에 실험을 동물을 전송 합니다.</li>
		<li>장소 동물 충격 전달 및 비디오 없이 8 분에 대 한 컨텍스트 A에서에서 전체 세션 동안 동작을 기록합니다.</li>
		<li>8 분 후, 그들의 homecages에 모든 동물을 반환 하 고 신속 하 게는 물고기를 반환 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3 일 SEFL 절차에 노출 컨텍스트 b에서 가벼운 스트레스에 모든 과목 참고:이 절차 발생할 수 있습니다 어디서 나 24 시간에서9외상 성 스트레스 후 90 일.<ol>
<li>컨텍스트 A에서에서 사용 된 그들에서 그리드 바닥의 다른 세트와 함께 컨텍스트 B 설정 (예: 교체 또는 비틀 거리 며 표 층)과 삼각형 또는 흰색 검정 곡선 유리 야 삽입. 가시 광선;와 실 비 추지 마십시오 비록, 적외선 또는 근 적외선 빛은 필요한 만큼 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>멀티 미터를 사용 하 여 표 층의 다른 바에 각 프로브를 배치 하 고 원하는 충격 진폭 생산 확인 하 여 충격 생성기에 의해 전달 되 고 현재 테스트. 멀티 미터를 사용 하 여 표 층의 다른 바에 각 프로브를 배치 하 고 원하는 충격 진폭 생산 확인 하 여 충격 생성기에 의해 전달 되 고 현재 테스트. 참고: 손상 또는 막대의 부식 약하거나 고르지 못한 충격 배달 될 수 있습니다. 벽을 따라 표 감동 소변 등 액체 수 있습니다 또한 저하 충격 전달.</li>
		<li>약 실 아래 닦 고 A 컨텍스트에서 사용 되지 솔루션 그리드 바닥 아래 팬 스프레이 (예., 1% 아세트산).</li>
		<li>방법은 다른 방법에서 실험 방으로 물고기에서 전송 동물 컨텍스트는 (예를 들어, 검은 플라스틱 욕조) 사용 되 고 공포 컨디셔닝 챔버로 개별적으로 그들을 배치. 만 하나를 라운드의 가치 (두려움 컨디셔닝 챔버의 수에 의해 결정) 한 번에 실험 룸에 동물의.</li>
		<li>세션 동안 가벼운 스트레스 (아래 설명 참조)와 동결 영상 기록 및 활동에 모든 동물을 노출 합니다.<ol>
<li>180-s 초기 기간 후에 모든 동물을 단일 1-s, 1 footshock (쥐) 또는 단일 2-s, 1 footshock (마우스)을 제공 합니다. 참고: 확인을 180의 초기 기간 동안 동결 초과할 수 없는 512합니다.</li>
			<li>충격 전달 후 30 초 모든 동물을 제거 하 고 물고기를 신속 하 게 반환 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>SEFL 절차의 4 일에 공포는 가벼운 스트레스 상황을 테스트 합니다.<ol>
<li>3 일에 컨텍스트 B에 설정 합니다.</li>
		<li>3 일에 동일한 전송 실험 룸에는 물고기에서 동물 교통.</li>
		<li>충격 전달 및 비디오 기록 세션에 걸쳐 동결 없이 8 분에 대 한 컨텍스트 b에서 동물 장소.</li>
		<li>8 분 후에 모든 동물을 제거 하 고는 물고기를 즉시 반환 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 데이터 분석
<ol><li>사용 하 여 기록 된 실험 세션 동안 측정 두려움을 제외 하 고 모든 운동의 부족으로는 호흡에 필요한 정의 냉동. 참고: 동결 눈 먼 인간의 득점에 의해 가장 정확 하 게 득점 하지만 몇 가지 자동화 된 프로그램이 잘 수행 하는. 그러나, 모든 자동화 시스템 정확한13될 인간 관찰자를 보정 해야 합니다.<ol>
<li>손으로 고정 점수, 실험 조건에 눈 먼 한 실험 주제를 관심3의 기간에 걸쳐 4 초 마다 관찰. 각 관찰에서 "동결" 또는 "고정 되지"으로 주제를 분류 합니다. % 시간 동결을 결정 하는 관측의 총 수를 동결 관측값 수를 비교 합니다.</li>
		<li>동결 점수 자동된 비디오 분석을 사용 하려면 먼저 자동된 분석에서 실질적으로 다른 냉동 점수 정확 하지 않은 결과가 발생할 수 있습니다으로 자동된 비디오 분석 결과 손 점수에서 얻은 결과 일치 하는지 확인 합니다. 참고: 쥐 또는 적 충격 마우스 표시 한다 높은 값 가난한 캘리브레이션 장비를 제안 하는 동안 사이 0과 5% 동결</li>
	</ol>
</li>
	<li>관심 (아래 설명 참조)의 기간 동안 두려움을 측정 하기 위해 위에서 설명한 방법을 사용 합니다.<ol>
<li>% 시간 주 2 전체 8 분 테스트 세션에서 동결로 외상 컨텍스트에 두려움을 측정 합니다.</li>
		<li>% 시간 충격 배달 전에 3 일에 컨텍스트 b에서 3 분 기준 기간 동안 동결로 가벼운 스트레스 컨텍스트에 외상 컨텍스트에서 두려움의 일반화를 측정 합니다. 참고: SEFL에 대 한 그것은 상당한 일반화 하지 않다 그래야 충분히 컨텍스트를 차별화 하는 것이 중요입니다.</li>
		<li>공포 직후 충격 하루 3% 시간 충격 뒤에 30 s 동안 동결로 측정 합니다.</li>
		<li>전체 8 분 테스트 세션 4 일에 걸쳐 시간을 보낸된 비율으로 가벼운 스트레스 상황에 두려움을 측정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>금액, 또는 중 고 즉시 다음 3 일에 충격 3-s 기간 동안 운동의 속도 의해 충격 반응성을 측정 합니다. 참고: ANOVAs는 것이 좋습니다 모든 데이터 분석을 위해 추가 그룹으로 (예., 약물 치료) 필요에 따라 추가할 수 있습니다.</li>
</ol>

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</ol>

박사 Fanselow Neurovation 연구소의 창립 이사회 회원입니다.

SEFL 쥐 및 쥐에 지 수를 민감하게 공포 응답 PTSD의 특성을 연구 하는 데 사용할 수 있습니다 PTSD의 강력한 행동 모델 이다. 외상 후 스트레스, 다음 설치류 증가 공포 응답 분명히 다른 컨텍스트에서 이전 외상 경험의 알리미로 제공 하는 가벼운 스트레스와 결합 한 후에 표시. 외상 성 스트레스에 따라 설치류 당연히 두려움 주 2, 외상 성 스트레스는 그대로 그 메모리를 나타내는 (그림 1)에 외상 성 스트레스 상황에 반환의 높은 레벨을 표시 합니다. 그러나, 그들은 3 일 (그림 2)에 3 분 기준 기간 동안 최소한의 동결에 의해 표시 된 대로 새로운 컨텍스트를 외상 성 스트레스 상황에서 최소한의 공포 일반화를 보여줍니다. 이 소설이 컨텍스트에 모든 학습 향상 외상 컨텍스트에서 일반화 때문에 단순히 하지 임을 나타냅니다. 또한, 동물 외상 성 스트레스에 노출 증가 반응 그 학습 향상 단일 충격 때문으로 인식 되고...

두려움은 생존, 인식 하 고 위협에 대처 하는 개인 설정에 대 한 중요 한 동작입니다. 그러나, 과장 된 공포 응답 정신 장애 외상후 스트레스 장애 (PTSD) 등의 발전에 기여할 수 있다. PTSD의 1 개의 특징은 가벼운 스트레스, 특히 그의 원래 외상, 그리고 새로운 공포1,2를 개발 하는 경향이 연상에 대 한 과장 된 응답입니다. 실험실에서 두려움은 종종 인간과 설치류3,4에서 두려움의 안정적이 고 ethologically 유효한 인덱스는 동작 동결을 통해 측정 됩니다. PTSD의 공포와 향상 된 공포 식 dysregulation 포함 알려져 있다, 하는 동안 안정적으로 상대적으로 무해 한 자극에이 증강된 공포 응답을 캡처하는 PTSD의 강력한 동물 모델의 부족이 이다.
이 프로토콜 쥐 및 쥐에, PTSD의 안정적이 고 강력한 전 임상 모델 스트레스 강화 된 공포 (SEFL) 학습 실험을 수행 하는 데 필요한 구체적인된 방법론을 제공 합니다. SEFL은 파블로프 두려움 컨디셔닝, 아직 그것은 정상적인 두려움 컨디셔닝에서 명백한 응답을 생성 하 고 다음 외상 스트레스 PTSD 환자5,6에서 관찰 된 두려움을이의 측면을 활용 합니다. 이 모델에서 단일 높은 스트레스 경험 (외상으로 여기 라고) 지속적인 행동 변화를 리드, 자극의 극단적인 두려움을 포함 한 외상 이벤트와 연결 된, 불안, 놀라게 반응성을 증가 증가 변경 glucocorticoid 신호7,8. SEFL의 주요 특징은 뚜렷한 맥락에서 외상 성 스트레스 (있으면된 충격의 시리즈)에 다음 노출 동물 보여 가벼운 스트레스에 과장 된 공포 반응 (예., 단일 충격) 다른 문맥에서. 중요 한 것은, SEFL 효과 소설 컨텍스트 또는 증가 충격 감도5외상 컨텍스트에서 일반화 때문 아니다. 우리의 모델에서 우리는 의도적으로 개별 전송, 냄새 및 그리드 바닥 패턴 등 새로운 컨텍스트를 모든 일반화를 저해 하는 절차를 이용 한다. 따라서, 정상적인 두려움 컨디셔닝, 달리 SEFL 어울리지 않게 충격적인 경험와 직접 관련 된 환경 신호에 관련 된 새로운 공포 학습에 이르게 비연관 과정 이다. 광범위 한 작업 표시 쥐 (또는 쥐에서 10 예측할 수 없는 충격을 포함 하는 단일 60 분 세션)에서 15 예측할 수 없는 충격을 포함 하는 단일 90 분 세션 증가 불안 함께 두려움 컨디셔닝의 오랫동안 민감 화를 유도 하 고 dysregulation 기저 corticosterone의 circadian 리듬입니다. 반면, 단일 사전 노출 footshock 생성 하지 않습니다 SEFL9. 또한, SEFL 쥐 및 쥐에서 안정적으로 이용하실 수 있습니다.
따라서, PTSD의 SEFL 모델 PTSD 이상에 관련 된 생물 학적 메커니즘을 프로 빙을 위한 강력한 도구입니다. SEFL 사용 하 여, 연구원은 외상에 노출 미래의 두려움 학습에 영향을 미칠 수 어떻게 확인할 수 있습니다. 또한,이 모델 PTSD에 관측 된 향상 된 공포 식 조절에 관련 되어있을 수 있습니다 특정 세포 및 분자 메커니즘을 조사를 위해 유용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>로우 프로파일 바닥을 위한 공포 조절 챔버 Med</td><td>Associates Inc.</td><td>VFC-008-LP</td><td>공포 조절 챔버</td></tr><tr><td>소음 감쇠 큐비클</td><td>Med Associates Inc.</td><td>NIR-022SD</td><td>외부 소음의 침입을 방지하기 위한 소음 조절 칸막</td></tr><tr><td>이 NIR/백색광 제어 박스</td><td>Med Associates Inc.</td><td>백색 및 근적외선을 투사할 수 있는</td> <td>NIR-100VR</td> 조명 제어 상자</tr><tr><td>NIR VFC 라이트 박스</td><td>Med Associates Inc.</td><td>NIR-100L2</td><td>화이트 오버헤드 하우스라이트</td></tr><tr><td>윈덱스&nbsp; 오리지널 유리 세정제</td><td>Windex</td><td></td><td>동물 사이의 공포 조절 챔버 청소 및 냄새를 맡기 위한 솔루션</td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>동물 사이의 공포 조절 챔버 청소 및 냄새를 맡기 위한 솔루션</td></tr><tr><td>A-프레임 챔버 삽입</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-008-IRT</td> 컨텍스트 A 및 B 곡선 벽 인서트 Med Associates Inc.<td>의 내부 레이아웃을 구별하기 위한 검은색 플렉시글라스 삼각형 인서트</td></tr><tr><td></td><td></td><td>VFC-008-CWI</td><td>컨텍스트 A 및 B의 내부 레이아웃을 차별화하기 위한 흰색 플라스틱 시트</td></tr><tr>Mouse <td>Med Associates Inc</td><td>.용 1/8" 그리드 로드가 있는 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 플로어</td><td>VFC-005A</td><td>마우스용 플랫 그리드 바닥</td></tr><tr><td>1/8" 및 3/16" 그리드 로드가 번갈아 가며 있는 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 바닥 마우스</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005-S</td><td>마우스용 엇갈린 그리드 바닥</td></tr>, <tr>Mouse <td>Med Associates, Inc.</td><td>용 1/8" 엇갈린 그리드 로드가 있는 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 바닥</td>, Inc.<td>VFC-005A-L</td><td>마우스용 교대 그리드 바닥</td></tr>, <tr>Rat <td>Med Associates, Inc</td>.<td>용 3/16" 그리드 로드가 있는 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 플로어,</td> Inc.<td>VFC-005</td><td>쥐를 위한 플랫 그리드 바닥</td></tr><tr><td>3/16" 및 3/8" 그리드 로드가 번갈아 가며 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 바닥</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005-L</td><td>쥐용 교대 그리드 바닥,</td></tr><tr>Rat <td>Med Associates, Inc</td>.<td>용 3/16" 엇갈린 그리드 로드가 있는 로우 프로파일 컨텍스트 그리드 플로</td>어, Inc.<td>VFC-005-S</td><td>쥐를 위한 엇갈린 그리드 바닥</td></tr><tr><td>금속 팬</td><td>Med Associates Inc.</td><td></td><td>그리드 바닥 아래의 배설물을 잡기 위한 금속 팬</td></tr><tr><td>독립형 혐오 자극기/스크램블러</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-414S</td><td>발 충격 전달을 위한 충격 발생기 및 스크램블러</td></tr><tr><td>멀티미터</td><td>Fluke</td><td>87-5</td><td>발 진폭 측정을 위한 도구</td></tr><tr><td>VideoFreeze Software</td><td>Med Associates Inc.</td><td>SOF-843</td><td>충격 전달 제어를 위한 VideoFreeze 소프트웨어</td></tr>, <tr><td>고속 Firewire, 흑백 비디오 카메라</td>, <td>Med Associates, Inc.</td><td>VID-CAM-MONO-4</td><td>근적외선으로 녹화할 수 있는 비디오 카메라</td></tr></tbody></table>

스트레스 강화 된 두려움 학습, 외상 후 스트레스 장애의 강력한 설치류 모델

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

공포 행동 생존을 위해 중요 하지만 두려움의 어울리지 않게 높은 수준의 외상후 스트레스 장애 (PTSD) 등 정신 장애 개발에 대 한 취약점을 증가 시킬 수 있습니다. PTSD에 두려움 dysregulation의 생물 학적 메커니즘을 이해 하는 장애의 유효한 동물 모델에서 시작 하 중요 하다. 이 프로토콜 쥐 및 쥐에 PTSD의 전 임상 모델 스트레스 강화 된 공포 (SEFL) 학습 실험을 수행 하는 데 필요한 방법론을 설명 합니다. SEFL은 PTSD, 급성 스트레스에 의해 발생 하는 공포 학습의 장기 민감성 등의 중요 한 측면을 정리에 개발 되었다. 파블로프의 SEFL 사용 측면 컨디셔닝 두려워 하지만 고유 하 고 강력한 민감하게 공포 응답 정상 조건부 공포 응답 보다 훨씬 더 큰 생산. 외상 절차 포함 컨디셔닝 챔버에 쥐를 배치 하 고 관리 15 있으면된 충격을 무작위로 배포 하는 90 분 이상 (쥐 실험, 마우스 실험 10 있으면 충격 무작위로 배포 60 분 이상 사용) . 하루에 2, 설치류에에서 배치 됩니다 컨텍스트 컨디셔닝 소설 어디 그들이 받을 단일 충격; 다음, 하루에 3 주 2에서와 같은 맥락에서 다시 배치 되며 수준에 변화에 대 한 테스트 됩니다. 설치류 이전 외상 디스플레이 받은 첫 날에 더 충격을 받은 그에 비해 시험 당일에 동결의 수준을 향상. 따라서,이 모델 단일 높은 스트레스 경험 (외상) 외상 성 이벤트와 연결 된 자극의 극단적인 공포를 생성 합니다.

주 2 외상 컨텍스트 테스트의 결과 그림 1에 표시 됩니다. 외상 조건에 동물 A 아무 외상 컨트롤에 비해 외상 컨텍스트를 두려움의 인수를 나타내는 컨텍스트에서 동결의 상당히 높은 수준의 보여주었다 [쥐: F(1,17) = 23.58, p &lt; 0.01; 쥐: F(1,14) = 666.50, p &lt; 0.0001]입니다. 3 일에 새로운 맥락에서 단일 충격은 그림 2에 표시 하기 전에 초기 계획 기간 동안 동결. 외상 및 아무 외상 동물 보여 서로 다른 하지 않은 최소한의 동결 레벨 [쥐: F(1,17) = 3.14, p &gt; 0.05; 쥐: F(1,14) 1.70, p &gt; 0.05 =]. 이것은 컨텍스트 A와 B는 외상 동물 소설 컨텍스트에 외상 컨텍스트에서 일반화 하지 않았다 충분히...

여기는 외상 후 스트레스 장애, 쥐 및 쥐에서의 전 임상 모델 스트레스 강화 된 공포 (SEFL) 학습 실험을 수행 하는 데 필요한 자세한 방법에 설명 합니다. 모델은 파블로프 두려움 컨디셔닝 및 설치류에서 향상 된 두려움의 색인 어의 측면을 활용 합니다.

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

이 방법은 PTSD의 근본적인 생물학 기계장치를 더 잘 이해하는 방법과 같은 행동 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 견고하고 신뢰할 수 있으며 정량적이며 여러 종에서 수행 될 수 있다는 것입니다. 컨텍스트 A 역할을 하는 공포 컨디셔닝 챔버 1세트를 설정하고, 두 번째 공포 컨디셔닝 챔버세트를 설정하여 컨텍스트 B.Place 외부 소음의 침입을 방지하기 위해 칸막이 에 있는 각 공포 컨디셔닝 챔버를 배치합니다.그런 다음 각 공포 컨디셔닝 챔버에 그리드 바닥을 배치하여 각 컨텍스트에 대해 다른 그리드 패턴을 사용하여 컨텍스트 간에 바닥 텍스처를 구분합니다. 다음으로 컨텍스트 B에 검은색 플렉시글래스 삼각형 인서트를 배치하여 두 컨텍스트의 내부 레이아웃을 구분합니다. 챔버 벽과 문을 닦고 희석 된 청소 용액으로 그리드 바닥 아래에 팬을 스프레이하십시오.그리드 플로어를 청소한 후 각 그리드 바닥에 1밀리암페어 또는 하한 진폭 충격을 전달할 수 있는 충격 발생기와 스크램블러를 연결하여 발 충격 전달을 위해 각 그리드 바닥에 충격을 전달합니다. 마지막으로, 멀티미터를 사용하여 각 프로브를 그리드 바닥의 다른 막대에 배치하여 충격 발생기에 의해 전달되는 전류를 테스트하고 원하는 충격 진폭이 생성되는 것을 확인합니다. 첫날에는 그리드 바닥과 가시광선이 있는 컨텍스트 A를 설정합니다.원하는 충격 진폭을 확인하기 위해 멀티미터가 다른 막대에 부착되어 있는지 확인합니다. 비바리움에서 수레에 놓인 집 케이지의 실험실로 동물을 수송하고, 네 개의 공포 컨디셔닝 챔버에 개별적으로 배치합니다. 마우스 실험의 경우 충격 발생기와 스크램블러를 사용하여 외상 조절 대상을 포함하는 챔버의 그리드 바닥을 통해 무작위로 60 분 이상 제시 된 10 초, 1 밀리암페어 발 충격을 전달하십시오.쥐 실험의 경우 충격 발생기와 스크램블러를 사용하여 외상 조절 대상을 포함하는 챔버의 그리드 바를 통해 90 분 이상 무작위로 제시 된 15 1 초, 1 밀리암페어 발 충격을 전달하십시오. 쥐에 대 한 90 분 후, 또는 60 마우스 실험에 대 한 분, 그들의 홈 케이지에 모든 동물을 반환 하 고 신속 하 게 vivarium에 반환. 둘째 날, 문맥 A를 설정하고 첫날과 같이 실험실로 동물을 수송한다.동물을 충격 전달 없이 8분간 컨텍스트 A에 배치하고 전체 세션 동안 의 동작을 녹화합니다. 8분 후, 모든 동물을 집 새장에 돌려보내 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 셋째 날에는 컨텍스트 A와 검은색 삼각형 또는 흰색 곡선 플렉시글라스 인서트에 사용되는 것과 다른 격자 바닥 세트로 컨텍스트 B를 설정합니다.필요한 경우 적외선 또는 근적외선을 사용하여 챔버를 조명하고 다중계로 충격 진폭을 확인하십시오. 챔버를 닦고 문맥 A.Next에서 사용되지 않는 솔루션으로 그리드 바닥 아래에 팬을 스프레이하고, 비바리움에서 검은 색 플라스틱 욕조의 실험실로 동물을 수송하고, 개별적으로 공포 컨디셔닝 챔버에 배치합니다. 180초 의 기준기 기간 후에, 쥐를 위한 1 개의 1 초, 1 밀리암트 발 충격, 또는 마우스를 위한 1 밀리amp 풋 충격, 모든 동물에게 전달합니다.그런 다음 충격 전달 후 30 초 후에 모든 동물을 제거하고 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 절차의 4 일째에, 3 일째에 와 같이 컨텍스트 B를 설정합니다. 3일째와 동일한 수송의 실험실로 동물을 수송합니다.충격 전달 없이 8분 동안 B 컨텍스트에 동물을 배치하고, 세션 내내 비디오 기록이 동결됩니다. 마지막으로, 8 분 후에 모든 동물을 제거하고 즉시 비바리움으로 돌아갑니다. 결과는 외상 조건에 있는 동물이 외상 상황에 공포의 취득을 나타내는 아무 외상 통제에 비해 문맥 A에 있는 동결의 상당히 높은 수준을 보여주었다는 것을 표시합니다.외상과 외상 동물 모두 서로 다르지 않은 최소한의 동결 수준을 보였습니다. 또한, 외상 동물은 외상 통제가 없는 것에 비해 충격 반응성이 낮았으며, 외상 동물은 외상 조절에 비해 더 큰 동결을 보였으며, 이는 외상 스트레스에 노출되어 가벼운 스트레스자 직후에 두려움을 증가시켰음을 나타낸다. 이 절차에 따라, 높은 플러스 미로 같은 다른 방법, 오픈 필드, 그리고 밝은 어두운 상자 는 외상이 불안 과 같은 표현형에 미치는 영향과 같은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다.

stress-enhanced-fear-learning-robust-rodent-model-post-traumatic

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

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