Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Esam S.B. Salem; Kazutoshi Murakami; Toshimasa Takahashi; Elise Bernhard; Vishnupriya Borra; Mridula Bethi; Takahisa Nakamura

doi:10.3791/58323

비 방사성 L-azidohomoalanine 라벨 방법에 의해 초기 단백질 합성 분석에 대 한 기본 마우스 Hepatocyt...

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Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

비 방사성 L-azidohomoalanine 라벨 방법에 의해 초기 단백질 합성 분석에 대 한 기본 마우스 Hepatocytes의 절연

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08:04 min

October 23, 2018

DOI: 10.3791/58323-v

Esam S.B. Salem*^1,2, Kazutoshi Murakami*², Toshimasa Takahashi², Elise Bernhard², Vishnupriya Borra², Mridula Bethi², Takahisa Nakamura^2,3,4

¹Department of Pharmacology and Systems Physiology, College of Medicine,University of Cincinnati, ²Division of Endocrinology,Cincinnati Children's Hospital Medical Center, ³Division of Developmental Biology,Cincinnati Children's Hospital Medical Center, ⁴Department of Pediatrics, College of Medicine,University of Cincinnati

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기, 우리는 건강 하 고 기능적인 기본 마우스 hepatocytes의 격리에 대 한 프로토콜을 제시. 비 방사성 라벨 기판 간 초기 단백질 합성을 탐지 하기 위한 지침에에서 에너지 대사 항상성의 맥락에서 단백질 합성을 기본 메커니즘을 이해할 수 있도록 제공 되었다.

이 방법은 비만, 무알코올 지방 간 및 타입-2 당뇨병에 있는 간 에너지 및 단백질 생합성의 분자 변경에 관하여 각종 신진 대사 질병 연구 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 기능성 1 차 마우스 간세포및 검출 간 초기 단백질의 분리를 비방사성 라벨기판을 통해 용이하게 한다는 것입니다. 이 방법의 시각적 데모는 크고 얇은 마우스 혈관 때문에 관류 단계가 배우기 어렵기 때문에 중요합니다.

간 관류의 경우, 오른쪽 신장 정맥으로 분기시 열등한 베나 카바 또는 IVC에 24 게이지 카테터를 조심스럽게 삽입하십시오. IVC 내의 캐뉼라 위치를 유지하는 카테터 바늘을 제거하고 커넥터를 사용하여 24 게이지 캐뉼라를 관류 튜브와 연결합니다. 4 밀리 리터 영구 유량에서 마이너스 따뜻한 HBSS와 간 을 perfusing 시작 신속 하 게 내부 혈액을 배출 하는 비장 정맥을 절단.

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