이방성 고분자 인공 항 원 제시 세포 CD8 + T 세포 활성화의 제조

이 방법은 아미노 엔지니어링 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이러한, 생물 물질 면역 세포 상호 작용 및 활성화에 입자 물리적 특성의 역할은 무엇입니까. 이 기술의 주요 장점은 생체 모방 입자의 크기와 모양의 독립적 인 제어를 가능하게한다는 것입니다.

이 기술의 의미는 생체 내 세포 중재 면역 반응을 일으킬 수있는 선반 입자 치료이기 때문에 암 의 치료로 확장됩니다. 이 방법은 암 아미노 치료에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만, 그것은 또한 다른 시스템에 적용 할 수 있습니다. 감염증 이나 타입-1 당뇨병과 같은.

마이크로 입자 합성의 경우, 100 밀리그램의 폴리(젖산 공동 글리콜산) 또는 PLGA를 계량하여 신자극 유리병으로 계량하고 과류를 통해 5밀리리터의 디클로로메탄을 용해시킵니다. 균질화제는 1% 폴리비닐 알코올 또는 PVA 용액의 50 밀리리터를 포함하는 비커에 균질화제를 배치하여 균질화제는 그것을 건드리지 않고 가능한 한 비커의 바닥에 가깝습니다. 균질화기를 적절한 속도로 켜고 PLGA 솔루션을 비커에 1분간 균질화하십시오.

균질화의 끝에서, 폴리 비닐 알코올 PLGA 마이크로 입자 용액을 화학 후드의 교반 판에 5% PVA 용액 의 100 밀리리터를 포함하는 비커에 부어 적어도 4 시간 동안 용액을 저어. 용매가 증발하면 입자 용액을 50 밀리리터 원원튜브에 붓고 원심분리에 의해 입자를 수집합니다. 각 튜브의 상체를 이온화 된 물의 20 밀리리터로 교체하고 소용돌이에 의해 입자를 다시 중단하십시오.

그런 다음 각 튜브의 최종 부피를 신선한 이온화 물로 최대 50 밀리리터까지 가져와서 방금 설명한 대로 입자를 두 번 더 씻습니다. 나노 입자 합성의 경우, 디클로로메탄의 5 밀리리터에 PLGA의 200 밀리그램을 용해하고 비커의 바닥을 만지지 않고 얼음에 1 %의 PVA 용액의 50 밀리리터를 포함하는 비커에 초음파 프로브를 배치합니다. 12와트로 초음파 처리를 시작하고 즉시 약 200 나노미터 직경의 나노 입자를 생성하기 위해 2 분 초음파 처리에 대한 비커에 PLGA 솔루션을 추가합니다.

초음파 처리 후, 화학 연기 후드에서 용매 증발의 4 시간 동안 교반 플레이트에 5 PVA 용액의 100 밀리리터를 포함하는 비커에 1 % 폴리 비닐 알코올 PLGA 나노 입자 용액을 부어. 모든 용매가 증발되면 입자 용액을 50밀리리터 원심 튜브에 부어 원심분리를 통해 미세입자를 제거하고 초월제를 제거합니다. 그런 다음 나노 입자를 고속 원심분리기 튜브로 이송하여 이온화 된 물에 세 개의 세 가지 를 입증하였다.

폴리머 입자 제조의 경우, 마지막 세척 후, 입자를 신선한 이온화 물의 약 1 밀리리터로 다시 중단하고 밀리리터 입자당 2.5 밀리그램의 최종 농도로 입자에 필름 주조 용액을 추가합니다. 입자 현탁액을 10 밀리리터 알리쿼트에 넣고 75x 50mm 직사각형 페트리 접시로 옮기면 1차원 스트레칭을 합니다. 또는 15 밀리리터 알리쿼트에서 100- 100 밀리미터 평방 페트리 요리로 2차원 스트레칭.

화학 후드에서 하룻밤 건조 후, 필름을 제거하고 가위로 가장자리를 손질 하는 핀셋을 사용 하 여. 1D 스트레칭의 경우, 자동화 된 박막 스트레칭 장치의 한 축의 알루미늄 블록에 장착하기 위해 네오프렌 고무의 두 조각 사이에 하나의 필름의 두 개의 짧은 가장자리를 배치합니다. 그런 다음 알렌 렌치를 사용하여 고무 위에 금속 그립을 나사로 고정하여 필름을 제자리에 고정시하십시오.

2D 스트레칭의 경우 4개의 알루미늄 블록에 네 개의 가장자리를 모두 장착하여 두 축에 필름을 스트레칭하고 한 축의 알루미늄 블록 사이에 필름 길이를 기록하여 1D 스트레칭또는 2D 스트레칭을 위한 두 축을 모두 기록하고 원하는 접이식 스트레치에 따라 필름을 하나 또는 두 방향으로 스트레칭하는 데 필요한 거리를 계산합니다. 그런 다음 필름로드 스트레칭 장치를 소량의 물 위에 90도의 오븐에 놓아 필름을 10 분 이상 온도로 가져 갑니다. 스트레칭이 완료되면 필름을 실온으로 20분 간 식힙니다.

1D 스트레칭의 경우 가장자리의 스트레칭 장치에서 필름을 잘라냅니다. 2D 스트레칭의 경우 두 축에 균일하게 뻗어있는 필름의 중앙 사각형을 잘라 내어 저장합니다. 튜브당 2개 이하의 필름이 없는 50밀리리터 원모형 튜브에 필름을 넣고, 소용돌이를 위해 각 튜브에 약 25밀리리터의 이온화 물을 추가합니다.

필름이 용해되면, 입증 된 바와 같이 분해 된 물에 입자를 세 번 세척합니다. 마지막 세척 후 튜브 당 신선한 이온화 물의 약 1 밀리리터에서 입자를 다시 중단합니다. 그런 다음 입자를 영하 80도에서 1시간 또는 하룻밤 동안 동결합니다.

다음 날 아침, 류필립이 준비된 MES 버퍼에서 밀리리터당 20밀리그램의 소닉 또는 나노 입자를 다시 중단합니다. 900 마이크로리터의 MES 버퍼를 포함하는 폴리프로필렌 마이크로 원심분리기 튜브에 100마이크로리터의 입자 용액을 추가하고 새로 준비된 EDC NHS 솔루션 100마이크로리터를 추가합니다. 입자를 소용돌이로 섞고 실온에서 인버터의 입자를 30분 동안 배양합니다.

인큐베이션의 끝에서, 원심분리에 의해 입자를 수집하고 2~3와트에서 5초 간 초음파 처리로 PBS의 1밀리리터에서 나노 입자를 소용돌이 또는 다시 중단시킴으로써 PBS의 1밀리리터에서 마이크로 입자 펠릿을 다시 중단한다. 다음으로, 적당한 신호 1단백질과 10마이크로그램의 항체를 마이크로 입자에 추가하거나, 16마이크로그램의 알디알1 단백질과 20 마이크로그램의 항체 CD28을 나노 입자에 첨가한다. PBS로 각 튜브의 최종 부피를 1.1 밀리리터로 가져와 서인버터에서 하룻밤 사이에 입자를 섭씨 4도에서 배양합니다.

다음 날, 입증 된 바와 같이, 이온화 된 물에 입자를 세 번 세척. 이러한 PLGA 나노 및 마이크로 입자는 전송 및 스캐닝 전자 현미경을 사용하여 입증및 이미지화된 단일 에멀젼 기술을 사용하여 합성되었다. 균질화 후, 마이크로 입자는 약 3 마이크로미터의 평균 직경을 보였다.

구형 미세 입자는 약 1개의 양상 배급을 가졌고, 1D 뻗어있는 상골 탄성 입자는 약 3 반의 더 큰 종횡비를 가지었고 2D 뻗어 있는 타원 입자는 약 1.2의 종횡비를 가지며, 대략 1의 종횡비를 유지했다. 컨쥬게이션 효율 결과는 구형 및 타원 마이크로 인공 항원 제시 세포, 또는 AAPC 및 나노 AAPC의 표면에 유사한 양의 단백질을 드러내며, AAPC 합성 시 단백질 커플링이 농도 의존방식으로 발생한다는 것을 입증한다. Prolate 타원 AAPC는 01 밀리그램 용량에서 달성 된 최고의 분리와 구형 AAPC보다 하위 포화 용량에서 T 세포 증식의 높은 수준을 유도하는 것으로 나타났다.

7 일 후, T 세포의 수동 계산은 탈장 AAPC가 용량 의존방식으로 마이크로 및 나노 척도에서 구형 대응에 비해 T 세포를 보다 효과적으로 자극한다는 것을 밝혔다. 이 절차에 따라, AAPC는 그들의 치료 효능 및 약동학을 측정 하기 위해 생체 내에서 관리 될 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 면역 공학 분야의 연구원들이 AAPC 효능에 대한 이색성 부호의 효과를 탐구하는 데 도움이되었습니다.