Name: Pubertal 발병을 확인 하 고 쥐 및 쥐에 다 산 분석 결과 수행 하 여 생식 능력의 결정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: 학습하세요 생식 생물학 연구를 위한 비침습적 사춘기 발병 평가 방법을 쥐와 래트에 적용하는 기술입니다. 이 방법은 유전적 변이가 생식 능력에 미치는 영향을 연구하는 데 필수적입니다.

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이 게시의 기초는 초기 작업에 기여 하는 저자를 감사 합니다. Aitor 아구, 제네 비 브 중 라이언과 에리카 L. Schoeller 원고를 준비 하는 도움 원고와 기술 지원에 대 한 제시카 소라 리와 오스틴 턱에 감사. H.M.H. 유 니스 케네디 슈 라이버 국립 연구소의 아동 건강 및 보너스 번호 R00HD084759에서 건강의 국가 학회의 인간 발달에 의해 지원 되었다.

여기에 설명 된 모든 메서드를 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 미시간 주립 대학에 의해 승인 하 고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에 따라 실시 되었습니다.
1. 확인할 Pubertal 발병
<ol><li>의류, 최소한 기관 지침에 따라, 그것은 깨끗 한 실험실 외 투 및 깨끗 한 장갑을 착용 하는 데 필요한. 항상 깨끗 한 장갑을 착용 하는 마우스를 처리 합니다.</li>
	<li>테이블에 패드를 배치 하 여 작업 영역을 준비 합니다.<ol>
<li>패드를 위쪽으로 향하게 하는 그리드와 깨끗 한 마우스 케이지 상단을 놓습니다.</li>
		<li>작업 영역에서 규모를 설정 합니다. 규모와 자체에 깨끗 한 500-1000 mL 비 커를 배치 합니다.</li>
		<li>기록의 몸 무게와 preputial 분리, 질 또는 첫 번째 발 정기 작업 영역 옆에 있는 시트를 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>연구에 대 한 마우스를 식별 합니다. 사춘기에 도달할 때까지 pubertal 발병에 대 한 일상적인 검사를 수행 합니다. 연구를 통해 하루 중 같은 시간에 검사를 수행 합니다. 그러나 Pubertal 발병 빠르면 생 후 11-12 일19, 발생할 수 있습니다, 가장 실험적인 셋업에서 pubertal 발병 모니터링 시작 ~ 22 일.</li>
	<li>작업 영역 (단계 1.2)에 마우스 케이지를 놓습니다. 새 장을 열고 테이블에 뚜껑, 물병, 음식 홀더를 배치 합니다.</li>
	<li>남성 쥐에서 preputial 분리 결정.<ol>
<li>마우스 꼬리를 잡고 있는 동안 단계의 1.2.1 깨끗 한 마우스 케이지 위에 놓습니다. 부드럽게 꼬리에 잡고, 마우스 ~ 5에 대 한 감 금 소의 그리드를 탐험 하자 s.</li>
		<li>살짝 꼬리를 뒤로; 당겨 일반적으로 그것의 앞 다리와 눈금 들고 앞으로 이동 하는 동물 발생 합니다. 피부에 접근 다른 손으로 목과 귀를 닫습니다.</li>
		<li>어깨와 목 엄지와 집게손가락 사이 느슨한 피부를 파악. 그것은 피부, 좋은 잡아 중요 하다 마우스 무의 머리 주위를 선회에서 되지 것입니다.</li>
		<li>나머지 손가락으로 뒤에 피부를 잡아을 눌러 손에 대 한. 호흡, 혈액 흐름, 또는 손상 뼈, 근육 또는 피부를 방해 하지 않고 단단히 잡으십시오. 손의 손바닥 안에서 마우스의 뒷면을 지 원하는 하는 동안 마우스의 배꼽 노출 손을 설정 합니다.</li>
		<li>자유 손으로 가볍게 눌러 다시 음 경 주위 피부를 강요 하지 않고. Preputial 분리에서 preputial 피부 슬라이드 뒤로 노출 귀 두 남 근 (그림 2A, 화살표 preputial 분리를 보여주는). Preputial 분리의 유무를 기록 합니다.</li>
		<li>부드럽게 단계 1.2.2에서에서 500-1000 mL 비 커에 그것을 배치 하 여 마우스 무게 고 무게를 기록 합니다.</li>
		<li>케이지 바닥에 비 커 0-2 cm를 개최 하 여 주택 장에 마우스를 다시 하 고 천천히 마우스를 허용 하는 비 커를 자체적으로 종료 팁. 물과 순 한 세제로 비 커를 깨끗 하 고 규모에 그것을 반환 하 고 규모를 taring 하기 전에 그것을 건조.</li>
	</ol>
</li>
	<li>여성 쥐에 질 구는 결정.<ol>
<li>작업 영역 (단계 1.2)에 목화 공, 비 커와 메 마른 물 한 병을 놓습니다. 비 커에 물을 붓으십시오. 메 마른 물으로 목화 공을 축이다를 단계 1.2.1에서에서 케이지 상단 옆 넣습니다.</li>
		<li>마우스 케이지를 작업 영역 (단계 1.2)에 놓고 꼬리의 기지에서 개최 하 여 케이지 상단 (1.2.1 단계)에 자사의 홈 장에서 마우스를 전송 합니다. 부드럽게 마우스의 앞으로 움직임을 장려 하기 위해 꼬리를 뒤로 잡아 당기십시오.</li>
		<li>무료 손가락으로 엉덩이 지원 하면서 꼬리를 들어올립니다. 케이지의 상단와 접촉을 유지 하기 위해 hindlimbs를 허용 한다. 마우스를 너무 많이 이동, 단계 1.5.1-1.5.4에 설명 된 대로 손에 잡으십시오.</li>
		<li>부드럽게 단계 1.6.1에서에서 물 습도 목화 공을 외 음부를 청소. 각 마우스에 대 한 깨끗 한 습도 면봉을 사용 합니다. 결정 질, 외 음부 검사 및 질은 완전히 오픈 여부 확인 (그림 2A, 여성 질 개통).</li>
		<li>질 발생 한 경우 기록 합니다. 마우스 무게 고 단계 1.5.6-1.5.7에 설명 된 대로 홈 케이지를 반환 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>첫 번째 발 정기 첫 배 란의 지표로<ol>
<li>작업 영역 (단계 1.2)에 살 균 물, 레이블이 지정 된 유리 슬라이드와 깨끗 한 팁 200 µ L 피펫으로 비 커를 배치 합니다.</li>
		<li>1.6.2-1.6.3 단계에에서 설명 된 대로 여성을 잡아. 질에 살 균 물 ~ 50 µ L을 포함 하는 피 펫의 끝을 놓습니다.</li>
		<li>부드럽게 소개 하 고 reabsorbing ~ 50 µ L의 물 2-4 회 하 여 질 벽에서 세포를 플러시. 레이블이 지정 된 유리 현미경 슬라이드에 피 펫 팁에서 콘텐츠 얼룩.</li>
		<li>똑똑히 관찰 하는 10 배 또는 20 X 목표를 사용 하 여 명시 야 현미경에 세포 형태학 또는 얼룩 airdry ~ 1 h 시키고 다음 0.1% 메 틸 렌 블루 솔루션 (ddH2O에에서 용 해)와 counterstain (그림 2B). Counterstain를 위한 0.1% 메 틸 렌 블루 솔루션으로 말린된 슬라이드 찍어 ~ 30 s. 슬라이드 어 1 h 동안 건조 하자.</li>
		<li>10 X 20 X에서 밝은 분야 현미경에 1.7.4 단계에서 슬라이드를 확인 합니다. Estrous 주기 (그림 2B)의 4 가지 단계를 구분할 수 있는 세포 형태를 관찰 하 여 estrous 주기 (그림 2B)20 의 단계를 설정 합니다. 참고: Metestrus 백혈구와 nucleated 상피 세포, 그리고 cornified 상피 세포 (그림 2B)에 의해 발 정기의 혼합물에 의해 cornified 편평 상피 세포와 백혈구, 백혈구에 의해 diestrus, proestrus의 혼합물에 의해 특징입니다. 20.</li>
		<li>몸 무게를 기록 하 고 단계 1.5.6-1.5.7에 설명 된 대로 그것의 가정 케이지를 마우스를 반환 합니다. 얼룩 질 날 때 마우스는 그것의 첫 번째 발 정기 (그림 2B)에 종료 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 바람직한 사육 실 조건
<ol><li>사육 실 ~ 20-24의 온도 ° C, 습도 55 ± 10%, 그리고 균질 성 방 ~ 300-400의 강도의 빛 럭21바닥 위에서 약 1 m. 이 빛의 강도를 25-80 럭 스의 바람직한 중간 케이지 광도를 수 있습니다. 빛의 강도 테스트 하려면 빛 미터를 사용 합니다.</li>
	<li>실험을 통해 조명의 적절 한 타이밍을 위해 사육 방에 조명을 제어 하는 자동된 시스템을 사용 합니다. 빛과 10 h 어둠 (LD14:10)2114 h "여름 같은" 조건에 12 h 하루 (12 h 빛과 12 h 어둠, LD12:12)에서 설치류 범위에서 다 산을 평가 하기 위해 최적의 날 길이 조건.</li>
	<li>사육 케이지를 준비 합니다.<ol>
<li>뚜껑, 물, 음식, 침구 및 번 식 쌍 당 중첩 깨끗 한 마우스 케이지를 준비 합니다.</li>
		<li>섹스를 포함 하 여 모든 필요한 정보를 케이지 카드 작성의 출생, 마우스, 긴장과 때 짝짓기 설정 날짜 날짜.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 불 임 연구
<ol><li>불 임 연구에 사용 될 동물을 식별 합니다. 동물 성적 성숙 (1 단계) 인지 확인 합니다. 마우스에 있는 불 임 연구를 설정 하려면 일반적으로 사용 되 나이 범위는 연령, 어디 성적 성숙 완료 된 가장 실험 조건에 나이 10-16 주.</li>
	<li>깨끗 한 테이블에서 단계 2.3에서 준비 사육 케이지를 놓습니다.</li>
	<li>캐치 마우스를 누르고 있습니다.<ol>
<li>천천히 마우스 케이지에 gloved 손을 소개 합니다. 마우스의 장갑과 손 냄새에 적응을 허용 (~ 5-30 s), 시간의 짧은 기간에 대 한 감 금 소에 손을 두십시오. 바쁜와 육 포의 움직임을 피하십시오.</li>
		<li>감 금 소의 바닥에 가까운 cupped 손에 낮은 고 천천히 쥐에 접근. 그들은 도망 됩니다. 그들은 손을 통해 실행, 엄지와 검지 손가락 사이 한 마우스의 꼬리를 함정.</li>
		<li>2-3에 대 한 꼬리에 의해 마우스를 들어올립니다. 마우스를 더 이상 개최 하는 경우 꼬리를 지키고 고 꼬리에 보류를 유지 cupped 손에 마우스를 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1 남자 및 그 후 여성 1 번 식으로 꼬리 (단계 3.3)으로 유지 함으로써 전송. 다 산 분석 결과를 설정할 때 암컷 같은 estrous 단계 인지 확인 합니다. 1.7 단계에에서 설명 된 대로 질 세 포진 검사를 수행 하 여 여성의 estrous 단계를 결정 합니다.</li>
	<li>케이지, 닫고 쥐 음식, 물, 중첩 물자를 갖도록 합니다. 케이지 카드 케이지 케이지 카드 홀더를 연결 합니다.</li>
	<li>주택 선반에 사육 케이지를 놓습니다. 다 산 연구의 전체 기간 동안 사육 케이지를 최대한 그대로 두고. 30 일 동안 불 임 연구를 실시 합니다. 각 breeding 쌍에 대 한 자세한 기록을 유지 하 고 1) 짝짓기를 설정 날짜, 2) 새끼 태어난 날짜 및 3) 새끼, 죽은 및 라이브 새끼를 포함 하 여 수 합니다. 연구를 통해 매일 쓰레기 검사를 수행 합니다.</li>
	<li>다 산 연장 30-60 일 더 없는 경우 또는 다 산에 약한 영향에 대 한 연구 단계 3.6에서 설정 됩니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 상관이 있다.

쥐의 전반적인 복지21성공적인 불 임 분석 결과 대 한 중요 하다. 다 산 분석 결과 수행할 때 육체적으로 확인 하는 쥐에 매일이 스트레스를 일으킬 수로 중요 하다. 이들은 스트레스도 더 자주 케이지 변경을 하지 마십시오. 이상적으로 케이지 변화는 주당 1-2 회 더 이상 해질 것 이다. 어두운 단계 빛 노출 야행성 설치류에 번 식에 부정적인 영향을 미칩니다. 어두운 시간 동안 사육 방에 조명을 설정 하지 않습니다. 방에 항목 어두운 시간 동안 필요한 경우에, 희미 한 붉은 빛 조명을 사용 합니다. 또 다른 스트레스의 과도 한 냄새, 진동 또는 소음 연구의 일부 또는 전체에 대 한 물고기에 존재입니다. 스트레스를 완화 하 고 마우스 복지와 번 식을 개선 하기 위해, 소재 또는 다른 유형의 농축 중첩 마우스를 제공 합니다. 둥지 건물 마우스에서 중요 한 문제 이며 번 식 성공 증가. 둥지도 쥐를 숨기고 재생 장소를 수 있습니다. 잘 건강 하 고 잘 길 러 진 동물 품종, 따라서 그것은 높...

사춘기를 통해 전환 성적 성숙 및 생식 능력을 달성 하기 위해 필요 합니다. Pubertal 전환 및 성인에서 비 옥의 정비 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 (그림 1) 불리는 생식 축에 의해 통제 된다. Pubertal 개시의 타이밍 및 비 옥의 정비 단단히 자손과 부모1,2의 생존의 기회를 높이기 위해 내부 뿐만 아니라 환경 요인에 의해 통제 된다. 이 프로토콜에는 생쥐와 쥐 생식 능력을 평가 하는 불 임 연구를 설정 하기 전에 성적 성숙 확인 pubertal 발병을 확인 하는 비-침략 적 접근 방식을 제공 합니다.
불 임 연구는 성적으로 성숙한 동물에서 수행 되 고 동물 사춘기를 통해 간 후에 시작 될 수 있다. Pubertal 발병 전에 생식 축, 이며 사춘기 (그림 1)를 시작에 부족 금액에 뇌 하 수 체에 성적인 성숙, 생식 샘 자극 호르몬-방출 호르몬 (GnRH)의의 핵심 드라이버 릴리스입니다. Pubertal 발병 증가 GnRH 릴리스 중간 예 하에서 발생 하는 복잡 한 프로세스입니다. GnRH 황 호르몬 (LH)과 여 포 자극 호르몬 (FSH) 분 비 뇌 하 수 체에서 2 개의 호르몬 gonadal 성숙 및 생식 기능 (그림 1)3,,45 에 대 한 필수적인 촉진 .
생식 축에 모욕 감소 다 산 되며 또한 사전 또는 지연 pubertal 발병 할 수 있다. Pubertal 발병과 생식 능력의 타이밍에 영향을 알려진 조건 포함 화학6,7, 증가/감소 몸 무게1,8에 변화를 방해 하는 내 분 비에 노출 날 길이2,9 그리고 유전자 변이10,11,12,13,,1415.
성적인 성숙의 개시 다 산 분석 결과를 설정 하기 전에 완료 해야 할 중요 한 단계 이다. Preputial 분리, 질 및 첫 발 정기를 통해 pubertal 개시 결정의 장점은 이러한 절차의 비-침략 적 특성으로 혈액 또는 동물16, 의 희생을 요구 하지 않기 17.
Pubertal 개시 결정 후 불 임 연구를 제대로 설정 생식 축의 무결성에 대 한 중요 한 정보를 제공 합니다 있으며 일반적으로 생성 하는 추가 연구 (수정)에 대 한 실험 동물의 두 번째 장점은 18.이 프로토콜에서 설명 하는 불 임 연구 설치 남성과 여성 생식 능력에서 미성년자와 주요 적자를 검색할 수 있습니다. 키 매개 변수 계산 포함 1) 첫 번째 쓰레기, 2) 주어진된 시간 프레임 및 3) 담가 크기에서 생성 하는 새끼의 수를 시간. 마지막으로, 후속 불 임 장애의 원인을 파악 하기 위해 실시 수 있는 연구의 유형에 대 한 권장 사항이 포함 되어 있습니다.
유전자 변형 쥐에 일을 반영 하는 대표적인 데이터 및 설명된 프로토콜 마우스를 말합니다. 그러나, 모든 포함된 프로토콜은 쥐에서 동등 하 게 유효 합니다.

<table><tbody><tr><td>멸균 면봉</td><td>피셔</td><td>22456885</td><td></td></tr><tr><td>표면 보호기</td><td>피셔</td><td>1420637</td><td></td></tr><tr><td>라이트 미터</td><td>VWR</td><td>21800-014</td><td></td></tr><tr><td>메틸렌 블루&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Genesee Scientific</td><td>29-101</td><td></td></tr><tr><td>옵티마우스 랙 케이지 포함</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>C89100</td><td></td></tr><tr><td>물병 바구니&nbsp;</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>C61011</td><td></td></tr><tr><td>필터 케이지 탑</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>C78210</td><td></td></tr><tr><td>옵티미스 표준 피더</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>C40100SG</td><td></td></tr><tr><td>케이지 카드 홀더</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>C43251</td><td></td></tr><tr><td>케이지 카드</td><td>AnimalCare 시스템</td><td>M52010</td><td></td></tr><tr><td>병 Assambley</td><td>AnimalCare 시스템</td><td></td><td></td>C79122P</tr><tr><td>침대 R'Nest Nesting</td><td>The Andersons</td><td>BRN4WSR</td><td></td></tr><tr><td>1/8" 옥수수 코브 침구&nbsp;</td><td>The Andersons</td><td>8B</td><td></td></tr><tr><td>표준 마우스 차우</td><td>Teklad</td><td>7904 (7004)</td><td></td></tr> <tr><td>스케일</td><td>VWR</td><td>10205-004</td><td></td></tr><tr><td>폴리 프로필렌 비커</td><td>피셔</td><td>14-955-111F</td><td></td></tr></tbody></table>

pubertal 발병을 확인 하 고 쥐 및 쥐에 다 산 분석 결과 수행 하 여 생식 능력의 결정

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

생식 능력의 평가 치료 또는 또한 불린 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 생식 축에 유전자 조작의 영향을 이해 하는 데 중요 하다. 생식 축 다 산 재생산에 유리한 조건에 적응 하는 환경 및 내부 입력의 주요 통합 이다. 쥐 및 쥐에 불 임 연구에 착수, 이전 성적 성숙 평가 제외 가능성 관찰된 생식 고기에 의해 발생 하는 지연 또는 pubertal 발병 결 석. 이 프로토콜 pubertal 발병 preputial 분리의 결정을 통해 남성 및 질 및 첫 발 정기를 통해 여성을 평가 하는 비-침략 적 접근 방식을 설명 합니다. 사춘기의 성적 성숙의 공적 및 확인 후 불 임 연구를 시작할 수 있습니다. 절차는 쥐와 쥐, 불 임 연구를 설정 하는 방법 및 어떤 매개 변수를 평가 하 고 치료 또는 유전자 삭제 다 산에의 영향을에 있는지 확인에 대 한 최적의 번 식 조건을 설명 합니다.

발표 결과 녹음 방송 요인 복 부 앞쪽 homeobox 1 (Vax1) 여기 라고도 heterozygote 쥐 (HET)13또는 Vax1 1 개의 대립 유전자에 몸 전체에서 삭제 된 두 개의 서로 다른 유전자 변형 마우스 모델에서 조건에 따라 GnRH 신경 세포22, 여기 조건부 코 (cKO)를 되 나 이내 삭제 되었습니다. 불 임 연구를 설정 하기 전에 모든 쥐에 pubertal 발병을 확인 하는 것이 중요입니다.
첫째, 하루와 질 및 preputial 분리에 무게는 설치 되었다. HET 마우스 질 및 preputial 분리 동일한 나이 및 무게 컨트롤 마우스에서 발생 (그림 3A 와 <str...

많은 치료 및 유전자 변이 성적 성숙과 다 산의 타이밍에 영향을. 이 프로토콜 pubertal 발병 쥐 및 쥐에 성적으로 성숙한 동물 불 임 연구를 설정 하는 이전에 평가 하는 비-침략 적 방법을 설명 합니다.

Pubertal 발병을 확인 하 고 쥐 및 쥐에 다 산 분석 결과 수행 하 여 생식 능력의 결정

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

이 방법은 생식 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다, 예컨대 preputial 분리를 통해 마우스와 쥐의 사춘기 발병을 결정하는 방법과 같은, 질 개구부, 불임 연구를 수행하기 전에 첫 번째 에스트루를 확립. 이 기술의 주요 장점은 입증 된 비 침습적 접근법을 사용하여 사춘기 발병을 확립함으로써 성적으로 성숙한 동물에서 불임 연구를 따르고 수행 할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 의미는 화학 물질을 방해하는 내분비와 같은 생식 능력에 영향을 받기 쉬운 유전 돌연변이 또는 처리에 기인하는 재생에 있는 적자의 진단을 향해 확장합니다.이 방법은 마우스에 있는 생식 능력에 통찰력을 제공할 수 있더라도, 또한 쥐와 햄스터와 같은 그밖 모형 시스템에 적용될 수 있습니다. 이 방법의 시각적 데모는 좋은 섬세한 동물 처리 기술이 필요하기 때문에 매우 중요합니다. 미리 분리 및 질 개방의 다음 시각적 식별을 위해 마우스를 올바르게 유지하는 것이 특히 중요합니다.작업 영역을 준비하려면 패드를 테이블에 놓습니다. 그런 다음 깨끗한 마우스 케이지 위에 그리드가 위를 향하여 패드에 놓습니다. 다음으로 작업 영역에 스케일을 설정합니다.깨끗한 500 ~1000 밀리리터 비커를 스케일에 놓고 그것을 잘 어울럽힙거라. 그런 다음 작업 영역 옆에 시트를 배치하여 데이터를 기록합니다. 이 후 마우스 케이지를 작업 영역에 배치합니다.케이지를 열고 뚜껑, 물병 및 음식 홀더를 테이블에 제거합니다. 꼬리에 마우스를 들고있는 동안, 깨끗한 마우스 케이지 상단에 놓습니다. 꼬리를 잡는 동안 마우스가 케이지 상단의 격자를 탐색하도록 합니다.꼬리를 부드럽게 뒤로 당기고 다른 손으로 목과 귀에 가까운 피부에 접근합니다. 엄지와 집게 손가락으로 어깨와 목 사이의 느슨한 피부를 잡습니다. 그런 다음 나머지 손가락으로 뒷면의 피부를 잡고 부드럽게 손에 눌러 마우스를 잡습니다.무료 손으로, 부드럽게 다시 음경 주위에 피부를 밀어. 현존적 분리에서, preputial 피부는 뒤로 미끄러져, 글랜 음경을 노출. 검사 후, 사전 분리의 존재 또는 부재를 기록합니다.이 후, 마우스의 무게와 무게를 기록합니다. 그런 다음 케이지 바닥에 비커를 잡고 마우스가 자체적으로 종료할 수 있도록 하여 하우징 케이지에 마우스를 다시 소개합니다. 작업 공간에 면공, 대형 비커, 멸균수 한 병을 배치합니다.비커에 멸균물을 붓습니다. 그런 다음, 비커에 멸균물로 면공을 가습하고 깨끗한 케이지 탑 옆에 놓습니다. 작업 영역에 마우스 케이지를 배치합니다.그런 다음 꼬리의 베이스로 마우스를 잡고 케이지 상단으로 옮김합니다. 마우스의 꼬리를 부드럽게 당겨 마우스로 전진하는 움직임을 장려합니다. 그 후, 세 손가락으로 엉덩이를 지지하면서 꼬리를 들어 올립니다.가습된 면공으로 외음부를 부드럽게 청소한 다음 외음부를 검사하여 질이 완전히 열려 있는지 확인합니다. 질 개구부가 발생한 경우 기록합니다. 그런 다음 마우스의 무게를 측정하고 홈 케이지로 돌아갑니다.각 번식 쌍의 쥐에 대해 뚜껑, 물, 음식, 침구 및 중첩 재료로 깨끗한 마우스 케이지를 준비하십시오. 그런 다음 필요한 정보와 함께 케이지 카드를 작성합니다. 준비된 침구 케이지를 깨끗한 테이블에 놓고 천천히 장갑을 낀 손을 마우스 케이지에 넣고 짧은 시간 동안 케이지에 둡니다.장갑을 낀 손으로 마우스에 천천히 접근하십시오. 마우스가 손 위로 달릴 때 엄지와 검지 손가락 사이에 마우스 한 마우스의 꼬리를 잡은 다음 꼬리로 마우스를 들어 올립니다. 마우스는 최대 2~3초 동안 바디의 지지 없이 꼬리에 의해 보관될 수 있습니다.준비된 사육 케이지에 마우스를 놓고, 수컷과 암컷 마우스에 음식, 물 및 중첩 물질이 있는지 확인 한 후 케이지를 닫습니다. 제시된 방법을 사용하여, 두 개의 상이한 형질전환 마우스 모형이 연구되었다. 질 개구부 및 예의 분리는 이종화 마우스와 대조마우스 모두에서 동일한 연령과 무게에서 발생하였다.반대로, 질 개구부 및 preputial 분리는 조건부 녹아웃 여성과 남성에서 현저하게 지연되었고, 체중 증가와 관련이 있었다. 나이의 4.5 주에, 여성 컨트롤및 조건부 녹아웃 마우스는 비교 체중을 했다, 조건부 녹아웃 남성 컨트롤 보다 약간 무거운 동안. 이는 조건부 녹아웃 마우스의 질 개구부 및 전량적 분리의 지연이 체중 증가지연과 관련이 없다는 것을 나타낸다.사춘기 발병이 끝난 후, 불임 연구는 10주에서 16주에 시작되었습니다. 남성과 여성 이테로지고테 마우스는 모두 비옥하였다. 이테로지고테 암컷은 3개월 간의 연구에서 더 적은 쓰레기를 발생시켰으며, 남성과 여성 이종조 마우스는 모두 더 작은 쓰레기를 생성했습니다.불임 분석서를 설치하기 전에 사춘기 발병을 확인하는 것의 중요성을 설명하기 위해, 생식 능력은 조건부 녹아웃 마우스에서 평가되었다. 70일 간의 불임 연구에서 조건부 녹아웃 남성이나 암컷모두 쓰레기를 생성하지 않았습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 주의마우스를 처리하고 접근하고 동물을 처리하는 동안 침착유지하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라, 순환 성 호르몬 수준을 측정 하는 같은 다른 방법은 추가 질문에 대답 하기 위해 수행 될 수 있습니다., 불 임 또는 다른 비 모 는 비정상적인 남성 호르몬에 의해 발생 했다 여부, 에스트로겐, 여 포 자극 호르몬, 그리고 황 호르몬 수준. 마우스와 함께 일하는 것은 알레르기의 물고 발달의 위험 때문에 유해할 수 있다는 것을 잊지 마십시오. 노출을 줄이기 위해 장갑과 실험실 코트를 착용하는 것과 같은 예방 조치와 마우스의 주의 깊게 다루어질 때 항상 이 절차를 수행해야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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