Mondelinge intubatie van volwassen Zebrafish: een Model voor de evaluatie van de intestinale opname van bioactieve stoffen

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het slijmvlies vaccinologie veld, zoals hoe darmslijmvlies opname biologische verbindingen en hoe dergelijke biologische stoffen moduleren het immuunsysteem op de lokale site na intubatie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het eenvoudig is om op te zetten, snel, en toont lage sterftecijfers. Deze methode kan inzicht geven in mucosale vaccinologie.

Het kan ook worden toegepast op andere verbindingen, zoals chemische stoffen, giftige stoffen, of ziekteverwekkers. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang als in de orale intubatie en darmontleding stappen, moet je voorzichtig zijn, want in intubatie je zou kunnen verwonden de zebravis en de dood veroorzaken. In dissectie is het einde van de darm zeer fijn en fragiel.

Plaats ongeveer een centimeter van de fijne siliconen buizen op een 31-gauge Luer-lock naald. Snijd een steriele 10-microliter filter pipet tip, neem de fijnere einde, en plaats het over de siliconen buis als een schede. Om te beginnen, bevestig de naald apparaat om een 100-microliter Luer-lock spuit.

Verplaats de vis eerst naar de experimentele tanks een nacht voor het experiment. Vortex de voorbereide nanodeeltjes oplossing goed, en het opstellen van het gewenste volume van de suspensie. Na het veilig verdoven van de vis, gebruik een net om de vis snel over te brengen naar een natte plastic lade.

Oriënteer het dier horizontaal om de naald onder ogen te zien. Steun de vis voorzichtig met één hand en open de mond met de beschermde naald. Steek vervolgens voorzichtig de naald in de slokdarm tot ongeveer een centimeter van de mond opening.

Het is moeilijk om te zien hoe ver de naald moet gaan, en dit is een kwestie van praktijk. U zult de naald voelen aangezien het een einde vindt, en dan door de naald te manipuleren, zult u de correcte hoek vinden om het apparaat een weinig meer te voegen. Injecteer langzaam de nanodeeltjessuspensie in de vis, zodat de suspensie niet naar buiten stroomt door de kieuwen of de mond.

Verwijder hierna voorzichtig de naald en plaats de vis in een hersteltank. Terwijl de vis herstelt, controleer de vis op eventuele afwijkingen. Zodra de vis is hersteld, terug te keren naar een van de experimentele tanks.

Na het euthanaseren van de vis volgens het tekstprotocol, plaats de vis op een stuk filterpapier. Maak met behulp van een scherpe dissectieschaar een halfronde incisie van de anus tot het operculum en open de incisie met een fijne pincet. Snijd vervolgens beide uiteinden van de darm door, haal alle inwendige organen eruit en leg ze op het filterpapier.

Vervolgens, scheiden van de darm van de interne organen, en strek het uit, het verzorgen van alle van de darm te verkrijgen. Gebruik ten slotte een pincet om de darm op het filterpapier te rollen om het kleefweefsel los te maken. Met behulp van dit protocol werden zebravissen van gemengd geslacht met succes geïntubeerd met verschillende recombinante eiwitnanodeeltjes.

Met behulp van de zelfgemaakte orale intubatie apparaat, een laag gemiddeld percentage van de sterfte werd bereikt. Om de levering van de fluorescerende nanodeeltjes opname lichamen gemaakt met recombinant TNF alpha te evalueren, werd een cytometrie analyse uitgevoerd. De totale hoeveelheid fluorescerende cellen was aanzienlijk hoger in de nanodeeltjes-geïntubeerde groep dan in de controlegroep, zowel vijf als 24 uur na intubatie.

De intubatieapparatuur is goedkoop, nauwkeurig en herbruikbaar. De hele intubatieprocedure kan zeer snel door één operator worden uitgevoerd, en, belangrijker nog, de methode is consistent tussen de verschillende operatoren. De combinatie van onze intubatiemethode met downstream-analyse zou ideaal kunnen zijn voor de ontwikkeling van orale vaccins.