쥐에 갈망의 부 화를 측정 하기 위한 바른된 장소 설정 프로토콜
2018년 11월 6일
여기, 모 르 핀 조절 장소 특혜 (CPP) 프로토콜은 쥐에 갈망의 부 화를 측정 하는 설명입니다.
이 방법은 약물 사용 욕구와 욕망 응답의 잠복에 대한 약물 중독 분야에서 몇 가지 주요 질문을 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 6일간의 모르핀 컨디셔닝으로, 조건부 장소 선호도 메모리 응답은 쥐 모델에서 갈망하는 현상을 관찰하기 위해 18일로 연장될 수 있다. 이 쥐 모르핀 컨디셔닝 모델의 의미는 갈망의 잠복기의 우리의 이해 근본적인 메커니즘의 발전으로 확장됩니다.
시술을 시작하기 전에, 30센티미터 측 챔버에 의해 2개의 크고 검은 색 30 으로 구성된 3개의 챔버 조절 장소 환경 설정 장치를 구성한다. 그리고 매끄러운 흰색 PVC 바닥으로 25 바이 30센티미터 중간 챔버의 흰색 11. 그런 다음 쥐의 초기 환경 설정을 테스트하기 위해 측면 챔버에 다른 촉각 단서를 추가합니다.
동물의 사전 컨디셔닝을 위해 기요틴 도어를 제거하여 전체 장치에 무료로 접근할 수 있도록 하십시오. 그리고 중간 챔버에 쥐를 배치합니다. 동물의 활동을 15분 동안 기록하여 3일째에 양측 챔버에서 보낸 시간을 기준선으로 계산합니다.
동물의 컨디셔닝을 위해, 아침에 밀리리터 모르핀 염산염 IP당 1킬로그램당 1밀리리터로 모르핀 조절쥐 군을 주입하십시오. 그리고 킬로그램 식염수 당 1 밀리 리터 10 시간 후, 6 일 동안 매일. 각 쥐를 페어링한 적절한 약물, 비선호 또는 식염수 쌍으로 배치하고, 각 주사 직후 45분 동안 선호하는 챔버를 선호합니다.
마지막 컨디셔닝 세션 후 2일, 10일 및 18일에 모르핀 조절 동물의 테스트를 위해 기요틴 도어를 제거하여 전체 장치에 무료로 접근할 수 있도록 한다. 그리고 모르핀 프리 상태에서 전체 장치의 자유로운 탐사를 위해 중간 챔버에 배치 후 15 분 동안 각 동물의 활동을 기록한다. 모핀 및 식염수 그룹에서 조건된 장소 기본 설정의 메모리 보존은 마지막 컨디셔닝 세션 후 여러 시간 지점에서 조건부 장소 기본 설정 점수를 측정하여 평가됩니다.
측면 챔버에 대한 항목수는 모르핀의 보강 특성을 반영하고 갈망의 배양을 나타내는 항목의 증가 수를 반영하는 자체 관리 패러다임에서 활성 응답의 수와 유사합니다. 그림과 같이 이 프로토콜을 사용하여 모르핀 컨디셔닝된 장소 기본 설정을 성공적으로 수립할 수 있습니다. 마지막 컨디셔닝 세션 후 최대 18일 동안 장기 모르핀 보상 메모리를 유도합니다.
이 절차를 시도할 때 촉각 큐의 균형을 맞추는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 각 컨디셔닝 후 복직과 같은 다른 조치를 수행할 수 있습니다. 욕망의 잠복에 따라 복종이 유사한 기본 메커니즘을 가지고 있는지 여부에 대한 추가 질문에 대답하기 위해.
복직 후, 이 기술은 쥐의 조건된 장소 선호 패러다임에 욕망의 잠양을 탐구하기 위하여 약 추가의 필드에 있는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다.
개요
본 논문은 쥐의 갈망 잠복기(incubation of craving)를 측정하기 위한 모르핀 조건 형성 장소 선호도(CPP) 프로토콜을 설명합니다. 이 방법을 통해 연구자들은 약물 갈망 및 중독의 기저 메커니즘을 탐구할 수 있습니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 신경과학
- 행동심리학
- 약리학
배경
- 약물 갈망을 이해하는 것은 중독 연구에서 매우 중요합니다.
- 조건 형성 장소 선호도는 약물 관련 기억을 평가하기 위한 일반적인 방법입니다.
- 갈망의 잠복 현상은 이 모델을 통해 연구될 수 있습니다.
- 이전 연구들은 약물 조건 형성의 장기적 효과를 보여주었습니다.
연구 목적
- 쥐에서 신뢰할 수 있는 모르핀 CPP 모델을 구축한다.
- 시간 경과에 따른 갈망의 잠복기를 조사한다.
- 행동 반응을 통해 모르핀의 강화 특성을 평가한다.
사용된 방법
- 테스트를 위해 3실 챔버 CPP 장치를 제작하였습니다.
- 기초 선호도를 설정하기 위해 쥐를 사전 조건화하였습니다.
- 6일에 걸쳐 모르핀과 식염수를 투여하였습니다.
- 조건화 후 여러 시점에서 활동성 및 선호도를 측정하였습니다.
주요 결과
- 장기 기억 유지를 동반한 모르핀 CPP의 성공적인 확립.
- 약물-연합 챔버 진입 횟수의 증가는 갈망의 잠복기(incubation)를 나타냄.
- 행동 반응은 모르핀의 강화 특성을 반영함.
- 본 연구 결과는 중독의 갈망 메커니즘에 대한 추가적인 탐구를 뒷받침함.
결론
- 모르핀 CPP 모델은 약물 갈망 연구에 효과적입니다.
- 모르핀 조건 형성의 장기적 효과를 관찰할 수 있습니다.
- 본 프로토콜은 중독의 역학을 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다.
자주 묻는 질문
산업적 관련성 요약
본 프로토콜은 중독 치료의 핵심 과제인 금단 기간 중 약물 갈망의 시간 의존적 증가를 모델링하여 바이오 제약 연구자들이 활용할 수 있도록 합니다. 쥐 모델에서 갈망의 잠복기(incubation of craving)를 포착함으로써, 재발 방지를 목표로 하는 새로운 중재법의 표적 검증 및 기전적 리스크 감소를 지원합니다. 이 방법은 물질 사용 장애 파이프라인에서 전임상 스크리닝과 임상 후보 물질 평가 사이의 중개적 가교 역할을 제공합니다.
바이오 제약 R&D의 전략적 응용
초기 발견 및 타겟 검증
- 과학적 가치: 장기 보상 기억 및 갈망 신경생물학에 관한 치료 가설을 탐구합니다.
- 운영적 가치: 인큐베이션 현상의 행동 판독을 통해 기능적 타겟 검증을 가능하게 합니다.
- 예측적 가치: 시간 의존적 갈망 증가를 조절하는 타겟을 식별함으로써 포트폴리오 우선순위 결정을 지원합니다.
스크리닝 및 분석법 개발
- 분석 준비도: 갈망 종말점에 대한 화합물 스크리닝을 위해 검증된 생물학적 시스템을 준비합니다.
- 정량적 결과: 능동적 반응의 대리 지표로 챔버 진입 횟수를 측정하여 용량-반응 분석을 가능하게 합니다.
- 재현성: 표준화된 촉각 신호와 챔버 설계는 갈망 평가 시 실험실 간의 일관성을 지원합니다.
중개 및 전임상 연구
- 질환 관련성: 인간의 중독에서 임상적으로 관찰되는 현상인 갈망의 잠복기를 모델링합니다.
- 전임상 연속성: 조건 형성 후 18일간의 관찰 기간을 통해 발견 단계를 연결합니다.
- 위험 조정 의사결정: 테스트 화합물에 의한 갈망 잠복기의 완화 정도에 근거하여 go/no-go 기준을 결정합니다.
파이프라인 및 워크플로우 통합
본 방법은 표적 가설 검증부터 리드 최적화에 이르는 발견 연속체에 부합하며, 특히 장기간의 금욕 기간 동안 갈망의 잠복기를 차단하는 화합물의 평가를 가능하게 합니다.
- 발견 생물학: 모르핀 관련 기억 지속성 및 갈망 신경 적응의 기전 연구를 지원합니다.
- 스크리닝: 갈망 잠복기에 미치는 화합물의 효과를 평가하기 위한 정량적 행동 결과(챔버 진입 횟수)를 제공합니다.
- 분석: 금단 간격에 따른 조건 비교를 위해 시계열 선호도 및 진입 데이터를 생성합니다.
- 중개 연구: 임상적 잠복 기간과 일치하여 재발 방지 전략에 대한 예측 타당성을 지원합니다.
- 기업적 재사용: 갈망 지속성을 표적으로 하는 다양한 약리학적 중재법을 평가할 수 있는 재사용 가능한 플랫폼을 구축합니다.
운영 및 기업 영향
- 과학적 가치: 임상적으로 유의미한 갈망 궤적의 모델링을 통해 표적 결합에 대한 예측적 신뢰도를 제공함.
- 운영적 가치: 절차적 복잡성을 최소화하면서 갈망 잠복기에 대한 표준화되고 확장 가능한 평가를 수행함.
- 전략적 가치: 부적응적 기억 과정을 완화하는 화합물을 조기에 식별함으로써 자본 효율성을 높임.
- 포트폴리오 영향: 장기적 갈망 발현에 미치는 영향에 근거하여 후보 물질의 위험 조정 우선순위 결정을 용이하게 함.
실행 시 고려 사항
- 설치류 행동 약리학 및 장소 선호 조건화에 대한 전문 지식이 필요합니다.
- 뚜렷한 촉각적 바닥 단서가 있는 정밀한 챔버 제작에 의존합니다.
- 6일간의 조건화 기간 동안 일관된 핸들링 및 주사 일정이 필수적입니다.
- 관찰자 편향을 최소화하기 위해 챔버 진입 횟수에 대한 맹검 채점 방식에 의존합니다.
- 접근 행동 측정으로 제한되며, 갈망의 정서적 또는 동기적 차원은 포착하지 못합니다.
