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세포 외 단백질 Microarray 기술은 낮은 친 화력 수용 체 Ligand 상호 작용의 높은 처리량 검색
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JoVE Journal Biochemistry
Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

세포 외 단백질 Microarray 기술은 낮은 친 화력 수용 체 Ligand 상호 작용의 높은 처리량 검색

Full Text
7,739 Views
06:01 min
January 7, 2019

DOI: 10.3791/58451-v

Bushra Husain1, Sairupa Paduchuri1, Sree R. Ramani2, Nadia Martinez-Martin1

1Receptor Discovery group, Microchemistry, Proteomics and Lipidomics Department,Genentech, 2Portfolio Management and Operations,Genentech

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a protocol for screening extracellular protein microarrays to identify novel receptor-ligand interactions in high throughput. It also describes a method to enhance the detection of transient protein-protein interactions using protein-microbead complexes.

Key Study Components

Area of Science

  • Protein-protein interactions
  • Extracellular proteins
  • High throughput screening

Background

  • Understanding receptor-ligand interactions is crucial in biology.
  • Transient protein-protein interactions are often difficult to detect.
  • Microarrays provide a platform for high throughput analysis.
  • Protein-microbead complexes can enhance detection sensitivity.

Purpose of Study

  • To identify novel binding partners for extracellular proteins.
  • To improve the sensitivity of detecting transient interactions.
  • To utilize microarray technology for efficient screening.

Methods Used

  • Utilization of microarray printers for slide generation.
  • Preparation of working plates using 384 well plates.
  • Manual preparation of samples prior to slide printing.
  • High capacity printing with multiple slides per run.

Main Results

  • Successful identification of novel receptor-ligand interactions.
  • Demonstrated high sensitivity in detecting transient interactions.
  • Efficient use of minimal protein amounts for extensive screening.
  • Generation of hundreds of slides from just a few micrograms of protein.

Conclusions

  • The protocol enhances the ability to study protein interactions.
  • Microarray technology is effective for high throughput analysis.
  • This method can significantly advance research in protein biology.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this method?
The main advantage is the ability to generate hundreds of slides using just a few micrograms of protein.
How many slides can be printed in one run?
A standard micro arrayer can print 57 slides per run.
What type of plates are used for sample preparation?
384 well plates are used for generating working plates.
What is the sample volume used in each well?
10 microliters of sample per well is used from the stock plates.
How does this method improve detection sensitivity?
By using protein-microbead complexes, the method enhances the detection of transient protein-protein interactions.
What is the capacity of the print head in the micro arrayer?
The print head holds 48 spotting pins and can accommodate up to 8,000 spots per slide.

여기, 우리는 높은 처리량 프로토콜 화면 extracellular 단백질 microarrays 소설 수용 체 ligand 상호 작용의 식별을 제시. 우리는 또한 단백질 microbead 복합물을 사용 하 여 일시적인 단백질-단백질 상호 작용의 탐지를 강화 하는 방법을 설명 합니다.

이 방법은 높은 처리량과 높은 감도 모두 세포 외 단백질에 대한 새로운 결합 파트너의 검출을 가능하게함으로써 단백질 단백질 상호 작용 분야에서 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 몇 마이크로그램의 단백질만 으로 마이크로 어레이 프린터를 사용하여 수백 개의 슬라이드를 생성할 수 있다는 것입니다. 슬라이드 인쇄에 표준 마이크로 어레이어를 사용합니다.

이 계측기는 런당 57개의 슬라이드를 사용할 수 있으며, 48개의 스포팅 핀을 들고 있는 프린트 헤드를 사용하며 슬라이드당 최대 8, 000개의 스팟을 수용할 수 있습니다. 스톡 플레이트에서 잘 샘플 10 마이크로 리터에서 384 개의 웰 플레이트를 사용하여 작업 플레이트를 생성합니다. 마이크로 어레이를 사용하여 슬라이드 인쇄하기 전에 이 단계를 수동으로 수행합니다.

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