Name: Glycyrrhizae 기 수의 신경 보호 효과 평가 외 Rhizoma 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 마우스 모델을 사용 하 여 추출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 배우세요 중대뇌동맥폐색 마우스 모델을 이용한 감초 추출물의 신경보호 효과 평가 방법을. 이 기법은 뇌졸중 연구에서 자연 유래 화합물의 신경보호 작용을 선별하는 데 활용됩니다.

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동물 관련 된 모든 절차는 부산 대학교 (승인 번호, 부산대-2016-1087)의 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 이 연구에 대 한 그래픽 개요는 그림 1에 표시 됩니다.
1. 준비 및 GRex의 관리
참고:이 연구에 사용 된 GR 상업적인 제약 회사에서 구입 했다.
<ol><li>메탄올의 2000 mL에 GR의 200g를 배치 하 고 5 일 동안 실 온 (25 ° C)에서 품 어.</li>
	<li>0.26 m m 두께와 5 µ m 기 공 크기, 필터 종이 사용 하 여 혼합물을 필터링 하 고는 상쾌한 제거. GR 잔류물에 메탄올 1000 mL를 추가 하 고 다시 필터링.</li>
	<li>두 개의 supernatants 결합, 필터 종이 통해 필터링, 진공, 아래 집중 하 고 생산 GRex 잔류물을 freeze-dry.</li>
	<li>디 메 틸 sulfoxide (DMSO), 0.9% 생리 식 염 수로 희석에 GRex 녹이 고는 0.45 μ m 주사기 필터를 통해 필터링. 그런 다음 < 5 %DMSO 최종 농도 조정 합니다.</li>
	<li>구강을 통해 MCAO reperfusion 후 GRex (300 밀리 그램/kg 체중) 1 시간을 관리 합니다. 생리 식 염 수 (10 mL/kg 체중) 정상적인 그룹 및 제어 그룹에만에 각각 희석 DMSO를 관리 합니다. 참고:이 실험에 사용 된 GRex 농도 있었던 우리의 이전 연구8농도 따라 결정 되었다.</li>
</ol>2. 마우스 모델 MCAO의
<ol><li>사용 남성 C57BL/6 쥐 세 6 주 하 고 22-25 g. 무게 제공 표준 차 우와 물, 그리고 집에 무료로 액세스할 모든 동물 제어 온도 (22 ± 1 ° C)는 환경에서 그들 12 h 명암 주기.<ol>
<li>보통 가짜 운영, 제어, 및 GRex 치료 그룹의 구성 한다 6 마우스 각각의 그룹으로 마우스를 나눕니다.</li>
		<li>MCAO 수술 (고이즈미 외 의 방법의 수정 9) 제어 및 스테레오-현미경을 사용 하 여 GRex 치료 그룹에.</li>
	</ol>
</li>
	<li>70% N2O 2% isoflurane 30% O2를 사용 하 여 마우스에 흡입 마 취를 유도. 마 취 때 마우스 꼬리에 적용 하는 기계적인 자극에 반응이 충분 한으로 간주 됩니다. 36.5 ± 0.5 ° C 온도 지주 담요 온도계에 연결 하는 몸을 사용 하 여에서 쥐의 체온을 유지 한다.</li>
	<li>가슴에 머리를 제거 하 고 면도 하 여 쥐의 목 제 모 크림의 사용 하 여 다음 2 번 술과 함께 번갈아 betadine 스크럽으로 피부 수술 부위의 소독 이며 약 2cm의 절 개 수술로 긴 목의 센터에 블레이드입니다. 조심 스럽게 왼쪽된 일반적인 경 동맥 (LCCA), 외부 경 동맥, 및 주위 결합 조직에서 내부 경 동맥의 분기를 격리 합니다.</li>
	<li>외부 경 동맥과 (4-0 비단 봉합, 반 히 치 매듭) 일시적으로 혈액 흐름을 차단 하는 수술 봉합으로 일반적인 경 동맥 내부 경 동맥으로 작업 중 선.</li>
	<li>실리콘 코팅 나일론 봉합 (8-0 monofilament, 11 m m 긴) 왼쪽된 MCA의 기원에 내부 경 동맥을 통해 삽입 합니다. 0.10-0.12 범위에 필 라 멘 트의 실리콘 코팅 부분의 두께 조정 m m.</li>
	<li>레이저 도플러 유량 계를 사용 하 여 MCA에 상대적인 대뇌 혈 류 (rCBF)에 있는 감소를 측정 합니다. MCAO는 rCBF은 전체 허 혈 성 기간 동안 휴식 조건 값의 < 20%에서 유지 될 때 확인 될 것입니다.</li>
	<li>대뇌 동맥을 차단 하는 동안 2 시간에 대 한 혈관에 삽입 된 필 라 멘 트를 수정 하 고 신중 하 게 철회 reperfusion의 22 h에 대 한 혈액 흐름을 복원 하는 필 라 멘 트. 5 장소 (3-0 비단 봉합, 두 절반 보내고 매듭)에서 봉 제 하 여 피부를 봉합 하 고 마 취에서 각 성 각 마우스 허용.</li>
	<li>일반 그룹에서 다음과 같은 예외 (2.4)까지 위의 동일한 절차에 따라 가짜 작업을 수행. 일반적인 경 동맥 선 고 베인된 근육과 피부를 봉합.</li>
</ol>3. 손상 된 뇌 조직의 볼륨의 측정
<ol><li>CO2 흡입 뇌 손상 측정에 대 한 생쥐의 안락사, 후 소비 마우스 MCAO 아이리스 수술가 위를 사용 하 여 직각된 포 셉의 발병 후 24 시간 두뇌.<ol>
<li>가 위를 사용 하 여 머리를 제거한 후 두개골에서 피부를 뒤집어 머리의 중간 피부에 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>정수 리 뼈 각도 겸 휴식, 경질 벗는 동시에 중요 하 고 신중 하 게 두개골에서에서 뇌를 분리.</li>
	</ol>
</li>
	<li>컷 섹션 (두께 1 m m)으로 삭제 조직 마우스 뇌 매트릭스를 사용 하 고 2 %2,3,5 triphenyltetrazolium 염화 (TTC)의 솔루션에 17 분에 대 한 섹션을 얼룩.</li>
	<li>적어도 2 시간에 대 한 10% 포 르 말린에 섹션을 수정 하 고 디지털 카메라를 사용 하 여 사진을. TTC 괴 지역 흰색 될 것입니다 하는 동안 가능한 조직 붉은 얼룩 관찰 됩니다.</li>
	<li>분석 하 고 계량 ImageJ를 사용 하 여 각 섹션의 대뇌 경색 영역.</li>
</ol>4. hematoxylin과 오신 (H & E) Cresyl 조직학 섹션의 보라색 얼룩
<ol><li>CO2 흡입에 의해 조직학 연구에 대 한 마우스를 안락사 그리고 그들 transcardially 인산 버퍼 (PBS), 염 분의 10 mL와 10 mL 4 %paraformaldehyde (PFA)의 뒤에 perfuse. (3.1) 위의 동일한 절차를 사용 하 여 뇌를 분리 하 고 30% 자당의 10 mL에 뇌를 하룻밤 담가.</li>
	<li>최적의 절삭 온도 (10 월) 화합물에 뇌 조직을 포함 하 고 coronally는 cryostat를 사용 하 여 15 µ m 두께 섹션으로 그것을 슬라이스. 되며 고 오신 (H & E) 또는 cresyl 보라색 얼룩이 다음 유리 슬라이드에 섹션을 탑재 합니다.</li>
	<li>1 분 뒤에 5 분 동안 되며 솔루션에서 얼룩에 대 한 80% 에탄올에 유리 슬라이드에 젖어.<ol>
<li>1% 산 알코올에 슬라이드를 두 번 찍어, 30에 대 한 포화 리튬 탄산염 해결책에서 담가 30 s, 그리고 counterstain 30 오신 솔루션에 대 한 수돗물으로 세척 s s.</li>
		<li>린스 수돗물에 슬라이드, 연속적으로 95%와 절대 에탄올에 담근 다.</li>
		<li>슬라이드를 건조, 적어도 10 분 동안 크 실 렌에서 그들을 취소 하 고 설치 매체를 사용 하 여 coverslips를 탑재.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적어도 1 시간, 클로 프롬 하룻밤 희석 50% 에탄올에 침수에 의해 다음에 대 한 따뜻한 슬라이드 유리 슬라이드를 놓습니다.<ol>
<li>40 ° C의 건조 오븐에서 10 분 0.1 %cresyl 바이올렛과 슬라이드 얼룩.</li>
		<li>30 분 동안 95% 에탄올에 immerse 다음 2 시간 동안 절대 에탄올에서 탈수.</li>
		<li>5 분, 크 실 렌에 2 번 후 공기 건조 후 장착 매체 마운트하기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>현미경을 사용 하 여, MCAO 유도 뇌 손상 후 발생 한 조직학 변화 관찰.</li>
</ol>5. 통계 분석
<ol><li>실험 결과 수단 ± 표준 편차로 표현 하 고는 단방향 분산 분석 (ANOVA) Tukey의 임시 게시물 분석 데이터 분석 소프트웨어를 사용 하 여 다음을 사용 하 여 그룹 간의 통계적 의미를 결정 합니다.</li>
	<li>P에 통계적 의미를 설정-< 0.05 값.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
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<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
<li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention%3A+role+of+multimodal+combination+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li>
<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
<li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li>
<li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329(2016).</li>
<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

뇌졸중 주요 위험 요소는 만성 고혈압, 당뇨병, 고 지 혈 증, 등 대사 질환의 증가 보급, 뇌졸중 예방 및 치료는 되었다 의료 연구12, 의 중요 한 지역 13. 언어 및 뇌졸중 후 운동에 적자는 강하게 뇌 조직14 환자 및 그들의 가족15가난한 삶의 질에서 발생 하는 손상의 정도 연관. 그것은 약물 치료의 효능 연구를 인간의 질병에서 발생 하는 그 같은 병 적인 변화를 포함 하는 뇌졸중의 적절 한 동물 모델을 사용 하는 것이 중요. MCAO 모델 대뇌 동맥 혈관을 방해 하 여 thrombotic 스트로크를 모방 합니다. 그것은 상대적으로 재현할 수 및 최소 침 습16,17,,<sup class=...

허 혈과 reperfusion 대뇌 혈 류로 인 한 뇌 손상 신경 세포의 죽음 및 뇌 조직의 손실을 이끌어 낸다. 뇌 손상의이 유형은 비만, 고혈압, 당뇨병 mellitus1,2등 대사 질환의 확산으로 인해 뇌혈관 질환의 증가 보급 증가 하 고 있습니다. 절대 뇌졸중 노인 환자는 극적으로 증가 세계적으로, 그리고 수시로 남겨진다 장기 장애, 이러한 환자에 대 한 의료 서비스의 비용 주요 사회적 부담. 따라서, 2 차 장애 경제 부담1,2를 줄이기 위해 가능한 만큼 많이 완화 한다.
뇌의 가장 일반적으로 사용 되는 설치류 모델은 있는 MCA는 가려진는 실리콘 코팅 수술 suturing 필 라 멘 트 혈액 흐름을 차단 하와 허 혈 성 뇌졸중3, 를 일으키는 중간 대뇌 동맥 (MCA) 폐색 (MCAO) 모델 4. 폐색 소재 내부 luminal 필 라 멘 트 삽입 기간을 조작 하 여 폐색 시간과 영원의 컨트롤 수를 필 라 멘 트를 사용 하 여.
이전 연구는 같은 설치류 MCAO 모델을 사용 하는 경우에 뇌의 총 볼륨 차이가 실험, 연구의 낮은 재현성을 일으키는 나타났습니다. 재현성을 높이기 위해 우리는 실험에 사용 된 필 라 멘 트 민트의 두께 최적화. 대뇌 허 혈 성 기간 및 허 혈 성 기간 60 분 보다 긴의 체적 영역 허용 했다 유도 경색의 예비 연구의 결과 관찰 하 여 측정할 뇌 조직 손상.
Glycyrrhizae 기 수 외 Rhizoma (GR), 일컬어 감 초, 말린된 뿌리와 뿌리 줄기 Glycyrrhiza uralensis 의 구성 및 G. 나무. 그것은 중국 하 고 한국 전통 의학에서 식품 첨가제와 약5,6,7등 다양 한 용도로 사용 되었습니다.
이전 연구8, GR 메탄올 추출 물 (GRex) MCAO 마우스에서 안티-apoptotic 효과 보여주었다 사전 치료 (Bcl-2) B-세포 림프 종 2의 단백질 표정에 있는 감소의 중요 한 예방 및 Bcl 초대형 (Bcl-xL)를 포함 하 여. 이 연구는 GRex 후 경색 치료 효과적으로 MCAO-대뇌 손상에서 경색 볼륨을 감소 하는 경우 결정의 효율성을 평가 하 여 기존의 MCAO 마우스 모델의 재현성을 향상 시키기 위해 실시 되었다.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Qualitative filter paper</td><td>Advantec</td><td>Filter paper No. 2</td><td>Qualitative filter paper</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td></tr><tr><td>Syringe filter (0.45 &micro; m)</td><td>시그마</td><td>CLS431220</td><td>주사기 필터(0.45 &마이크로; m)</td></tr> <tr><td>스테레오 현미경</td><td>라이카</td><td>M50</td><td>스테레오 현미경</td></tr><tr><td>스테레오 현미경</td><td>니콘</td><td>SMZ745</td><td>스테레오 현미경</td></tr><tr><td>레이저 도플러</td><td>무어 악기</td><td>moorVMS-LDF</td><td>레이저 도플러</td></tr><tr><td>마취 탁상용 브래킷 N2O & O2 유량계 시스템</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>마취 탁상용 브래킷(N2O 포함) 및 O2 유량계 시스템</td></tr><tr><td>동종 모니터링 시스템</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020</td><td>동종 모니터링 시스템</td></tr><tr><td>디지털 카메라</td><td>Canon</td><td>Eos-M2</td><td>디지털 카메라</td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>저온 유지 장치</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td>Zeiss Zeiss Axio</td><td>현미경</td></tr><tr><td>데이터 분석</td><td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot 버전 12</td><td>데이터 분석</td></tr><tr><td>데이터 분석 NIH</td><td>이미지</td><td>ImageJ</td><td>데이터 분석</td></tr><tr><td>마우스 다이어트</td><td>두열 생명공학</td><td>표준 설치류 차우</td><td>마우스 다이어트</td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>중화</td><td>A02104781</td><td>이소플루</td></tr><tr><td>란 이소플루란</td><td>TROIKAA</td><td>ISOTROY 100</td><td>이소플루란</td></tr><tr><td>실크 봉합사 (4-0 블랙 실크)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>실크 봉합사 (4-0 블랙 실크)&nbsp;</td></tr><tr><td>실크 봉합사(3-0 화이트 실크)&nbsp;</td><td>백재</td><td>57</td><td>실크 봉합사 (3-0 백실크)&nbsp;</td></tr><tr><td>나일론 봉합사(8-0 모노필라멘트)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>나일론 봉합사(8-0 모노필라멘트)&nbsp;</td></tr><tr><td>2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)</td><td>시그마</td><td>T8877-25G2,3,5</td><td>-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)</td></tr><tr><td>포르말린(포름알데히드 용액)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>포르말린(포름알데히드 용액)</td></tr><tr><td>헤마톡실린(해리스 헤마톡실린)</td><td>YD 진단</td><td>EasyStain</td><td>헤마톡실린(Harris Hematoxylin)</td></tr><tr><td>에오신(1% 에오신 Y 용액)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>Eosin (1% Eosin Y 용액)</td></tr><tr><td>크레실 바이올렛(아세테이트)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>크레실 바이올렛(아세테이트)</td></tr><tr><td>파라포름알데히드&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>P6148-1KG</td><td>파라포름알데히드&nbsp;</td></tr><tr><td>설탕</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>설탕</td></tr><tr><td>최적 절단 온도 (OCT) 화합물</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>최적 절단 온도 (OCT) 화합물</td></tr><tr><td>해부 나이프</td><td>Fine Science Tools</td><td>10055-12</td><td>해부 나이프</td></tr> <tr><td># 4 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11241-30</td> <td># 4 Forcep</td></tr> <tr><td># 5 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5 Forcep</td></tr><tr><td>#6 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11260-20</td><td>#6 Forcep</td></tr><tr><td>#7 Fine Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>#7 Fine</td></tr><tr><td>Forcep Surgical Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td>수술용 가위</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td>Extra Fine Bonn Scissors</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Spring 가위</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff 스프링 가위</td></tr><tr><td>용기 팽창 힘자</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>18153-11</td><td>용기 팽창 힘자</td></tr></tbody></table>

glycyrrhizae 기 수의 신경 보호 효과 평가 외 rhizoma 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 마우스 모델을 사용 하 여 추출

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

허 혈 뇌졸중 후 뇌 혈 류의 reperfusion 뒤 신경 세포의 죽음 및 뇌 조직의 손실을 이끌어 낸다. 선 공부에 대 한 가장 일반적으로 사용 되 동물 모델은 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델. 이전 연구는 동일한 실험 동물 종 비슷한 MCAO 조건 하에서 사용 하는 경우에 다른 경색 크기를 보고 있다. 따라서, 우리는이 불일치를 해결 하는 향상 된 실험 방법 개발. 마우스 MCAO 폐색 소재로 인간의 선 조건을 모방 하는 필 라 멘 트를 사용 하 여 대상이 됐다 고 필 라 멘 트 두께 더 재현 경색 볼륨 설정 최적화 되었다. Glycyrrhizae 기 수의 마우스는 메탄올으로 치료 추출 외 뿌리 줄기 (GRex) 선 유도 따라 크게 감소 총 경색 볼륨 및 치료 제어 그룹을 기준으로 세포가 살아 나 기의 증가 수. 이 성공적으로 실험 프로토콜을 수정 하 고 reproducibly 뇌경색에 GRex의 유익한 효과 설명 했다.

가짜 운영 하는 일반 그룹에 아무 대뇌 경색 반면 상대적으로 광범위 한 손상된 영역 관찰 제어 그룹에서 관찰 된다. 쥐에 관리 300 mg/kg GRex MCAO 모델 그룹, 손상 된 영역에서 통계적으로 유의 한 감소에에서는 (그림 2) 관찰 됩니다.
조직학 변화는 조사에 의해 허 혈 성 뇌 섹션 H &amp; E 또는 cresyl 보라색 얼룩. H &amp; E 염색 제공 합니다 구조 정보를 특정 기능에 대 한 정보와 셀10, 반면 hippocampal 신경11의 총 수를 추정 하는 데 사용 됩니다 cresyl 보라색 얼룩. 따라서, H &amp; E 또는 cresyl 바이올렛 강도, ImageJ 소프트웨어 (<strong ...

이 연구에서 우리는 결과 얻기 위해 더 많은 재현, 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 마우스 모델을 구축 하 여 기존 실험 방법 수정. Glycyrrhizae 기 수의 구강 관리 외 뿌리 줄기 (GR) 메탄올 추출 물 (GRex), 선 유도 따라 크게 감소 치료 제어 그룹을 기준으로 총 경색 볼륨.

Glycyrrhizae 기 수의 신경 보호 효과 평가 외 Rhizoma 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 마우스 모델을 사용 하 여 추출

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

이 방법은 모델과 관련된 신경 보호 천연 화합물에 대한 스크리닝에 대한 신경 과학 및 전통적인 구강 의학 연구 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 감염 부피의 높은 확률성이 허혈성 타이밍 복용량에 따른다는 것입니다. 이 방법의 시각적 데모는 멸균 현미경을 사용하여 원래, 중간 소뇌 동맥에 매우 얇은 구현을 삽입하는 것이 일반적이기 때문에 중요합니다.이 절차를 시연하는 것은 제 실험실에서 공부하는 학교 학생인 이세은이될 것입니다. 글리시리자에 라딕스 에 Rhizome 추출물 또는 GRex를 준비하려면 먼저 200그램의 글리시리자에 라딕스 에 리조메(GR)를 실온에서 5일 간 배양하기 위해 메탄올 2리터에 넣습니다. 인큐베이션의 끝에서, 5 마이크로 미터 모공 크기로 0.26 밀리미터 두께의 필터 용지를 통해 솔루션을 변형.GR 잔류물을 신선한 메탄올 1리터에 넣고 솔루션을 다시 필터링합니다. 두 개의 여과를 결합하고 새로운 필터 용지를 통해 변형시면 됩니다. 그런 다음 동결 건조 전에 진공 상태에서 추출물을 농축하여 GRex를 생산합니다.GRex를 투여하기 위해 동결 건조 된 제품을 디메틸 설플옥사이드에 녹이고 혼합물을 0.9 %의 생리적 식염수로 희석하십시오. 그런 다음 0.45 마이크로미터 주사기 필터를 통해 용액을 필터링하고, DMSO의 최종 농도를 5% 미만으로 조정하여 마우스 중간 뇌동맥 폐색 모델 또는 MCAO를 설정하고, 마취6주 된 22~25그램 남성 C57BL/6 마우스에서 꼬리 자극에 반응성이 없음을 확인하고, 마우스를 36.5도 의 온도에 연결하여 열계에 연결시켰다. 면도 및 탈약 크림에 의해 마우스의 가슴과 목에서 모든 머리를 제거 한 후, 스테레오 현미경 아래에 마우스를 배치하고 목의 중심에 2 센티미터 피부 절개를합니다.왼쪽 공통 경동맥, 외부 경동맥 및 내부 경동맥을 주변 결합 조직으로부터 조심스럽게 분리하고, 4.0 실크 봉합사를 사용하여 외부 경동맥과 일반적인 경동맥을 반히치 매듭으로 분리하여 내부 경동맥으로의 혈류를 일시적으로 차단한다. 0.1~0.12밀리미터 두께의 11mm 길이의 실리콘 코팅 8.0-모노피라멘트 4.0 실크 봉합사를 내부 경동맥을 통해 좌중뇌동맥의 기원까지 삽입하고, 레이저 도플러 유량계를 사용하여 상대대뇌 혈류 동맥의 감소를 측정한다. 뇌동맥이 가려지는 동안 삽입된 필라멘트를 혈관에 2시간 동안 고정합니다.폐색 기간

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

중간 대뇌 동맥 (MCA) 내고 동물 모델에 초점 대뇌 국소 빈혈을 연구하는 기술입니다. 이 방법에서는, 중간 대뇌 동맥 craniotomy에 의해 노출 소작된에 의해 출혈도 잡았. 이 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다.

마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

출처: Zheng, Y., et al. 뇌허혈에 대한 산성 사후 조절의 신경 보호를 연구하기 위한 실험 모델. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 중대뇌동맥폐색(MCAO)의 마우스 모델에서 허혈성 손상에 대한 신경 보호 효과를 평가하기 위해 산성 사후 컨디셔닝(APC)의 적용을 보여줍니다. MCAO 모델에서 재관류와 관련된 단계와 흥분 독성, 산화 스트레스 및 신경 사멸을 완화하기 위한 재관류 중 APC의 적용을 간략하게 설명합니다.

 뇌허혈의 마우스 모델에서 산성 사후 컨디셔닝의 신경 보호 효과 평가

출처: Lee, SE, et al. 일시적인 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델을 사용하여 Glycyrrhizae Radix et Rhizoma 추출물의 신경 보호 효과 평가. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 테스트 화합물의 신경 보호 효과를 평가하는 절차를 보여줍니다. 이 화합물은 뇌에 들어가 신경 사멸을 예방하고 경색 부피를 줄여 치료되지 않은 마우스에 비해 신경 보호 효과를 확인합니다.

중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 시험 화합물의 신경 보호 효과 평가

이 프로토콜은 마우스의 일시적인 중대뇌동맥 폐색 후 경색 부피와 혈액-뇌 장벽 파괴를 감소시키는 반복적인 저산소증 전조건화 또는 전신 저산소증에 대한 짧은 노출을 설명합니다. 또한 신경혈관 보호의 효능을 평가하기 위해 뇌졸중 후 경색 용적과 혈액-뇌 장벽 파괴의 이중 정량화에 대해 자세히 설명합니다.

마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화

뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).

마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색 및 재관류 유도 스트로크에 대한 수술 적 접근

말단 중간 대뇌 동맥 분기 (MCAO)의 수술 폐색 실험 뇌졸중 연구에서 자주 사용하는 모델입니다. 이 논문은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하는 측의 두개 창에 삽입, 결합 영구 MCAO의 기본적인 기술을 설명한다.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

이 프로토콜은 중간 크기의 경색과 우수한 생존율을 가진 독특한 마우스 스트로크 모델을 보여줍니다. 이 모델을 통해 전임상 뇌졸중 연구자는 허혈 기간을 연장하고, 노령 마우스를 사용하고, 장기적인 기능적 결과를 평가할 수 있습니다.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

배우세요 중대뇌동맥폐색 마우스 모델을 이용한 감초 추출물의 신경보호 효과 평가 방법을. 이 기법은 뇌졸중 연구에서 자연 유래 화합물의 신경보호 작용을 선별하는 데 활용됩니다.

Glycyrrhizae 기 수의 신경 보호 효과 평가 외 Rhizoma 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 마우스 모델을 사용 하 여 추출

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