Name: 자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 학습하세요 자유롭게 이동하는 쥐에서 뇌파 기록과 함께 흥분성 아미노산의 마이크로다이얼리시스 방법을. 이 기술은 뇌전증의 신경전달물질 역학과 발작 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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저자 안 나 Binaschi, 파올로 Roncon 우선 출판 원고에 그들의 공헌에 대 한 엘 레 노어 팔 마를 감사 하 고 싶습니다.

저자는 공개 없다.

이 작품에서는, 우리는 TLE의 실험 모델에서 연속 비디오-뇌 파 기록 microdialysis와 결합을 수행 하는 방법을 보여줍니다. 비디오-뇌 파 기록 기법 올바르게 다른 동물에 있는 질병의 진행 단계를 진단 하는 데 사용 됩니다 및 microdialysis 기술 (변경 되었습니다 발견에 대 한 시간에 발생 하는 조미료 릴리스의 변경 사항을 설명 하는 이전에 게시 연구2에 aspartate). 좋습니다는 단일 장치/임 플 란 트를 수행 하기 위해를 사용 하 여 각 동물에서 둘 다 소개에서 설명 하는 이유로.
때마다, 행동 방해를 최소화 하 고 피해 위험 및 동물54에 대 한 고통을 감소 radiotelemetry 만성 뇌 파 기록에 대 한 속박 되 시스템을 선호 해야 합니다. 그러나, 곁된 EEG 기록은 이다 원격 측정법 보다 훨씬 저렴.
우...

기능 장애 조미료-중재 흥분 성의 GABAergic 금지 neurotransmission 측 두 엽 간 질 (TLE)에 자발적인 발작의 결과에 대 한 통찰력을 제공 하려면 우리는 체계적으로 extracellular 농도의 모니터링 GABA1 와 나중 자연 질병의 다양 한 시간 포인트에서 쥐의 복 부 해 마에 있는 microdialysis에 의해 조미료와 aspartate2 수준 과정, 즉, 개발 및 간 질의 진행 하는 동안. 우리는 TLE pilocarpine 모델 쥐, 모방 행동, electrophysiological 및 histopathological 변경3,4 면에서 매우 정확 하 게 질병을 이용 했다 그리고 우리 상관의 아미노 dialysate 농도 그것의 다른 단계에 산: epileptogenic 모욕, 대기 시간 단계, 첫 번째 자발적인 발작과 만성 phass5,,67시간 후 급성 단계. 질병 단계 프레임 장기 비디오-뇌 파 모니터링 및 정확한 뇌 파 및 자발적인 발작의 임상 특성에 의해 활성화 되었습니다. Microdialysis 기술에의 응용 프로그램은 장기 비디오-뇌 파 모니터링 TLE neuropathology에 대 한 기계적 가설을 제안 하 연관. 요약 하자면,이 원고에 설명 된 기술을 neurochemical 변경 개발 및 간 질 동물 모델에서의 진행으로 정의 된 뇌 영역 내에서 쌍 수 있습니다.
이점된 장치, microdialysis 정에 juxtaposed 깊이 전극의 구성 종종 간 질 연구 연구 신경 활동에 신경 전달 물질, 그들의 대사 산물, 또는 에너지 기질 변화 한다 상관 하는 어디에서 채택 된다. 대부분의 경우 그것은 자유롭게 행동 하는 동물에서 사용 하지만 그것은 또한 예를 들어, 수술8전에 깊이 전극 조사 수립이 저항 간 질 환자에서 인간의 비슷한 방식으로 지휘 될 수 있다. 뇌 파 기록 및 dialysate 컬렉션은 별도로 수행할 수 있습니다 (예를 들어를 한 반구에는 microdialysis 전극 이식도 수행 하는 동안 동물의 한 그룹에는 microdialysis을 수행 또는 다른 반구에 프로브 유일한 뇌 파 동물의 또 다른 그룹에). 그러나, 프로브를 전극 커플링 여러 장점을 있습니다: stereotaxic 수술을 간소화, 한 반구 조직 손상을 제한 (다른 하면서 조직학 연구에 대 한 제어로 그대로), 그리고이 결과 homogenizes 같은 뇌 영역 고 같은 동물에서 얻을 수 있습니다.
다른 한편으로, 그것은 집에서 만든 경우 기술 및 시간 결합 된 microdialysis 프로브 전극 장치 준비 해야 합니다. 하나는 시장에서 구입한 경우 상대적으로 높은 금액을 보낼 수 있습니다. 또한 때 microdialysis 프로브 (프로브 팁 직경 및 길이가 7-12 mm에서 200-400 µ m는 일반적으로)9및 EEG 전극 (전극 팁은 일반적으로 300-500 µ m의 직경, 및 충분히 관심10의 뇌 구조에 도달) 결합 하 여, 탑재 된 장치는 동물을 위해 번잡 하 고 특히 연결 하면 투 석 펌프 및 하드 와이어 EEG 레코딩 시스템 손실 될 경향이 머리의 한쪽에 크고 상대적으로 무거운 개체를 나타냅니다. 이 측면은 처리 하기 어렵고 덜 microdialysis 세션에 적응형 간 질 동물에 더 적합 합니다. 적절 한 수술 기법 및 적절 한 수술 치료는 최소한의 동물 불편을 일으키는 원인이 되 고 조합 microdialysis-뇌 파 실험10,11, 에 대 한 추구 되어야 오랫동안 임 플 란 트에 발생할 수 있습니다 12.
장점과 한계 microdialysis 기술의 세부 사항에 많은 신경 과학자에 의해 평가 되었습니다. 그것의 주요 장점은 다른 비보에 관류 기법 (예를 들어, 빠른 흐름 푸시 풀 또는 대뇌 피 질의 컵 관류)에 프로브는 관심13,14, 비교적 정확한 면적의 작은 직경 15. 둘째, microdialysis 막 조직과 perfusate; 사이의 물리적 장벽을 만듭니다. 따라서, 높은 분자 무게 물질 교차 하지 않는다 고 분석16,17방해 하지 않습니다. 또한, 조직 perfusate18의 난 류 흐름에서 보호 됩니다. 다른 중요 한 장점은 perfusate에서 분석 농도 극대화 하기 위한 perfusate 흐름 수정 가능성 (즉, microdialysis 과정 잘 수학적으로 정의 될 수 있습니다와 높이를 수정할 수 있습니다 샘플에 있는 분석의 농도)19. 마지막으로, 관심의 조직에 약물 또는 약리학 내용물을 고취 하 고 개입20의 사이트에 그들의 효과 결정 하는 기술을 사용할 수 있습니다. 다른 한편으로, microdialysis는 전기 화학 또는 생물 센서;에 비해 제한 된 해상도 시간이 (일반적으로 이상 샘플 수집에 필요한 시간이 1 분) 그것은 조직 손상; 하는 침략 적 기법 그것은 관심의 실정이 함께 perfusate를 입력 하는 모든 녹는 물질의 지속적인 농도 기온 변화도 때문에 막 주위 공간 내에서 neurochemical 균형 타협. 마지막으로, microdialysis 기술은 높은 분석 기법에는 perfusate9,,2122,23 물질의 정량화에 대 한 고용의 제한에 의해 영향을 . 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 후 조미료와 aspartate 생물 샘플 분석에 대 한 orthophthaldialdehyde와 derivatization 잘 검증된24,,2526 , 27 그리고 그것의 광범위 한 토론이이 원고의 범위 이지만이 메서드를 사용 하 여 생성 하는 데이터를 자세히 설명 합니다.
제대로 하 고 perfusate 구성의 수정 없이 수행, microdialysis 신경 전달 물질 방출의 기초 수준에 대 한 신뢰할 수 있는 정보를 제공할 수 있습니다. 기초 수준의 가장 큰 부분이 가능성이9시 냅 스 송신기 넘침의 결과 이다. 많은 경우에 추가 시 냅 스 공간에서 신경 전달 물질의 간단한 샘플링은 조사 목표를 추구 하기에 충분 하지, 때문에 microdialysis 기술을 채택 될 수 있다 또한 뉴런을 자극 하거나 중요 한의 그들을 박탈 하는 것은 K+ 또는 캘리포니아2 +연상 하거나 신경 전달 물질의 방출을 방지 등 생리 이온.
높은 K+ 자극 깨어 동물 뿐만 아니라 기본 및 organotypic 문화에 신경 활동을 자극 하는 신경 생물학에 종종 사용 됩니다. K+ (40-100 m m)의 높은 농도 가진 솔루션 건강 한 중추의 노출 신경 전달 물질28의 경과 끝. 간 질 동물1 과 다른 신경 퇴행 성 질환29,30높은 K+ 에 추가 릴리스를 제공 하는 뉴런의이 능력을 손상 될 수 있습니다. 마찬가지로, 캘리포니아2 + 부족 (Ca2 + 무료 솔루션 perfusing에 의해 얻은) 칼슘 의존을 설정 하는 데는 microdialysis에 의해 측정 하는 대부분 신경 전달 물질의 릴리스. 반면 캘리포니아2 + 독립적인 자료 명과에서 유래 하지만 많은 연구 캘리포니아2 +의 의미 논란 제기 Ca2 + 종속 릴리스 신경 원산지는 일반적으로 믿어진다-민감한 측정의 예 조미료 또는 GABA9: 따라서, 만약에 가능 하다 면, 그것은이 후자는 더 높은 공간적 해상도 전극 시 냅 스31에 가까이 있게 microsensor 연구, microdialysis 연구를 지 원하는 것이 좋습니다.
간 질 동물에 microdialysis 연구에 대 한 그들의 대부분에서 얻은 데이터는 비디오 또는 비디오-뇌 파 모니터링 발작, 즉, 표지판 때문에 비정상적인 증상의 일시적 발생의 의존을 강조 하는 것이 중요 하다 과도 한 또는 동기 신경 활동 두뇌32에서. Pilocarpine 치료 동물 실험을 준비할 때 고려해 야 하는 electrographic 발작의 몇 가지 특성을 확인 하 고 있습니다. 자발적인 발작 뒤에 자주 뇌 파 interictal 스파이크3 우울된 활동 하 고 클러스터33,34에서 발생. 가짜 운영된 비 간 질 동물 발작 같은 활동35 전시 수 있습니다 따라서 뇌 파 기록 평가 대 한 매개 변수는 표준된36 여야 고, 만약에 가능 하다 면, microdialysis 세션의 타이밍 잘 정의 되어야 합니다. 마지막으로, 우리는 매우 좋습니다 전문가의 국제 리그 간 질 반대와 미국 간 질 학회 그들의 아주 최근 보고서37에 의해 제시 된 원리와 방법론 표준 비디오-뇌 파 모니터링 제어 성인 설치류에 대 한 ,38.
여기, 우리 microdialysis 조미료 및 간 질 동물에서 장기 비디오-뇌 파 기록 및 그들의 분석에서 dialysate HPLC에 의해 동시에 aspartate의 설명. 우리 하나 최상의 결과 위해 처리 해야 하는 프로토콜의 중요 한 단계를 강조 합니다.

<table><tbody><tr><td>3채널 2연전극</td><td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA</td><td>MS333/3-B/SPC</td><td>재료</td></tr><tr><td>가이드 cannula</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml;, Sweden</td><td>MAB 4.15.IC</td><td>재료</td></tr><tr><td>수지 KK2 Plastik</td><td>Elettra Sport, Lecco, Italy</td><td>KK2</td><td>재료</td></tr><tr><td>Super Attack gel Loctite</td><td>Henkel Italia Srl, Milano, Italy</td><td>2047420_71941</td><td>재료</td></tr><tr><td>Imalgene-Ketamine</td><td>Merial, 툴루즈, 프랑스</td><td>221300288 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Sigma, Milano, Italy</td><td>X1251</td><td>Material</td></tr><tr><td>Isoflurane-Vet</td><td>Merial, 툴루즈, 프랑스</td><td>103120022 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td><td>Formevet, Milano, Italy</td><td>103703017 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td><td>MSD Italia, Roma, Italy</td><td>20891077 (AIC)</td><td>Material</td></tr><tr><td>simplex rapid dental cement</td><td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom</td><td>ACR811</td><td>Material</td></tr><tr><td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td><td>Shofu, Kyoto, Japan</td><td>PN1167</td><td>Material</td></tr><tr><td>probe clip holder</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml;, Sweden</td><td>p/n 100 5001</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>히스토아크릴&reg; Blue Topical Skin Adhesive</td><td>TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td><td>TS1050044FP</td><td>재질</td></tr><tr><td>발륨 10 mg/2 ml - diazepam</td><td>Roche, Monza, Italy</td><td>019995063 (AIC)</td><td>재질</td></tr><tr><td>1 mL 주사기, 25G 바늘</td><td>Vetrotecnica, Padova, Italy</td><td>11.3500.05</td><td>재질</td></tr><tr><td>랫 플렉시블 피드 니들 17G</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; 스웨덴</td><td>7206</td><td>재료</td></tr><tr><td>잔디 기술 장치</td><td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA</td><td>M665G08</td><td>장비 (AS40 증폭기, 헤드 박스, 상호 연결 케이블, 텔레팩터 모델 RPSA S40)</td></tr> <tr><td>모듈식 데이터 수집 및&nbsp; 분석 시스템 MP150</td><td>Biopac, Goleta, California, USA</td><td>MP150WSW</td><td>장비</td></tr><tr><td>디지털 비디오 감시 시스템</td><td>AverMedia Technologies, Fremont, California, USA</td><td>V4.7.0041FD</td><td>장비</td></tr><tr><td>미세 투석 프로브</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; 스웨덴</td><td>MAB 4.15.1.Cu</td><td>재료</td></tr><tr><td>미세투석 프로브</td><td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA</td><td>S-8010</td><td>재료</td></tr><tr><td>블록 히터</td><td>Grant Instruments, Cambridge, England</td><td>QBD2</td><td>장비</td></tr><tr><td>교반기</td><td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy</td><td>711</td><td>장비</td></tr><tr><td>주입 펌프</td><td>Univentor, Zejtun, Malta</td><td>864</td><td>설비</td></tr><tr><td>미세 보어 폴리에틸렌 튜빙</td><td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA</td><td>800/100/100/100</td><td>재질</td></tr><tr><td>파란색 튜빙 어댑터</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; 스웨덴</td><td>1002</td><td>재질</td></tr><tr><td>빨간색 튜브 어댑터</td><td>Agn Tho's, Lindig &ouml; 스웨덴</td><td>1003</td><td>재질</td></tr><tr><td>2.5 mL 주사기(22G 바늘 포함</td>) <td>Chemil, Padova, Italy</td><td>S02G22</td><td>재질</td></tr><tr><td>바이알 캡</td><td>Cronus, Labicom, Olomouc, Czech</td><td>Republic VCA-1004TB-100</td><td>재질</td></tr><tr><td>셉텀</td><td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA</td><td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL 셉텀</td><td>재질</td></tr><tr><td>하단 스프링이 있는 유리 인서트</td><td>Supelco, Sigma, Milano,</td><td>Italy 27400-U</td><td>Material</td></tr><tr><td>autosampler vial</td><td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy</td><td>C4013-2</td><td>Material</td></tr><tr><td>Smartline manager 5000 시스템 컨트롤러 및 탈기 장치</td><td>Knauer, Berlin, Germany</td><td>V7602</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>Smartline 1000 quaternary gradient pump</td><td>Knauer, Berlin, Germany</td><td>V7603</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>분광형광 검출기</td><td>Shimadzu, 교토, 일본</td><td>RF-551</td><td>장비</td></tr><tr><td>크로마토그로픽 컬럼</td><td>Knauer, Berlin, Germany</td><td>25EK181EBJ</td><td>재료</td></tr><tr><td>chromatogrphic pre-column</td><td>Knauer, Berlin, Germany</td><td>P5DK181EBJ</td><td>재료</td></tr><tr><td>이동상 용액 A</td><td>0.1M 인산나트륨 완충액, pH 6.0</td><td></td><td>용액</td></tr><tr><td>이동상 용액 B</td><td>40% 0.1M 인산나트륨 완충액, 30% 메탄올, 30% 아세토니트릴, pH 6.5</td><td></td><td></td></tr><tr><td>용액 링거 용액</td><td>조성(mM): MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td><td></td><td>용액</td></tr><tr><td>변형 링거 용액</td><td>조성(mM): MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA</td><td></td><td>용액</td></tr><tr><td>식염수</td><td>0.9% NaCl, ph 7.0</td><td></td><td>용액</td>으로 조정</tr> 자<tr><td>당 용액</td><td>10% 증류수</td><td></td><td>용액</td></tr></tbody></table>

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 microdialysis

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis은 동작 또는 병리학 (예를 들어, 발작의 특정 결과와 뇌 틈새 공간으로 확산 하는 신경학 활성 물질의 변화를 상관 관계가 확고 신경 과학 기법 대 한 간 질). 간 질을 공부, microdialysis 기술 단기 또는 장기 심지어 비디오-electroencephalography (뇌 파) 자발적인 발작 빈도, 심각도, 진행 및 클러스터링을 평가 하기 위해 모니터링 종종 결합 됩니다. 결합 된 microdialysis 뇌 파 여러 메서드 및 악기의 사용을 기반으로 합니다. 여기, 우리가 쥐 모델에서 간 질의 자연 역사의 여러 단계에서 시간이 지남에 모니터 조미료와 aspartate 유출 녹음 지속적 비디오 뇌 파 vivo에서 microdialysis를 수행. 결합 된 이렇게 페어링 신경 전달 물질 방출에 변화 질병 개발 및 진행의 특정 단계를 수 있습니다. Dialysate는 아미노산 농도 액체 크로마토그래피에 의해 결정 되었다. 여기, 우리가 설명 방법 및 개요 주 예방 조치 한 비보에 microdialysis 동안 해야한다-stereotaxic 수술에 특히 주의 microdialysis, 깊이 중 기저 및 높은 칼륨 자극 뇌 파 전극 뇌 파 기록 및 aspartate 및 조미료는 dialysate에 고성능 액체 크로마토그래피 분석. 이 방법을 적용할 수 있습니다 aspartate 및 두뇌에 조미료의 생리 적 농도의 변화를 유도 하는 약물 이나 질병의 다양 한 테스트. 적절 한 분석 분석 결과의 여부에 따라 그것은 사용할 수 있습니다 더 이상 뇌 파 기록을 동시에 채용 하는 경우 다른 수용 성 분자를 테스트 하.

프로브 복구
평균 복구 (즉, 유리병 솔루션의 동일 볼륨에 콘텐츠의 perfusate에 평균 아미노산 콘텐츠) 되었고 2 μ/min와 조미료 3 μ/분 6.32 ± 0.64의 유량에서 15.49 ± 0.42 .89 ± 0.36 %2의 흐름 율에 Μ/분 고 10.13 ± 0.51 aspartate cuprophane 막 프로브를 사용 하는 경우에 대 한 3 μ/분. 평균 복구 조미료 3 μ/분 6.55 ± 1.07의 2 μ/min 흐름 속도로 13.67 ± 0.42% 이었고 2 μ/min와 aspartate 3 μ/분 8.49 ± 0.15의 흐름 율 14.29 ± 0.62 %polyacrylonitrile 막 프로브를 사용 하는 경우 (그림 4A-4B). 그것은 명확 하...

여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

이 방법은 신경 질환의 자연사 동안 신경 화학의 변경과 같은 신경 과학의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 제안된 microdiasis EEG 기술의 주요 장점은 그러한 결합된 접근이 질병 발달 및 진행의 특정 단계 내에서 신경 전달물질 방출의 변화의 쌍을 허용한다는 것입니다. 패라데이 케이지 외부에 위치한 앰프를 켜는 것으로 시작합니다.EEG 소프트웨어를 열고 EEG 인수를 시작하고 연결되지 않은 케이블에서 생성된 EEG 신호를 관찰합니다. 다음으로, 한 손의 두 개의 뻗은 손가락 사이에 동물의 머리를 잡고 다른 자유 손을 사용하여 전극 받침대에 커넥터를 나사로 연결하여 테더링 된 EEG 기록 시스템에 동물을 연결합니다. 단일 동물의 전극 신호에 따라 증폭기의 각 채널에 증폭 계수를 설정하여 EEG 신호가 스케일에 있습니다.그런 다음 동물이 연구원의 직접적인 관찰하에 적어도 한 시간 동안 새로운 케이지를 탐험하게하십시오. 동물의 상품에 따라 케이블을 조정하고 케이블이 동물의 움직임과 누워 있는 자세를 방해하지 않도록 합니다. 마지막으로 비디오 카메라에서 올바른 이미지 프레임이 있는지 확인한 다음 비디오 EEG 녹화를 시작합니다.먼저 제조업체 사용자의 가이드에 따라 첫 번째 사용을 위해 미세 투석 프로브를 준비하고 링거의 솔루션으로 채웁니다. 그런 다음 FEP 튜브의 10 센티미터 길이 조각을 잘라 다른 색상의 튜빙 어댑터를 사용하여 프로브의 입구와 출구 캐뉼라에 연결합니다. 튜빙이 모든 연결에서 데드 스페이스없이 어댑터에 닿는지 확인합니다.동물의 머리를 단단히 잡고 핀셋을 사용하여 가이드에서 더미 캐뉼라를 제거합니다. 가이드 캐뉼라에 미세 투석 프로브를 삽입하고 모델링 점토를 사용하여 캐뉼라를 더욱 단단히 굳게 합니다. 다음으로, 동물을 테더드 EEG 레코딩 시스템에 연결한다.그런 다음 동물을 플렉시 유리 실린더에 넣고 새로운 환경을 탐험하게하십시오. 깨어 자유롭게 움직이는 쥐의 움직임을 따르십시오. 그런 다음, 튜브 어댑터를 사용하여 링거의 용액을 포함하는 무딘 22 게이지 바늘과 프로브의 입구를 2.5 밀리리터 주사기에 연결합니다.링거 용액 1밀리리터를 10초 만에 프로브에 밀어 넣고 2.5 밀리리터 주사기의 피스톤을 지속적으로 밀어넣습니다. 프로브가 사용할 준비가 된 시기를 의미하려면 콘센트에 나타나는 액체의 방울을 확인합니다. 마지막으로, 링거의 용액으로 어댑터를 튜브링하여 FEP 튜빙에 연결된 2.5 밀리리터 주사기를 채우고 주입 펌프에 장착합니다.분당 두 개의 마이크로리터에서 펌프를 시작하고 밤새 실행합니다. 비디오 EEG를 통해 샘플 수집 3시간 전에 발작이 없는 것을 확인한 후, 링거의 솔루션으로 채워진 FEP 튜빙 주사기를 운반하는 펌프를 중지하십시오. 100 밀리머 칼륨 용액을 포함하는 수정 된 링거의 솔루션으로 채워진 튜브 어댑터가있는 FEP 튜빙에 연결된 2.5 밀리리터 주사기의 또 다른 세트를 마운트하십시오.분당 두 개의 마이크로리터에서 펌프를 시작하고 실행합니다. 시스템에 기포가 없는지 확인하고 튜브가 모든 연결에서 데드 스페이스가 없는 어댑터에 닿는지 확인합니다. 그런 다음 출구에 나타나는 액체의 방울을 확인하여 프로브가 사용할 준비가 되었는지를 확인합니다.다음으로 링거 용액으로 채워진 주사기의 FEP 튜브를 각 동물의 프로브 입구 캐뉼라에 연결하고 콘센트 끝에 액체 방울이 나타나는 것을 기다립니다. 프로브의 콘센트를 FEP 튜브에 연결하여 테스트 튜브의 수집으로 이어집니다. FEP 튜브를 0.2 밀리리터 테스트 튜브에 천공 캡으로 삽입하고 모델링 점토 조각으로 고정하여 튜브가 제자리에 유지되도록 하십시오.시스템을 평형화하기 위해 샘플을 수집하지 않고 60 분 동안 두 개의 마이크로 리터에서 펌프를 실행 한 후, 기준 조건하에서 5 연속 30 분 투석 샘플을 수집하고 얼음에 샘플을 저장합니다. 10분 후, 100밀리머 칼륨 링거용액을 함유한 주사기에서 튜브를 일반 링거의 솔루션으로 전환하고 펌프를 실행하도록 합니다. 제5차 후평형 투석을 수집한 후 1시간 동안 10분마다 20개의 미세리터 분수를 수집합니다.그런 다음 30분 짜리 투석 샘플을 추가로 수집하고 펌프를 중지합니다. 마지막으로, HPLC 분석 전까지 실험 후 샘플을 영하 80도에서 저장합니다. 실험이 완료되면 사용된 미세 투석 프로브를 증류수로 헹구고 다음 사용까지 깨끗한 증류수로 채워진 유리병에 보관하십시오.마지막으로, 증류수로 전체 미세 투약 설정을 헹구고 70 %의 에탄올이 뒤따릅니다. 에탄올을 공기로 대체하고 멸균 환경에 설치하십시오. 이들은 질병의 만성 단계 도중 통제와 간질 쥐의 해마에서 기록된 대표적인 EEG 흔적입니다.대조쥐에서는 EEG 변경이 관찰되지 않았으며, 동기화된 발록실 간질 활성은 간질 쥐의 행동 발작 전후 약 500밀리초 를 관찰하였다. 만성 간질 쥐에서 발견되는 기저 조미료 농도는 대조군 동물보다 상당히 높았다. 높은 칼륨은 대조군 쥐에서 약 30 분 동안 및 만성 간질 쥐에서 약 60 분 동안 글루타민산염의 추가 방출을 불러 일으켰습니다.이 절차를 시도하는 동안 장치로 이식 된 동물은 장기간 실험 과정에서 잃어 버리기 쉽기 때문에 가벼운 헤드 세트와 충분히 긴 케이블을 사용하여 동물의 이동성을 방해하지 않도록하는 것이 중요합니다. 적절한 분석 에세이의 가용성에 따라, 이 방법은 EEG 기록을 동시에 사용할 때 뇌의 다른 가용성 분자를 테스트하는 데 더 사용될 수 있다. 그것의 발달 후에, 이 기술은 간질학의 필드에 있는 연구원이 측두엽 간질의 경우에 흥분성 신경 전달에 있는 변경에 통찰력을 제공하기 위하여 허용했습니다.이 비디오를 시청 한 후, 우리는 당신이 자유롭게 움직이는 간질 쥐에서 깊이 전극 EEG 기록과 함께 생체 균에서 수행하는 방법에 대한 더 나은 이해를 해야합니다 믿습니다.

microdialysis-excitatory-amino-acids-during-eeg-recordings-freely

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 쥐의 척수 절편에서 신경 네트워크 활동을 연구하기 위한 미세 전극 어레이 기반 분석을 보여줍니다. 먼저, 슬라이스의 표재성 등쪽 뿔(SDH)의 전기생리학적 활성을 기록합니다. 그런 다음, 탈분극을 연장하기 위해 칼륨 채널 억제제가 도입되어 뉴런 네트워크 전반에 걸쳐 동기 리듬 활성을 일으킵니다.

microelectrode array-based assessment of neuronal networks in mouse spinal cord slices(쥐 척수 절편에서 신경 네트워크에 대한 Microelectrode Array-based Assessment of Neuronal Networks in Mouse Spinal Cord Slices)

이 비디오는 간질에 의한 쥐의 간질 발작에 대한 뇌파 (EEG) 기록을 보여줍니다. 복부 해마에 전극을 이식한 쥐를 EEG 기록 시스템에 연결하고 플렉시글라스 챔버에 넣습니다. 쥐는 발작 발생을 모니터링하기 위해 뇌 활동이 기록되는 동안 자유롭게 움직일 수 있습니다.

간질에 의한 쥐의 간질 발작에 대한 뇌파 기록

출처: Soukupová, M., et al. 자유롭게 움직이는 쥐에서 EEG 기록 중 흥분성 아미노산의 미세 투석. J. Vis. Exp. (2018)이 비디오는 만성 간질 유도가 있는 쥐의 세포외 흥분성 신경전달물질 수치 평가를 보여줍니다. 미세 투석 프로브를 뇌에 이식하고 뇌파검사(EEG)를 사용하여 발작이 없음을 확인한 후, 간질성 쥐의 상승된 신경전달물질 수치를 평가하기 위해 세포외액을 수집합니다. 그런 다음 고칼륨 용액을 주입하여 신경 흥분성을 유지하고 신경 전달 물질의 방출을 증가시키고, 흥분성 신경 전달 물질에서 칼륨 유도 피크를 평가하기 위해 샘플을 수집합니다.

Assessment of Excitatory Neurotransmitter Levels in Chronic Epilepsy-Induced Rats

출처: Moore, J. D., et al. Juxtacellular Monitoring and Localization of Single Neurons within Sub-cortical Brain Structures of Alert, Head-Arrest Rats(경보, 머리 구속 쥐의 피질하 뇌 구조 내 단일 뉴런의 모니터링 및 국소화). J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 구속되고 깨어 있는 쥐의 병치세포 기록 및 염색 방법을 보여줍니다. 이 절차에는 뉴런의 신호를 기록하고 염료를 주입하여 기록 부위의 위치를 정확하게 파악하는 작업이 포함됩니다. 이 기술을 사용하면 신경 활동을 뇌의 해부학적 구조에 정확하게 매핑할 수 있습니다.

깨어 있는 쥐의 신경 활동을 정확하게 매핑하기 위한 Juxtacellular Recording and Staining 

우리는 여기서 인간의 간질 대뇌 피질 조직의 다중 전극 배열 녹음을 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 간기 및 발작 사건의 간질 조직 절제술, 슬라이스 준비 및 다중 전극 배열 기록은 구체적으로 입증된다.

인간의 간질 수술 후 두피 조직의 다중 전극 어레이 레코딩

여기서는 토닉과 효소 결합 된 미세 배열 (MEA)를 사용하여 생체 내 세포 외 글루타메이트 phasic 변화를 측정하는 공간적 및 시간적 정확한 방법에 대한 설치 소프트웨어 탐색 및 데이터 분석을 기술한다.

효소 기반의 바이오 센서를 사용하면 알츠하이머 병 마우스 모델에서 토닉과 Phasic이 품목을 측정하는

이 연구에서는 piglets. 에서 신경 전달 물질 활동 vivo에서 효소 기반 microelectrode 배열 (MEA) 기술의 새로운 사용 가설 그 조미료 dysregulation 마 취 neurotoxicity의 메커니즘에 기여 했다. 여기, 우리 마 취 유도 neurotoxicity의 메커니즘 연구 나 기술에 맞게 프로토콜을 제시.

마 취 유도 Neurotoxicity 그대로 돼지 뇌에서의 연구에 대 한 Microelectrode 배열 기술의 적응

우리는 microelectrode 배열을 사용 하는 설치류 뇌 조각에 4 aminopyridine 이용한 epileptiform 활동의 기록 및 전기 변조를 수행 하는 방법을 보여 줍니다. 사용자 지정 녹음 실 조직 생존 연장된 실험 세션에 걸쳐 유지합니다. 전극 매핑 라이브 고 자극 쌍의 선택 사용자 지정 그래픽 사용자 인터페이스에 의해 수행 됩니다.

녹음 및 Microelectrode 배열에 결합 하는 설치류 뇌 조각에 Epileptiform 활동의 변조

척수 등쪽 경적에서 네트워크 수준의 nociceptive 활성을 조사하기 위한 마이크로전극 어레이 기술과 4-아미노피리딘-유도된 화학적 자극의 조합된 사용이 개략적으로 설명된다.

마이크로전극 어레이를 이용한 척추 노셉티브 회로에서의 네트워크 활동 기록

이 프로토콜은 자유롭게 움직이는 의식이 있는 마우스의 세포외 전기생리학적 특성을 밝히기 위해 운동 피질(MC)에서 세포외 기록 방법론을 설명하고, 관심 행동의 기저에 있는 네트워크 신경 활동을 평가하는 데 유용한 국소전위(LFP) 및 스파이크의 데이터 분석을 설명합니다.

자유롭게 움직이는 마우스의 다채널 세포외 기록

이 프로토콜은 자유롭게 움직이는 설치류 EEG를 기록하기 위한 안정적이고 쉽게 접근할 수 있는 시스템을 만들기 위해 개발되었습니다.

자유롭게 움직이는 마우스의 만성 다중 사이트 뇌파 기록을 위한 비용 효율적이고 최소 침습적 프로토콜

학습하세요 자유롭게 이동하는 쥐에서 뇌파 기록과 함께 흥분성 아미노산의 마이크로다이얼리시스 방법을. 이 기술은 뇌전증의 신경전달물질 역학과 발작 메커니즘 연구에 활용됩니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

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