Name: 창 자-혈액 장벽 및 간 대사 Microbiota 제품의 평가 위한 Vivo에서 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: 배우세요 쥐에서 문맥 정맥 채혈을 이용한 장-혈액 장벽 투과성 직접 측정 방법. 이 기술은 간 및 신장 기능의 영향을 최소화하여 생체 내 장벽 기능을 정확히 평가할 수 있습니다.

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작품은 과학과 고 등 교육 공화국 폴란드의 지원, 다이아몬드 부여 no: DI2017 009247.

실험 과학적인 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 관한 지침 2010/63 EU에 따르면 남성 Wistar 교토 쥐에 수행 하 고 난 바르샤바에서 로컬 Bioethical 위원회에 의해 승인 했다.
1. 삽입 Intraintestinal 관리에 대 한 라인의
참고: 여기 카 테 터를 사용 하 여 마커의 intracolonic 관리를 제안 한다. 그것은 구강 관리 또는 gavage 소화 관 예 위 또는 십이지의 다양 한 수준에서 수정할 수 있습니다. 일회용 수술 복, 수술 가운, 후드와 장갑를 포함 하 여 사용 하 고 절차 1-6 동안 수술 (바늘, 등)에 사용 된 날카로운 도구에 관련 된 안전 조치에 따라 확인을 기억 하십시오.
<ol><li>빠른 동물 수술 전에 하룻밤. 일반 마 취, 즉, 우 레 탄 1.5 g/kg bw i.p. 평가 적절 한 anesthetization의 주입에 의해 취득 하는 종 및 각 막 반사의 부족에 의해 고 발가락-핀치 및 꼬리 핀치 메서드에서 동안 모든 절차를 수행 합니다.</li>
	<li>소아 폴 리 카 테 터 10 층 (8 층)를 사용 하 여 저 승 카 테 터로. 콜론 (약 8 cm)에 삽입 될 부분을 나타내기 위해 카 테 터를 표시 합니다.</li>
	<li>콜론으로 카 테 터를 삽입 하기 전에 항문 지역 및 직장에서의 자 콘텐츠를 확인 합니다. 자 있으면 직장 영역을 마사지 하 여 항문을 빈.</li>
	<li>카 테 터를 따라 윤활제 (예: 글 리세 린 또는 바 셀 린)를 넣어. 항문 및 윤 활 유에와 함께 그 주변을 축 축 하 게.</li>
	<li>외부 항문 괄약근을 통해 가이드 와이어 약 8 cm와 카 테 터를 삽입 합니다. 천천히 앞으로 뒤로 및 원형 움직임을 확인 합니다. 참고: 카 테 터를 삽입 하는 동안 복 부 촉진 하 여 카 테 터의 위치 확인에 유지 합니다.</li>
</ol>2. 열 등 한 베 나 정 맥 도관 법
<ol><li>사 타 구니에 모피를 면도. 또는 3 번 알코올과 povidone 요오드와 함께 피부를 소독 하 고 외과 커튼으로 사 타 구니 영역을 커버 합니다.</li>
	<li>대 퇴 동맥에서 맥 박을 느낄 하 고 맥 박을 만져 서 장소에 약 2.0 c m의 길이 대 한 경도 피부를 잘라 하려고 합니다.</li>
	<li>근 막과 근육 혈관 번들 시각화를 해 부.</li>
	<li>대 퇴 정 맥 혈관 번들에서 해 부: 첫 번째 신경, 후 대 퇴 동맥 그리고 정 맥. 참고: 대 퇴 정 맥의 작은 가지 쉽게 손상 될 수 있습니다, 출혈 생산 이후 neurovascular 뭉치의 해 부 기간 동안 주의 해야 합니다.</li>
	<li>대 퇴 정 맥에 2 개의 합자를 넣어. 매듭을 아직 연결 하지 않습니다. 바늘 홀더를 가진 인접 합자의 끝을 잡아.</li>
	<li>정 맥의 근 위 부분을 위쪽으로 보유자와 합자 끝 조심 스럽게 빼냅니다. 정 맥은 혈액으로 가득 될 때까지 기다려야 하 고 원심 매듭.</li>
	<li>작은 절 개를 만들기 (ca. 1 m m) 매듭 및 인접 합자 사이 정 맥에 microsurgical가 위를 사용 하 여. 끝이 굽은 핀셋 이나 바늘을 사용 하 여 카 테 터를 삽입 합니다. 참고: 정 맥 펑크 고 테에 대 한 가이드로 바늘의 구부려 진 끝을 사용 합니다. 카 테 터를 삽입 하는 동안 인접 합자를 풉니다. 6-7.0 cm에 대 한 카 테 터를 삽입 합니다.</li>
	<li>두 개의 단일 수술 매듭을 가진 대 퇴 정 맥에 카 테 터를 보호 합니다. 뿐만 아니라 인접 합자 넥타이.</li>
	<li>주사기로 피를 뽑아서 하 여 카 테 터의 patency를 확인 하십시오. Heparinized 염 분 (100 단위/mL)의 0.3 mL와 함께 테 린스.</li>
	<li>하나의 바늘의 2 개의 층으로 수술 상처를 닫습니다.</li>
</ol>3. 포털 정 맥 도관 법
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58456/58456fig1.jpg"> 그림 1 : 포털 테. 포털 카 테 테 르 바늘 OD의 구성: 약 25.0 m m [A], 유연한 폴리우레탄 테 OD의 길이가 0.9 m m: 0.025", 길이 약 100.0 m m [B], 테 OD의 유연한 폴 리 에틸렌 팁: 0.040", 약 15.0 m m 긴 [C], 플러그 [D 그리고 길이 100.0 m m [E]의 합자 3/0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58456/58456fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol><li>그림 1에 따라 포털 카 테 터를 준비 합니다.<ol>
<li>바늘의 컷 끝 (OD: 9 m m) OD 폴리우레탄 테로: 0.025".</li>
		<li>합자 3/0 바늘 및 카 테 터의 교차점에 넥타이. 참고: 합자의 긴 부분 길이 6 m 이상 인지 확인 합니다.</li>
		<li>카 테 테 르 세의 끝: 0.025"폴 리 에틸렌 테 세로: 0.040".</li>
		<li>금속 또는 플라스틱 플러그와 카 테 터를 닫습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>중간 개복 술<ol>
<li>복 부에 모피를 면도, 또는 3 번, 알코올과 povidone 요오드와 함께 피부를 소독 하 고 외과 커튼으로 지역을 커버 합니다.</li>
		<li>배꼽에는 흉 골의 칼에서 경도 피부를 잘라.</li>
		<li>흰색 라인을 따라 복 부 벽의 근육을 잘라.</li>
		<li>xiphoid 연골 두 컷 사이 Y 형태로 rostrally 컷을 확장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>포털 정 맥 절 개<ol>
<li>식 염 수로 수술 면봉 축</li>
		<li>맹, 오름차순 가로 결 장 및 작은 창 자 루프 exteriorize 창 자는 mesentery의 루트를 노출 하는 왼쪽 위에. 참고: 건조에서 내장을 보호 하기 위해 생리 식 염 수를 적신 거 즈로 내장을 커버.</li>
		<li>포털 정 맥 노출, 양쪽 또는 위쪽 moistened 면봉으로 횡 경 막 쪽으로 신중 하 게 간장 돌출부를 이동 합니다.</li>
		<li>(간장 hilum, 길이가 약 5 mm)에서 mesentery로 처리 되지 않는 포털 정 맥의 일부를 지역화 하 고 포털 정 맥에서 합자 3/0 (15 ㎝ 길이)를 전달 합니다. 참고: 합자를 배치 하면서 조직 손상 으로부터 보호, 축 축 하 게 생리 염 분 해결책으로 합자.</li>
		<li>집게와 합자의 끝을 클램프 하 고 배를 안정 시키기 위해 부드럽게 그것을 조이십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>삽입 및 카 테 터의 안정화<ol>
<li>포털 정 맥의 무료 부분 아래 포털 테의 합자의 긴 부분을 통과 하 고 테 포털 정 맥 바로 옆에 위치 하 고 그렇게 그것을 당겨.</li>
		<li>위 mesenteric 정 맥 위 mesenteric 정 맥 및 포털 정 맥의 교차점 아래 3 m m로 바늘을 삽입 합니다. 30 ° 각도로 하 고, 정 맥으로 입력 한 후 바늘을 잡고, 각도 줄일 고 포털 정 맥을 동시에 거의 수평으로 바늘을 사전. 주: 약 6-7 m m의 길이 대 한 바늘을 삽입. 안정화 합자 부드럽게 카 테 터를 삽입 하는 동안 포털 정 맥을 강화 한다.</li>
		<li>바늘이 삽입 하는 곳에 조직 접착제의 1-2 방울을 적용 합니다. 간 커버 면봉을 제거 합니다.</li>
		<li>복 부 구멍으로 내장을 다시 넣어.</li>
		<li>데워 염으로 내장을 축 축 하 고 moistened 멸 균 거 즈로 그것을 커버.</li>
		<li>카 테 터의 patency 확인 하 고 린스 heparinized 염 분 (100 단위/mL)의 0.3 mL와 테. 참고: 정 맥 혈액 테에서 자발적으로 backflows.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술의 결말<ol>
<li>5 분 후, 내장 및 연동 운동 색상 검사, 적절 한 mesenteric 혈액 흐름 유지 됩니다 있는지 확인 하십시오.</li>
		<li>3 바늘으로 복 부 캐비티를 닫습니다: 연속, 흡수 되기 쉬운 봉합 사;-복 벽 근육의 내부 층으로 복 벽 복 부 벽-연속, 흡수 되기 쉬운 봉합 사;의 나머지 근육 피부와 피하 조직-단일, 비 흡수 봉합. 참고: 배꼽 주변 카 테 터의 원심 부분을 Exteriorize.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 문맥 혈액 샘플링
<ol><li>때때로 사용; 특정 테스트 프로토콜에 따라 샘플 포털 정 맥 혈액 표 1을 참조 하십시오.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>짧은 프로토콜</td>
			<td>긴 프로토콜</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 -기준선 (전에 intracolonic 관리)</td>
			<td>t0 -기준선 (전에 intracolonic 관리)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 -intracolonic 관리 후 5 분</td>
			<td>t1 -intracolonic 관리 후 30 분</td>
		</tr>
<tr>
<td>t2 -intracolonic 관리 후 30 분</td>
			<td>t2 -intracolonic 관리 후 60 분</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 포털 혈액 샘플링 프로토콜 창 자 침투성 평가 대 한.
참고: 연속 혈액 샘플링 사이의 시간 주로 시험된 물질의 생체 이용률과 관리 (결 장, 위, 등)의 사이트에 따라 달라 집니다.
<ol start="2"><li>포털 카 테 터 플러그를 열고 혈액의 흐름을 자유롭게 하자.</li>
	<li>사용 주사기 (vol. 2 mL) 및 무딘 바늘 OD: 0.9 m m. 더 이상 0.7 mL 혈액의 수집.</li>
	<li>Heparinized 염 (100 단위/mL)의 0.3 mL와 함께 테 린스 하 고 카 테 터 플러그를 닫습니다.</li>
</ol>5. 열 등 한 베 나 정 맥 혈액 샘플링
<ol><li>때때로 사용; 특정 테스트 프로토콜에 따라 샘플 열 등 한 베 나 정 맥 혈액 표 2를 참조 하십시오.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>문맥</td>
			<td>열 등 한 베 나 카바</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 -기준선 (전에 intracolonic 관리)</td>
			<td>t0 -기준선 (전에 intracolonic 관리)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 -intracolonic 관리 후 30 분</td>
			<td>t1 -intracolonic 관리 후 30 분</td>
		</tr>
</tbody></table>표 2: 프로토콜 간 허가 측정을 위한 샘플링 및 창 자-포털 간 조직의 혈액 혈액 통로 추적 하는 혈액의.
<ol start="2"><li>열 등 한 베 나 정 맥 카 테 터 플러그를 열고 혈액의 흐름을 자유롭게 하자.</li>
	<li>더 이상 0.7 mL 주사기를 사용 하 여 혈액의 수집 (vol. 2 mL) 깨진 바늘 OD: 0.9 m m.</li>
	<li>0.2-0.3와 테 린스의 mL heparinized 염 분 (100 단위/mL)와 카 테 터 플러그를 닫습니다.</li>
</ol>6입니다. 창 자 침투성 표식 관리
<ol><li>가이드 와이어를 제거 하 고 살 균 물 (보통 1 mL 하지만 삽입 하기 전에 체크 실제 풍선 크기)의 적절 한 볼륨을 사용 하 여 저 승 카 테 테 르 풍선 팽창. 참고: 풍선 직경 1 cm 넘지 말아야 한다.</li>
	<li>(약 15% 경사) 콜론에서 관리 솔루션의 유출의 위험을 최소화 하기 위해 아래 쥐 머리를 놓습니다.</li>
	<li>천천히 테스트 물질을 관리 (예: trimethylamine, 100 mg/kg bw) 저 승 카 테 터에 배수 장치 포트를 사용 하 여. 참고: 볼륨 관리 솔루션의 0.75 mL의 항문에서 관리 솔루션의 유출을 방지 하기 위해 0.5 mL/min의 이송 속도 초과 하지 마십시오.</li>
	<li>10 분 후 풍선을 카 테 터를 빼 다.</li>
	<li>열 등 한 베 나 카바와 사용; 특정 테스트 프로토콜에 따라 문맥에서 샘플 혈액 표 1과 표 2를참조 하십시오.</li>
	<li>승인 된 방법을 통해 동물 안락사</li>
</ol>7입니다. 간 정리의 계산
<ol><li>익스프레스 간 통관, 포털 혈액 농도 열 등 한 베 나 정 맥 혈액 농도 차이 의해 또는 포털 혈액 농도 (1-(열 등 한 베 나 정 맥 농도에 열 등 한 베 나 정 맥의 비율에 의해 간장 추출으로 이해 / 포털 정 맥 농도)).</li>
</ol>8. 시험 물질 농도 n 혈액 샘플의 평가
<ol><li>테스트 물질 테스트 방법론에 따라, 적절 한 실험실 절차 (원심, 등등)에 샘플을 적용. 제안 된 프로토콜에서 우리 평가 TMA/TMAO SCFA 농도 트리플 4 극 자 질량 분석으로 결합 하는 액체 크로마토그래피를 사용 하 여. 보충 자료에는 방법에 대 한 자세한 설명을 찾아 주시기 바랍니다.</li>
</ol>

<ol><li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li>
<li>Keita, A. V., Soderholm, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+barrier+and+its+regulation+by+neuroimmune+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">The intestinal barrier and its regulation by neuroimmune factors.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 22 (7), 718-733 (2010).</li>
<li>Farhadi, A., Banan, A., Fields, J., Keshavarzian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier%3A+an+interface+between+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier: an interface between health and disease.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (5), 479-497 (2003).</li>
<li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+rats+is+associated+with+an+increased+permeability+of+the+colon+to+TMA%2C+a+gut+bacteria+metabolite%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypertension in rats is associated with an increased permeability of the colon to TMA, a gut bacteria metabolite.</a> PloS one. 12 (12), e0189310(2017).</li>
<li>Fujii, H., Nakai, K., Fukagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+oxidative+stress+and+indoxyl+sulfate+in+progression+of+cardiovascular+disease+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Apheresis+and+Dialysis%3A+Official+Peer-Reviewed+Journal+of+the+International+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Dialysis+Therapy%22%5BJournal%5D)">Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis: Official Peer-Reviewed Journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy. 15 (2), 125-128 (2011).</li>
<li>Tomasova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracolonic+hydrogen+sulfide+lowers+blood+pressure+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%3A+Biology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intracolonic hydrogen sulfide lowers blood pressure in rats.</a> Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 60, 50-58 (2016).</li>
<li>Brahe, L. K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+butyrate+the+link+between+diet%2C+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+Reviews%3A+An+Official+Journal+of+the+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li>
<li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimethylamine-N-oxide%3A+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Canadian+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li>
<li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole+and+indoxyl+sulfate%2C+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan%2C+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li>
<li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li>
<li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Alternatives+to+Laboratory+Animals%3A+ATLA%22%5BJournal%5D)">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li>
<li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li>
<li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Surgery%22%5BJournal%5D)">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li>
<li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+%28TMAO%29+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li>
<li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li>
<li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%3A+An+Official+Publication+of+the+Infectious+Diseases+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li>
<li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li>
<li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li>
<li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

설명 직접 vivo에서, GBB 침투성 측정 방법을 유지 closetophysiological 조건 위장 시스템 (장 혈액의 흐름을 유지), 그리고 간, 신장 기능 영향을 거의 받지 않습니다.
이 기술의 중요 한 단계는 포털 카 테 터의 삽입 이다. 이 수행 되어야 합니다 부드럽게 하 고 결정적으로 같은 시간에. 온화 하 고, 짧은 출혈이 문맥;의 올바르게 수행된 펑크에서 발생할 수 있습니다. 그러나, 그것은 그릇에 바늘이 삽입 될 때 중지 됩니다. 지속적인 출혈 포털 정 맥 천공을 나타냅니다. 촉진 하기 위해 카 테 터 삽입, 포털 정 맥 잘 드러내 야 한다. 내장, exteriorizing 후 mesenteric 루트 잘 드러낼 때, 상단 mesenteric 정 맥도 볼 수 있어야 (mesenteric 정 맥은 문맥에 cranially 입력). 포털 정 맥 측으로 이동 하는 간 엽 일반적으로 적용 됩니다. 때문에 카 테 터의 움직임은 포털 정 맥 파열 및 출혈...

창 자-혈액 장벽 (GBB)로 알려진 장 배리어 영양소1의 흡수를 허용 하는 동안 유해한 화합물의 통행을 제한 하기 위하여 혈 류에서 창 자 루멘을 분리 하는 복잡 한 멀티 레이어 시스템입니다. 그것은 이루어져 있다 3 개 주요 레이어: 점액 레이어, 상피와 lamina propria.
수많은 요인 GBB 무결성 및 기능2영향을 미칠 수 있습니다. 그것은 보였다 GBB 위장과 extraintestinal 질환, 심혈 관 및 대사 질환3, 혈 류4직감 세균 대사 산물의 증가 흐름으로 이어질 수 있는 포함 하 여 교란 된다. 창 자 세균 대사 산물의 증가 침투 전체 유기 체의 기능에 영향을 수 있습니다. 최근 연구 결과 순환 시스템 기능5,6,7 indoles, H2S, 짧은 사슬 지방산 (SCFA), trimethylamine N 산화물 등의 세균성 대사 산물의 상당한 영향을 표시 하는 예를 들어 ,89. 마지막으로, 그것 증가 GBB 침투성 형태학 및 기능 변경 창10과 관련 된 심혈 관 및 대사 질환의 마커로 봉사 수 있습니다 제안 되었습니다. 따라서, 세균 대사 산물의 창 자-포털 간 조직의 혈액 혈액 통로 추적 모두 기본 및 임상 과학에 대 한 관심이 있을 수 있습니다.
GBB 침투성의 평가 대 한 일반적으로 이용한 실험 방법 수행 있다 생체 외에서 절제 장 세그먼트, 점 막, 또는 인공 막11,12의 파편을 사용 하 여. 그 방법의 정확도 GBB의 적절 한 작동 하는 것이 지속적인 장 혈에서는 사실에 의해 손상 됩니다. 다른 한편으로, 사용할 수 있는 비보에 방법 소변의 평가 또는 외 인 마커13의 주변 혈액 농도에 근거한 다. 그러나, 간 대사 뿐만 아니라 신장 기능, 즉, 사 여과 속도 관 배설에 의해 외 인 화합물의 주변 혈액과 소변 농도 영향을, 즉, 물질 대사를 먼저 통과. 두 매개 변수는 GBB 함수 별도로 연구 주제 사이 크게 달라질 수 있습니다.
이 종이 포털 혈액 샘플링을 사용 하 여 쥐에서 GBB 침투성의 직접 측정을 설명 합니다. 이 비보에 메서드 장 혈액 흐름을 유지 하 고 간 및 신장 기능에 의해 영향을 거의 받지 않습니다. 설명한 방법은 사용 되지 않습니다 일반적으로, 아마도 일부 방법론 어려움 때문에. 우리는 문맥 및 간 정 맥 합류 보다 열 등 한 베 나 정 맥 도관 법 자세히 설명합니다. 문맥 및 열 등 한 베 나 정 맥에서 혈액 샘플링 GBB 침투성 및 간 허가의 평가 뿐만 아니라 분자의, 창 자 세균 대사 산물 또는 의약품 등의 용기-포털 간 조직의 혈액 혈액 통로의 추적을 허용 한다. 우리는 또한 우리의 실험실에서 테스트 하는 방법의 몇 가지 응용 프로그램을 제시. TMA, 직감 세균 대사 산물, TMA의 간 정리의 평가 및 평가 SCFA의 창 자-포털 간 조직의 혈액 혈액 통로의 콜론 침투성의 평가 포함 됩니다.
창 자-혈액 장벽 침투성을 평가 하려면 다음 프로토콜 단계 따라야 한다, 순서 대로: 1 (intraintestinal 행정에 대 한 라인의 삽입), 3 (포털 정 맥 도관 법), 4 (문맥 혈액 샘플링 ), 6 (창 자 침투성 표식 관리), 4.
간 통관 및 창 자-포털 간 조직의 혈액 혈액 통로 평가 하려면 다음 프로토콜 단계 따라야 한다, 순서 대로: 1 (intraintestinal 행정에 대 한 라인의 삽입), 2 (열 등 한 베 나 카바 도관 법), 3 (포털 정 맥 도관 법), 4 (문맥 혈액 샘플링), 5 (열 등 한 베 나 정 맥 혈액 샘플링), 6 (창 자 침투성 표식 관리), 4, 5, 7 ( 간 정리의 계산).

<table><tbody><tr><td>바늘 OD: 9 mm</td><td>Becton Dickinson&nbsp; 미국</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 카테터 ID: 0.025", OD: 0.040"&nbsp;</td><td>과학 상품, Inc.</td><td>#BB520-40</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 카테터 ID: 0.012", OD: 0.025"&nbsp;</td><td>과학 상품, Inc.</td><td>#BB520-25</td><td></td></tr><tr><td>C-Flex 튜빙, 불투명 화이트 1/50"ID x 1/12 " OD&nbsp; &nbsp;</td><td>콜 - 파머 악기 (주)</td><td>06424-59</td><td></td></tr><tr><td>소아용 폴리 카테터(크기 10F 또는 8F)&nbsp;</td><td>Sigmed</td><td>0000 80305</td><td></td></tr><tr><td>수술용 합자 3/0</td><td>Yavo Sp. Z o.o.&nbsp;</td><td>P48JE</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 수술용 봉합사 - 폴리글락틴 910 4/0</td><td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td><td></td><td></td>152336</tr><tr><td>조직 접착제 - 록타이트 454시아노아크릴레이트 접착제</td><td>록타이트;</td><td></td><td></td>1370127</tr><tr><td>Povidone 요오드</td><td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td><td>4449 11</td><td></td></tr><tr><td>Heparin - Heparinium WZF&nbsp;</td><td>WZF 폴파 S.A.</td><td>02BK0417</td><td>생리학적 식염수 글리세린으로 10배 희석</td></tr><tr><td>86%</td><td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td><td>5.90999E+12</td><td>대장 카테터 삽입에서 윤활제 역할을 함</td></tr><tr><td>Xylocaine 2%</td><td>AstraZenca&nbsp;</td><td></td><td></td>9941342</tr><tr><td>우레탄</td><td>시그마-알드리치(머크)&nbsp;</td><td>U2500-500G</td><td></td></tr><tr><td>트리메틸아민 용액 45%</td><td>시그마-알드리치(Merck)&nbsp;</td><td>92262-1L</td><td></td></tr><tr><td>주사기 2 mL</td><td>B.Braun Melsungen AG</td><td>4606027V</td><td></td></tr><tr><td>식염수 250 mL</td><td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z oo</td><td>15LL707WL</td><td></td></tr><tr><td>외과 용 가위, 직선, 길이 115mm, 4 1/2 "뭉툭한 끝</td><td>Braun</td><td>NS-010-115-PKM</td><td></td></tr><tr><td>동맥 집게 유형 Micro-Adson 구부러진, 길이 140mm 5 1/2 "</td><td>Braun</td><td>KN-008-140-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>해부학 집게, 길이 95mm, 3 3/4 "날카로운 0.7x0.55</td><td>Braun</td><td>PO-001-007-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위 유형 Vannas,&nbsp; 스트레이트, 길이 85mm, 블레이드 길이 3 3/8 "6mm</td><td>Braun&nbsp;</td><td>NO-010-085-PMK</td><td></td></tr><tr><td>타월 클램프 타입 백하우스, 길이 130 mm, 5 1/8"&nbsp;</td><td>Braun</td><td>HO-128-130-PMK</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더, 길이 150 mm, 6" t=0.4 1/2&nbsp;</td><td>브라운&nbsp;</td><td>IM-927-150-PZMK</td><td></td></tr><tr><td>섬세한 가위, 길이 110 mm, 직선, 4 3/8" 샤프&nbsp;</td><td>브라운</td><td>NO-052-110-PMK</td><td></td></tr><tr><td>해부학 집게, 길이 95mm, 3 3/4" 샤프</td><td>브라운</td><td>PO-022-001-PMK</td><td></td></tr></tbody></table>

창 자-혈액 장벽 및 간 대사 microbiota 제품의 평가 위한 vivo에서 방법

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

창 자-혈액 장벽 (GBB) 혈 류 장 루멘에서 영양분, 세균 대사 산물과 약물의 흐름을 제어합니다. GBB 무결성 혈 류 창 자 세균 대사 산물 등 생물학적 활성 화합물의 쉽게 액세스 될 수 있습니다 위, 심혈 관 및 대사 질환에 교란 된다. 따라서,는 GBB의 침투성 장 및 extraintestinal 질병의 마커를 있을 수 있습니다. 또한, 세균 대사 산물의 증가 침투 수 있습니다 전체 유기 체의 기능에 영향을.
GBB 침투성 공부에 대 한 일반적으로 사용 되는 방법 수행 비보 전있습니다. 이러한 방법의 정확성은 창 자 혈액의 흐름에 따라는 GBB의 기능 때문에 제한. 다른 한편으로, 일반적으로 사용 되 비보에 방법 편 파 수 있습니다 간 및 신장 성능, 그 메서드는 소변의 평가 기반으로 또는 / 및 exogenous 마커의 주변 혈액 농도. 여기, 우리 장 혈액 흐름을 유지 하 고 간, 신장 기능 영향을 거의 받지 않습니다 메서드를 사용 하는 비보에 포털 혈액 샘플링에 따라 쥐에서 GBB 침투성의 직접 측정을 제시.
폴리우레탄 카 포털 정 맥에 삽입 하 고는 키 모 보다 열 등 한 베 나 정 맥 혈관 합류. 기준선에 및 위장의 원하는 부분에 선택한 마커의 관리 후 혈액 샘플링 됩니다. 여기, 선물이 TMA, 창 자 세균 대사 산물, TMA의 간 정리의 평가 (2) 및 (3) 평가의 직감 직감 포털 혈액-간-주변 혈액 통로의 콜론 침투성의 평가 (1)를 포함 하는 방법의 몇 가지 응용 프로그램 박테리아에서 파생 된 짧은 사슬 지방산입니다. 또한, 프로토콜 장내 흡수와 약물의 간 대사를 추적 또는 포털 혈압의 측정을 위해 사용할 수도 있습니다.

우리는 성공적으로 GBB 침투성 및 간 허가 TMA의 쥐에서 측정 됩니다. 우리는 고혈압 쥐 normotensive 쥐 (그림 2)4에 비해 TMA 증가 콜론 침투성을 증명 하고있다. 또 다른 연구에서 우리는 높은 소금 섭취가 TMA (그림 3)14의 GBB 침투성 및 간 허가 영향을 주지 않습니다 발견.
변, 포털 혈액 및 말 초 혈액에서 SCFA의 농도 측정, 우리 주변 혈액에 창 자에서 분자의 경로 추적. 그 실험에 대 한 모범적인 결과 표 3에 표시 됩니다.
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영양소, microbiota 대사와 순환에 의약품의 액세스 창 자-혈액 장벽 (GBB)에 의해 제어 됩니다. 우리는 GBB 침투성에서 vivo에서, 일반적으로 사용 되는 간접 방법, 달리는 거의 영향을 받지 않습니다 간 및 신장 기능을 측정 하기 위한 직접적인 방법을 설명 합니다.

창 자-혈액 장벽 및 간 대사 Microbiota 제품의 평가 위한 Vivo에서 방법

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

창 자 혈액 장벽은 영양분의 통과를 제어 하는 다층 시스템, 세균성 대사 산물, 마약, 그리고 혈액 스트림에 장 루멘에서 다른 외인 성 화합물. 우리가 알다시피, 장벽의 무결성은 심장 혈관 및 혈액 스트림에 창자 세균 대사 산물과 같은 생물학적 활성 화합물의 쉽게 접근을 초래할 수 있는 몇몇 신진 대사 질병에서 뿐만 아니라 위장에서 손상될 수 있고 전체 유기체의 기능에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 장 혈액 장벽의 투과성은 장및 외장 질환 모두의 마커일 수 있습니다.이 비디오에서는, 우리는 소화관에 시험 물질의 투여 후 포털 혈액 샘플링을 사용하여 쥐의 장 혈 장벽 투과성의 직접 측정을 제시한다. 우리는 심정맥 합류 바로 위에 포털 정맥과 열등한 정맥 카바의 분류를 자세히 설명합니다. 포탈 정맥과 열등한 정맥에서 혈액 샘플링은 장혈 장벽 투과성뿐만 아니라 장내 세균 대사 산물 이나 의약품과 같은 관심분자의 간 통관 및 흡수 경로를 평가 할 수 있습니다.이 방법은 사실상 간과 신장 기능에 의해 영향을 받지 않으며 생체 내 및 체외 방법에 일반적으로 사용되는 것에 비해 강한 이점인 장 혈류를 보존합니다. 동물은 절차 전에 하룻밤 금식해야합니다. 전신 마취 중에 모든 절차를 수행하십시오.동물은 실험 후 안락사된다. 우리의 절차는 장 내 투여를위한 라인의 삽입으로 시작합니다. 여기서 우리는 마커의 대장 내 투여를 제안합니다.그것은 어쩌면 소화 관의 다양 한 수준에서 관리에 의해 수정 될. 예를 들어, 위 또는 십이지들. 그러나, 위장관의 상부에 마커를 투여하면서 연반의 가변 속도와 효소 및 위산과의 가능한 상호 작용을 고려하십시오.소아 폴리 카테터 크기 10 F 또는 8 F를 식민지 카테터로 사용하십시오. 카테터를 표시하여 결장내 약 8센티미터에 삽입될 부품을 표시합니다. 항문 부위와 직장에 있는 대변의 수를 확인한 후 결장에 카테터를 삽입합니다.의자가 있는 경우 직장 영역을 마사지하여 직장을 비웁니다. 카테터를 따라 윤활유를 넣습니다. 다음으로, 윤활유로 항문과 주변을 촉촉하게 합니다.외부 항문 괄약근을 통해 가이드 와이어와 카테터를 삽입합니다. 앞으로, 뒤로 및 원형 의 움직임을 느리게 합니다. 카테터를 삽입하는 동안 복부 심백에 의해 카테터의 위치를 계속 확인하십시오.다음 단계는 열등한 베나 카테터화입니다. 당신은 창자 투과성 연구에서이 절차를 건너 뛸 수 있습니다. 대퇴동맥의 맥박을 느끼고 맥박이 만져볼 수

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

출처: 칼라타유드 아로요, M. 외. 시험관 내 숙주-미생물 인터페이스에서 합성 박테리아 컨소시엄의 생존 가능성 평가. J. Vis. 경험 (2018).이 영상은 박테리아의 생존 가능성을 연구하기 위한 시험관 내 장 숙주-미생물 모델을 시연합니다. Caco-2와 HT29-MTX 세포의 공동 배양은 모의 소화 조건 하에 사전 처리된 박테리아와 함께 배양됩니다. 상피 장벽의 완전성을 경상피 전기 저항을 이용해 평가하며, 배양지에서 분획, 용해된 점액, 세포 용해액, 세포 잔해물을 수집하여 후속 분석을 수행합니다.

박테리아 부착 및 내부 흡수를 평가하기 위한 시험관 내 장 모델

이 프로토콜은 장 장벽 기능의 생체 외 모델로 절제된 장 조직 제제 또는 "장 주머니"의 사용을 설명합니다. 이 모델은 소화기 질환의 동물 모델에서 특정 장 부위에서 상피 장벽과 점액 겔 층 모두의 무결성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

예 생체 내 창자 주머 니나는 위장 질환 모델에서 점막 투과성을 평가하는

두 가지 방법은 여기 장 장벽 기능을 결정 하 되 게 됩니다. 상피 미터 (볼트/옴)의 조직 문화 우물에서 직접 경작된 epithelia의 transepithelial 전기 저항 측정에 사용 됩니다. 쥐, FITC dextran gavage 메서드는 vivo에서창 자 침투성 결정 하 사용 됩니다.

생체 외에서 그리고 Vivo에서 접근 장 상피 세포 침투성을 결정 하

여기, 선물이 위장 장 관의 생리 조건을 시뮬레이션 bioreactors의 시리즈를 사용 하 여 콜론 생체 외에서, 의 본질적인 microbiota 경작을 위한 프로토콜.

인간의 본질적인 Microbiota 공부 기술을 경작 하는 체 외에서 고급 적용

우리는 아세트아미노펜 (APAP)에 장과 간 오르가노이드를 가진 미생물 계통 (MPS)를 드러나. 이 문서에서는 MPS의 오르가노이드 생산 및 APAP 약동 및 독성 특성 평가를 위한 방법을 설명합니다. 또한 결과를 검증하는 데 필요한 조직 기능 분석을 설명합니다.

약물 약동 및 독성 평가를 위한 장/간 미생물학 시스템

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

Dysregulated 장 상피 장벽 기능 및 면역 반응은 생리적인 모형의 부족 때문에 제대로 조사되지 않는 선동적인 장 질병의 특징입니다. 여기서는 생체 내 점막 투과성 및 백혈구 모집을 연구하기 위해 잘 혈관화되고 외부화된 장 세그먼트를 사용하는 마우스 장 루프 모델을 설명합니다.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

이 문서는 전 생체 내 실험을 위한 새로운 창자 기관 배양 시스템을 사용하여 호스트-미생물군유전체 상호 작용을 분석하기 위한 독특한 방법을 제시합니다.

호스트-미생물군유병 상호 분석을 위한 장 내 장관 장기 배양 시스템

본 연구에서, 플루오레세인-이소티오시아네이트 표지(FITC) 덱스트란을 경구 위관영양을 통해 마우스에 투여하여 생체 내 및 혈장 및 대변 샘플 모두에서 장 투과성을 평가합니다. 장 장벽 기능은 많은 질병 과정에서 영향을 받기 때문에 이 직접적이고 정량적인 분석은 다양한 연구 분야에서 사용될 수 있습니다.

Fluorescein-Isothiocyanate-labeled dextran을 사용한 생쥐의 장 장벽 무결성 평가

배우세요 쥐에서 문맥 정맥 채혈을 이용한 장-혈액 장벽 투과성 직접 측정 방법. 이 기술은 간 및 신장 기능의 영향을 최소화하여 생체 내 장벽 기능을 정확히 평가할 수 있습니다.

창 자-혈액 장벽 및 간 대사 Microbiota 제품의 평가 위한 Vivo에서 방법

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