Name: 흡입 마 취 코-투-두뇌 약물 전달 평가 Intranasal 행정을 위한 새로운 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-14T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: 배우세요 흡입 마취 하에서 쥐를 이용한 비강 내 투여 및 코-투-뇌 약물 전달 정량 평가 방법. 중추신경계 질환 치료를 위한 약물 전달 기술 개발에 활용됩니다.

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이 연구는 민간 대학 연구 브랜딩 프로젝트에서 문 부 과학성;에서 부분적으로 지원 되었다 과학 (JSP);의 승진을 위한 일본 사회에서 과학 Research (C) (17 K 08249 [T.K. 하 T.S.])에 대 한 특정 [T.K.]을 [를 T.S.], 생화학의 발전 그리고 다케다 과학 재단에 대 한 하 마 구치 재단에서 공동 연구에 대 한 그랜트. 우리는 실험에 그들의 귀중 한 기술 지원 씨 유야 특별히 및 양 아키코 아사미 감사 합니다.

이 동물 연구 (#AP17P004)는 니혼 대학 동물 관리 및 사용 위원회 (도쿄, 일본)에 의해 승인 지침에 따라 수행 되었다. 이 연구 (#17-0001) 약 학 학교, 일본 대학의 방사성 동위 원소 센터에 의해 승인 되었다.
1. 흡입 마 취 Intranasal 관리에 사용 되는 동물
<ol><li>제어 온도 23 ± 1 ° C, 습도 50% ± 10%, 그리고 음식과 물에 대 한 광고 libitum 액세스의 유지와 스테인리스 스틸 케이지 12 h 명암 주기 (오전 8시-오후 8시 빛), 아래에서 실험 쥐를 집.</li>
	<li>실험, 이전 2 %isoflurane, 다음 개시 4%의 농도에서 흡입을 통해 마우스를 anesthetize. 표면 righting의 실종에 대 한 확인 하 여 anesthetization의 필요한 수준을 확인 합니다.</li>
</ol>2입니다. 관리 솔루션의 준비
<ol><li>[14C]의 관리 솔루션 준비-눌린 (50 μ M, 마우스 당 0.5 μCi/mL) 인산 염 버퍼 식 염 수에 희석 하 여 사용 될 때까지 4 ° C에서 저장.</li>
</ol>3. 마우스 intranasal 행정
<ol><li>
일시적으로 열 수 있는 흡입 마스크를 사용 하 여 micropipette 메서드 (그림 1) 참고:이 기술은 이다 Frey 그 외 여러분 에 의해 설립 micropipette를 사용 하 여 intranasal 관리 프로토콜의 수정 3<ol>
<li>흡입 마 취 2 %isoflurane (그림 1A)와 그들의 사지를 찍고 여는 코르크에서 부정사의 위치에서 마우스를 해결.</li>
		<li>30 s 간격으로, 1-2 μ 복용량 쥐는 흡입 마 취 (그림 1B 및 C) 아래에 고정 하는 동안 또는 왼쪽 및 오른쪽 콧구멍으로 관리를 통해 각 마우스 25 μ 관리 솔루션의 전체 볼륨을 관리 합니다.</li>
		<li>참고: 폐기물 마스크 열 때와 수동 방법 (폐기물 마 취 가스 용기)으로 마 취 가스 (연기 후드, 하드 ducted biosafety 내각, 진공, 등) 활성화 방법으로 청소를 닫을 때</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cannulation 역 m 는 식도 통해 기도 측면에서 ethod (그림 2) 참고:이 기술은 이다 쥐 히 라이 외 에 의해 설립에 대 한 intranasal 흡수 프로토콜의 수정 7<ol>
<li>흡입 마 취와 isoflurane 2% 그들의 사지를 찍고 여는 코르크에서 부정사의 위치에서 마우스를 해결.</li>
		<li>목에서 머리 면도 하 고 뒤에 알코올 린스 betadine 또는 액체 응용 프로그램을 통해 준비.</li>
		<li>가 위는 작은 절 개 (1.5 cm) 후 집게로 목 구멍 아래 피부를 확장 하 여 기도 식도 노출 합니다.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 기도에 절 개 (1 m m)를 확인 합니다.</li>
		<li>캐 뉼 러를 삽입 (내부 직경: 0.58 m m, 외부 직경: 0.965 m m) 1.2 c m의 길이에 흡입 마스크의 내부에는 정 맥의 반대쪽 끝을 연결 하는 고.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 식도 있는 절 개 (1mm), 한 캐 뉼 러를 삽입 (내부 직경: 0.28 m m, 외부 직경: 0.61 m m), 코 구멍의 후부 부분을 향해 1.4 c m의 길이에 그것 (그림 2A , B)을 선 고. 참고: 프로시저 3.2.2 3.2.4 × 10 배율에서 입체 현미경 실행 되었다.</li>
		<li>관리 솔루션으로 채워진 1 mL 주사기를 바늘 (27G × 1/2)를 첨부 하 고 프로그래밍 가능한 마이크로 주사기 펌프에 연결.</li>
		<li>3.2.5 (그림 2C)에서 식도에 삽입 했다 정 맥에 바늘 위에 연결 합니다.</li>
		<li>25 μ [14C]의 총 볼륨 관리-일정 한 속도로 (5 μ/분) 눌린 솔루션 (그림 2C 및 2D).</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 양적 실험 라디오 표시 된 수용 성 고분자를 사용 하 여 ([14C]-눌린)
<ol><li>마 취 실험 쥐 목을 벨을 위를 사용 하 여 그들의 두개 그리고 수 질 oblongata의 측면에서 두뇌를 손상 하지 않도록 주의 복용 하는 동안.</li>
	<li>신중 하 게 떠 서 두개골에서 마이크로 주걱을 사용 하 여 전체 뇌를 추출 합니다.</li>
	<li>장소 필터 종이 얼음에 저장 된 배양 접시에 염 분 해결책으로 습.</li>
	<li>추출 된 두뇌 moistened 필터 종이에 놓습니다.</li>
	<li>혈액 두뇌의 표면에 고착 해 서 적어도 [14C]의 영향을 제거 하기 위해 생리 식 염 수를 적신 면봉으로 닦아-두뇌의 표면에 혈액에 눌린.</li>
	<li>빠르게, 두뇌를 해 부 및 세 부분으로 나눌: 후 각 전구, 뇌, 그리고 수 질 oblongata (는 폰 포함).</li>
	<li>1 시간에 50 ° C에서 조직 solubilizer에 뇌 샘플을 배치 합니다.</li>
	<li>액체 섬광 칵테일의 10 μ 뇌 샘플에 추가 합니다.</li>
	<li>섬광 결정 적용된 솔루션의 방사능 섬광 유리병에 칵테일에 녹아 관리 솔루션의 25 μ 약 수를 전송 합니다.</li>
	<li>측정 하는 뇌 샘플에서 [14C]의 분 방사능 당 번 ([14C] X뇌) 및 적용된 솔루션 ([14C]에 복용량X) 액체 섬광 카운터는 적절 한 장착에 3H, 14c.에 대 한 크로스 오버 보정</li>
</ol>5. 데이터 분석
<ol><li>마약 배포 수준 (%) 주입된 복용량 (ID %)에 대 한 다음 수식을 사용 하 여 계산 합니다. ID % ⁄g 뇌 = ([14C] X뇌/ [14C]복용량에X) × 100 X뇌 (뇌 dpm/g)가 [14C] 금액-눌린 뇌 조직에서 측정 및 X복용량 (dpm/25 μ 솔루션)은 [14C]의 농도-눌린 intranasal 관리에 사용 하는 솔루션에서.</li>
</ol>

<ol><li>Sakane, T., Yamashita, S., Yata, N., Sezaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transnasal+delivery+of+5-fluorouracil+to+the+brain+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Drug+Targeting%22%5BJournal%5D)">Transnasal delivery of 5-fluorouracil to the brain in the rat.</a> Journal of Drug Targeting. 7 (3), 233-240 (1999).</li>
<li>Illum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transport+of+drugs+from+the+nasal+cavity+to+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Science%22%5BJournal%5D)">Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system.</a> European Journal of Pharmaceutical Science. 11 (1), 1-18 (2000).</li>
<li>Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+bypasses+the+blood-brain+barrier+to+target+therapeutic+agents+to+the+central+nervous+system+and+treat+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease.</a> BMC Neuroscience. 9 (Suppl 3), S5(2008).</li>
<li>Chapman, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+treatment+of+central+nervous+system+dysfunction+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Intranasal treatment of central nervous system dysfunction in humans.</a> Pharmaceutical Research. 30 (10), 2475-2484 (2012).</li>
<li>Kanazawa, T. <a target="_blank" href="https://europepmc.org/abstract/med/29607986">Development of non-invasive drug delivery system to the brain for brain diseases therapy.</a> Yakugaku-Zasshi. 138 (4), 443-450 (2018).</li>
<li>Kozlovskaya, L., Abou-Kaoud, M., Stepensky, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+drug+delivery+to+the+brain+via+nasal+route%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of drug delivery to the brain via nasal route.</a> Journal of Controlled Release. 189, 133-140 (2014).</li>
<li>Hirai, S., Yashiki, T., Matsuzawa, T., Mima, H. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0378517381900582">Absorption of drugs from the nasal mucosa of rat.</a> International Journal of Pharmaceutics. 7 (4), 317-325 (1981).</li>
<li>Lochhead, J. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+biologics+to+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of biologics to the central nervous system.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 64 (7), 614-628 (2011).</li>
<li>Lalatsa, A., Schatzlein, A. G., Stepensky, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+to+deliver+peptide+drugs+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Strategies to deliver peptide drugs to the brain.</a> Molecular Pharmaceutics. 11 (4), 1081-1093 (2014).</li>
<li>Kanazawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+delivery+of+small+interfering+ribonucleic+acid+and+drugs+through+intranasal+administration+with+nano-sized+polymer+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Devices%22%5BJournal%5D)">Brain delivery of small interfering ribonucleic acid and drugs through intranasal administration with nano-sized polymer micelles.</a> Medical Devices. 8, 57-64 (2015).</li>
<li>Kanazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+nose-to-brain+delivery+of+hydrophilic+macromolecules+with+stearate-+or+polyethylene+glycol-modified+arginine-rich+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Enhancement of nose-to-brain delivery of hydrophilic macromolecules with stearate- or polyethylene glycol-modified arginine-rich peptide.</a> International Journal of Pharmacology. 530 (1-2), 195-200 (2017).</li>
<li>Kamei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+an+enhanced+nose-to-brain+delivery+of+insulin+on+mild+and+progressive+memory+loss+in+the+senescence-accelerated+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Effect of an enhanced nose-to-brain delivery of insulin on mild and progressive memory loss in the senescence-accelerated mouse.</a> Molecular Pharmaceutics. 14 (3), 916-927 (2017).</li>
<li>Suzuki, T., Oshimi, M., Tomono, K., Hanano, M., Watanabe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+transport+mechanism+of+pentazocine+across+the+blood-brain+barrier+using+the+in+situ+rat+brain+perfusion+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Science%22%5BJournal%5D)">Investigation of transport mechanism of pentazocine across the blood-brain barrier using the in situ rat brain perfusion technique.</a> Journal of Pharmaceutical Science. 91 (11), 2346-2353 (2002).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

약물의 코-투-두뇌 전달이이 통로 BBB를 무시 하는 직접 운송 경로 나타내므로 중앙 신 경계 장애에 뚜렷한 영향을 미칠 전망 이다. 3 개의 다른 코-투-두뇌 통로 날짜8보고 되었습니다. 첫 번째는 비 강 점 막에 있는 후 각 점 막에서 개는 후 각 신경을 통해 전달 하는 후 각 신경 통로. 두 번째는 삼차 신경을 통해는 hindbrain에 brainstem에 비 강 점 막의 호흡기 점 막에서 전달 trigeminal 신경 통로. 세 번째는 CSF 통로, CSF 통해 뇌에 걸쳐 배포 됩니다. 코-투-두뇌 통로 BBB에 의해 그리고 중앙 신경8, 를 biomedicines에 전달 하는 수단으로 장애가 될 경향이 있는 친수성 고분자의 관리에 관하여 상당한 주목을 받고 있다 9 , 10 , <sup cla...

펩 티 드, oligonucleotides, 항 체 등 biomedicines 내 화 중앙 신 경계 장애는 현재 아무 치료 요법에 대 한 새로운 치료 대리인으로 잠재적인 응용 프로그램으로 간주 됩니다. 그러나, 대부분 biomedicines 수용 성 고분자 이기 때문에, 정 맥 또는 구두 관리를 통해 두뇌에 혈액에서 배달 매우 어렵습니다 혈액-뇌 장벽 (BBB)의 임피던스 때문.
최근 몇 년 동안, intranasal 행정 BBB1,2,3,,45를 방지 하는 치료제의 코-투-두뇌 배달에 대 한 잠재적인 경로 수를 보고 되었습니다. 그러나, 코-투-두뇌 통로 배달6의 정량 분석에 대 한 상대적으로 몇 가지 보고서 되었습니다. 또한, 거의 아무 보고 되어 설립된 최적 관리 조건 및 투약 식이요법, 볼륨, 같은 시간, 기간, 및 속도, 코-투-두뇌 배달의 수사를 위해. 다음과 같은 이유 때문에 상기 결함을 관찰 수: 마우스 intranasal 관리의 최적의 방법 (i)는 아직 설정할 수, 그리고 (ii) intranasal 관리 pipetting, 일반적으로 사용 되는 일반적으로 특징 이다 mucociliary 클리어런스 (MC)으로 인해 동물 중 interindividual 변화에 의해 그로 인하여 종종 특정 약물의 실제 코-투-두뇌 배달 잠재력의 underestimations로 이어지는.
흡입 마 취 isoflurane를 사용 하 여 (개시: 4%, 유지 보수: 2%)는 흡입과 설치류에 대 한 마스크는 감소 시키기의 목표와 함께 광범위 한 사용, 또는 실험 동물에서 수행 수술과 관련 된 통증을 제거. 마스크의 사용은 피하, 복, 그리고 정 맥 경로 통해 흡입 마 취 실험 동물에 일반적인 약물 관리를 수행 하는 비교적 간단 합니다. 그러나, intranasal 관리의 경우 마스크를 약국에 대 한 동물에서 일시적으로 제거 될 필요가 있다. 유지 보수 2% 미만 isoflurane, 동물 일반적으로 자각 빠르게 흡입 마 취에서. 복용량 당 관리 볼륨이 큰 경우,이 식도, 코 구멍에서 흘러 마약 솔루션을 발생할 수 있습니다. 그리고 따라서 하나의 큰 복용량 작은 intranasal 행정에 대 한 여러 개의 더 작은 복용량으로 세분화 될 필요가 있습니다. 동물입니다. Intranasal 행정 반복 관리용 마스크 제거 및 지속적인된 비 강 납품을 위한 충분 한 시간을 필요로, 생쥐 관리 절차 동안 마 취에서 각 성 것 이다 높은 확률이입니다. 이 매우 어려운 안정적인 마 취 상태, intranasal 행정을 수행 하 게 하 고 아마 설치류 중 코-투-두뇌 배달의 관찰 된 interindividual 변화에 기여.
이 연구에서 우리는 따라서 실험 동물에 최소한의 물리적 스트레스를 부과 흡입 마 취, 안정적인 intranasal 관리의 두 가지 새로운 방법 개발. 첫 번째 방법은 흡입 마 취 동안 intranasal 행정을 가능 하 게 일시적으로 열 수 있는 마스크를 사용 했습니다. 마스크의 열 수 있는 부분을 피 펫을 사용 하 여 안정적인 intranasal 행정을 촉진 하기 위하여 관리 타이밍에 따라 사용할 수 있는 실리콘 플러그를 포함 합니다. 두 번째 방법으로 비 강, 식도에서 전달 하는 정 삽입 수술 그리고 약물 솔루션 전달 될 수 있는 직접 하 고 확실 하 게 안정적인 흡입에서 비 강에는 주사기 펌프는 다음이 연결 된 마 취입니다. 실질적으로 MC의 영향을 최소화 하 여 비 강에 있는 retentively 약 향상 될 때문에이 방법은 코-투-두뇌 루트를 통해 두뇌에 약의 납품을 강화할 수 있습니다. 또한, 양적 라디오 표시 [14C]를 사용 하 여 뇌에서 마약 유통 수준 주입된 복용량/g 뇌에 대 한 (%)을 평가 하는 방법 설명-눌린 [분자량 (MW): 5000] 수용의 모델 기판으로 고분자입니다.

<table><tbody><tr><td>ddY 마우스</td><td>재팬 SLC, Inc.</td><td></td><td>남성, 4-6주, 20-30g</td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>화이자</td><td>v002139</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 설치</td><td>SHINANO manufacturing CO. LTD.</td><td>SN-487-OTAir, SN-489-4</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 마스크</td><td>SHINANO manufacturing CO. LTD.</td><td></td><td>소형 설치류용</td></tr><tr><td>이소플루란 마스크(오픈 타입)</td><td>SHINANO manufacturing CO., LTD.</td><td></td><td>특별 주문</td></tr><tr><td>마취 상자</td><td>SHINANO 제조 CO., LTD.</td><td>SN-487-85-02</td><td></td></tr><tr><td>동물 실험 가위 - 1</td><td>NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.</td><td>B-27H</td><td></td></tr><tr><td>동물 실험 가위 - 2</td><td>NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.</td><td>B-13H</td><td></td></tr><tr><td>핀셋 - 1</td><td>파인 사이언스 도구 Inc.</td><td>11272-30</td><td>듀몽 #7 Dumoxel</td></tr><tr><td>Tweezers-2</td><td>나츠메 제작쇼 주식회사</td><td>A-12-1</td><td></td></tr><tr><td>캐뉼라 튜브 (PE-50)</td> <td>Becton, Dickinson and Company.</td><td>5069773</td><td>내경: 0.58mm, 외경: 0.965mm</td></tr><tr><td>캐뉼러 튜브(SP-10)</td><td>NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.</td><td>KN-392</td><td>I.D.: 0.28 mm, O.D.: 0.61 mm</td></tr><tr><td>면도기</td><td>MARUKAN, LTD.</td><td>DC-381</td><td></td></tr><tr><td>입체 현미경</td><td>올림푸스 주식회사</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>바늘 27G 1/2 in 13mm</td><td>TERUMO CORPORATION</td><td>NN-2738R</td><td></td></tr><tr><td>1mL 주사기</td><td>TERUMO CORPORATION</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr>주<td>사기 펌프</td><td>신경 과학</td><td>NE-1000</td><td></td></tr><tr><td>셀룰로오스 멤브레인</td><td>Toyo Roshi Kaisya, Ltd.</td><td></td><td></td>00011090</tr><tr><td>마이크로 주걱</td><td>시미즈 아키라 Inc.</td><td>91-0088</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 (0.5-10 uL)</td><td>Eppendorf AG</td><td>Z368083</td><td></td></tr><tr><td>피펫 칩</td><td>Eppendorf AG</td><td>0030 000.811</td><td></td></tr><tr><td>테이프</td><td>TimeMed 라벨링 시스템, Inc.</td><td>T-534-R</td><td>마우스 고정용</td></tr><tr><td>[14C]-Inulin</td><td>American Radiolabeled Chemicals Inc.</td><td>ARC0124A</td><td>0.1 mCi/mL</td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd.</td><td>054-00461</td><td></td></tr><tr><td>액체 섬광 카운터</td><td>Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc</td><td>Tri-Carb 4810TR</td><td></td></tr></tbody></table>

흡입 마 취 코-투-두뇌 약물 전달 평가 intranasal 행정을 위한 새로운 방법

Novel Methods for Intranasal Administration Under Inhalation Anesthesia to Evaluate Nose-to-Brain Drug Delivery

Intranasal 행정 혈액-뇌 장벽 circumvents 치료제의 코-투-두뇌 배달에 대 한 잠재적인 경로 수를 보고 되었습니다. 그러나, 몇 가지 보고서는 정량 분석 뿐만 아니라 최적의 관리 조건 및 코-투-두뇌 배달의 수사를 위해 식이요법을 먹이 지 되었습니다. 설치류를 사용 하 여 코-투-두뇌 통로 메커니즘에 대 한 연구에서 제한 된 진행 후보 약물에 대 한 코-투-두뇌 전달 시스템 설계 측면에서 상당한 장애를 나타냅니다.
이런 점에서 진보를 얻으려면, 우리 개발 하 고 실험 동물에 대 한 안정적인 intranasal 행정 흡입 마 취의 두 가지 새로운 방법으로 평가. 우리는 또한 라디오 표시 [14C]를 사용 하 여 코-투-두뇌 통로 통해 두뇌에 마약 유통 수준 평가 하는 방법 설명-눌린 (분자량: 5000) 수용 성 고분자의 모델 기질으로.
처음에, 우리는 안정적인 마 취 동물에 신뢰할 수 있는 관리를 수행할 수 있게 일시적으로 열 수 있는 마스크를 사용 하 여 피 펫 기반 intranasal 관리 프로토콜 개발. 이 시스템 [14C]를 사용 하 여-눌린 작은 실험 오류와 함께 뇌에 전달 될 수 있는.
우리는 이후 mucociliary 클리어런스 (MC)의 효과 최소화 하기 위해 개발 된 식도 통해 기도 측면에서 역방향 cannulation 수 반하는 intranasal 관리 프로토콜 개발. 이 기술은 상당히 높은 수준의 [14C] 주도-눌린, 양적 嗅, 뇌, 그리고 피 펫 방법 보다 수 질 oblongata에 발견 되었다. 이 비 강에 마약 솔루션의 유지 비 강에 MC 반대 방향으로는 주사기 펌프를 사용 하 여 활성 관리에 의해 실질적으로 증가 하기 때문에 나타납니다.
결론적으로, intranasal 행정이 연구에서 개발의 두 가지 방법 설치류 약 동학을 평가 하기 위한 매우 유용한 기술 될 기대 될 수 있습니다. 역방향 cannulation 방법, 특히, 약 후보자의 코-투-두뇌 배달의 완전 한 잠재력을 평가 하는 데 유용 수 있습니다.

그림 3 은 [14C]-눌린 수준에 후 각 전구 (A), 뇌 (B), (C) 두 가지 유형의 intranasal 행정 현재 연구에서 평가 사용 하 여 얻은 수 질 oblongata (ID % ⁄g 두뇌). 피 펫 사용 방법 배달 [14C]를 사용 하 여 intranasal 관리-openable 흡입 마스크 (그림 1)를 사용 하 여 두뇌에 눌린. 흡입 마 취, 양적 결과 낮은 표준 오류에 의해 표시 된 시험된 동물 중에서 아무 실험 interindividual 변화를 밝혔다. -흡입 마 취 (그림 2), [14C]의 상당히 높은 수준의 눌린-눌린 후 각 전구 (에서 관찰 했다 식도 역 정 비 강 관리 방법 [14C]을 관리 하는 데 사...

여기는 실험 동물에 대 한 안정적인 intranasal 관리 최소한의 물리적 스트레스와 흡입 마 취의 두 가지 새로운 방법에 설명합니다. 우리는 또한 방사선된 [14C]를 사용 하 여 코-투-두뇌 통로 통해 뇌에 약물 분포 레벨의 양적 평가 하는 방법 설명-수용 성 고분자의 모델 기판으로 눌린.

흡입 마 취 코-투-두뇌 약물 전달 평가 Intranasal 행정을 위한 새로운 방법

Intranasal administration has been reported to be a potential pathway for nose-to-brain delivery of therapeutic agents that circumvents the blood-brain ...

이 방법은 제약 과학 분야의 주요 질문에 대한 비강 내 관리 및 약동학 및 관심 약물의 약리학에 대한 답변을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동물에 최소한의 스트레스와 코 - 뇌 전달 약물 후보 및 흡입 마취의 정량적 평가에 사용할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 의미는 코-뇌 경로를 통해 약물 전달 기술의 개발에 기여로 중추 신경계 질환의 치료로 확장.절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 과정 학생 인 후쿠다 미츠요시 (Mitsuyoshi 후쿠다)가 될 것입니다. 격리 된 무선 동위 원소 시설에서 마이크로 피펫을 통해 비강 내 전달. 테이프 및 마취 마우스를 supine 위치에 있는 코르크 보드에 투여하고, 1~2개의 마이크로리터 용량으로 25개의 카본-14 이눌린 용액을 투여하여 동물의 오른쪽 및 왼쪽 콧구멍에 투여한다.식도를 통해 기도 측에서 역수통 전달을 위해 마취 된 마우스를 해부 현미경 아래에 놓고 목 구멍에 1.5 센티미터 피부 절개를합니다. 집게를 사용하여 기관체가 노출될 때까지 절개를 확장하고 노출된 기관에서 1mm 절개를 합니다. 캐뉼라 1.2센티미터를 절개에 미리 표시된 위치에 삽입하고 캐뉼라의 반대쪽 끝을 흡입 마스크 의 안쪽에 부착합니다.그 후, 집게를 사용하여 기관 아래에서 식도를 노출하십시오. 가위를 사용하여 식도에서 1밀리미터 절개를 하고 비강의 후면 끝을 향해 미리 표시된 위치에 두 번째 캐뉼라 1.4센티미터를 삽입합니다. 실험 동물의 무게에 따라 적절한 길이에 캐뉼라를 삽입하고 다른 동물에서 캐뉼라의 길이를 조정하는 것이 중요합니다.식도 캐뉼라를 리게이트하고 프로그래밍 가능한 마이크로시링펌프에 연결된 투여 용액으로 채워진 1밀리리터 주사기에 27게이지 바늘을 부착합니다. 그런 다음 전체 용액이 투여될 때까지 분당 일정한 5마이크로리터 속도로 25마이크로리터의 탄소-14 이눌린을 전달합니다. 느리지만 일정한 확산 속도는 비강 내에서 가능한 한 많은 약물 용액을 유지하는 데 중요합니다.이눌린 투여 후 30분 후에 혈액-뇌 장벽을 넘어간 탄소-14 이눌린의 양을 정량화하기 위해 가위를 사용하여 각 실험처리 된 동물의 두개골을 메둘라 oblongata 측에서 조심스럽게 열고 마이크로 스패툴라를 사용하여 조심스럽게 뇌를 떠냅니다. 각 뇌를 수확할 때 페트리 접시에 식염수로 모은 필터 종이에 놓습니다. 그리고 식염수에 흠뻑 젖은 면봉을 사용하여 각 뇌의 표면에서 혈액을 청소하십시오.다음으로, 빠르지만 신중하게, 후각 전구, 뇌관, 그리고 수질외경가나 폰 섹션으로 뇌를 해부합니다. 그리고 뇌 용색제에 1 시간 동안 섭씨 50도, 액체 신윤질 칵테일 10 마이크로 리터를 첨가합니다. 적용된 용액의 방사능을 결정하기 위해, 흡입 칵테일에 용해된 투여 용액의 25 마이크로리터 알리쿼트(aliquot)를 자극 바이알로 옮기고, 탄소-14 방사능의 분당 붕괴를 측정하여 액체 신자극 카운터에서 적용한다.흡입 마취하에서, 어떤 실험적인 개별 간 변이는 내트라나시스 약 전달 동물 중 관찰되지 않습니다. 식도 역캐뉼라 비강 투여 방법이 사용되는 경우, 미생물 분과보다 후각 전구, 뇌막 및 메둘라 직사각형에서 상당히 높은 수준의 탄소-14 이눌린이 관찰된다. 더욱이, 더 높은 탄소-14 이눌린후각전과 메둘라 직사각형에서 검출되며, 둘 다 뇌로의 통로에서 두드러진 진화되어 뇌에서 뇌로 의한 통로에서 뇌에서 두드러진 것으로 나타났다.개발 후, 이 기술은 중추 신경계에 있는 큰 분자 치료 에이전트의 생체 활성을 탐구하기 위하여 코-뇌 전달 의 필드에 있는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다.

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연구

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Medicine

의학

코에서 뇌로의 약물 전달을 평가하기 위한 흡입 마취 하의 비강 내 투여를 위한 새로운 방법

intranasally 뇌를 타겟팅의 목적을 위해 깨어 마우스로 약물을 투여하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 긴 마취없이 약물의 비강 관리를 사용하는 기간, 그리고 최소한의 전신 노출과 코 - 투 - 뇌 전달을 통해 주입 반복 할 수 있습니다.

깨어 마우스로 CNS의 치료학의 비강 관리

이 비디오는 약물 에어로졸의 생성과 에어로졸 발생기가 장착된 흡입 장치를 사용하여 이러한 에어로졸을 마우스에 코로만 전달하는 것을 보여줍니다. 마우스는 코 전용 억제기에 구속되고 흡입 장치에 연결되어 약물을 마우스의 비강으로 직접 전달합니다. 그 후, 약물은 기관을 통과하여 폐로 들어갑니다.

약물 에어로졸을 생성하여 마우스 폐에 직접 전달하는 기술

출처: Ullah, I., et.al. 중추신경계에 비강내 siRNA를 전달하는 동안 마우스를 배치하기 위한 포지셔닝 장치. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 특수 포지셔닝 장치를 사용하여 뉴런 표적 펩타이드-siRNA 복합체를 마우스 뇌에 전달하기 위한 정밀한 비강내 투여 기술을 보여줍니다. 마취된 마우스는 폐 배액을 방지하면서 siRNA 흡입을 최적화하기 위해 머리를 아래로 향하게 하고 앞으로 고정합니다. 표적 펩타이드는 뉴런에서 수용체 매개 흡수를 촉진하여 뇌에서 표적 siRNA 전달 및 유전자 침묵을 가능하게 합니다.

포지셔닝 장치를 사용하여 마우스 뇌에 siRNA의 비강내 전달

출처: Kanazawa, T., et al. 코에서 뇌로 약물 전달을 평가하기 위한 흡입 마취 하에 비강내 투여를 위한 새로운 방법. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 코에서 뇌로 약물 전달을 달성하기 위해 마취된 마우스에 방사성 표지 약물을 비강내 투여하는 방법을 보여줍니다. 약물이 비강 상피를 통과하고 신경 경로를 통해 뇌에 도달하는 방법과 모양체 운동이 약물 보유 및 제거에 어떤 영향을 미치는지 설명합니다. 또한 비디오에서는 식도를 통해 캐뉼라를 삽입하여 모양체 운동에 반대하여 약물을 전달하고 유지력을 높이고 수송 효율성을 향상시키는 대체 역 캐뉼라 삽입 방법에 대해 설명합니다.

코에서 뇌로 약물 전달을 위한 피펫 및 역캐뉼라 삽입을 통한 마우스의 비강내 약물 투여

이 원고는 이미지 기반 비강 기도 모델에서 후각 영역에 약물을 전달하기 위한 다양한 프로토콜의 모델링 및 시뮬레이션을 검토합니다. 여러 소프트웨어 모듈을 사용하여 해부학적으로 정확한 코 모델을 개발하고, 계산 메시를 생성하고, 비강 기류를 시뮬레이션하고, 후각 영역의 입자 침착을 예측합니다.

비강 흡입은 제약 에어로졸의 수동 및 능동 제어 모델링 및 강한 약물 전달의 시뮬레이션

여기에 기술 된 흡입 유닛 생성 특성화 샘플 균일 쥐의 폐에 약제 에어로졸을 증착 할 수있다. 이는 효능 폐 증착 약물 투여의 안전성 전임상 판정 가능; 임상 흡입 약물 개발을 가능하게 키 데이터.

건조 분말과 제약의 분무 에어로졸 흡입은 코 전용 노출 시스템을 사용하여 마우스 배달

줄기 세포는 내재 된 종양 향성으로 인해 뇌종양 치료제로서 유망한 치료제입니다. 비 침습적 비강 내 줄기 세포 전달은 혈액 뇌 장벽을 우회하여 임상 번역의 가능성을 보여줍니다. 이 기사는 신경 교종 마우스 모델에서 비강 줄기 세포 전달의 기본 원리를 요약합니다.

마우스 모델에서 아교 모세포종에 치료 용 줄기 세포 비강 전달

여기서, 우리는 중추 신경계에서 효과적인 유전자 침묵이 가능하게 하는 뇌 표적화 펩티드-siRNA 제제의 비강 내 투여를 위한 마우스의 적절한 배치를 가능하게 하는 마우스 포지셔닝 장치를 이용한 프로토콜을 제시한다.

중추 신경계에 비강 siRNA 전달 하는 동안 마우스의 배치에 대 한 위치 장치

신생아 설치류의 기관에 약물을 직접 주입하는이 기술은 국소 투여 약물 또는 생물학이 신생아 폐 질환에 미치는 영향을 연구하는 데 중요합니다. 추가적으로, 이 방법은 또한 동물 모델에서 폐 손상을 유도하는데 사용될 수 있다.

폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관 내 점적하는 최소 침습적 방법

이 프로토콜은 Rayleigh 분해를 비바이러스성 mRNA 벡터의 에어로졸라이징을 위한 가벼운 과정으로 제시합니다. 에어로졸화된 mRNA 벡터의 지역적 침착은 앨버타 이상화된 비강 입구(AINI) 모델로 평가됩니다. 인간 폐세포 내 녹색 형광 단백질(GFP) 발현은 에어로졸화 후 mRNA 벡터의 물리화학적 및 생물학적 기능 유지를 나타냅니다.

레이리 분해 에어로졸을 통한 mRNA 폴리플렉스의 비강 전달: 비강 증착 및 기능 검사를 위한 시험 관 내 방법

배우세요 흡입 마취 하에서 쥐를 이용한 비강 내 투여 및 코-투-뇌 약물 전달 정량 평가 방법. 중추신경계 질환 치료를 위한 약물 전달 기술 개발에 활용됩니다.

흡입 마 취 코-투-두뇌 약물 전달 평가 Intranasal 행정을 위한 새로운 방법

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