Transcranial 직류 자극 (tDCS) 마우스

Alvar Gaaud 절차는 마우스에 있는 경두개 직접 전류 자극을 적용하는 것입니다. 이것은 직접 전류 발생기에서 낮은 강렬한 전류를 생성하고 전극을 통해 동물에게 직접 보내서 달성했습니다. tDCS는 우울증, 정신 분열증, 알츠하이머 병, AHDH 및 자폐증과 같은 인간의 주요 정신 질환에 대한 비 약물 치료 대안으로 조사되었습니다.

또한 tDCS는 저렴한 비용, 사용 용이성 및 비침습적 프로파일로 인해 독특한 기술입니다. 그러나, tDCS의 생물학적 영향은 완전히 이해되지 않으며, 뇌 영역의 현재 강도, 지속 시간 및 타일과 같은 자극 매개 변수에 관하여 아무 합의도 없습니다. 이를 위해, 최소 주문의 사용은 이러한 메커니즘의 철저한 연구에 필수적이며, 이는 행동 세포 및 분자 데이터의 수집 및 분석을 통해 tDCS의 임상 효능에 대한 더 나은 이해로 이어질 것이다.

현재 tDCS에 대한 두 개의 전극 설정이 있습니다, anodal 및 음극 자극이라고. 무달 자극에서, 전류는 동물의 머리에 직접 전달됩니다, 동물의 몸을 통해, 동물의 흉골에 위치 음극으로. 음극 자극에 있는 동안 전류는 동물의 흉부를 통해 입력, 그것의 머리와 음극으로 여행.

두 경우 모두 현재 발생기는 현재 강도및 자극 지속 시간을 제어합니다. 연락처 품질을 생성하고 피드백을 추론하는 동안. 활성 포지셔닝을 위한 다양한 설정이 있습니다.

따라서 모든 3차원 축을 고려해야 합니다. 이 프로토콜에서 머리 전극은 두개골의 중간 선에, 뿌리 bregma에 1 밀리미터를 이식하고, 바디 전극은 동물의 가슴에 위치했다. 짧은 기간 시뮬레이션으로 인해 기화 이소플루란과 같은 빠른 동작과 단기 마취를 사용하는 것이 좋습니다.

이 절차는 두 가지 중요한 단계로 구성됩니다. 전극 배치 및 경두개 직접 전류 자극. 수술 기구는 섭씨 440도에서 사전 유지 보수로 살균되었습니다.

면봉은 20 분 동안 121섭씨121도에서 평방 인치 당 20 파운드로 오토클레이브되었습니다. 열 플랫폼 컨트롤러를 섭씨 37도로 바꿔보겠습니다. 동물의 무게를 측정하고 마취 유도에 적합한 용량을 계산합니다.

케타민과 자일라진을 1킬로그램당 100밀리그램, 자일라진 킬로그램당 8밀리그램으로 섭취하십시오. 바늘 크기 31G. 동물은 2~ 3분 이내에 잠들수 있습니다.

전기 면도기 나 면도기를 사용하여 수술 부위를 면도하십시오. 동물을 미리 데운 가열 접시 위에 스테레오탁스 장치에 놓습니다. 동물의 머리를 잡고 각 동물의 귀에 팁 이어 바를 삽입하여 스테로탁 플랫폼에 고정합니다.

동물의 머리를 천천히 이동하여 측면 헤드 변속이 없고 수직 움직임이 거의 없는지 확인합니다. 마취 마스크를 마우스 코 위로 부드럽게 밀어 놓고 나사를 조여 제자리에 고정합니다. 수술 중 각막 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 눈 연고를 적용합니다.

면 봉면을 사용하여 포비도네 요오드 3개, 클로로우치신 2%, 에티놀 70%로 수술 부위를 준비합니다. 핀셋 한 쌍을 사용하여 동물의 발가락을 가볍게 짜서 마취가 채택되는지 확인하고 동물 페도 철수 일반 핀치 반사의 법칙을 확인하십시오. 동물의 귀 라인에 약 3 밀리미터 후방을 절개하고, 눈줄에서 중지합니다.

절개 부위는 임플란트를 받을 수 있을 만큼 충분히 커야 길이가 약 1센티미터여야 합니다. 뼈 스크레이퍼로 두개골을 부드럽게 긁어 접착제와 시멘트 준수를 개선합니다. 이것은 마이크로 스크래치를 만들려는 의도로 전달된 빛을 수행해야 합니다.

수술 후크를 느슨한 피부에 조심스럽게 배치하여 열린 수술 장을 유지하고 모피와 같은 장애물이 없습니다. 멸균 면봉을 사용하여 동물의 두피를 부드럽게 건조시다. 해부 현미경을 사용하여 동물의 두개골 상단을 시각화하십시오.

스테레오탁홀더에 바늘을 부착하고 브레그마를 찾습니다. 바늘을 동물의 머리 바로 위에 놓는 것은 브레그마를 가볍게 만지고 있습니다. 브레그마를 참조로 사용하여 관심 영역의 좌표를 조정합니다.

스테레오탁스 홀더에 임플란트를 고정합니다. 임플란트를 동물의 머리 위에 놓고 천천히 관심 지역에 낮춥춥습니다. 바늘을 사용하여 임플란트 공간에 슈퍼 접착제의 약 35 마이크로 리터, 1 방울을 확산.

두개골에 닿을 때까지 홀더를 천천히 아래쪽으로 이동합니다. 임플란트 공간이 표면과 완전히 접촉하고 있는지 확인하십시오. 제조업체의 지시에 따라 수술 용 시멘트를 준비하십시오.

정확한 포지셔닝 후, 두개골을 가로질러 세 개의 얇고 균일한 시멘트 층을 임플란트의 하부에 발라주세요. 응용 프로그램 브러시를 사용하여 드롭당 드롭을 적용합니다. 층은 임플란트의 추가 구조 적 지원을 위해 U 자형 구조를 형성해야합니다.

임플란트의 나사 실을 시멘트의 깨끗하게 두어 매끄럽고 방해받지 않는 연결을 허용합니다. 각 층이 약 4분 동안 건조하도록 허용합니다. 건조 후, 임플란트에서 완전히 분리 될 때까지 조심스럽게 홀더를 제거하십시오.

실수로 동물의 두개골에서 파괴 될 수 있기 때문에, 임플란트를 처리 할 때 항상 극단적 인주의를 사용합니다. 식염수에 젖은 면봉으로 동물의 피부와 절개 부위를 수분처리합니다. 임플란트의 밑에 피부를 잘라.

핀셋 한 쌍을 사용하여 조직을 한 데 모으고 조직의 2센티미터 당 조직 수술 접착제 1 방울로 절개를 닫습니다. 절개 부위및 기본 조직에 1~2%의 리도카인에 침투합니다. 젖산 링어 500 마이크로리터로 동물을 수분을 공급합니다.

미리 따뜻하게 37도 깨끗한 싱글 하우스 케이지에 마우스를 넣습니다. 케이지에 젖은 음식 펠릿의 작은 접시를 구축, 다음 시간에 음식에 쉽게 액세스 할 수 있습니다. 동물의 수술 후 체중을 등록하십시오.

동물은 케토프로펜으로 투여되어야 합니다. 수술 후 그리고 다음 이틀 동안 동시에 킬로그램 당 5 밀리 그램. tDCS 자극기가 완전히 충전되었는지 확인합니다.

양극 및 음극 케이블을 tDCS 자극기에 부착하여 시뮬레이션 사이트 근처에서 사용할 수 있도록 합니다. 스테레오탁스 홀더에 핀형 전극을 부착합니다. 열 플랫폼을 섭씨 37도로 설정합니다.

흡입 마취 시스템의 산소 유량계를 분당 1 리터로 켭니다. 마우스를 마취 유도 챔버에 넣습니다. 이소플루란 기화기를 3%로 켜면 동물이 4분 동안 이소플루란 효과를 받을 수 있도록 합니다.

동물이 유도 챔버에있는 동안, 0.9 % 식염수 용액으로 체전극을 채우기 위해 멸균 주사기를 사용합니다. 유도 챔버에서 동물을 제거하고 몸 전극 위에 가슴을 배치합니다. 마취 마스크를 마우스코 위로 부드럽게 밀어 놓고 제자리에 고정합니다.

이소플루란 출력을 1.5%로 낮추고 임플란트와 핀형 전극을 식염수로 채웁니다. 조심스럽게 함께 연결합니다. 프로토콜에 따라 자극 시간 및 전류 강도를 조정합니다.

나중에 tDCS 시스템의 연락처 품질을 확인합니다. 자극을 시작합니다. 현재 가 현재가 선택한 값까지 20초 동안 증가하는 것을 관찰합니다.

그리고 확립 된 시간 동안 자신을 유지합니다. 그런 다음 섹션의 끝에서 다시 아래로 돌진합니다. 제어할 정강이 버튼을 활성화합니다.

현재 가 현재가 선택한 값까지 20초 동안 증가하는 것을 관찰합니다. 그리고 자극 기간의 나머지 부분에 대해 하나 아래로, 최종 경사로와 선택된 값에, 끝에, 연속 으로 아래로 램프. 자극 섹션 중 하나가 완료되어 동물을 10 분 동안 미리 따뜻하게 37도 케이지로 조심스럽게 이송합니다.

이 프로토콜은 tDCS를 사용하여 마우스의 대뇌 피질을 bregma에 1 밀리미터 전방으로 자극합니다. 이 그래프는 tDCS 자극 프로토콜 후 통계화 및 유전자 발현을 나타낸다. 0.35 밀리암퍼를 사용하여 현재 강도는 하루 10분 동안 사용됩니다.

tCDS 임플란트는 1일부터 5일까지 접촉 품질에 큰 차이가 없는 자체 실행 가능한 것을 제시했습니다. 모델 두뇌에는 다양한 tCDS 자극 프로토콜이 있습니다. 프로토콜은 실험의 특수성에 따라 선택해야 합니다.

자극 영역, 전류 강도, 세션 지속 시간 및 전극 위치 지정 영역입니다. 이 특정 프로토콜에서는 알려진 tDCS를 통해 10분 동안 350마이크로앰퍼의 전류를 통해 모터 피질을 조절하는 것을 목표로 했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마우스에서 tDCS를 수행할 수 있습니다.

누군가가 수술을 연습할 때 동물 당 최대 4 분이 걸릴 수 있습니다. 수술 중 마우스를 활용하고 동물에게 수술 후 치료를 받을 때 동물 관리 지침을 고려하여 동물치료가 필수적이어서 연구 기간 동안 동물이 건강을 유지할 수 있도록 하는 것이 필수적입니다. 우리는 또한 외상에 동물의 생리적 반응이 생물학적 결과를 방해 할 수 있기 때문에, 실험을 수행하기 위해 임플란트 배치 후 5 ~ 7 일을 기다리는 것이 좋습니다.