Name: 유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 학습하세요 Vollenhovia emeryi 개미를 이용한 근친 교배 유도 및 평가 방법으로, 유전자 맵핑과 성 결정 메커니즘 연구에 활용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 실험실 조건에서 유전적 분석을 가능하게 합니다.

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우리 감사 씨 타 쿠 시 마다, AntRoom, 도쿄, 일본의 대리인 emeryi V. reproductives의 그의 사진 제공. 이 프로젝트 젊은 과학자 (16J00011), 그리고 젊은 과학자 (B)(16K18626)에 대 한 원조에 부여에 대 한 과학 진흥 (JSP) 연구 협력에 대 한 일본 사회에 의해 투자 되었다.

1. 필드 컬렉션 및 실험실에서 V. Emeryi 식민지의 유지 보수
참고: emeryi 대 의 둥지 썩 로그 및 일본 타락 한 부패 나무 branchesin 보조 숲에서 발견 된다. 이 종 식민지, 식민지 (1) 즉, 긴 날개 퀸 즈와 (2) 식민지 주로 짧은 날개 퀸 즈 퀸 즈 롱 날개8,14의 작은 숫자 뿐만 아니라 생산의 두 가지 유형을 보여 줍니다. 이 프로토콜에서 이시카와 현, 일본에에서 식민지의 후자의 유형을 수집 했습니다.
<ol><li>이른 여름 동안 emeryi 대 식민지를 수집 합니다. 참고: 생식 시즌 동안 성적 개인의 충분 한 번호를 얻을, 식민지 포함 하는 300 개 이상의 개인 선호 됩니다.</li>
	<li>흡 인기 (그림 2, 왼쪽)를 사용 하 여 유리 커버와 함께 수집 된 지점에서 인공 석고 둥지 개미 견본을 전송.</li>
	<li>16:8 h 명암 주기에서 25 ° C에서 인공 둥지에 있는 식민지를 유지 합니다. 젖은 석고 세척 병으로 수돗물을 제공 합니다.<ol>
<li>새로운 reproductives (F1 날개-퀸 즈와 F1 남성) 나타날 때까지 매일 갈색 설탕 물 채워진 팁 (20 µ L 팁) 및 알루미늄 호 일에 싸여 건조 귀뚜라미 분말의 약 100 mg을 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 실험 실험실 십자가
참고: 새로운 reproductives (그림 3)가을에 늦 여름에서 등장 하기 시작 합니다. 긴 날개 퀸 즈는 성적으로, 생산 그리고 짧은 날개 퀸 즈 clonally 생산 모성 게놈 (그림 1). 사용 하 여 긴 날개 왕비와 남성 inbreeding 십자가 대 한.
<ol><li>이동에서 개인을 중지, 방에 지속적인 환경 4 ° C에서 15 분 동안 식민지를 배치 합니다.</li>
	<li>입체 현미경 집게를 사용 하 여 30 노동자의 중간 다리를 제거 하 고 새로운 작은 석고 둥지로 (그림 2, 오른쪽) inbreeding 십자가 대 한 그들을 전송. 참고: 이후 근 친 십자가 의해 생산 됩니다 노동자에서 현재 근로자를 구별 하는 다리 제거 됩니다.</li>
	<li>노동자를 포함 하는 석고 둥지로 3-4 유 충 이나 번데기를 추가 합니다. 참고: 노동자 F0 퀸 즈 덜 식민지에서 탐구 활동을 표시. 유 충 이나 번데기에 게는 효과적으로 이러한 노동자와 식민지의 중심에 새로운 reproductives을 횡단 테스트 동안 끌 수 있다. 그 결과, 정상적인 식민지에 가까운 실험 식민지의 계속.</li>
	<li>긴 날개 왕과 남성 십자가 inbreeding 2.3 단계에서 준비 석고 둥지로 전송.</li>
	<li>음식과 물 제공 여왕 그녀의 날개를 잃게 하 고 알을 낳 기 때까지 1.3에 설명 된 대로 16:8 h 명암 주기에서 25 ° C에서 식민지를 유지. 참고:이 한 달에 1 주일 걸립니다.</li>
	<li>입체 현미경 실험 식민지 매일을 확인 합니다. F1 자손 사이 십자가 근 친을 수행 후 계란 입체 현미경으로 관찰할 수 있습니다.</li>
	<li>F1 여왕 시작 되 면 알을 낳고, F1 남성 및 애벌레 또는 pupae 둥지에서 단계 2.3에서에서 추가 된 F1 세대 (남성 및 여성 근 친 십자가에 사용) 및 F2 세대 (자손의 혼합 방지 제거 근 친 십자가에서 생산). 참고: 식민지에 몇 남성 경우 가능 하다 근 친 십자가 같은 실험적인 식민지의 한 남성과 1 ~ 3 퀸 즈를 사용 하 여 유도 하.</li>
	<li>F2 자손 등장 때까지 1.3에 설명 된 동일한 conditionsas에서 식민지를 유지. 참고: 전송 F1 여왕 및 새로운 더 큰 석고 둥지로 (그림 2, 왼쪽) 장기 식민지 유지에 대 한 F2 자손.</li>
</ol>3입니다. 근 친 성공의 평가
<ol><li>DNA 추출 및 유전형 부모의 세대 (F0)의<ol>
<li>한 다리의 집게를 사용 하 여 F0 여왕을 제거 하 고 1.5 mL microtube chelation 에이전트의 100 µ L를 포함 하는 다리를 전송.</li>
		<li>입체 현미경, 유리 접시 집게를 사용 하 여 초순 수의 300 µ L로 가득에 여성 복 부 해 부 고 격리 spermatheca 성관계 남성에서 정자를 포함 하.</li>
		<li>껍질 멀리는 spermatheca의 조직 그리고 곤충 핀을 사용 하 여 여자의 조직에서 정자를 분리. 참고:는 spermatheca에서 정자 추출 촉진, 여성의 표본에에서 저장 100 %EtOH 이상 하루 전에 해 부에 대 한.</li>
		<li>1.5 mL microtube chelation 에이전트의 100 µ L를 포함 하는 정자 전송할는 micropipette를 사용 하 여.</li>
		<li>F0 왕과 3.1.1와 3.1.3, 단계에서 각각 준비 하는 정액 샘플을 품 어, 20 분 플래시 95 ° C에서 원심은 microtube 및 4 ° c.에 저장</li>
		<li>모든 샘플링 방법을 사용 하 여 유전자 형 설명 다른 곳4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>개미 근 친 십자가 (F1)에 대 한 사용의 쌍에서 DNA 추출<ol>
<li>Sib는 계란 생산 확인 F1 여왕 성관계, 후의 여왕 그녀의 창 고 날개 또는 한 중간 다리와 3.1 위의 섹션에 설명 된 동일한 메서드를 사용 하 여 유전자 형을 사용 하 여 DNA를 추출 합니다.</li>
		<li>DNA의 F1 남자를 사용 하 여 한 다리와 유전자 동일을 사용 하 여 추출 방법 3.1 위의 섹션에 설명 된. 참고: 샘플은 DNA 추출, 전에 EtOH 및 DNA chelation 에이전트에서 4 ° c.에 두 달 동안 저장할 수 있습니다. 100%에 저장할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>남성 불 임 남성에서의 평가 inbreeding 십자가에서 생산 참고: 근 친 십자가에서 생산 하는 2 중 남성 불 임 많습니다.<ol>
<li>집게를 사용 하 여 PBS 솔루션의 400 µ L 유리 접시에 내부 생식 기관 해 부.</li>
		<li>PBS를 제거 하 고 4 %paraformaldehyde (PFA)는 micropipette를 사용 하 여 추가 합니다.</li>
		<li>실 온 (15-25 ° C)에서 30 분 동안 PFA에 배양 하 여 조직 수정.</li>
		<li>워시는 micropipette를 사용 하 여 PBS의 400 µ L로 5 회 조직.</li>
		<li>4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 솔루션 1 µ g/ml PBS에 희석.</li>
		<li>PBS를 제거 하 고 조직에이 희석 DAPI 얼룩 솔루션의 약 300 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>실 온 (15-25 ° C)에서 어두운 조건 하에서 15 분을 품 어.</li>
		<li>5 번과 400 µ L의 PBS, 조직 세척 하 고 티슈 포 셉을 사용 하 여 슬라이드 유리의 센터에 전송.</li>
		<li>중간 포함 Tetramethylrhodamine TRITC 활용 된 phalloidin 장착에 티슈를 탑재 합니다.</li>
		<li>Confocal 레이저 스캐닝 현미경 20 X 63 X 렌즈를 사용 하 여 샘플을 관찰 합니다.</li>
		<li>DAPI 검색 410-530 nm 405 nm 여기 레이저와 하이브리드 검출기를 사용 합니다.</li>
		<li>TRITC 검색 565-650 nm에서 561 nm 여기 레이저와 하이브리드 검출기를 사용 합니다.</li>
		<li>400 Hz의 검사 속도 사용 하 여 (400 라인/s) 1024 × 1024 픽셀 해상도.</li>
		<li>소프트웨어 플랫폼을 사용 하 여 이미지를 캡처하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

이 문서에서는 근 친 십자가 유도 하 고 emeryi 대개미에 근 친 결혼의 발생을 평가 하는 데 사용할 수 있는 프로토콜을 보여 줍니다. 실험, 십자가 대 한 사용 하는 개인의 유전형은 근 친 십자가 성공한 되도록 필요 합니다. 그러나, 이러한 교차 테스트의 효율성 2 중 남성은 단일 남성만 생산할 수가 있는 필드와 실험실6동안 연중 생산 수 명확 하 게 명백한 것입니다. Sib 성관계 퀸 즈 교차점 직후 남성 자손을 생산 하기 시작 합니다. Emeryi 대6,7. 에 2 중 및 단일 남성 사이 형태학 phenotypic 차이가 관찰 되었다 그러나, 2 중 남성 emeryi 대 거의 변함없이 실패 하지 testes를 개발 합니다. 테스트를 교차 사용 하는 쌍의 유전 relatedness를 테스트 하기 위한 유전자 표시...

개미와 꿀벌, Eusocial Hymenopteran taxa heterozygous 하나 이상의 무료 섹스 결정에 어떤 개인 (CSD) loci 될 여성, 그는 호모-또는 hemizygous haplodiploid 성 결심 체계 진화 남성 (그림 1A)1되.
섹스 결정 캐스케이드에 관련 된 유전자 및 분자 구성 요소는 꿀벌, Apis mellifera, hymenopteran 모델 생물2,,34에 잘 연구 되었습니다. 최근 비교 유전체학 조사 개미와 꿀벌 섹스 결정 통로 초기 성 결정 유전자를 csd5등에서 많은 상 상속 homologs 공유 것이 좋습니다. 그러나,이 homologs의 기능 보존에 대 한 증거는 아직 개미 부족.
이 문제를 해결 하기 위해 근 친 라인 들은 유전 매핑 및 분자 연구에 필수적으로 개발 될 필요가 있다. 그러나, 유지 하 고 진화 하는 라이프 사이클의 복잡 한 특성 때문에 실험실에서이 유기 체 사이 실험적인 십자가 실시 하기가 어렵습니다.
여기, 우리가 개미6,7성 결심 체계의 유전과 분자 기초 조사 모델 Vollenhovia emeryi 사용 합니다. 이 종의 근 친 라인 이전 개미6에 처음으로 섹스 결정에 관련 된 특성에 대 한 양적 특성 loci (QTL)의 연계 매핑을 위해 개발 되었다. 또한, 분자 성 결정 캐스케이드 조사7되었습니다. 이 종 특이 한 복제 시스템을 gynogenesis와 androgenesis (그림 1B)8,9를 사용 하 여 진화 하고있다. 대부분의 새로운 퀸 즈와 남성 clonally 생산 됩니다 산 모와 아버지의 유전자에서 각각. 또한, 근로자와 일부 퀸 즈 생산 성적으로8. 이 복제 시스템은 성적으로 사용 하 여 생산 하는 근 친 십자가 퀸 즈 생산과 남성 클래식 backcross에 유전으로 동일 하기 때문에 유전자 연구에 특히 적합 합니다. 성적으로 생산된 퀸 즈 다 모성 유전자10 (그림 1B)에서 생산 하는 퀸 즈에서 형태학 상으로, 이후 실시 하 고 평가 하는 근 친 십자가 크게 단순화이 메서드를 사용 하 여.
이 문서에서는, 교차 시험, 실험실 식민지의 설립을 위한 방법 근 친 결혼의 응용 십자가 전체 sib 쌍을 사용 하 고 식민지 일원의 유전형과 남성 자손의 절 개를 사용 하 여 그 십자가의 성공 평가 생식 기는 emeryi 대에 설명 되어 있습니다.
복제 시스템 고용에 inbreeding 십자가의 응용 프로그램은 종종 어떤 조사는 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 필수적인 첫 번째 단계. 예를 들어 Cardiocondyla obscurior, 2 중 남성 전체-sib 실험실에서 짝짓기의 10 세대 후의 거의 완전 한 부재 부재 CSD 로커 스11의 보여 줍니다. 그것은 남성 근 친 십자가6,,1213에서 생산의 비율에서 CSD loci의 수를 예측할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>플라스터 파우더</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>어떤 브랜드든 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 숯, 활성화, 파우더</td><td>Wako</td><td>033-02117,037-02115</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 글라스</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>어떤 브랜드든 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>드라이 크리켓 다이어트</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>어떤 브랜드도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 브라운 슈거&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A 어떤 브랜드든 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>스티렌 사각형 케이스</td><td>AS ONE</td><td>어떤 크기든</td><td>크기는 개미의 수에 따라 다릅니다.</td></tr><tr><td>Incbator</td><td></td><td></td><td>어떤 브랜드도 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>알루미늄 블록 욕조 건조 온도계 DTU-1B</td><td>TAITEC</td><td>0014035-000</td><td></td></tr><tr><td>1.5mL 하이퍼 마이크로튜브, 투명, 둥근 바닥</td><td>WATSON</td><td>131-715CS</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 (99.5)</td><td>Wako</td><td>054-07225</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>어떤 브랜드든 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>Forseps</td><td>DUMONT</td><td>0108-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Chelex 100 sodium form</td><td>SIGMA</td><td>11139-85-8</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline (PBS) Tablets, pH7.4</td><td>TaKaRa</td><td>T9181</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Wako</td><td>162-16065</td><td></td></tr><tr><td>-Cellstain- DAPI 솔루션</td><td>Dojindo Molecular Technologies</td><td>D523</td><td></td></tr><tr><td>ABI 3100xl 유전자 분석기</td><td>응용 바이오 시스템</td><td></td><td>자세한 내용은 시공사에 직접 문의하십시오.</td></tr><tr><td>컨포칼 레이저 스캐닝 현미경 Leica TCS SP8</td><td>Leica</td><td></td><td>자세한 내용은 건설업체에 직접 문의하십시오.</td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 20x/0.75 IMM</td><td>Leica</td><td></td><td>자세한 내용은 생성자에 직접 문의하십시오.</td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 63x/1.20 WATER</td><td>Leica</td><td></td><td>자세한 내용은 생성자에 직접 문의하십시오.</td></tr><tr><td>라이카 HyDTM</td><td>라이카</td><td></td><td>자세한 내용은 생성자에 직접 문의하십시오.</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X (LAS X)</td><td>Leica</td><td></td><td>자세한 내용은 생성자에 직접 문의하십시오.</td></tr></tbody></table>

유도 및 개미, vollenhovia emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

성 결심 캐스케이드의 유전 및 분자 구성 요소는 꿀벌, Apis mellifera, hymenopteran 모델 생물에에서 광범위 하 게 연구 되었습니다. 그러나, 작은 다른 비 모델 hymenopteran taxa, 개미 같은 성 결정 메커니즘에 대 한 알려져 있다. Hymenopteran 종에서 진화 하는 라이프 사이클의 복잡 한 특성, 유지 하 고 실험실에서이 유기 체 사이 실험적인 십자가 실시 하기가 어렵습니다. 여기, 우리가 근 친 십자가 수행 하 고 개미 Vollenhovia emeryi에 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 방법을 설명 합니다. Emeryi 대를 사용 하 여 실험실에서 근 친을 유도 하는 것은 종족의 유일한 생물학 때문에 상대적으로 간단 합니다. 특히,이 종 생산 androgenetic 남성, 그리고 여성 reproductives 전시 날개 다형성, 유전 십자가에 고기의 식별을 단순화. 또한, 근 친 결혼의 성공 평가 간단 남성 제작 하실 수 있습니다 지속적으로 정상적인 남성만 잘 정의 된 생식 기간 동안 필드에 표시 하는 동안, 십자가 inbreeding로 합니다. 우리의 프로토콜을 사용 하 여 emeryi 대 모델로 개미 종에서 성 결심 체계의 유전과 분자 기초 조사를 허용 합니다.

F0 , F1 세대를 사용 하 여 microsatellite 분석의 결과 근 친 십자가 성공적으로 생산 되었다 보여주었다 (그림 4)6. 결과적으로 inbreeding 십자가의 성관계 퀸 즈 실험 건너 식민지 설립의 한 달 이내에 획득 했다. 나머지는 여성 (노동자와 여왕)6근 친 십자가에서 모든 자손 (F2)의 분기 (27.1 ± 8.91 %SD) 남성, 이었다. QTL 매핑 inbreeding 십자가에서 자손을 사용 하 여 보여 남성 십자가 inbreeding 제작한 했다 2 중 2에서 homozygous CSD loci (CSD1 및 그림 5에 CSD2), 여성 (노동자) 동안 inbreeding 십자가에서 생성 했다...

이 프로토콜에서 근 친 십자가 실시 하 고 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 메서드가 개미 Vollenhovia emeryi에 대 한 설명 합니다. 이러한 프로토콜은 실험 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 유전 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

이 방법은 성 결정 시스템과 같은 Hymenoptera의 분자 생물학 및 유전 적 영역에서 중요한 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 유전자 매핑 및 분자 상태에 필수적인 개미 Vollenhovia Emery를 통해 교배 선을 쉽게 유도할 수 있다는 것입니다. 그래서,이 임무는 특정 개미의 성 결정 시스템에 대한 통찰력을 제공 할 수 있으며 말벌과 같은 다른 개미 및 기타 Hymenoptera 종에도 적용 될 수 있습니다.프로토콜을 시작하려면 초여름 동안 V.Emeryi 식민지를 수집하십시오. 수집된 나뭇가지에서 유리 덮개가 있는 인공 석고 둥지로 개미 표본을 배관기를 사용하여 옮김합니다. 인공 둥지의 식민지를 25도 C에서 유지하여 16~8시간 의 어두운 주기 하에서 유지합니다.수돗물을 세척병으로 제공하여 매일 석고를 촉촉하게 유지합니다. 다음으로, 새로운 생식 개미가 나타날 때까지 매일 20 마이크로 리터 팁을 사용하여 알루미늄 호일에 싸인 건조 크리켓 파우더 100 마이크로 그램과 갈색 설탕 물로 채워진 팁을 식민지에 추가하십시오. 필드에서 마이크로 식민지를 수집하고 새로운 여왕과 남성을 얻기위해 그들에게 충분한 음식을 제공하는 것이 중요합니다.첫째, 15분 동안 섭씨 4도에 설정된 통제된 환경이 있는 방에 식민지를 배치하여 개인이 움직이지 못하게 하십시오. 30 명의 작업자 개미의 중간 다리를 스테레오스코프 아래에 사용하여 F-0 세대를 후속 근친 교배 십자가에서 생산 된 작업자와 구별하십시오. 그런 다음 개미를 새로운 작은 석고 둥지로 옮겨 교배 십자가를 위한 것입니다.다음으로, 노동자를 포함하는 석고 둥지에 3 ~ 4 개의 애벌레 또는 pube를 추가합니다. 긴 날개 달린 여왕과 남성을 이전에 준비된 석고 둥지로 옮겨 교배 십자가를 갈아입습니다. 이 단계를 위해, 정상적인 식민지와 같은 상태에서 실험 횡단 식민지를 유지하는 것이 중요합니다.남성과 여성을 함께 배치하는 것만으로는 근친 교배를 유도하기가 어렵습니다. 식민지를 16~8시간 의 빛 아래 25도의 기온으로 유지하며, 여왕이 날개를 잃고 알을 낳을 때까지 음식과 물이 제공되는 어두운 주기입니다. 스테레오 현미경으로 매일 실험 식민지를 확인하십시오.F-one 자손 사이의 근친 교배 십자가를 설정 한 후, 계란은 입체 스코프에서 관찰 할 수 있습니다. F-one 여왕이 알을 낳기 시작한 후, F-1 세대와 F-2 세대가 혼합되는 것을 방지하기 위해 둥지에서 F-1 수컷과 애벌레 또는 푸브를 제거하십시오. F-2 자손이 나올 때까지 같은 조건하에서 식민지를 유지하십시오.집게를 사용하여 F-제로 퀸의 한 쪽 다리를 제거합니다. 1.5 밀리리터 마이크로 튜브에 100 마이크로리터의 냉각제를 포함하는 마이크로 튜브로 다리를 옮춥니다. 입체경 아래 집게를 사용하여 300 마이크로리터의 초순수수로 채워진 유리 접시에 암컷 복부를 해부합니다.짝짓기 남성에서 정자를 포함하는 spermatica를 시뮬레이션. 스퍼마티아의 조직을 벗겨 내고 곤충 핀을 사용하여 여성의 조직에서 정자를 분리합니다. 마이크로 파이 패드를 사용하여, 냉각 제의 100 마이크로 리터를 포함하는 1.5 밀리리터 마이크로 튜브로 정자를 전송.F-제로 여왕과 정자의 샘플을 섭씨 95도에서 20분 동안 배양합니다. 플래시 센트로는 마이크로 튜브를 융합하고 샘플을 섭씨 4도에 저장합니다. siv-mated F-one 여왕에 의해 계란 생산을 확인 한 후, 창고 날개 또는 하나의 중간 다리와 유전자형을 사용하여 여왕의 DNA를 추출합니다.다음으로, 한쪽 다리를 지피하여 F-1 남성의 DNA를 추출합니다. 근친 교배 십자가에서 수컷 개미의 비옥을 평가하기 위하여는, 집게를 사용하여 PBS 용액의 400 마이크로리터와 유리 접시에 내부 생식 기관을 해부합니다. 그런 다음 PBS를 제거하고 마이크로 파이 패드를 사용하여 4 % 파라 포름 디히드로 대체하십시오.실온에서 40 분 동안 PFA의 샘플을 배양하여 조직을 수정하십시오. 고정 후 마이크로 파이 패드를 사용하여 PBS의 400 마이크로 리터로 조직을 다섯 번 씻으시다. PBS에서 밀리리터당 1밀리그램으로 DAPI 용액을 희석합니다.PBS를 제거하고 희석된 DAPI 염색 용액의 약 300 마이크로리터를 조직에 추가합니다. 어두운 조건하에서 15 분 동안 조직을 배양하십시오. 인큐베이션에 이어, PBS의 400 마이크로리터로 조직을 5번 세척하고 집게를 사용하여 유리 슬라이드의 중심으로 조직을 옮겨.그런 다음 TRITC 테트라메틸lrhodamine을 포함하는 마운팅 매체에 조직을 장착. 마지막으로 20 또는 60 3x 객관적인 렌즈를 사용하여 공초점 레이저 스캐닝 현미경으로 샘플을 관찰합니다. Haploid 남성 v Emeryi의 고환의 현미경 이미지는 건강한 섬유 조직을 보여주지 않은 디플로이드 남성 v 에메리에 없는 건강한 섬유 조직 또는 정자를 보여줍니다.디플로이드 남성 v 에메리의 남성 생식 기관은 정자를 생산하지 않았고 그들의 고환은 개발되지 않았으며, 근친 교배 십자가에서 생산된 수컷은 멸균된다는 것을 시사합니다. 개발 후,이 기술은 빠른 타이밍 개미 종에 대한 볼렌호비아 에메리에서 상수에서 섹스 myatony을 탐구하는 방법을 포장.

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Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

신경 유도는 뇌의 형성의 첫 단계입니다. 그것은 Hensen의 노드 (주최자), 신경 운명을 채택할에 인접한 조직을 지시하는 메커니즘이며, 신경 계통을 일으키다하는 즉. 이 비디오는 여자의 배아에서 신경 유도에 대한 분석을 보여줍니다.

칙의 배아에서 신경 유도에 대한 분석

우리는 강아지풀 트리아 비리 디스 (S. 트리아 비리 디스)에있는 십자가를 수행하기위한 방법을 개발했습니다. 이 방법은 가능한 화분을 죽일 전에 뜨거운 물 처리에 원추 꽃차례를 치기 포함한다. 십자가는 잘 통제 성장 정권 다음을 수행하며 일반적으로 1 종 / s의 이삭 당 교차 수분 7의 회복이 발생할 수 있습니다.

에 십자가를 수행하는 방법<em&gt; 강아지풀</em목초에 대한&gt;, 새로운 모델 시스템

정자 경쟁의 능력에 대한 평가의 차이<em&gt; 초파리</em

꽃 식물에 균 스프레이 고독한 꿀벌 꽃가루 부담 균 잔류물의 높은 농도에 노출 될 수 있습니다. 실험실 기반 실험 체 외에관련 된을 사용 하 여-reared 꿀벌 애벌레,이 연구 균 처리 꽃가루 호스트와 호스트 비 식물에서 파생 된 소모의 대화형 효과 조사.

생체 외에서 고독한 꿀벌의 양육: 애벌레 위험 요소를 평가 하기 위한 도구

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초적혈구 멜라노가스터의생존능력을 배아에서 성인으로 평가하는 직접적이고 간단한 방법

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손 수분, 현미경 검사법 및 유전자 분석을 결합한 살구의 자기 및 간 호환성 관계 결정

여기서는 형광염을 마커로 사용하여 남성 Aedes aegypti의 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 여성 모기는 교화를 위해 표시되고 표시되지 않은 수컷 모두에 노출됩니다. 후 짝짓기, 그들의 정자는 그들의 짝짓기 파트너를 결정하기 위하여 형광 현미경의 밑에 검토됩니다.

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여기에서 우리는 모델 유기체 C. elegans를 사용하여 배아 생존력과 생산된 배아(새끼)의 총 수를 결정하는 일반적인 방법을 제시합니다.

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체외 분석을 이용한 위장관 선충 알에 대한 Tithonia diversifolia 추출물의 항산화 및 구충제 특성 평가

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Real-time PCR을 이용한 SNP 유전형 분석에 의한 Caenorhabditis elegans 감수분열의 교차 빈도 및 분포

학습하세요 Vollenhovia emeryi 개미를 이용한 근친 교배 유도 및 평가 방법으로, 유전자 맵핑과 성 결정 메커니즘 연구에 활용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 실험실 조건에서 유전적 분석을 가능하게 합니다.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

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