표적 플라스미드 DNA 전달을 위한 메티오닌 기능화 생체 적합성 블록 공중합체

양이온 고분자 약물 운반체는 안정성이 좋고 면역원성이 낮으며 촉진제제 및 수정의 장점이 있다. 여기에서, 우리는 그것의 합성을 위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 가역적 첨가-단편화 사슬 전달 중합법제어 분자량 및 구조 및 운반 기능성 군을 가진 블록 폴리머를 산출하는 데 적용되는 방법이다.

이 약 운반대는 동시에 암, 염증 및 그밖 질병의 협력 처리를 달성하기 위하여 다른 약을 전송할 수 있습니다. IFT 중합은 고전적인 방법이며, 이 프로토콜은 유전자 치료에 대한 적용의 예를 제공한다. 이 중합체의 합성을 위한 성공의 열쇠는 반응 온도를 정확하게 제어하는 것입니다.

수조보다 오일 목욕을 사용하는 것이 좋습니다. 이 절차를 시작하려면, 중합 병으로 사용되는 고무 스토퍼와 자기 교반기로 둥근 바닥 플라스크를 얻을. 중합병내 증류수 1밀리리터에 비스 하이드록시 HEMA 1.87 그램을 녹입니다.

5 밀리 리터 비커에서, 용해 0.03 CTP의 그램과 ACVA의 0.02 그램 에 0.5 밀리리터 1, 4-dioxane. 이 혼합물을 중합 병에 넣습니다. 그런 다음 응축수 트랩을 사용하여 중합 병에서 용액을 동결합니다.

병을 철지지에 고정시키고 바늘로 걸린 도관을 사용하여 질소를 진공 청소기로 진공 청소기로 사용하고 반응 혼합물에 주입합니다. 그런 다음 중합병을 밀봉하고 실온에서 30분 동안 용액을 해동하십시오. 이 동결 펌프 해동 주기를 세 번 반복합니다.

그 후, 병을 오일 목욕에 넣고 70섭씨로 젖을 짜서 질소 대기 하에서 24시간 동안 용액이 반응하도록 한다. 다음 날, 중합병을 섭씨 0도에서 식히고 고무 스토퍼를 열어 중합 반응을 종료한다. 다음으로, 2시간 동안 음수 20도의 냉장고에 아세톤을 미리 식히고, 50 대 1의 비율로 중합 병에 반응 용액과 혼합한다.

원심분리기는 아세톤을 제거하고 침전물을 수집하기 위해 10분 동안 8, 200배 g에서 혼합물을 수집합니다. 합성 된 폴리 비스 하이드록시 HEMA를 정화하려면 수집 된 침전물을 순수 한 물의 2 밀리리터로 용해하십시오. 그런 다음 1 대 50의 비율로 미리 냉각 된 아세톤의 100 밀리리터와 섞습니다.

침전물을 수집하는 데 10분 동안 8, 200배 g의 원심분리제. 침전물을 3번 용해, 혼합 및 원심분리하는 이 정화 과정을 반복한다. 먼저, 10밀리리터 비커에 증류수 5밀리리터에 0.96 그램의 APMA 와 0.93 그램의 정제 된 폴리 비스 하이드록시 HEMA를 용해하십시오.

ACVA0.01 그램을 1, 4-디옥산의 0.5 밀리리터에 녹이고 APMA 및 폴리 비스 하이드록시 HEMA 용액에 추가하십시오. 이 혼합물을 중합 병에 옮기고 1 시간 동안 건조 질소로 환기시하십시오. 이어서, 중합병을 오일 목욕에 넣고 섭씨 70도에서, 질소 대기 하에서 24시간 동안 반응하게 한다.

다음 날, 중합병을 섭씨 0도에서 식히고 고무 스토퍼를 열어 중합 공정 용액을 종료한다. 시작하려면 MCF-7 세포를 6웰 플레이트의 우물로 잘 하여 20, 000세포의 밀도가 있습니다. 가습 된 인큐베이터에서 세포를 섭씨 37도에서 12 시간 동안 5 %의 이산화탄소로 배양합니다.

그 후, 배양 배지를 양이온 폴리머 및 pDNA 폴리플렉스 폴리플렉스를 함유하는 신선한 배양 배지로 대체하여 질소 대 인 비의 상이한 비율의 폴리플렉스를 대체한다. 6 시간 동안 세포를 배양 한 다음 배지를 신선한 RPMI 1640 배지의 2 밀리리터로 대체합니다. 48시간 동안 계속 배양하십시오.

그런 다음, 세포를 수집하고, 녹색 형광을 검출하기 위해 유동 세포계를 사용합니다. 본 연구에서는, 메티오닌-기능성 생체적합성 블록 중합체는 가역적인 부화-단편화 사슬 전달 방법을 통해 제조되고, 얻어진 mBG의 플라스미드 DNA 복합 능력 및 이들의 트랜스포팅 효율을 조사한다. mBG/pDNA 폴리플렉스의 평균 입자 크기와 제타 전위는 각각 124나노미터와 15.7밀리볼트이며, N 대 P 비율은 16이다.

전기 전도 체질은 N 대 P 비율이 0인 pDNA가 아가로즈 겔의 구속 없이 움직일 수 있으며 겔 이미저에서 줄무늬로 관찰된다는 것을 보여준다. pDNA가 mBG로 복잡해지면 pDNA의 움직임이 지연되고 그 후 대역의 밝기가 감소됩니다. 이는 MBG가 N에서 P까지 4개 이상이면 pDNA를 완전히 복잡하게 만들 수 있음을 보여준다.

mBG/pDNA 폴리플렉스의 세포 독성은 다음 표준 MTT 분석기를 사용하여 측정된 다음 이러한 결과는 mBG/pDNA 폴리플렉스가 4, 8, 16 및 32의 N-p DNA 비에서 PEI/pDNA 폴리플렉스보다 세포 독성이 있음을 보여준다. 또한 볼 수 있듯이, mBG/pDNA 폴리플렉스의 세포 독성은 N 대 P 비율이 증가함에 따라 증가합니다. 이 증가 된 세포 독성은 양전하 GPMA 구성 요소의 결과입니다.

pDNA 경질 실험에 사용되는 N-대 P 비율은 세포 독성 결과에 따라 선택된다. mBG1, mBG2 및 mBG3의 경질 능력은 GFP 형광 강도를 측정하여 비교되며, 그 결과는 mBG3가 최적의 유전자 담체임을 보여주었다. 실트 라운드 하단 플라스크에서 공기를 배출하고 반응 온도를 유지하는 것이 중요합니다.

얻어진 중합체 약물 운반체는 화학요법 약물 및 유전자 약물의 공동 전달에 적용되어 약물 내성 암을 시너지 효과를 낼 수 있다. 유전자 약물과 화학 요법 약물의 조합의 분자 메커니즘은 약물 내성 종양의 치료를 위해 더 탐구 될 수 있습니다. 아세톤은 급성 독성에 대한 낮은 독성으로 평가된다.

키, 흡입 또는 눈이나 피부와의 접촉을 피해야합니다. 가열 절차 중에 스케일링의 위험을 피하십시오.