Name: 속 Magnetospirillum의 Magnetotactic 박테리아 성장: 변종 MSR-1, 자녀-1 및 MS-1 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: 배우세요 Magnetospirillum 속 MSR-1, AMB-1, MS-1 균주의 자성세균 배양법을 알아보세요. 액체 및 반고체 배지에서 산소 농도를 정밀 제어하여 재현성 있는 연구에 필수적인 균체 증식 기술을 습득합니다.

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우리는 전자 현미경 시설 (McMaster 대학, 교육 및 액세스에 대 한 MTB, 아담 P. 히치콕과 Xiaohui 주 맥 매스 터 대학, MTB 문화를 설정 하는 동안 그들의 지원에 대 한 문화와 마 샤 레이드로 그의 도움에 감사 리처드 B. 프 랭 클 건강 과학의 학부)입니다. 이 작품은 자연 과학 및 캐나다 엔지니어링 연구 위원회 (NSERC)와 미국 국립 과학 재단에 의해 지원 되었다.

1. 설치 N2 역
참고: 최소 누설 가스 탱크에 연결 될 수 있으며 1 mL 플라스틱 주사기의 실린더는 밀접 하 게이 튜브에 맞는 튜브의 내부 직경을 선택 합니다. 가스 역 완벽 한 N2 의 그림은 그림 1에 제공 됩니다.
<ol><li>안전 하 게 설치에 충분 한 공간이 N2 역 (약 50 cm의 길이)을 설정 하는 벤치에 가까운 N2 가스 탱크.</li>
	<li>역 건설 될 지역에 도달 충분히 튜브의 조각 탱크에 연결 합니다. 필요한 경우, 어떤 누설을 방지 하기 위해 탱크의 출력에 테 플 론 테이프를 적용 합니다.</li>
	<li>동시에 역 중간의 버블링 5 병의 능력을 구축, 길이 약 5 cm의 튜빙의 4 조각 잘라.</li>
	<li>3 3 방향 T-모양의 플라스틱 피팅 라인에 배관의 조각을 조립. 여분의 T-모양의 피팅을 통해 N2 탱크의 출력에서 튜브의 조각에이 라인의 한쪽 끝을 연결 합니다. 90 ° 팔꿈치 피팅 다른 끝에 추가 합니다.</li>
	<li>수평 금속 막대 구조를 연결할 사용 테이프는 벤치 위에 약 30 cm 배치.</li>
	<li>튜빙 (길이 약 20 cm) 단계 1.4에서 설치 피팅 무료 출력의 5 개를 연결 합니다.</li>
	<li>5 1.0 mL 플라스틱 주사기에서 피스톤을 제거 하 고 이러한 주사기의 더 큰 끝을 잘라 (즉., 반대 측 바늘), 졸업된 부분만 유지. 면, 너무 밀접 하 게 이러한 주사기를 채우십시오.</li>
	<li>튜빙의 20 cm 긴 수직 조각에 주사기를 삽입 하 고 N2 흐르는 때 누설을 비눗물을 사용 합니다.</li>
	<li>5 25 G 바늘 (0.5 m m x 25 m m)의 모자를 제거 하 고 얇은 튜브 10 cm 조각으로이 바늘을 삽입. 바늘 튜브에 밀접 하 게 맞는 확인 하십시오. 주의:이 단계 동안 찔 러의 위험이 있다. 그렇게 천천히, 그리고 신중 하 게.</li>
	<li>준비 단계 1.9에서 N2 역의 주사기 바늘을 연결 합니다. N2 모든 5 개의 라인을 통해 흐르는 지 확인 하 고 대기중에 역을 유지.</li>
</ol>2. 성장 매체 준비
참고: 그것은 2.1.2, 2.2.2 2.3.8 단계에 설명 된 대로 준비, 매체의 크기를 조정할 수 있습니다. 물과 화학 물질의 양을 비례 조정 그냥 요구를 사용. 모든 중간 부품의 역할은 보조 표 1에 설명 되어 있습니다.
<ol><li>MSR-1 액체 성장 매체의 준비<ol>
<li>이온을 제거 된 증류수 100 mL에 제 2 철 구 연산 염의 0.245 g를 추가 하 여 10 m m 제 2 철 구 연산 염 해결책을 준비 합니다. 가 열 하 고 솔루션을 얻은 분명 오렌지에 노란색까지 해산 저 어. 오토 클레이 브는 표준을 사용 하 여 솔루션 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 주기 고 어둠 속에서 실 온에서이 재고 솔루션을 저장 합니다. 참고: 때는 침전 되 고 명백한 제 2 철 구 연산 염 해결책을 삭제 합니다.</li>
		<li>비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 1.0 mL 추적 미네랄의 보완 솔루션, KH2포4의 0.1 g, MgSO4.7 H2O의 0.15 g, HEPES, 2.38 g 나노3 의 0.34 g 0.1 g의 효 모 추출 물, 콩 콩 펩의 3.0 g 칼륨 젖 산 염 (60 %w / w 솔루션) 및 10 m m Fe(III) 시트르산 재고 솔루션의 5 mL 4.35 mL. 참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 이 프로토콜의 1 단계에서에서 만든 것과 같은 동시에 버블링 5 병 수 역 N2 에 대 한 매체의 300 mL를 준비 합니다. 주의: 추적 미네랄 및 Fe(III) 시트르산 재고 솔루션 무 균 유지 될 필요가. 오염 방지, 그들 (분 젠 버너를 사용 하 여 병의 불꽃 오픈 정상)을 사용 하는 경우 표준 무 균 기술을 사용 하 여 사용 하 살 균 피 펫 팁 분배 합니다. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄 솔루션 저장</li>
		<li>모든 화학 제품의 추가 후 1m NaOH 솔루션 7.0에 pH를 조정 합니다. 갓된 매체 125 mL 혈 청 병으로 분배. 각 병에는 중간의 60 mL를 붓으십시오.</li>
		<li>버블 N2 용된 O2를 제거 하려면 30 분 중간에, 작은 튜브를 사용 하 여 1 단계에에서 설명 된 N2 역에 연결 됩니다. 병 종료를 초과 하는 가스를 수 있도록 작은 개통을 두고 각 병 위에 부 틸 고무 마 개를 놓습니다. 주의: N2버블링 하는 동안 거품 형성 수 있습니다. 거품 생산을 피하기 위해 가스 흐름을 적절 하 게 조정 합니다.</li>
		<li>주름 각 병 준비 스 토퍼와 알루미늄 인감 인감. 알루미늄 인감 병 프로토콜의 나머지 기간 동안 봉인 유지 보장 합니다.</li>
		<li>N2 역에서 바늘과 얇은 튜브를 분리 하 고 깨끗 한 바늘 (1 인치, ≤ 23 G)와 함께 그들을 대체. 가스의 부드러운 연속 흐름 종료 (약 50 mL/min) 탱크 N2 탱크의 밸브를 조정 합니다. 참고: 바늘 23 G 보다 큰 마 개에 영구 unsealable 구멍을 떠날 수 있습니다.</li>
		<li>고무 마 개를 통해 매체의 병에 N2 탱크에 연결 된 바늘 중 하나를 삽입 합니다. 즉시 동일한 병에 다른 깨끗 한 바늘을 삽입 합니다. 다른 병에 대 한이 단계를 반복 하 고 약 30 분 N2에 의해 병에 공기를 대체 하기 위하여 N2 흐름을 보자.</li>
		<li>해당 주사 바늘을 제거 하 여 N2 역에서 한 병을 분리 합니다. 대기 압력 매체의 병에 압력 감소 때까지 몇 초 동안 기다립니다 고 두 번째 바늘을 제거 합니다. 나머지 모든 병에 대 한이 단계를 반복 합니다. O2 단계 2.1.4 후 성장 매체의 병을 다시 입력 하지 않도록 주의: 단계 2.1.4-2.1.8 빠른 승계에서 수행 합니다. 모든 병은 N2 역에 동시에 연결할 수 없습니다, 병의 첫 번째 집합에 대 한 단계 2.1.4-2.1.8와 함께 진행 하 고 나머지 병에 대 한 다음이 단계를 반복.</li>
		<li>오토 클레이 브는 병. 하룻밤 실 온까지 멋진 그들을 보자 그리고 이후에 그들을 상 온에서 저장.</li>
	</ol></li>
	<li>자녀 1 및 MS-1 액체 성장 매체의 준비<ol>
<li>10 m m 제 2 철 quinate 솔루션을 준비 합니다. 먼저 0.19 g quinic 산 이온 증류수 100 mL에의 해산 다음 FeCl3.6H2를 해산, 어두운 빨간색, 명확한 솔루션을 얻을 때까지 저 어 오 0.27 g를 추가 합니다. 표준 사이클 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 사용 하 여 솔루션 압력솥. 참고: 균 재고 솔루션으로 어둠 속에서 실 온에서 제 2 철 quinate 솔루션을 저장 합니다. 때는 침전 되 고 확실 한 솔루션을 삭제 합니다.</li>
		<li>비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 비타민 보충 솔루션의 10.0 mL, 추적 미네랄 보충 솔루션, KH2포4, 염기 나트륨 호박의 0.848 g의 0.68 g의 5.0 mL hexahydrate, 디 나트륨 주석산이 수화물, 나트륨 아세테이트 안, 0.1%의 0.45 mL의 0.083 g의 0.575 g 수성 Resazurin, 나노3, 0.04 g 의약품 및 10 m m Fe(III) quinate 재고 솔루션 3.0 mL 0.17 g. 참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 이 프로토콜의 1 단계에서에서 만든 것과 같은 동시에 버블링 5 병 수 역 N2 에 대 한 매체의 300 mL를 준비 합니다. 주의: 비타민, 추적 미네랄과 Fe(III) quinate 재고 솔루션 살 균 보관을 해야 합니다. 오염 방지를 사용 하 여 표준 메 마른 기술 및 소독 피 펫 팁 분배 때. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄과 비타민 솔루션 저장</li>
		<li>모든 화학 제품의 추가 후에 6.75 1m NaOH 솔루션을 사용 하 여 pH를 조정 합니다.</li>
		<li>프로토콜의 나머지 부분에 대 한 단계 2.1.3-2.1.9를 참조 하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>MSR-1 반 고체 성장 매체의 준비<ol>
<li>K2HPO4 3.362 g와 KH2포4 이온 증류수 100 mL에의 4.178 g을 용 해 하 여 0.5 M 인산 염 버퍼 솔루션 pH 7.0을 준비 합니다. PH 7.0 인지 확인 하 고 KH2포4 와 NaOH 필요한 경우 약간 pH를 조정. 밀폐 유리병 (산소 교류를 피하기 위해 플라스틱 바람직)에서 솔루션을 저장 합니다.</li>
		<li>100 mL 0.02 M 염 솔루션의 준비. 이 솔루션에 FeCl2.4H2O의 0.2 g을 추가 하 고 10 m m 철 염화 물 해결책을 얻기 위하여 해산 저 어. 밀폐 유리병에 어둠 속에서 솔루션을 저장 합니다.</li>
		<li>6.72 g NaHCO3 이온 증류수 100 mL에 용 해 하 여 0.8 M 탄산 솔루션을 준비 합니다. 밀폐 유리병에 솔루션을 저장 합니다.</li>
		<li>고압 솔루션 단계 2.2.1-표준 주기 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 사용 하 여 2.2.3에서에서 준비. 어둠 속에서 그들로 살 균 재고 솔루션 저장 합니다.</li>
		<li>비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 추적 미네랄 보충 솔루션 1% 수성 resazurin 솔루션, 0.4 g의 NaCl, NH4Cl, MgSO4.7H2의 0.1 g의 0.3 g의 0.2 mL의 5 mL O, CaCl2.2H2O, 1 g의 나트륨 호박, 0.5 g의 나트륨 아세테이트, 0.2 g의 효 모 추출의 0.05 g, 한 천의 1.6 g.</li>
		<li>알루미늄 호 일 및 고압 솔루션 단계 2.3.5에서에서 준비 비 커를 커버.</li>
		<li>바로 압력솥 사이클의 끝 전에 준비 신선한 4 %L-cysteine· HCl· L-cysteine·의 0.8 g을 용 해 하 여 H2O 솔루션 HCl· H2O 이온 증류수 20 ml. 5 M NaOH 솔루션 pH 7.0에 솔루션을 무력화. 주의: 시스테인 솔루션은 cysteine의 산화 방지에 신선한 준비는 중요 하다.입니다. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄 솔루션 저장</li>
		<li>압력가 마로 소독, 후 50-60 ° c 중간 식 고 분 젠 버너의 불꽃에서 비 커를가지고. 알루미늄 호 일을 제거 하 고 신속 하 게 부드럽게 저 어 하는 동안에 다음을 추가: 비타민 솔루션, 2.8 mL의 멸 균 인산 염 버퍼 재고 솔루션, 메 마른 철 염화 재고 솔루션, 살 균 탄산 주식의 1.8 mL의 3 mL의 0.5 mL 솔루션 및 필터 소독 시스테인 솔루션의 10 mL 참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 매체의 120 mL의 배치를 준비 하는 일반적으로 편리 하다. 주의: 모든 솔루션 미래 사용을 위해 무 균 유지 되어야 합니다. 수행 단계 2.3.8 표준 메 마른 기술 및 소독 피 펫을 사용 하 여 팁을 분배 하는 경우.</li>
		<li>모든 화학 제품의 추가 후 16 mL 살 균 스크류 캡 Hungate 튜브로 따뜻한 매체를 전송. 각 관으로 매체의 12 mL를 전송 하 고 튜브 인감. 주의: 오염을 방지 하려면 단계 2.3.9 분 젠 버너의 불꽃에서 수행 합니다. 전에 agar 굳은, 매체는 40 ° C 이상 수행 합니다.</li>
		<li>튜브는 agar 고형화 하 고는 오 된다 명백한, 무색 인터페이스, 매체의 표면 아래 약 1 ~ 3 cm에 분홍색으로 구체화 될 때까지 몇 시간 동안 그대로 둡니다. 참고: 매체 튜브에 무색 차례 천천히 해야 합니다. 이 전환에 필요한 시간의 양을 변수 이며 처음 매체에 녹아 있는 O2 의 금액에 따라 달라 집니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3입니다. MTB의 접종
참고: 긴장, 자녀-1 MS-1 및 MSR-1의 문화는 상업적으로 얻을 수 있습니다 (자료 테이블).
주의: 무 균 조건, 분 젠 버너의 화 염에에서 모든 다음 단계를 수행 합니다.
<ol><li>MSR-1, 자녀-1 MS 1 변종 액체 매체에서의 접종<ol>
<li>부 틸 고무 마 개 및 알루미늄 주름 인감 빈 125 mL 혈 청 병을 봉인. 마 개를 통해 병에 두 바늘을 삽입 하 고 그들 중 하나를 단계 1.7에서 준비 하는 주사기를 연결. O2 N2 역 사용으로 배관의 같은 종류의 실린더에 주사기를 연결 합니다.</li>
		<li>병에 모든 공기 O2로 대체 됩니다 것을 보장 하기 위해 약 30 분, 병을 통해 O2 흐름을 보자. 병 그리고 압력솥에서 약간의 압력에 대 한 수 있도록 두 바늘을 제거 합니다. 사용 하기 전에 실내 온도에 아래로 냉각 하기 위하여 병을 수 있습니다. 참고: 시간을 절약 하려면 중간 준비 및 고압 매체 또는 재고 솔루션 병 단계 3.1.1 3.1.2를 수행 합니다.</li>
		<li>그들의 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 적용 분 젠 버너의 불꽃을 통해 그들을 전달 하 여 신선한 중간 병의 O2 병 stoppers의 꼭대기를 소독.</li>
		<li>멸 균 주사기와 바늘을 사용 하, O2 병에서 O2 의 1 mL를 추출 하 고 신선한 중간 병으로 그것을 전송. 그 바늘 밀접 하 게 맞는 주사기에이 단계 동안 주사기에서 공기를 방지 하기 다는 것을 확인 하십시오.</li>
		<li>유리 병에서 재배 하는 다른 문화에서 inoculum을 사용 하 여, 그들의 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 적용 분 젠 버너의 불꽃을 통해 그들을 전달 하 여 신선한 중간 병의 오래 된 문화 병 stoppers를 소독. 냉동 문화 관에서 inoculum을 사용 하는 경우 그냥 하자 실내 온도까지 따뜻한 분 젠 버너의 불꽃에서 밀봉 된 튜브와 함께.</li>
		<li>유리 병에서 재배 하는 다른 문화에서 inoculum을 사용 하 여, 신선한 매체에 이전 문화의 1 mL를 접종. 냉동된 재고에서 inoculate를 사용 하는 경우는 글리세롤 또는 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 냉동 법에 사용 된 희석만 0.1 mL 접종. 두 경우 모두에서 무 균 바늘과 멸 균 주사기를 사용 합니다.</li>
		<li>32 ° C에서 문화를 품 어와 4 ~ 7 일 후 신선한 매체에 접종.</li>
	</ol>
</li>
	<li>O2 그라데이션 반 고체 매체에 MSR-1의 접종<ol>
<li>신선한 매체의 튜브 핑크 무색 인터페이스에 의해 구체화 정의 오 표시 확인 합니다.</li>
		<li>경우는 inoculum 다른 O2 농도 기온 변화도 세미 단단한 문화에서 오고 있다, 박테리아에 의해 결성 된 밴드에 살 균 피 펫 팁 문화의 pipetting 50 µ L에 의해 박테리아를 수확. 천천히 인터페이스 방해를 피하고 신선한 매체 (핑크/무색 인터페이스), 오에이 박테리아를 예방. 경우는 inoculum 언된 문화에서 오고 있다, 대신 inoculum의 100 µ L와 같은 방법으로 진행 합니다.</li>
		<li>튜브와 25 ° C와 30 ° C 사이 박테리아 성장 하자 인감 박테리아의 밴드는 매체의 표면에 도달 하기 전에 동일한 절차를 사용 하 여 신선한 매체에 전송 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4입니다. 박테리아의 관찰
<ol><li>그것의 위에 70% 에탄올 솔루션을 적용 하는 분 젠 버너의 불꽃을 통해 전달 하 여 문화 병의 마 개를 소독. 반 고체 매체, 분 젠 버너의 불꽃에서 튜브를 엽니다. 멸 균 바늘과 멸 균 주사기를 사용 하 여 박테리아를 추출.</li>
	<li>교수형을 사용 하 여 드롭 박테리아를 모두 자기와 운동 방법8 . 참고: 단계 대조 현미경 검사 법 좋은 결과 제공 하지만 필수 아니에요. 배율 10 X 60 X까지 적당 하다.</li>
	<li>전송 전자 현미경 (TEM)을 사용 하 여 셀 구조와 세부8magnetosomes 관찰.</li>
</ol>

<ol><li>Blakemore, R. P. <a target="_blank" href="https://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.mi.36.100182.001245">Magnetotactic bacteria.</a> Annual Reviews in Microbiology. 36 (1), 217-238 (1982).</li>
<li>Uebe, R., Schüler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetosome+biogenesis+in+magnetotactic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Magnetosome biogenesis in magnetotactic bacteria.</a> Nature Reviews Microbiology. 14 (10), 621(2016).</li>
<li>Faivre, D., Schuler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetotactic+bacteria+and+magnetosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Magnetotactic bacteria and magnetosomes.</a> Chemical Reviews. 108 (11), 4875-4898 (2008).</li>
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<li>Lefèvre, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+of+magneto-aerotactic+behaviors+and+oxygen+sensing+mechanisms+in+cultured+magnetotactic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Diversity of magneto-aerotactic behaviors and oxygen sensing mechanisms in cultured magnetotactic bacteria.</a> Biophysical Journal. 107 (2), 527-538 (2014).</li>
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<li>Scheffel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+acidic+protein+aligns+magnetosomes+along+a+filamentous+structure+in+magnetotactic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An acidic protein aligns magnetosomes along a filamentous structure in magnetotactic bacteria.</a> Nature. 440 (7080), 110(2006).</li>
<li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+spectroscopy+and+magnetism+of+extracted+and+intracellular+magnetosomes+using+soft+X-ray+ptychography%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Measuring spectroscopy and magnetism of extracted and intracellular magnetosomes using soft X-ray ptychography.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (51), E8219-E8227 (2016).</li>
<li>Schüler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+analysis+of+a+subcellular+compartment%3A+the+magnetosome+membrane+in+Magnetospirillum+gryphiswaldense%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Molecular analysis of a subcellular compartment: the magnetosome membrane in Magnetospirillum gryphiswaldense.</a> Archives of Microbiology. 181 (1), 1-7 (2004).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

O2 농도의 특정 요구 사항을 MTB 특수 실험실에서 성장 하 게. 액체 매체에 대 한 프로토콜의 중요 한 단계는 O2, 접종 직전의 확실 한 볼륨을 추가 하 여 최종 농도 제어 하기 위해 모든 O2 매체에서의 초기 제거 이다. 그러나 그것은 MSR-1 거의 완벽 하 게 호 기성 조건 하에서 성장,, 세포의 자기 대폭 감소 표시 되었습니다. 같은 연구에서 결과 자녀 1 긴장과 MS-1 완벽 하 게 호 기성 조건6에서 성장 하지 않습니다 나타났다. MSR-1의 반 고체 문화에 대 한 모든 O2 시스테인 솔루션에 의해 감소 먼저 나타나고 O2 농도 기온 변화도는 오의 형성에 지도. 문화 잘 성장 하지 않습니다 또는 자석, O2 농도 확인을 먼저 해야 합니다.
반 고체 성장 매체는 알 수 없는 MTB를 분리 하거나 성장 하는 ...

Magnetotactic 박테리아 (MTB) 그람 음성 원핵생물 담 수 및 해양 수 중 서식 지1에서 유비 쿼터 스의 넓은 범위를 나타냅니다. 대부분의 경우는 셀 안에 체인으로 조립에 있는 자 철 광 (철3O4) 또는 greigite (Fe3S4), 자기 결정을 생산 하는 능력을 공유 하는 이러한 박테리아. 이 특정 구조상 주제 및 각 크리스탈2를 포위 하는 지질 막에 박테리아의 세포질에서 둘 다 행동 몇 가지 특정 단백질의 존재 때문 이다. 각 개별 크리스탈과 그 주변 막 소포는 magnetosome 이라고 하며 크기는 약 30에서 50에 이르기까지 Magnetospirillum 종3nm. Magnetosomes의 체인 배열 때문에 이러한 박테리아 그들 정렬 수 동적으로 외부에서 인가 되는 자기장은 영구 자석 쌍 극 자 모멘트를 소유한 다. 따라서, 이러한 박테리아 적극적으로 행동 하는 자기 추진된 마이크로-나침반을 아마도 효과적으로 찾아 가장 유리한 조건으로 자기장 라인을 따라 수영 (예., O2 농도) 성장을 위한.
MTB의 재미 있는 재산 모두 화학 및 그들의 magnetosome 결정의 결정학 그들의 능력입니다. 대부분 종자 생산의 자 철 광 또는 greigite, 상대적으로 고 순도 결정 몇몇 biomineralize 모두 미네랄4. 모든 경우에, 박테리아는 크기와 그들의 단일 마그네틱 도메인 결정의 모양을 정확 하 게 제어할 수 있습니다. 이 MTB이 biomineralization 프로세스를 수행 하는 방법의 더 나은 이해를 개발 하기 위해 연구의 큰 금액은 착수 하는 왜 설명 한다. 이 프로세스를 이해을 재단사-마그네틱 나노 많은 상업 및 의료 응용 프로그램에 대 한 연구 수 있습니다.
MTB에 대 한 광범위 한 연구에 상당한 장애물이 실험실에서 성장 하는 그들의 어려움을 하고있다. 대부분,이 작품에 사용 된 긴장을 포함 하 여 종은 obligately microaerophilic O2 터미널 전자 수락자로 성장 하는 때 이다. 이 이러한 박테리아 oxic 무산 소 조건 (oxic 무산 소 인터페이스 오) 사이의 전이 영역에서 가장 자주 발견 왜 설명 한다. 이 명확 하 게 MTB 분명히 이러한 생물에 대 한 성장 매체를 고안 하는 때 고려 될 필요가 있는 정확한 O2 농도 요구 보여줍니다. 또한, MTB의 위대한 기존 다양성 다른 긴장 다른 유형의 화학 기온 변화도 및 최적의 성장을 달성 하기 위해 영양분 필요 합니다 의미 합니다.
이 작품에서는, 우리는 성장 하는 가장 널리 공부 MTB의 3 방법을 설명: Magnetospirillum magneticum (스트레인 자녀-1), M. magnetotacticum (MS-1)와 M. gryphiswaldense (MSR-1). 이러한 종 phylogenetically Proteobacteria 문에서 Alphaproteobacteria 클래스에 속하고, 형태학에 헬리컬 있으며 셀의 각 끝에 극 지 편 소유. 우리는 변형 MSR-1 액체와 O2 농도 기온 변화도 세미 솔리드 미디어, 이전에 게시 중간 조리법5,6에 따라 성장에 대 한 프로토콜을 제공 합니다. 우리는 또한 수정된 자석 Spirillum 성장 매체 (MGSM)7에 성장 하는 자녀-1와 MS 1 긴장 상세한 프로토콜을 제시.

<table><tbody><tr><td>AMB-1</td><td>미국식 문화 컬렉션(ATCC)</td><td>ATCC 700264</td><td></td></tr><tr><td>MS-1</td><td>ATCC</td><td>ATCC 31632&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MSR-1</td><td>Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)</td><td>DSM 6361</td><td></td></tr><tr><td>구연산</td>철 <td>Sigma-Aldrich</td><td>F3388-250G</td><td></td></tr><tr><td>미량 미네랄 보충제</td><td>ATCC</td><td>MD-TMS</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>EMD</td><td>PX1565-1</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4.7 H2O</td><td>EMD</td><td>MX0070-1</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>BioShop Canada Inc</td><td>HEP001.250</td><td></td></tr><tr><td>NaNO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5506-250G</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>Fischer scientific</td><td>DF210929</td><td></td></tr><tr><td>펩톤</td><td>Fischer scientific</td><td>DF0436-17-5</td><td></td></tr><tr><td>L-젖산 칼륨 용액(60%)</td><td>시그마-알드리치</td><td>60389-250ML-F</td><td></td></tr><tr><td>D-(-)-퀴닉애씨드</td><td>시그마-알드리치</td><td>138622</td><td></td></tr><tr><td>FeCl3.6H2O</td><td>Fischer scientific</td><td>I88-100</td><td></td></tr><tr><td>비타민 보충제</td><td>ATCC</td><td>MD-VS</td><td></td></tr><tr><td>호박산나트륨 헥사하이드레이트</td><td>Fischer Scientific</td><td>S413-500</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 L-타르타르산염 이염기성 이수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>228729-100G</td><td></td></tr><tr><td>아세트산나트륨 삼수화물</td><td>EMD</td><td>SX0255-1</td><td></td></tr><tr><td>레사주린</td><td>Difco</td><td>0704-13</td><td></td></tr><tr><td>아스코르브산</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4544-25G</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Caledon</td><td>6620-1-65</td><td></td></tr><tr><td>FeCl2 .4H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>44939-250G</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>EMD</td><td>SX0320-1</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Caledon</td><td>7560-1</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>EMD</td><td>1011450500</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2.2 H2O</td><td>EMD</td><td>1023820500</td><td></td></tr><tr><td>Agar A</td><td>Bio Basic Canada Inc</td><td>FB0010</td><td></td></tr><tr><td>L-cysteine.HCl.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7880-100G</td><td></td></tr><tr><td>1.0 mL 주사기</td><td>Fischer scientific</td><td>B309659</td><td></td></tr><tr><td>25G&nbsp; x 1 바늘</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>125 mL 세럼 병</td><td>Wheaton</td><td>223748</td><td></td></tr><tr><td>20 mm 알루미늄 씰</td><td>Wheaton</td><td>224223-01</td><td></td></tr><tr><td>20mm E-Z 크림퍼</td><td>Wheaton</td><td>W225303</td><td></td></tr><tr><td>부틸 고무 마개</td><td>Bellco Glass, Inc.</td><td>2048-11800</td><td></td></tr><tr><td>Hungate 튜브</td><td>Chemglass (VWR)</td><td>CLS-4208-01</td><td></td></tr><tr><td>셉텀 스토퍼, 13mm, Hungate</td><td>Bellco Glass, Inc.</td><td>2047-11600</td><td></td></tr><tr><td>유리 배양 튜브</td><td>코닝 (VWR)</td> <td>9826-16X</td><td></td></tr><tr><td>염산 36.5-38 %, 생물 시</td><td>약 시그마-알드리치</td><td>H1758-100ML</td><td>11.6-12 N</td></tr></tbody></table>

속 magnetospirillum의 magnetotactic 박테리아 성장: 변종 msr-1, 자녀-1 및 ms-1

Growing Magnetotactic Bacteria of the Genus Magnetospirillum: Strains MSR-1, AMB-1 and MS-1

Magnetotactic 박테리아는 그람 음성, 운동, 주로 수생 원핵생물 유비 쿼터 스 담 수 및 해양 서식 지에서. 그들은 biomineralize magnetosomes는 자석 나노미터 크기의 결정의 자 철 광 (철3O4) 또는 greigite (Fe3S4) 내 지질 bilayer 막으로 둘러싸여 있는 그들의 능력에 의해 특징은 그들의 세포질입니다. 대부분 알려진된 magnetotactic 박테리아, magnetosomes 체인 함으로써 셀에 영구 자석 쌍 극 자 모멘트를 부여 하 고 수 동적으로 외부 자기장에 맞게 그들을 일으키는 원인이 되는 세포질 내에 조립 된다. 이 특정 기능으로 인해 magnetotactic 박테리아 상업 및 의료 응용 프로그램에 대 한 큰 잠재력이 있다. 그러나, 대부분의 종은 microaerophilic 이며 특정 O2 농도 요구, 그들 더 어렵게 대장균등 다른 많은 박테리아 보다 정기적으로 성장 하. 여기 선물이 3 Magnetospirillum속에 속하는 모든 magnetotactic 박테리아의 가장 널리 공부 긴장의 성장에 대 한 상세한 프로토콜. 이러한 방법을 이용할 박테리아, 그들은 일반적으로 성장 하 고 합성 magnetosomes 있도록 O2 농도의 정확한 제어를 위한 수 있습니다. 이 절차를 사용 하 여 추가 연구 magnetotactic 박테리아 성장 미생물학에 전문가 experimentalist이 필요 하지 않습니다. 비록 그것이 성장 미디어 화학 성분 수정 될 필요가 있을 것 이다 가능성이이 문서에 제공 된 일반 방법 또한 분리 하 고 다른 magnetotactic 박테리아 문화 사용할 수 있습니다.

성장 매체의 성공적인 준비는 다음과 같이 평가 될 수 있다. 과정의 끝에 취소 솔루션 (즉., 어떤 침전의 무료) 받아야 (이 액체 미디어와 O2 그라데이션 반 고체 매체). 그림 2a에서 접종을 볼 수 있습니다 전에 MSR-1 액체 매체의 예상된 부분을 표시 한 그림. 성공적인 O2 농도 기온 변화도 세미 단단한 매체 (그림 3, 튜브 A) 튜브의 상단에 분홍색 매체의 1-3 cm의 존재에 의해 표시 된 몇 시간 후 오 한의 형성에 의해 신호입니다. 매체의 나머지는 무색 이어야 한다. 접종 전에 resazurin의 완전 한 산화의 표시는 모든 분홍색 매체 및 따라서 O2 농도 기온 변화도의 실패 한 준비의.
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우리는 성장 하는 두 가지 유형의 성장 매체에서 Magnetospirillum 의 여러 변종에 대 한 절차를 제시. MSR-1 Magnetospirillum gryphiswaldense 긴장은 성장 액체와 O2 농도 기온 변화도에 반 고체 미디어 M. magneticum AMB 1 긴장과 M. magnetotacticum 변형 MS-1 액체 매체에서 성장 하는 동안.

속 Magnetospirillum의 Magnetotactic 박테리아 성장: 변종 MSR-1, 자녀-1 및 MS-1

Magnetotactic bacteria are Gram-negative, motile, mainly aquatic prokaryotes ubiquitous in freshwater and marine habitats. They are characterized by their ...

이 방법은 MSR-1, AMB-1 및 MS-1이라고 불리는 3종의 자기성 박테리아를 재배할 수 있습니다. 모든 담수 종, 그리고 속 자성구리움에서 모두. 그것은 이 유기체를 관련시키는 재현가능한 연구의 어떤 종류에 대한 필수적인 첫번째 단계입니다.자기 전술 박테리아는 매우 구체적인 산소 요구 사항이, 그래서 그들은 자기 탐색 시스템을 개발. 따라서 그들에게 사용할 수있는 산소의 양을 제어하는 것이 매우 중요합니다. 이 프로토콜의 모든 민물 자기 피릴라의 몇 가지 특정 변종에 최적화 되었습니다.그 세부 사항은 다른 자기 전술 박테리아의 산소와 영양소 요구 사항을 수용하기 위해 최적화 할 수 있습니다. 질소 스테이션을 설치하기에 충분한 공간이 있는 벤치 근처에 질소 가스 탱크를 안전하게 설치합니다. 역이 건설 될 지역에 도달 할 만큼 긴 탱크에 튜브의 조각을 연결합니다.필요한 경우 누출을 방지하기 위해 탱크출력에 테플론 테이프를 적용하십시오. 5병의 매체를 동시에 버블링할 수 있는 스테이션을 건설하기 위해, 5센티미터 길이의 4개의 튜브를 잘라냅니다. 3방향 T자 형 플라스틱 피팅 3개로 튜빙 조각을 조합합니다.이 라인의 한쪽 끝을 질소 탱크의 출력에 튜브 조각에 추가 T 자형 피팅을 연결합니다. 다른 쪽 끝에 90도 팔꿈치 피팅을 추가합니다. 테이프를 사용하여 구조물을 벤치 위에 30센티미터 떨어진 수평 금속 막대에 부착합니다.설치 된 피팅의 세 출력에 길이 20 센티미터의 튜브 의 다섯 조각을 연결합니다. 5개의 1밀리리터 플라스틱 주사기에서 피스톤을 제거하고, 이 주사기의 더 큰 끝을 잘라내어 졸업한 부분만 유지합니다. 이 주사기를 면으로 채우고 너무 단단히 포장하지 않도록주의하십시오.20센티미터 길이의 수직 튜브 에 주사기를 삽입합니다. 가스를 켜고 비눗물을 사용하여 질소가 흐르면 누출이 없도록 합니다. 5 개의 25 게이지 바늘의 캡을 제거하고 이 바늘을 얇은 튜브의 10센티미터 조각에 삽입하십시오.준비된 바늘을 질소 스테이션의 주사기에 부착합니다. 질소가 5개 선 모두를 통해 흐르는지 확인하고 스테이션을 대기 상태로 유지합니다. 10밀리알페라 페릭 구연산용액을 100밀리리터에 0.245그램의 페리 구연산제에 첨가하여 준비합니다.가열하고 오렌지 클리어 용액이 얻어지을 때까지 녹입니다. 용액을 121도에서 15분 이상 노출한 후 어두운 실온에서 멸균 된 스톡 솔루션을 저장합니다. MSR-1용 액체 성장 배지 5병을 준비하려면 증류수 300밀리리터를 포함하는 비커에 텍스트 프로토콜에 나열된 화학 물질을 추가합니다.멸균 페라닉 구연산및 미네랄 용액의 첨가는 멸균 기술을 사용하여 분젠 버너의 불꽃 아래에서 수행해야 합니다. 멸균 조건은 다른 세균성 종에 의한 배양의 오염을 피하기 위해 필수적입니다. 모든 화학 물질을 첨가한 후, 1개의 어금니 나트륨 수산화용액으로 pH를 7.0으로 조정한다.갓 준비된 배지를 125밀리리터 세럼 병에 담아 각 병에 60밀리리터의 배지를 붓습니다. 질소 스테이션에 연결된 작은 튜브를 사용하여 용존 산소를 제거하기 위해 30 분 동안 배지로 질소를 거품. 각 병 위에 부틸 고무 스토퍼를 놓고 여분의 가스가 병을 빠져나갈 수 있도록 작은 개구부를 남깁니다.30분 후, 준비된 스토퍼와 알루미늄 씰로 각 병을 밀봉합니다. 알루미늄 씰은 나머지 프로토콜 중에 병이 밀봉되도록 합니다. 질소 스테이션에서 바늘과 얇은 튜브를 분리하고 깨끗한 바늘로 대체하십시오.질소 탱크의 밸브를 조정하여 부드럽고 연속적인 가스 흐름이 탱크를 빠져나옵니다. 이제 질소 탱크에 연결된 바늘 중 하나를 고무 스토퍼를 통해 배지 병에 삽입합니다. 즉시 같은 병에 다른 깨끗한 바늘을 삽입합니다.다른 병에 대해 이 단계를 반복하고 질소가 약 30분 동안 흐르면 병의 공기를 질소로 대체하십시오. 30분 후, 해당 바늘을 제거하여 질소 스테이션에서 1병을 분리합니다. 매체 병의 압력이 대기압으로 감소할 때까지 몇 초 동안 기다렸다가 두 번째 바늘을 제거하십시오.남은 모든 병에 대해 이 단계를 반복합니다. MSR-1용 반고체 성장 배지 120밀리리터를 제조하려면 비커를 알루미늄 호일로 덮고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 제조된 솔루션을 자동 복제합니다. 오토클레이브 주기가 끝나기 직전에, 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이, 새로운 4%시스테인 용액을 준비하고 5개의 어금니 나트륨 수산화용액으로 pH를 7.0으로 조정한다.오토클레이브 후, 매체를 섭씨 50~60도로 식히고, 분젠 버너의 불꽃 아래에서 비커를 가져온다. 알루미늄 호일을 제거하고 부드럽게 교반하면서 멸균 기술을 사용하여 텍스트 프로토콜에 나열된 화학 물질을 신속하게 추가합니다. 필터 살균 시스테인 용액 1.2 밀리리터를 추가합니다.모든 화학 물질을 첨가한 후 따뜻한 배지를 16 밀리리터 멸균 나사 캡 Hungate 튜브로 옮기십시오. 배지의 12 밀리리터를 각 튜브로 옮기고 튜브를 밀봉합니다. 액체 매체에서 MSR-1, AMB-1 및 MS-1균제의 침구를 접종하기 위해 스토퍼에 에탄올을 적용하고 분젠 버너의 불꽃을 통과하여 산소와 신선한 중간 크기의 상단을 화염.멸균 주사기와 바늘을 사용하여 산소 병에서 1 밀리리터의 산소를 추출하여 신선한 중간 크기 병으로 옮습니다. 유리병에서 자란 다른 배양으로부터의 접종을 사용하는 경우, 두 병을 모두 화염. 그런 다음 오래된 문화의 1 밀리리터를 신선한 매체로 접종합니다.문화를 섭씨 32도에서 배양하고 4~7일 후에 신선한 매체로 접종합니다. 산소 그라데이션, 반고체 배지에서 MSR-1을 접종하기 위해, 신선한 배지의 튜브가 잘 정의된 OAI를 표시하고, 분홍색으로 유색 인터페이스에 의해 중간 표면 아래 약 1~3cm를 나타낸다는 것을 확인한다. 접종이 다른 산소 농도 그라데이션 반고체 배양에서 오는 경우, 박테리아에 의해 형성된 밴드에 배치된 멸균 파이펫 팁으로 배양의 50 마이크로리터를 심서 박테리아를 수확한다.인터페이스를 방해하는 것을 피하면서 OAI에서 이러한 박테리아를 신선한 배지에서 천천히 접종합니다. 튜브를 밀봉하고 박테리아가 섭씨 25도에서 섭씨 30도 사이로 자랄 수 있습니다. 박테리아가 자기와 모달인지 확인하기 위해 현미경 커버 슬립에 배양 한 방울을 놓습니다.커버 슬립을 뒤집어 유리 슬라이드에 놓는 O 링에 설치합니다. 드롭이 하단 슬라이드에 닿지 않는지 확인합니다. 매달려 있는 방울을 현미경 아래에 놓고 물방울 가장자리에 집중하십시오.자석의 남극을 그 가장자리에 가깝게 놓고 박테리아가 가장자리를 향해 수영하는 것을 지켜보십시오. 자석을 뒤집어 반대 방향으로 수영할 수 있도록 합니다. 여기에 접종 전과 세균 성장 후 액체 매체의 병이 표시됩니다.두 번째 병의 탁도는 박테리아가 성장하고 있음을 나타냅니다. 이 두 번 가속 영화는 모달 과 자기 자기 자기 박테리아 문화에 대한 매달려 드롭 실험의 예상 결과를 보여줍니다. 박테리아는 자기장이 적용될 때 처음에 물방울의 가장자리를 향해 헤엄쳤다.자석의 필드 방향이 반전되면 박테리아가 자기장이 적용되는 가장자리에서 멀리 헤엄치게 됩니다. 여기에 접종 전과 세균 성장 후 반고체 배지의 튜브가 표시됩니다. 예상대로, 박테리아의 밴드는 산화 무산소 인터페이스에서 형성하고 산소가 소비되고 인터페이스가 위로 이동함에 따라 시간이 지남에 따라 마이그레이션됩니다.여기에 표시된 자기 첨탑의 대표적인 전자 현미경 그래프입니다. 표기는 검은 화살표로 표시되고 빨간색 화살표는 자력을 표시합니다. 이 절차를 시도할 때, 자기 성 박테리아는 모두 제대로 성장하고 자기를 생산하기 위해 매우 구체적인 산소 수준 요구 사항이 있음을 기억하는 것이 매우 중요합니다.이 프로토콜은 이러한 유기체가 선호하는 미생물 조건을 달성하기 위해 성장 매체의 산소 수준을 제어하고 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 이 방법에 따라, 건강하고 높은 자기 세포의 고농도를 얻을 수있다. 이러한 방식으로, 다량의 박테리아를 필요로 하는 실험은 자기추출, 유전체학 및 유전연구, 또는 현미경검사법에 의한 집단운동 관찰과 같은 수행될 수 있다.실험실에서 자기 조직 박테리아를 성장 하는 가능성은 정말 이러한 유기 체의 매혹적인 생화 확 적인 및 물리적 속성 체계적인 방법으로 탐험 하는 과학자 를 허용 했다.

growing-magnetotactic-bacteria-genus-magnetospirillum-strains-msr-1

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

엄마가 magnetosome 활성화에 참여하는 표시되었습니다 독특한 Magnetosome 관련된 단백질이다. 여기에서 엄마가 삭제 돌연변이의 정화 프로토콜 (MamAΔ41)을...

의 정화 M. magneticum 스트레인 AMB - 1 Magnetosome 관련 단백질 MamAΔ41

출처: Le Nagard, L., et al. Magnetospirillum 속의 성장하는 자기 이동성 박테리아: 균주 MSR-1, AMB-1 및 MS-1. J. Vis. 경험. (2018).이 비디오는 액체 및 반고체 배지를 모두 사용하여 미호기성 조건에서 마그네토스피릴룸 박테리아를 배양하는 방법을 보여줍니다. 이는 산소-무산소 계면에서 눈에 보이는 박테리아 밴드의 형성과 산소가 고갈됨에 따라 상향 이동을 강조합니다. 이 비디오는 또한 자기장에 대한 반응으로 방향성 수영을 관찰하여 자기 이동 행동을 평가하는 방법을 보여줍니다.

마그네토스피릴룸 박테리아 성장 및 자기 이동 거동 평가

우리는 자연 물에 적용 할 수있는 magnetotactic 박테리아 (MTB)를 수집하는 방법을 보여줍니다. MTB는 고립과 박테리아의 자연 자기의 활용 비교적 간단한 설정을 사용하여 침전 샘플 풍부하게 할 수 있습니다. 절연 MTB 그런 다음 빛과 전자 현미경를 사용하여 자세하게 검토 할 수 있습니다.

당연히 환경에서 Magnetotactic 박테리아를 발생의 수집, 절연 및 강화

매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분석법(MALDI-TOF MS) 및 분자 기술(16S rRNA 유전자 염기서열 분석)을 통해 일상적인 진단에서 희귀 박테리아 병원체를 식별할 수 있습니다. 이 프로토콜의 목표는 보다 정확하고 신뢰할 수 있는 데이터를 제공하는 두 기술의 조합에 있습니다.

16S rRNA의 유전자 시퀀싱과 MALDI-TOF MS에 의해 희귀 세균성 병원체의 식별

코발트 도핑된 마그네토페리틴의 합성 및 양이온화를 위한 프로토콜과 양이온화된 마그네토페리틴으로 줄기세포를 빠르게 자화하는 방법을 제시합니다.

세포의 초고속 자화에 대한 양이온 Magnetoferritin의 합성

이 프로토콜의 전반적인 목표는 비용 효율적인, 노트북에 대 한 기능 nanosensors을 합성 하 고의 급속 한 탐지는 자석 및 형광 방출 modalities의 결합을 통해 병원 성 박테리아에 특히 표적으로.

E. 콜라이 O157:H7의 Foodborne 병원 체 검사를 사용 하 여 자기 형광 Nanosensor: 신속한 감지

이 문서는 제자리에서 비행 시간 2 차 이온 질량 분석 매핑의 화학 수 화 상태에서 미세 반응 기, 액체 진공 인터페이스에 분석을 위한 시스템으로 사용에 대 한 biofilm 성장을 위한 메서드를 제공 합니다. 녹색 형광 단백질으로 Shewanella oneidensis 미스터 1 모델로 사용 되었다.

제자리에서 Shewanella oneidensis MR1 Biofilms SALVI 및 ToF 심즈의 특성

MAPS 기술은 생체 내에서 특정 조절 RNA의 표적을 면밀히 조사하기 위해 개발되었습니다. 관심의 sRNA는 RNA 의 RNA 파트너의 공동 정화및 RNA 시퀀싱에 의한 그들의 식별을 가능하게 하는 MS2 aptamer로 태그됩니다. 이 수정 된 프로토콜은 특히 그램 양성 박테리아에 적합합니다.

그람 양성 박테리아에서 RNA 염기서열분석과 결합된 MS2-선호도 정화

이 프로토콜은 Mycobacterium smegmatis(Msm)의 액센 배양에서 천연 마이코박테리아 세포외 소포체(mEV)의 농축과 mCherry(적색 형광 리포터) 함유 재조합 MsmEV를 설계하고 농축할 수 있는 방법을 자세히 설명합니다. 마지막으로, 결핵균(Mycobacterium tuberculosis)의 EsxA 단백질을 함유한 MsmEV의 농축을 통해 새로운 접근법을 검증합니다.

마이코박테리아의 native and recombinant extracellular vesicles 농축

의 액체 기반 culturing 및 분배를위한...

형광등과 높은 처리량 검사 및 Biosensing C. 엘레간스 레인스

배우세요 Magnetospirillum 속 MSR-1, AMB-1, MS-1 균주의 자성세균 배양법을 알아보세요. 액체 및 반고체 배지에서 산소 농도를 정밀 제어하여 재현성 있는 연구에 필수적인 균체 증식 기술을 습득합니다.

속 Magnetospirillum의 Magnetotactic 박테리아 성장: 변종 MSR-1, 자녀-1 및 MS-1

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