인간 폐 조직에서 ZW10 상호 작용 단백질의 면역 염색의 디지털 분석

이 방법은 병리학 및 면역 조직 화학의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 충분히 빠르며 고품질의 디지털 미디어를 생성한다는 것입니다. 먼저 3-3센티미터 쿵 조직 샘플을 실온에서 24시간 동안 4%의 파라포름알데히드에 고정합니다.

다음 날, 실온에서 상승 에탄올 몰입에 조직을 탈수, 치료 당 20 분 동안 100 %의 자일렌에 세 개의 몰입. 마지막 자일렌 몰입 후, 30 분 동안 63도 섭씨 파라핀에 조직을 배치하고 신선한 63도 파라핀에 두 번째 45 분 침수 한 다음 마지막 한 시간 잠복에 대한 파라핀을 한 번 더 변경합니다. 파라핀이 냉각되면 회전 식 마이크로토메를 사용하여 파라핀 임베디드 조직 샘플의 5 마이크로미터 두께의 섹션을 획득하여 밀리리터 당 20 마이크로그램당 폴리 L-리신 코팅 슬라이드의 섹션을 캡처합니다.

탈왁싱을 위해 슬라이드를 섭씨 65도 오븐에 2시간 동안 넣고 디메틸벤젠에 15분 간 침수한 다음 15분 동안 100% 자일렌에 담근 다음 내림차순 에탄올 몰입 시리즈에서 슬라이드를 재수화합니다. 항원 수리를 위해 슬라이드를 항원 수리 상자에 넣고 300 밀리리터의 구연산 수리 액을 상자에 넣습니다. 상자를 전자레인지에 2분간 가열한 다음 저전력으로 가열하여 6분간 끓입니다.

슬라이드가 실온으로 냉각되면 실온에서 회전 셰이커에 3개의 5분 0.01 어금니 PBS 세척으로 조직 샘플을 세척합니다. 내인성 과산화효소를 제거하려면 실온의 젖은 상자에 30 분 동안 과산화수소 3 %를 배양하십시오. 인큐베이션이 끝나면 슬라이드를 시연한 대로 세척하고 각 섹션의 비특이적 바인딩을 섭씨 37도에서 39분 동안 100마이크로리터100 마이크로리터로 연결합니다.

다음으로, 슬라이드당 항 ZWINT 항체 100 마이크로리터를 밤새 섭씨 4도에서 분류하고 0.01 대구 PBS에서 3개의 세차재를 분류합니다. 마지막 세척 후, 37섭씨37도에서 30분 동안 적절한 이차 항체로 슬라이드를 배양한 다음 3개의 0.01 어금음 PBS 세척을 한다. 마지막 세척 후, 10 분 동안 신선한 DAB의 300 마이크로 리터에 슬라이드를 추가한 다음 실온에서 수돗물로 10 초 세척합니다.

헤마톡슬린 염색 용액으로 조직을 실온에서 2분 동안 염색한 다음 수돗물로 세척한 다음, 상승에 탄올 몰입으로 조직을 다시 탈수한 다음 실온에서 자일렌에 15분 동안 침전됩니다. 마지막 100% 에탄올 침수 후, 중성 잇몸 용액에 5%자일렌의 15 마이크로리터로 섹션을 장착하고 각 조직 샘플을 커버 유리로 덮습니다. 섹션의 자동 전체 슬라이드 스캐닝의 경우 먼저 슬라이드가 실온에서 12시간 동안 건조하여 조직 샘플을 담정할 수 있도록 합니다.

다음으로 자동 전체 슬라이드 스캐너에서 브라이트필드를 수동으로 선택하고 수동 스캐닝 인터페이스를 입력합니다. 슬라이드이름을 수정하고 이미지에 대한 저장소 경로를 선택합니다. 검색 영역을 설정하고 사용자 집합 임계값 옵션을 사용하여 검사 샘플을 선택합니다.

임계값은 약 50이며 스캐닝 영역 확장 값은 200 마이크로미터입니다. 스캔 포커스 값을 설정하고 자동 초점 및 단일 레이어 모드를 선택한 다음 슬라이드를 워크 스테이션에 로드하고 자동 스캐닝을 시작합니다. 모든 슬라이드를 스캔한 후 나중에 분석을 위해 이미지를 저장합니다.

폐 조직 섹션의 이미지를 분석하려면 조직 병리학 적 이미지 분석 소프트웨어를 열고 로컬 컴퓨터를 선택하여 스캔 데이터로 파일을 엽니다. 적절한 줌 레벨을 선택하고 Toggle 색상 Adjust를 사용하여 색상을 최적의 대비로 설정한 다음 각 이미지의 관심 영역을 원/ 이름을 지정합니다. 다음, 플러그인에서, QC를 선택합니다. 시나리오 빌더가 나타납니다.

밀도 퀀트를 선택하고 감지 막대를 조정합니다. 동그라미 영역의 염색 강도가 원본 이미지와 유사할 때까지 점수 레벨을 조정하고 모델을 새 파일로 저장하고 이름을 지정한 다음 모델을 다른 슬라이드에 적용하고 선택한 별표로 선택하여 소프트웨어가 각 이미지에 대한 관심 영역에 대한 APE 점수를 자동으로 계산할 수 있도록 합니다. 비소세포 폐암 표본에서 종양및 인접한 비종양 조직의 전체 슬라이드 디지털 스캐닝은 고품질의 디지털 이미지를 생성합니다.

이러한 유형의 폐암 샘플에서 계산된 APE 점수는 일반적으로 인접한 비암 조직에 대해 결정된 것보다 훨씬 높습니다. 또한, 편평형 세포 암 조직 단면에서 ZWINT 발현 수준은 자주 축종 조직 샘플에서 측정된 것보다 상당히 높은 것으로 결정된다. 이 절차를 시도하는 동안 병리학적 스캐닝을하는 동안 종양 이나 종양 부위의 고품질을 준비하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

이 절차에 따라, 현미경 검사법의 다른 방법은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 병리학적 스캐닝을 위한 방법이나 다른 방법도 없습니다. 이 기술이 병리학 적 스캐닝 분야의 연구자들이 연구 목적의 디지털 진단을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

paraformaldehyde와 함께 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 마스크와 같은 예방 조치는 항상이 절차를 수행하는 동안 취해야한다는 것을 잊지 마십시오.