병 변 특성화 및 작은 동물 두뇌에 전극을 위치에 대 한 마이크로-CT 기반 방법

이 방법은 병변을 확인하고 전극 위치를 찾기위한 보다 간단하고 적은 오류 경향이 및 보다 정량적인 방법을 제공함으로써 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단면화없이 전체 뇌의 병변 및 전극 부위의 검증을 허용한다는 것입니다. 최종 제품은 뇌의 디지털 3D 볼륨이며 여러 뇌를 병렬로 처리 할 수 있습니다.

이 방법은 쥐에서 입증될 것이지만, 마우스 및 얼룩말 핀치와 같은 다른 유기체에도 적용될 수 있다. 일반적으로, 이 방법에 새로운 개인 은 몇 가지 단계는 최상의 결과 보장 하기 위해 특정 주의 필요 하기 때문에 투쟁 할 것 이다. 시작하려면 추출된 뇌를 50밀리리터 원문 튜브에 주입용액에 배치합니다.

샘플을 섭씨 4도에서 부드럽게 흔들어 2~3일 동안 보관하십시오. 오스뮴이 완충제가 아닌 물에 희석되어 있는지 확인하십시오. 이는 물이 가벼운 세제역할을 하여 오스뮴이 조직 깊숙이 침투할 수 있기 때문입니다.

이중 증류수에 2%의 오스뮴 테트산화물 50밀리리터를 준비합니다. 그런 다음 새로운 50 밀리리터 원옥 튜브에 뇌를 배치하고 osmium 테트옥사이드 용액을 추가합니다. 튜브를 닫고 파라핀 필름으로 밀봉하여 누출을 방지합니다.

밀봉된 튜브를 섭씨 4도에 보관하고 2주 동안 부드러운 흔들림을 냅니다. 튜브가 수평으로 배치되었는지 확인합니다. 뇌는 매우 두껍고 확산으로 여행하는 긴 방법입니다.

튜브를 수평으로 배치하면 오스뮴이 조직 깊숙이 들어갈 수 있습니다. 샘플이 2 주 동안 배양 한 후, 샘플에서 모든 무한 한 osmium 테트산화물을 제거하기 위해 다섯 번 두 번 증류된 물로 씻어. 다음으로, 샘플을 섭씨 4도에서 30분 간 양적 증류수로 씻어내면 됩니다.

이중 증류수를 에탄올 4개의 희석물로 교체하여 시료를 탈수시합니다. 수지 침투 과정을 시작하려면 3개의 아세톤과 3개의 아세톤 수지 희석제를 통해 샘플을 이동한 다음 실온에서 100% 수지로 샘플을 담그고 침투 과정을 계속합니다. 그 후 시료를 일회용 금형으로 옮기습니다.

실온에서 4시간 동안 신선한 100% 수지와 샘플을 주입합니다. 45도에서 15분 동안 진공 오븐에서 샘플을 탈바합니다. 그런 다음 60 °C에서 48 시간 동안 오븐에서 샘플을 치료하십시오.

마지막으로 시료가 경화되면 일회용 금형을 벗겨 내고 Micro-CT 기계로 스캔합니다. 전통적인 단면에서 뇌의 방향은 미리 결정되어야 합니다. 이 Micro-CT 방법을 사용하여, 샘플 뇌의 디지털 볼륨은 3 차원에서 조작하고 사실상 어떤 방향으로 슬라이스 할 수 있습니다.

준비된 쥐 뇌의 전자 현미경 검사를 스캔하면 조직이 Micro-CT 이미징의 목적으로 크게 손상되지 않았는지 확인합니다. 얼룩말 핀치 뇌는 또한 준비 하 고 다른 작은 동물 두뇌에이 방법의 유틸리티를 테스트 하기 위해이 프로토콜에 따라 스캔. 이 기술은 뇌의 표면 병변뿐만 아니라 뇌 깊은 병변을 찾는 데 사용할 수 있습니다.

이 기술은 또한 좌측, 전해질 병변, 전극 트랙, 테트로드 어레이, 그 자리에서실리콘 프로브의 단일 테트로드 의 위치에 적용될 수 있다. 이 절차를 시도하는 동안, 뇌가 충분히 오랫동안 충분한 동요와 함께 배양 할 수 있도록 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라, 광유전학과 2광자 화상 진찰 같이 그밖 방법은 다른 두뇌 지역이 다른 행동에서 재생하는 역할에 관하여 추가 질문에 대답하기 위하여 수행될 수 있습니다.

이 기술은 신경 과학 분야의 연구원이 쥐, 마우스, 송버드 및 기타 작은 동물의 뇌와 행동 사이의 구조 기능 관계를 더 잘 탐구할 수 있게 할 수 있습니다. osmium과 함께 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 장갑을 착용하고 진공 후드에서 작업하는 것과 같은 예방 조치는 이 절차를 수행하는 동안 항상 취해야 합니다.