산 성 침 용 법을 사용 하 여 전체 신장의 네 프 론의 수 추정

산 성 메이세레이션 방법은 신장에 대한 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있으며 특정 유전자가 신장 발달에 기여하거나 영향을 미치는 방법과 당뇨병이나 고혈압과 같은 특정 조건이 nephron 수에 미치는 영향을 미칩니다. 이것은 태아 발달 도중 태어난 개별을 가진 출생한 개별이 신장 병리학과 연관되었기 때문에 신장의 총 수로 중요합니다. 산 성 메이션 방법의 주요 장점은 자기 공명 화상 진찰과 같은 다른 nephron 카운팅 방법 보다 더 빠르고, 재현 가능하고, 저렴하며, 시간이 덜 소요된다는 것입니다.

이 기술은 신장 기능에 대한 신장 수의 영향의 상관 관계를 용이하게하며, 이는 특정 유전자가 nephron 기능 및 개발에 미치는 영향에 대한 이해를 증진하는 데 중요합니다. 전반적인 nephron 수에 영향을 미치는 유전자 또는 요인의 연구는 질병 관련 nephron 손실을 제한하도록 설계된 약리학 또는 유전 적 접근의 개발에 도움이 될 것입니다. 좋은 실험 기술과 연습으로, 이 방법에 새로운 개인은 쉽게 전체 신장 nephron 수의 신뢰할 수 있고 재현 가능한 추정을 허용하는 산 성 메이션 방법의 숙달을 얻어야 한다.

미세 한 수술 가위를 사용하여 중간선을 따라 마우스 복강을 열어 시작합니다. 창자와 생식 지방을 동물의 오른쪽으로 조심스럽게 옮길 수 있습니다. 총 해부를 사용하여 왼쪽 신장을 분리하고 왼쪽 신장 동맥과 정맥을 잘라 내어 장기를 PBS의 적절하게 표시된 계량 보트로 배치한 신장을 조심스럽게 제거합니다.

같은 방식으로 올바른 신장을 수집하고 PBS로 미리 촉촉한 수술 거즈에 신장을 배치합니다. 어떤 부착된 비 신장 조직 및 신장 캡슐을 신속하게 제거하십시오. 그런 다음 각 신장에 개별적으로 좌우 기관의 무게를 별도로 기록합니다.

계량 후 각 신장을 PBS 없이 적절하게 표시된 계량 보트에 다시 넣고 깨끗한 면도날을 사용하여 각 장기를 반길이로 자릅니다. 각 신장 반컷 측면을 놓고 각 절반을 2밀리미터 또는 작은 조각으로 자른다. 동일한 면도날을 사용하여 다진 신장 조각을 적절하게 표시된 15 밀리리터 원판 튜브로 조심스럽게 옮기십시오.

통풍이 잘 되는 연기 후드에 각 튜브에 6개의 어금다 염산 5밀리리터를 추가합니다. 다음으로, 90 분 동안 37섭씨 수조에 튜브를 넣기 전에 신장산 혼합물을 부드럽게 교반합니다. 산성 메이션의 끝에서, 신장 당 하나의 5 밀리리터 주사기에 하나의 18 게이지 바늘을 부착하고 신중하게 주사기 플런지를 제거합니다.

주사기를 개별 50 밀리리터 원추형 튜브에 연기 후드에 넣고 각 주사기의 열린 끝에 신장 솔루션을 부어 빈 튜브를 테스트 튜브 랙에 따로 놓습니다. 그런 다음 바늘을 통해 50 밀리리터 튜브로 각 용액의 느린 압출을 위해 플런서를 조심스럽게 교체하십시오. 15 밀리리터 원옥 튜브를 튜브 당 PBS 용액 5밀리리터로 세척하여 PBS를 소용돌이시면 남은 신장 조직을 용해시합니다.

방금 입증 된 대로 적절한 50 밀리리터 튜브에 세척 내용을 돌출하십시오. 세 번째 세척을 압출 한 후 각 주사기를 21 게이지 바늘로 장착하십시오. 50 밀리리터 튜브의 내용을 작은 보어 바늘 세척을 통해 50 밀리리터 튜브의 두 번째 세트로 돌출하고 신선한 PBS로 처음 50 밀리리터 튜브 내용을 세 번 압출합니다.

세 번째 세척 및 압출 후, 추가 PBS와 각 튜브에 총 볼륨을 가지고 하룻밤 4 섭씨에서 로커 플레이트에 랙에 튜브를 배치합니다. 처리 5일 이내에 12개의 웰 플레이트의 6개의 우물 바닥에 16개의 별도의 섹션이 포함된 그리드를 배치합니다. 부드럽게 펠릿 조직을 다시 중단 신장 용액의 튜브를 여러 번 반전.

신장당 각 균질화 용액의 500마이크로리터 알리쿼트 3개를 신장당 3개의 웰 각 에 12개의 웰 플레이트에 조심스럽게 추가합니다. PBS의 동일한 볼륨으로 각 우물의 내용을 희석. 반전 된 현미경의 단계에 접시를 배치합니다.

구형 구조, 붉은 색조 및 개별 글로메룰리 의 몸에 부착 된 동맥 이전 또는 포스트 동맥에 의해 구물물기를 식별합니다. 각 그리드섹션당 글로메룰리 수를 계산하여 그리드당 수를 계산하여 음부당 총 구물수 수를 계산합니다. 그런 다음 신장 당 글로메룰리의 평균 수를 얻기 위해 100 번 잘 당 글로메룰리의 수를 곱합니다.

본 대표적인 실험에서, 14일 동안 차량으로 주입된 마우스의 전체 네프론 수는 신장당 약 12, 500개의 네프론이었다. 그러나 안지오텐신2주주입은 심방 압력을 약 40mm의 수은으로 증가시켰으며, 전체 네프론 수의 거의 26% 감소와 관련이 있었다. 쥐 신장 기발생의 이 유전 모형에서는, 2개의 신장으로 품어진 동물은 입증된 바와 같이 산 성 maceration 후에 신장 당 약 27, 500의 신장당 신장당 신장을 포함하는 계산되었습니다, 고독한 신장으로 품어진 쥐는 현저하게 더 낮은 총 신장 수를 가지고 있는 동안.

두 실험에서 추정쥐에서 이전에 보고 된 범위와 일치 했다. 산성 메이세레이션 방법은 전체 신장에서 신장 의 니프론 수를 추정하는 데 이상적입니다, 특히 디섹터 분수 방법 또는 자기 공명 영상과 같은 nephrons을 계산하기위한 더 많은 노동 집약적 및 비용 금지 기술을 갖추고 있지 않은 실험실에서. 이 방법은 자기 공명 화상 진찰에 의해 결정된 숫자의 5% 이내인 전체 신장 신장 신장 수의 높은 처리량, 능률, 그리고 재현가능한 추정을 허용합니다.

신장의 수의 평가는 감소된 nephron 수가 만성 신장 병과 같은 심장 혈관 질병의 증가한 리스크와 연관되었기 때문에 임상 관련성입니다. 염산으로 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 장갑, 보호 안경 및 실험실 코트 착용과 같은 예방 조치를 취해야한다는 것을 잊지 마십시오.