Name: 소 유선 생 검 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 53 s
Description: 배우세요 소 유선 생검 기술을 통해 조직 채취 및 세포 배양 방법을 익히세요. 이 기술은 유방 생리학과 대사 연구에 필수적인 유전자 발현 및 단백질 분석에 활용됩니다.

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이 연구는 국립 동물 영양 프로그램 및 버지니아 기술에 의해 지원 되었다. 양 타 라 Pilonero, 박사 줄리 Settlage, 및 박사 Izabelle 텍사스의 기술 지원은 기꺼이 인정 됩니다.

설명 하는 모든 메서드는 버지니아 기술 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 되었다.
1입니다. 인사
<ol><li>수술 및 암소 처리 경험을 가진 두 개 이상 조 수 있다.</li>
	<li>기차 모든 보조 세 번 이상, 가능 하면 절차를 수행 하기 전에 시체 물자를 사용 하 여 라이브 동물에이 프로토콜을 연관. 참고: 훈련 된 강사에 의해 실시 해야 이전 훈련 하 고 기술을 수행.</li>
	<li>약국에 대 한 큰 동물성 수 의사에 손에 있고 이벤트에 응급 치료 절차 동안 필요 하 게 됩니다. 이 절차 중 발생할 수 있는 긴급 포함 하지만 제한 되지 않는다: 출혈, α-2 주 작동 근 과다 복용 및 폐 부 증, 역류 및 식품 소재, 통증, 그리고 더 진정 필요로 하는 환자 저항의 열망.</li>
</ol>2. 외과 기구, 공급 및 시설 준비
<ol><li>재고와 구입 모든 장비 및 소모품 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>깨끗 하 고 압력솥 수술 커튼, 생 검 계기, 메스 홀더, 외과 수건 및 집게.</li>
	<li>제대로 크기의 쥐 어 짜기 자동 활송 장치 그리고 암소를 억제 헤드 게이트 있다.</li>
	<li>짜기 자동 활송 장치 근처 테이블 작업 공간을 설정 합니다.</li>
	<li>작업 영역 깨끗 하 고 암소를 통해 트래픽을 제한 확인 하십시오.</li>
	<li>장비 및 쉬운 접근을 위한 작업 공간에서 공급을 구성 합니다.</li>
	<li>작업 공간 안에 적절 한 조명이 있다.</li>
</ol>3입니다. 동물의 준비
<ol><li>하루 예정된 생 검 전에 세척 하 고 동물, 특히 비료와 더러워진된 소재 제거를 젖 통을 문질러.</li>
	<li>안전 하 고 자비 롭 감 금 소의 절차를 따릅니다.</li>
	<li>생 검에 앞서 고 다시 생 검 시, 건강, 건강 상태 및 동물의 동작을 평가 합니다. 주: 최소 시험 포함 한다 온도, 맥 박, 호흡 속도 뿐만 아니라 피부염에 대 한 시험 제안 된 외과 사이트 또는 세균성 감염의 다른 영역. 각 분기에서 우유 샘플을 수집 하 고 유선 염에 대 한 확인.</li>
	<li>건강 한 소만을 사용 합니다.</li>
	<li>완전히 우유 암소입니다.</li>
	<li>짜기 낙하산 우유 분 비에 존재 최소화 하기 위해 우유의 2 시간 이내에 동물을 이동 합니다.</li>
	<li>머리 게이트 동물을 제 지.</li>
</ol>4. 진통 및 진정 작용
<ol><li>뒤로 방지 및 앞으로 움직임 암소의 머리에 밧줄 고삐를 놓습니다.</li>
	<li>1 개의 측에 동물의 머리를 당겨 하 고 빠른 릴리스 매듭을 사용 하 여 장소에 머리를 쥐 어 짜기 낙하산에 밧줄을 묶어.</li>
	<li>70% 이소프로필 알콜 면봉으로 주입의 영역을 청소 하 고 생 검 15-20 분 이전에 경 정 맥을 통해 정 맥 flunixin meglumine (몸 무게의 1.1 2.2 mg/kg)를 관리. 참고: 일부 프로토콜에 비 스테로이드 성 항 염증 약물 관리 되는 생 검 후 경우 항 염증 성 약물 연구 결과 영향을 미치지 것입니다.<ol>
<li>경 정 맥을 찾습니다.</li>
		<li>Jugular groove의 기지에서 압력의 신청에 의하여 경 정 맥을 올립니다.</li>
		<li>주사기에 없는 거품 인지 확인 하려면 선택 합니다.</li>
		<li>제기 경 정 맥에 바늘을 삽입 하 고 두 번 주사기로 0.5 mL의 혈액을 그리는 내용으로 혼합. 피는 주사기에 표시, 바늘을 재배치 합니다. 정 맥에 바늘 이면 내용을 주입.</li>
		<li>부드럽게 바늘을 제거 합니다.</li>
		<li>부드러운 압력으로 거 즈 출혈을 방지 하기 위해 사출 사이트에 적용 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Xylazine 염 정 맥 관리 (체중의 0.01 0.05 mg/kg) と 선박에 진정의 설립을 위한 충분 한 시간을 생 검 전에 약 5-10 분. 주의: 폐부종의 흔적에 대 한 동물을 확인 합니다. 폐 부 증의 임상 증상에는 호흡 곤란, 심한 호흡 곤란, 호흡 곤란, 기침, 거품가 래, 그리고 푸른 혀 포함 됩니다. 폐 부 증의 징후를 관찰 하는 경우 tolazine (몸 무게의 2 ~ 4 mg/kg)를 사용 하 여 xylazine 효과 반전 하는 것이 좋습니다.
	<ol>
<li>꼬리를 70% 이소프로필 알콜 면봉으로 주입의 영역을 청소.</li>
		<li>주사기에 없는 거품 인지 확인 하려면 선택 합니다.</li>
		<li>꼬리 선박에 바늘을 삽입 하 고 주사기로 혈액의 0.2 mL를 그릴 바늘은 그릇에 수 있도록 내용을 혼합. 선박에서 바늘 이면 주사 주사기 내용.</li>
		<li>부드럽게 바늘을 제거 합니다.</li>
		<li>부드러운 압력으로 거 즈 사출 사이트에 적용 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5입니다. 생 검 사이트의 준비
<ol><li>절차에 대 한 꼬리를 묶어 조수가 있다.</li>
	<li>(일반적으로 위 지역에 결합 조직 컬렉션을 최소화 하 고 선 구 덩이, 그림 1에 침투를 피하기 위해), 젖 통에 생 검 사이트를 선택 하 고 선택한 생 사이트에서 더러워진된 소재 또는 배설물을 제거.</li>
</ol><img alt="유방염 가능성을 나타내는 염증을 나타내는 뚜렷한 영역이 있는 소 유방." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1 . 소 젖 통 생 사이트 설명의 이미지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<ol start="3"><li>관찰 하 고 생 검 동안 이러한 혈관을 피하기 위해 어떤 큰 피하 혈관을 식별 하기 위해 특별 한 주의 함께 피부를 만져.</li>
	<li>생 검 사이트 주변 15 cm x 15 cm에서에서 머리 클립.</li>
	<li>Povidone-요오드 (0.75% 사용 가능한 요오드) 또는 액체 gluconate 스크럽 생 면을 준비 합니다. 대체 70% 이소프로필 알코올 세 번 이상 모든 가시와 보이지 않는 파편을 제거 하. 무 균 스크럽 솔루션 및 내부-아웃 방식을 사용 하 여 원형 모션에서 이소프로필 알콜 적용 합니다. 살 균 세탁 솔루션은 적어도 5 분 동안 피부 접촉 유지할 것을 인식 하시길 바랍니다.</li>
	<li>선 블록을 만들려고 절 개 사이트에서 2 %lidocaine 염 산 염의 6 mL을 피하 입금 18 G 바늘 세트 나비 주입을 사용 합니다. 깊은 조직에 침투 하지 않습니다. 참고: lidocaine의 복용량은 3과 8 mL 사이 변화 한다.</li>
	<li>지역 마 취 제 3 ~ 5 분 스크럽 솔루션 및 절 개 전에 알코올의 또 다른 반복 수행에 대 한 확산을 허용 합니다. 기다리는 동안, 생 검 계기를 준비 합니다.</li>
</ol>6. 생 검 절차
<ol><li>생 검 도구를 처리할 때와 절 개에 대 한 무 균 기술을 사용 합니다.</li>
	<li>모든 보이는 오염 제거 살 균 외과 장갑 적용 하 손을 씻으십시오.</li>
	<li>사용 순서에에서 메 마른 지역에서 수술 도구를 정렬 합니다. 번호 10 메스, 멸 균 거 즈, 조립된 생 악기, 그리고 hemostasis의 메 마른 수건 있다. 주: 코어 생 검을 수행 하기 위해 프로시저 1 또는 바늘 생 검을 수행 하는 프로시저 2 따릅니다.
</li>
</ol><img alt="크로마토그래피 시스템의 조립도; DNA 분리 공정을 위해 라벨이 붙고 번호가 매겨진 구성 요소." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2 . 어셈블리 및 V. C. 파, 그 외 여러분에 의해 설명 된 코어 생 검 도구 설정의 도식 표현 9 눈금 막대는 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="4"><li>코어 생 검 계기 (Farr 외.9)<ol>
<li>멸 균 글러브 (그림 2)를 사용 하 여 코어 생 검 악기를 조립 한다.<ol>
<li>무 균 드 레이프 (그림 2A)에 7 살 균 조각을 놓으십시오.</li>
			<li>조각 2 (그림 2B )에 도킹 시스템에 블레이드 (1 조각)를 삽입 합니다. 주의: 블레이드 라인에 직접 손가락을 배치 하지 마십시오.
</li>
			<li>도킹 스테이션 정렬 됩니다 있도록 조각 2 (그림 2C) 위에 조각 3을 삽입 합니다. 참고: 작품 4 (그림 2D)의 내부 벽에 도킹 시스템을 관찰 합니다.</li>
			<li>블레이드 (1 조각)의 최종 가장자리 조각 4 (그림 2D)의 도킹 시스템에 참여 합니다.</li>
			<li>조각 4 눈에 띄게 하 고 조각 4 조각 3 (그림 2E) 옆 인지 합니다.</li>
			<li>조각 5 장치 (블레이드 + 조각 2)에서 (그림 2F)를 삽입 합니다.</li>
			<li>도킹 스테이션 정렬 (그림 2G).</li>
			<li>조각 6 조각 2의 상단에 삽입 (칼 날의 반대편) (그림 2 H)</li>
			<li>도킹 스테이션 정렬 (그림 2 H).</li>
			<li>도킹 스테이션 (그림 2I)로 잠금 나사 (7 조각)를 삽입 합니다.</li>
			<li>조각 3 (블랙) 잠금 나사 커버를 앞으로 밀어. 주의: 블레이드 출구에 손가락을 배치 하지 마십시오.
</li>
			<li>조각 4를 전진 하는 도구를 활성화 하 고 외부 도구 블레이드를 관찰.</li>
			<li>(사용 가능) 도구에 블레이드를 철회를 다시 조각 4를 당겨. 참고: 블레이드는 도구는 biopsied 되도록 조직 안에 원하는 거리를 침투 하는 경우에 활성화 되어야 한다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>암소는 충분히 진정 생 사이트 충분히 anesthetized 확인 합니다. 반응이 되도록 피부를 대 타.</li>
		<li>피부와 피하 조직에서 인접 번호 10 메스를 사용 하 여 원심을 통해 2 ~ 3 cm 세로 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>무 균 기술을 사용 하 여 무선 드릴을 생 검 계기를 연결 합니다.</li>
		<li>생 검 도구에 대 한 드릴 놓고 도구는 드릴에 단단히 연결 되어 있으면 확인 합니다.</li>
		<li>개인 모든 절차 동안 꼬리를 상승 함으로써 적절 한 구속을 확인 합니다.</li>
		<li>시계 방향 회전 및 낮은 속도 사용 하 여 드릴을 켭니다. 참고: 드릴 살 균, 그리고 연산자 남아 있지 않는다 메 마른 때 드릴을 사용 하 여.</li>
		<li>드릴은 회전 하는 동안 전체 생 도구 (약 7.5 cm) 절 개를 통해 젖 통에 사전.</li>
		<li>드릴 끄고 수동으로 4 조각의 도구를 확장 합니다.</li>
		<li>시계 방향 회전 및 낮은 속도 사용 하 여 드릴을 켭니다.</li>
		<li>젖 통에서 조직 핵심을 포함 하는 악기를 제거 합니다.</li>
		<li>적어도 20 분 동안 메 마른 수건을 사용 하 여 상처에 강한 압력을 즉시 적용 됩니다. 참고: 적절 한 압력을 적용 그들의 주먹을 사용 하 여이 수행 비서가 있다.</li>
		<li>조직 생 검 도구 핀셋을 사용 하 여 제거 합니다.</li>
		<li>1 x 인산 염 버퍼에 식 염 수 샘플을 유지 하 고 조직의 양을 평가.</li>
		<li>적어도 30 분에 대 한 생 검 후 암소의 생체 신호 마다 10 분 가져가 라.</li>
		<li>생 검 사이트에 압력의 20 분 후에 출혈에 대 한 확인 합니다. 혈액의 drips 있다면 추가 5-10 분에 대 한 압력을 계속.</li>
		<li>중지는 결국 출혈 5 m m 간격 스테인리스 스테이플을 사용 하 여 절 개를 닫습니다. 5와 8 스테이플 사이 사용 합니다.</li>
		<li>생 지역에는 어로 졸 붕대를 적용 합니다.</li>
		<li>수술 후 50 분에 대 한 동물을 관찰 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
바늘 생 검 계기
	<ol>
<li>장치에 대 한 제조업체의 지침을 따릅니다.</li>
		<li>무 균 기술을 사용 하 여 패키지에서 생 검 바늘을 제거 합니다.</li>
		<li>손상이 관찰 되는 경우 바늘을 삭제 합니다.</li>
		<li>장치에 바늘을 연결 합니다.</li>
		<li>덮개를 닫고 장치를 거 시기.</li>
		<li>암소는 충분히 진정 생 사이트 충분히 anesthetized 확인 합니다. 반응이 되도록 피부를 대 타.</li>
		<li>피부와 피하 조직에서 인접 번호 10 메스를 사용 하 여 원심을 통해 1 ~ 2 cm 세로 절 개를 확인 합니다. 참고: 절 개 생 검 바늘 악기에 대 한 코어 생 검 악기 보다 더 작은 (1-2 cm)를 하실 수 있습니다.</li>
		<li>절 개 사이트 (피부에서 약 10 ~ 13 cm)로 생 검 바늘을 삽입 합니다.</li>
		<li>수집 조직 생 검 바늘 장치를 활성화 합니다.</li>
		<li>젖 통에서 바늘을 제거 합니다.</li>
		<li>적어도 20 분 동안 메 마른 수건을 사용 하 여 상처에 즉시, 강한 압력을 적용.</li>
		<li>핀셋을 사용 하 여 생 검 바늘에서 조직을 제거 합니다.</li>
		<li>1 x 인산 염 버퍼에 식 염 수 샘플을 유지 하 고 조직의 양을 평가.</li>
		<li>적어도 30 분에 대 한 생 검 후 생체 신호 마다 10 분 가져가 라.</li>
		<li>생 검 사이트에 압력의 20 분 후에 출혈에 대 한 확인 합니다.</li>
		<li>스테인레스 스틸 스테이플 중지 되었습니다 결국 출혈을 사용 하 여 절 개를 닫습니다.</li>
		<li>생 지역에는 어로 졸 붕대를 적용 합니다.</li>
		<li>수술 후 50 분에 대 한 동물을 관찰 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 사후 생 동물 보호
<ol><li>동물을 관리 하는 모든 약물을 문서화 합니다. 참고: 우유; 절차 후 36 h의 기간 동안 삭제 되었다 고기 철수가 했다 4 디 철수 기간 우유와 고기에 대 한 국가 또는 관할권 및 사용 약물에 따라 다를 수 있습니다. 로컬 규칙 및 규정을 확인 하시기 바랍니다.</li>
	<li>우유는 생 후 7 ~ 10 d에서 혈액의 존재를 확인 합니다.</li>
	<li>후속 milkings biopsied 분기에서 스트립 혈전을 수교 하 고 그 완벽 한 우유를 확인 제거 발생 합니다. 참고: 1-3 milkings 절차에 대 한 biopsied 분기에서 혈전의 존재는 예상 된다. 우유에 혈액은 생 후 1 ~ 6 d에 대 한 관찰 될 수 있습니다.</li>
	<li>우유를 항복, 관찰 하 고 만약에 가능 하다 면, 개별 매일 먹이 섭취 외과 스테이플 제거 되었습니다 때까지.</li>
	<li>외과 물림 쇠 제거 되었습니다 때까지 하루에 두 번 체온, 호흡 및 심장 속도, 그리고 태도 대 한 동물을 모니터링 합니다.</li>
	<li>외과 물림 쇠 제거 되었습니다 때까지 붓기, 유연함, 대 한 매일 두 번 생 사이트 및 배수의 어떤 표시 든 지를 확인 합니다. 이러한 관찰은 수 의사를 참조 하십시오. 참고: 생 검 사이트를 청결 한 유지 하 고 필요에 따라에 어로 졸 붕대에 다시 1 ~ 3 일 마다를 적용.</li>
	<li>치유 속도 따라 생 후 10 ~ 14 d 절 개 사이트에서 스테이플을 제거 합니다.</li>
	<li>로컬 또는 전신 감염의 어떤 표시 든 지 관찰 하는 경우는 수 의사를 참조 하십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

코어 및 바늘 생 검 방법이 프로토콜9,16에서 설명 했다. 동물 건강 및 생 검 전에 유선 염14 의 발생률에 대 한 자세한 평가 두 절차에 필요 합니다. 연구 목적으로, 염증이 나 감염 증의 분명 한 징후와 동물에서 기술 수행를 피해 야 한다. 이 중 고 생 검 후 합병증의 위험을 줄일 것입니다. 모든 생 검 기기 및 장치, 소독, 깨끗 하 고 생 검 사이트의 오염을 방지 소독 해야 합니다. 절차, 전에 그것은 수술 부위의 감염 (SSI)을 최소화 하는 데 필요한입니다. 일반적으로, SSI 동물 병 적 상태, 손실된 성능 및 젖소에서 높은 생산비와 연결 됩니다. 연구는 이전 생 머리 절 개 사이트, 생 지역 오염9,14, 제거 세척 및 살 균 대리인 (70% 알코올, 요오드 수술을 사용 하 여 클리핑 등 때문에 SSI를 방지 하는 방법을 보고 9, 2% 액체 아세테이트 솔루션14, 10 %povidone-요오드8스크럽) 피부 준비를 위해. 일부 연구에서 항생제의 관리는7 중 또는 생 검9; 직후 채택 되었다 그러나, 항생제 예방 치료는 현재 작업에 사용 되지 않았습니다 하 고 생 검 사이트의 아무 감염 관찰 했다. 오염을 방지 하기 위해 상처 생의, 꼬리 졸 붕대가 적용 될 때까지 생 사이트와 접촉을 방지 하기 위해 확보 해야 합니다. 이 프로토콜에서 스테이플 스는 생 후 약 10 ~ 14 d 제거 됩니다.
코어 생 검 전에 제대로 도구를 설정 하 고 드릴;에 첨부 하는 것이 중요 하다 느린 회전 속도 선택, 앞으로 회전을 선택 하 고 드릴의 역방향 모드를 사용 하지 마십시오. 절차 동안,를 사용 하 여 디지털 압력의 절 개 양쪽에 떨어져 피부 가장자리를 유지 하 고 충분히 절 개 하지 않고 피부 또는 결합 조직 도구 항목을 허용 하도록 중요 하다. 이 절차를 수행 하지, 코어 생 검 계기의 회전 하는 동안 절 개 가장자리에 드래그 발생 하 고 감염의 위험을 증가 시킬 것입니다 하 고 상처 치유를 지연 수 있습니다 추가 피부 조직 외상을 일으킬 수 있습니다. 이 프로토콜에서 설명 하는 현재 생 검 절차 보드 큰 동물 외과 의사에 의해 수행 되었다. 절차를 성공적으로 수행 했다 (그림 5). 두 기술은 비교적 간단 하 고 빠른 수술 절단 절차에 비해 수행 하 있습니다.
젖소8,,910,14MG 생 검 후 생 검 사이트에서 출혈 일반적입니다. 현재 프로토콜에서 최소한의 (그림 4)은 관찰 출혈는 절차 후 바로 상처에 적절 한 (강한) 압력의 응용 프로그램 때문일 수 있습니다. 적어도 20 분 동안 강한 압력은 필요, 그리고 그것은 경우에 따라 30 분 이상 필요할 수 있습니다. 심한 출혈에 적당 한 생 검 사이트에 압력의 적용 후 관찰 되는 경우, 압력을 계속 하 고 즉시 수 의사에 게 연락 하는 것이 좋습니다.
Hemostasis 암소 사망률을 줄이기 위한 중요 한 요소 이다로 한 연구 생 사이트9출혈 제어에 hemostatic 패드를 포장. 그러나, 같은 방식으로 hemostatic 패드의 사용 낙농 환경에서 미생물 오염에 대 한 높은 잠재적인 위험을 있다. 또 다른 연구14 반복된 biopsies 사이 및 생 검 및 피부 폐쇄 후 생 검 사이트에 수동 압력을 적용 하 고 적어도 2 h 생 검 다음에 사이트에 얼음을 적용. 현재 프로토콜에서 강한 압력을 20 ~ 25 분에 대 한 생 검 사이트에 적용 했다 출혈을 제어 하는 적절 한.
성공적인 생 검 기술 절차 후 짧은 기간 동안 지속 되는 우유에 최소 혈액 발생 한다. 우유 감소 및 유선 염 감염 시 우유 분 비의 중단을 방지 하려면 intramammary 혈전 biopsied 분기10,14에서 스트립 손으로 제거 되어야 한다. 현재 프로토콜에서 피는 생 후 48 h까지 우유에 관찰 되었다. 그러나, 동물의 더 큰 수를 사용 하는 연구, 우유에 피는 보다 6 일 소의 대부분에 관찰 되었다. 몇몇 동물 6 일8후 우유에 혈액을 보여주었다. 이러한 이유로, 우유 외관의 매일 관찰 절차 후 6 d 필요 하다. 동물 때 큰 조직 샘플14얻은 유선 염 감염의 어떤 표시를 전시 하지 않았다. 그러나, 이전 연구는 바늘을 사용 하 여 같은 동물에 반복된 biopsies을 수행 발견 그 유선 염 감염 발생률은 약 12% 다음 절차8. 현재 프로토콜에서 어느 동물 임상 유선 염 수술 후 감염의 시각적 표시를 했다. 또한 약간의 기회는 생 검 후 절 개 사이트를 감염 될 수 있습니다.
Tolazoline 염 산 염, 약물, 진정의 효과 반전 하는 xylazine에서 과다 복용의 경우 사용할 수 있어야. Xylazine의 과도 한 복용량은 폐부종을 발생할 수 있습니다. 폐 부 증의 임상 증상에는 호흡 곤란, 심한 호흡 곤란, 호흡 곤란, 기침, 및 거품가 래 포함 됩니다. 폐 부 증의 징후를 관찰 하는 경우 tolazine (몸 무게의 2 ~ 4 mg/kg)를 사용 하 여 xylazine 효과 반전 하는 것이 좋습니다.
현재 프로토콜 모두 바늘 생 검 및 코어 생 검을 수행 기법을 설명 합니다. 일반적으로, 바늘 생 검에 비해 코어 생 검의 장점은 젖 통 건강에 부정적인 영향을 최소와 더 큰 조직 샘플 (0.75 ~ 1 g)9 . 바늘 생 검 코어 생 검 계기 보다는 보다 적게 침략 적 방법입니다. 그러나, 여러 생 검 조직을 바늘 생 검 절차 후 우유에 혈전 뿐만 아니라 절차, 주요 출혈의 위험을 증가 시킬 수 있습니다 사용 하 여 더 많은 양의 얻을 하려고 합니다. 두 기술은 최소한의 소 병 적 원인이 고 수술 인원의 최소한의 교육으로 쉽게 달성 했다. 매일 우유 수확량 (8 ~ 10% 감소)와 그것의 구성9 및 사료 섭취 량 감소14 단기 변화는 각각 코어와 바늘 생 검 후 예상 된다. 바늘 생 검 절차의 한계는 바늘으로 제거 하는 조직의 작은 볼륨. 악기는 바늘 biopsied 되도록 조직 내 이며 여러 시도 자주 조직, 절차 후 우유와 유선 염에 혈액의 위험을 증가의 적절 한 금액을 얻기 위해 필요한 경우에 활성화 될 필요가 있다. 코어 생 검의 경우 많은 양의 조직 수술 후 출혈의 위험이 높은 포함 (> 200 mg)입니다. 또한, 생 검 도구는 사용 하기 전에 적절 한 훈련 요구를 더 어렵습니다.

생 검 의료에 대 한 과목 또는 연구 목적에서 조직의 핵심 섹션을 수확 하는 절차 이다. 치료에 조직 응답의 분석 또는 관심의 다른 요소를 수 있도록 안락사1 대신 조직을 수집 하는 최소 침 습 및 널리 사용 되 기술입니다. (MG) 소 유선 조직 샘플 낙농 연구 유전자와 단백질 표정, 조직학, 세포 세포, 신호 경로 변화 관리에 대 한 응답에서 신진 대사 과정의 조직 연구에 대 한 필수적입니다 또는 환경입니다. 또한, MG 조직 진단 하 고 소 염 세균 감염2기인 같은 특정 전염병 연구 필요 합니다.
소의 젖 통 4 개의 별도 땀 샘을 포함 하 고 각 선 포함 총칭 실질 라는 독립적인 우유 분 비 시스템. 포, 덕트, 및 결합 조직 유 방 실질에 있습니다. 폐 포 (luminal) 내부 표면에 있는 상피 세포의 구성 된 미세한 구형 빈 구조 이며 전문된 myoepithelial (기저) 외부 표면에 세포. 포 합성 및 우유의 분 비에 대 한 책임이 있습니다. 실질에 섬유 결합 조직, 폐 포의 다른 그룹에서 폐 포의 그룹을 분리할 수 있으며 각 그룹 lobule3를 호출 됩니다. 여러 가지 요인이 개발 및 동물 생리학, 영양, 관리, 유전학, 및 환경4를 포함 하 여 MG의 기능 발생할 수 있습니다. 유선 염에는 또한 부정적인 MG 기능과 우유 품질5에 영향을 미치는 중요 한 요소 이다. Mastitic 병원 체에 의해 풀어 놓인 독 소는 폐 포에 손상을 하 고 MG 조직6생화학, 조직학 변화에서 발생 하는 괴 사를 일으킬 수 있습니다. 따라서, 조직학 및 각 폐 포 또는 lobule MG에서의 대사 과정은 다른 사람들 로부터 크게 달라질 수 있습니다. 따라서, 전체 유선의 대표 샘플은 biopsies 바람직한 있습니다. 단일 lobule 또는 결과 과학적 또는 진단 정보를 제한 하는 개별 치조에만 작은 biopsies 캡처할 수 있습니다. 연구 목적을 위해 유 방 생 검 조직 특성의 '스냅숏'을 제공 하지만 생 검 총 유선의 견적의 부재에 전체 유 방 기능 특성을 적절 하 게 수 없습니다 유의 해야 하는 대량.
여러 생 검 도구 인간의 사용을 위한 지난 30 년 동안 개발 되었습니다. 현재, 그 악기의 각 색 한 동물 들과 함께 사용 하기 위해 사용할 수 있습니다. 젖소에 대 한 MG 조직의 샘플을 되었습니다 가져올 외과 절단 (무딘 해 부)7, 코어 생 검 계기9,10, 생 검 바늘1,8, 등 다양 한 기법을 사용 하 여. 따라서, 젖이 젖소에 MG 생 검 기술을 휴식 진정 electrocautery hemostasis 19927 서 진정9, 아래 핵심 biopsies의 컬렉션을 사용 하 여 외과 절 개를 사용 하 여 프로시저에서 전환 해야 10,,1112. 수술 생 검 침략 메서드를 될 수 있는 비싼 혈 종 등의 합병증의 높은 발병 률을가지고, 문제, 상처 및 종양 확산13이다. 현재, 코어 생 검 그리고 바늘 생 검 (트루 컷 생)가 널리 채택 되었습니다 대안 수술 생 검으로. 코어 및 바늘 생 검 수술 생 검에 비해 장점: 절차는 최소 침 습; 주요 합병증은 희소 하다; 전신 마 취가 필요; 절차는 relativley 빠른; 복구 시간이 짧습니다. 젖 통 건강에 부정적인 영향을 최소화 하 고 우유 생산량 및 구성8,,910;에 단기 효과가 있다 그리고 비용 보다 수술 생 검13.
한 코어 생 검 절차 1996 년에 사용한 살 균, 스테인리스 정 이동식 개폐식 블레이드 전신9,10,11 없이 소 MG에서 대표적인 양의 조직 제거 하 ,12. 절차 동안, 악기는 낮은 속도, 깔끔하게 잘라 조직 핵심 도구는 조직에 고급 회전 모션을 만드는 무선 드릴에 붙어 있었다. 혜택은 더 큰 조직 샘플 (70 x 4 mm 직경, 약 0.75 ~ 1 g) 9. 10 최근 연구 보여준 V. C. 파외 에 의해 설명 하는 생 검 절차 9 젖이 젖소의 성능 및 젖 통 건강에 부정적인 영향 없이 반복된 MG 조직 컬렉션을 수행 하기 위해 사용할 수 있습니다. 가장 최근에, 연구14 젖소 생 검을 수집 하는 내부 스테인리스 정에 적용 하는 진공 큰 trocar (9.5 m m의 31 cm 긴, 외경, 내경 8 m m)를 사용 하는 MG의 반복된 biopsies을 평가 하기 위해 실시 되었다 . 이 메서드는 진정 (xylazine)와 취 (2 %lidocaine 염 산 염)를 사용합니다.
바늘 생 검은 유 방 조직 수집을 다른 기술입니다. 여러 연구 결과이 기술을 채택 했다. 한 연구1 진정 (detomidine)와 지역 마 취 제 (1 %lidocaine) 절차에 사용. 생 검, 후 소는 예방 항생제 치료를 받았다. 유 방 동맥 우유는 전후 마사지 수동으로 했다. 우유에 피는 생 검 후 최대 84 h에 대 한 관찰 되었다. 양과 우유의 구성 시간의 짧은 기간에 대 한 영향을 받았다. 최근, 연구 사용 생 검 바늘 반복된 MG biopsies 젖소8. 진정 (1 %acepromazine, 근육)과 취 (2 %lidocaine 염 산 염, 피하) 동물에 관리 되었다. 동물 또는 받지 못했습니다 intramammary 약물 이나 항생제 전에 절차 후 그리고 수술 후 기간 동안 생 사이트에서 감염의 흔적 했다. 이 연구에는 바늘을 사용 하 여 반복된 소 MG biopsies 젖소의 우유 생산 및 젖 통 건강에 사소한 부정적인 영향을 미쳤다. 일반적으로, 바늘 생 검 코어 생 검 계기 보다는 보다 적게 침략 적 방법 것으로 보인다. 그러나, 앞에서 설명 했 듯이, MG 조직의 대표적인 샘플을 수확 생 검 기술에 대 한 필수적입니다. 바늘 생 검의 한계는 적은 양의 소 MG 조직 (약 20 ~ 25 밀리 그램)를 얻은8,15.
거의 모든 연구의 사용 α-2 주 작동 근 진정와 로컬 마 취8,,910, 생 검 바늘 또는 더 큰 코어를 통해 이었다. 소 MG에서 대부분 신경 엔딩 피부와 연결 됩니다. Innervation parenchymal 조직에 스파스 유형과 뻗 기 수용 체를 통해 크게 날카로운 수술 통증을 감지 하는 신경 섬유 이다. 결과적으로, MG의 수술 조작으로 인해 통증의 생리 적 메커니즘 피부와 피하 조직3 parenchymal 조직 같은 깊은 곳에서 조직을 통해 이다. 따라서, 생 검 절차, 이건만 로컬로 피부와 피하 조직, anesthetize 하는 데 필요한로 깊은 조직으로 로컬 마 취의 침투 수술 통증을 크게 감소 하지 않습니다. 후 생 검 영역의 적절 한 준비, 동물 불편은, 주로, 억제와 관련 된.
더 큰 코어 샘플의 컬렉션 혈 종 형성을 증가 하 고 MG 실질 내 감염의 위험을 증가 시킬 수 있습니다. 따라서, 요정 요원 프로토콜은 종종 비록 그 보편성8비 경구 항생제7의 관리를 포함 됩니다. 달성 hemostasis 암소 사망률을 줄이기 위한 중요 한 요소 이기도 합니다. 상기 연구에서 생 검 사이트에 적용 된 큰 코어 생 검 계기14, 수동 압력을 사용 하 여 하 고 암소 브래지어 절차에 따라 적어도 2 h 상처에 얼음을 적용 하는 데 사용 되었다. 많은 양의 수확 하는 조직에도 불구 하 고 사료 섭취 량과 우유 수확량에만 약간의 감소는 관찰 되었다, 그리고 절차는 암소 건강에 부정적인 영향 없이 매 3 주를 반복 했다.
연구원은 젖소에서 MG 생 검을 수행 결과 생의 진단 또는 분석 품질, 기술, 그리고 암소 사망률의 용이성을 고려해 야 합니다. 정확 하 고 사전 계획 된 외과 기술은 이러한 목표를 달성 하는 것이 필수적입니다. 날짜 하려면, MG 생 연구 생 검 기술 자체를 설명 하는 반대로 생 검 결과 설명에 초점을 맞춘 고 젖이 젖소에 대 한 설명을 부족 복제를 허용 하도록 충분 한 세부 사항. 따라서,이 작품의 목표는 바늘 생 검 및 소의 생 검 밀리 그램의 안전 하 고 인간적 인 복제를 허용 하도록 충분 한 세부 사항에 더 큰 코어 생 검 기술을 설명 했다.

<table><tbody><tr><td>70% 이소프로필 알코올&nbsp;</td><td>월마트&nbsp;</td><td>565106257</td><td>1 L</td></tr><tr><td>에어로졸 스프레이로 파리를 죽이고 쫓아내기 MWI</td><td></td><td>14339</td><td>1병(필요한 경우)</td></tr><tr><td>생검 바늘, 12 G &times; 16 cm</td><td>C. R. Bard</td><td>MN1216</td><td>2</td></tr><tr><td>나비 주입 세트 (18 G 바늘)</td><td>Fisher</td><td>22-258087</td><td>1</td></tr><tr><td>세포 배양 접시</td><td>Fisher</td><td>08-772E</td><td>4</td></tr><tr><td>무선 드릴 (저속)</td><td>Hitachi& 주의;</td><td>&nbsp; DS10DFL&nbsp;</td><td>1</td></tr> 개<tr><td>코어 생검 기기, Farr et al. (1996)</td><td></td><td></td><td>2, 맞춤형 금속 가공. 도구를 요청하려면 작성자에게 문의하십시오.</td></tr><tr><td>소는</td><td></td><td></td><td>건강한</td></tr><tr><td>Flunixin meglumine</td><td>MWI/VetOne</td><td>체중</td><td>1.1에서 2.2 mg/kg을</td>501018</tr><tr><td>접이식 테이블&nbsp; &nbsp;</td><td>아마존</td><td></td><td>1</td></tr><tr><td>펜치</td><td>피셔</td><td>09-753-50</td><td>1</td></tr><tr><td>장갑 비멸균&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>17-200-845</td><td>9, 크기에 따라 다름</td></tr><tr><td>하드 브러시&nbsp;</td><td>설리반 공급</td><td>18270</td><td>1, 소를 씻기 위해</td></tr><tr><td>헤드 게이트&nbsp;</td><td></td><td></td><td>1, 젖소를 위해 맞춤화된</td></tr><tr><td>리도카인 염산염 2% 주사성&nbsp;</td><td>MWI/VetOne</td><td>510212</td><td>6 mL가 사용되었습니다,&nbsp; 3에서 8 mL까지의</td></tr><tr><td>가축 바디 워시</td><td>eZall Technologies</td><td>39384</td><td>1, 소를 세척하기 위해</td></tr><tr><td>바늘 18 G&nbsp; (1 - 1/5 ")</td><td>Fisher</td><td>14-821-15A</td><td>6</td></tr><tr><td>바늘 20g(1 to 1/5")</td><td>Fisher</td><td>14-815-526</td><td>6</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (0.9%)</td><td>Fisher</td><td>20-012-043</td><td>1 L</td></tr><tr><td>포비돈 요오드 연고</td><td>Jeffers</td><td>#VED1A</td><td>500 g (필요한 경우)</td></tr><tr><td>포비돈 요오드 스크럽 용액 (0.75% 요오드)</td><td>MWI/VetOne</td><td>510094</td><td>1 L</td></tr><tr><td>재사용 가능한 생검 기구&nbsp;</td><td>C. R. Bard</td><td>MG1522</td><td>1</td></tr><tr><td>로프 고삐</td><td>Nasco 농장 및 목장</td><td>C10852</td><td>2, 암소 크기</td></tr><tr><td>메스 블레이드 (#10)</td><td>MWI</td><td>033870</td><td>2</td></tr><tr><td>메스 홀더</td><td></td> <td>MWI 602008</td><td>1</td></tr><tr><td>자체 밀봉 오토클레이브 파우치 10 x 5.5 in.</td><td>Fisher</td><td>19-130-0038</td><td>800</td></tr><tr><td>멸균 면 거즈 스폰지</td> 1케이스 <td>Fisher</td><td>22-037-986</td><td>4</td></tr><tr><td>멸균 거즈 패드</td><td>Fisher</td><td>19-090-735</td><td>4</td></tr><tr><td>멸균 수술용 장갑&nbsp;</td><td>수술용 장갑</td><td>19-166-679</td><td>3,&nbsp; 크기에 따라</td></tr><tr><td>다름 멸균 수술용 수건</td><td>Fisher</td><td>50-118-0339</td><td>6</td></tr><tr><td>청진기</td><td>Littmann Master Classic II</td><td>1392</td><td>1</td></tr><tr><td>수술용 클리퍼</td><td>Oster A5</td><td>078005-010-003</td><td>1, 생검을 위한 동물 준비</td></tr><tr><td>수술용 클리퍼 블레이드 (#40 )</td><td>Oster&nbsp;</td><td>78919-016</td><td>1, 생검을 위한 동물 준비</td></tr><tr><td>수술용 스테이플 제거제</td><td>MWI</td><td>541</td><td>1</td></tr> 수술용 <tr><td>스테이플러 사전 로드</td>됨 <td>MWI</td><td>17713</td><td></td></tr><tr><td>10mL 주사기</td> 5개 <td>Fisher</td><td>14-823-224</td><td></td></tr><tr><td>2mL 주사기</td> 3개 <td>Fisher</td><td>22-028854</td><td></td></tr><tr><td>20mL 주사기</td> 3개 <td>Fisher</td><td>22-034507</td><td>3</td></tr><tr><td>5 mL 주사기</td><td>Fisher</td><td>22-028855</td><td>3</td></tr><tr><td>온도계</td><td>Agri-Pro Enterprises Inc</td><td>72000</td><td>1</td></tr><tr><td>Tolazine hydrochloride</td><td>Akorn Animal Health</td><td>61311-486-10</td><td>체중 2에서 4 mg/kg (필요한 경우)</td></tr><tr><td>핀셋&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>14-955-025</td><td>1, 조직 샘플을 다루는 데 사용됩니다</td></tr>. <tr><td>물 호스</td><td>Miracle-Gro, Walmart</td><td>554990501</td><td>1, 소를 씻기 위해</td></tr><tr><td>방수 에어로졸 붕대 (알루미늄 분말 40 mg)</td><td>MWI</td><td></td><td>010728 1병&nbsp;</td></tr><tr><td>자일라진 염산염</td><td>MWI/VetOne</td><td>510650</td><td>체중의 0.01 - 0.05 mg/kg</td></tr></tbody></table>

소 유선 생 검 기술

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

소 유선 biopsies 유전자 발현, 신호 경로, 및 단백질 번역 조직학 분석을 포함 한 세포 생물학 연구 조직 샘플을 수집을 연구원 허용. 이 문서에서는 생 검 소 유선 (MG)의 두 가지 방법을 설명합니다. 3 건강 한 홀스타인 젖소는 과목 했다. 생 검, 전에 소 젖이 되었고 이후 가축 낙하산에서 제 지. 진통제 (flunixin meglumine, 몸 무게의 1.1 2.2 mg/kg) 생 검 jugular 정 맥 [4] 주입 15-20 분 전에 통해 관리 되었다. 서 진정, xylazine 염 산 염에 대 한 (0.01-0.05 mg/kg의 몸 무게) と 혈관을 통해 주입은 수술 전에 5-10 분. 일단 적절 하 게 진정 생 사이트 aseptically 준비 하 고 로컬 anaesthetized 피하 주사를 통해 2 %lidocaine 염 산 염의 6 mL와 함께 했다. 무 균 기술을 사용 하 여, 2 ~ 3 cm 수직 절 개를 되었다 번호 10 메스를 사용 하 여. 코어 및 바늘 생 검 도구 사용 되었다. 코어 생 검 도구 무선 드릴에 부착 되었고 바로 드릴 작업 사용 하 여 절 개를 통해 MG 조직에 삽입. 바늘 생 검 도구 절 개 사이트에 수동으로 삽입 되었다. 절차 후 즉시 보조 hemostasis 달성 하기 메 마른 수건을 사용 하 여 20 ~ 25 분에 대 한 절 개 사이트에 압력을 적용. 스테인리스 수술 스테이플 피부 절 개를 사용 했다. 스테이플 제거 10 일 수술 후 했다입니다. 코어 및 바늘 biopsies의 주요 장점은 두 가지 방법을 건강 한 소에 안전 하 게 수행 될 수 있는 최소한 침략 적 절차입니다. 우유 수확량 생 검 다음 영향을 받는 했다. 이 절차는 짧은 회복 시간을 요구 하며 합병증의 더 적은 위험. 특정 제한 생 검 후 생 검 사이트에 감염 출혈 등이 있습니다. 이러한 기술의 응용 프로그램 임상 진단 및 기본 세포 배양 등 연구 목적에 대 한 조직 컬렉션을 포함합니다.

현재 프로토콜 바늘 생 검 생 당 10 ~ 30 mg의 샘플을 제작 하는 동안 코어 생 검 기술 200 ~ 600 mg의 조직 샘플을 생산. 동물 수술 후 10 일을 위해 하루에 두 번 관찰 되었다. 아니 합병증 발생 절차 동안 또는 수술 기간, 정상적인 한계 안에 남아 있는 소의 중요 한 매개 변수 (평균 호흡 속도 = 31.4 ± 7.04 (SD) 당 분, 평균 심장 박동 호흡 75.9 ± 8.9 박동 분, 그리고 평균 당 = 직장 온도 = 38.2 ± 0.68 ° C, 그림 3).
수동 압력 hemostasis (약 25 분)를 달성 하기 위해 생 검 지역에, 다음 오픈 상처 최소한의 출혈 (그림 4) 보여주었다. 소 같은 다이어트 광고 libitum, 지 루 했다 고 동물 수술 기간 동안 동일한 주택 시설에 보관 했다. 동물 생 사이트;에서 감염의 표시를 보여주지 않았다 아무 통증, 출혈, 붓기, 배수, 또는 높은 온도 (그림 5) 했다. 생 검 (그림 5C)의 8 ~ 10 d 내 상처 치유.
한 동물 절차 후 8 일에 문 지르고 상처로 인해 경미한 피부 자극을 개발. 이 암소는 생 검 사이트 povidone-요오드 솔루션 및 70% 이소프로필 알코올을 사용 하 여 청소 하 여 치료 했다. 스테인레스 스틸 스테이플 배수 장치를 허용 하도록 제거 되었다 고 povidone 요오드 연 고 (1%)는 2 ~ 3 d에 대 한 생 검 사이트에 하루에 두 번 적용 되었다. 피부 자극 povidone-요오드 연 고를 적용 한 후 2 d 사라 고 더 합병증으로는 상처 치유.
혈전은 기계 젖을 짜기 전에 biopsied 분기에서 우유의 스트립 손으로 제거 되었습니다. 현재 프로토콜에서 우유에 혈전의 존재는 생 검 후 최대 3 milkings (약 36 h)에 대 한 관찰 되었다. 우유의 혈액 오염 생 검 후 최대 48 h에 대 한 관찰 되었다. 우유에는 혈액의 양 기준으로 코어 및 바늘 생 검 사이 관찰 하는 시각 차이가 있었다. 동물 (그림 6) 절차 후 우유 수확량에 있는 중요 한 감소를 보여주지 않았다. 평균 우유 구성 되었고 4.37% 지방, 3.34% 단백질, 유 당 4.64%. 평균 우유 체세포 수 (SCC) mL 당 미만 200, 000 셀 이었다.
얻은 MG 조직 1 차 셀 문화 (그림 7) 같은 다른 연구 목적을 위해 사용할 수 있습니다.
<img alt="호흡, 심박수, 체온 대 생검 후 일수; 산점도; 코어 대 바늘 도구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3 . 동물 건강 지표의 평가 소 유선 생 검 후. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="소 해부학, 유방 건강 검진, 붓기 관찰, 수의학 평가, 낙농업." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig4v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 그림 4 . 후 생 검 사이트 모양을 . 수동 압력 hemostasis 달성 하기 생 검 지역에 적용 했다 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="시간 경과에 따른 바늘 대 코어 생검 치유; 시술 후 3일, 6일, 10일째의 봉합을 보여주는 다이어그램." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 그림 5 . 생 검 사이트 사진. (A) 생 검 절차. 후 3 d 사이트 (B) 생 검 절차. 후 6 d 사이트 (C) 생 상처 았다 적절 하 게 설명 하는 절차 후 10 d 사이트. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="우유 생산량 대 생검 시간; 도구 변동성을 나타내는 회귀가 있는 산점도, P=0.99." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 그림 6 . 매일 우유 생산 소 유선 생 검 전후 (n = 3 소). 선형 모델 추정 10 일 생 검 전에 동물 생산의 하루 우유 23.35 kg. 우유 수확량은 크게 변화 하지 않았다 (P &gt; 0.05) 10 일 전에 생 후 10 일에서에서 비록에 약간의 증가 우유 수확량 관찰 되었다 (10 일전 생 검에서에서 매일 우유의 0.0005 k g/d의 증가). 3 동물이이 프로토콜;에 사용 되었다 1 동물은 두번 biopsied (동물 1: 코어 생 검 젖 통의 왼쪽에, 오른쪽 젖 통에 생 검 바늘) 두 동물 했다 biopsied 한 번 (동물 2와 3: 코어 또는 바늘 절차를 사용 하 여 젖 통의 오른쪽에만). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="세포 배양 단층, 현미경 이미지, 세포 형태 연구, 생물학적 연구 도구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 그림 7 . 기본 소 유 방 상피 세포 문화의 대표적인 이미지. 눈금 막대는 100 µ m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

이 문서는 코어 및 바늘 생 검 도구를 사용 하 여 소 유선 생을 선물 한다. 수확된 조직 세포 배양 또는 유 방 생리학과 신진 대사 유전자 발현, 단백질 표정, 단백질 수정, immunohistochemistry, 대사 산물의 농도 등을 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다.

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

생검은, 나는 대부분의 사람들이 알다시피 생각으로, 관심있는 기관에서 조직의 비트를 제거하고이 경우, 그것은 유방 선입니다. 생검 샘플은 유전자 발현 분석과 같은 일을 하려고 하는 경우에 매우 유용합니다, 조직의 일부를 취하고 조직분석을 하는 것과 같은 일을 하려는 경우에, 유방 선의 현미경 수준에서 구조를 보고, 또한 호르몬 작용과 관련된 신호 경로 와 같은 것을 결정하는 데 매우 유용합니다, 예를 들면, 호르몬 작용에 관련있는 신호 경로 와 같은 것을 결정하는 것이 아주 유용합니다. , 그래서 당신은 유방 조직 샘플링의 어떤 종류를 할 때 주의해야주의 중 하나는, 당신은 진정으로 대표샘플을 촬영 한 것입니다? 왜냐하면, 당신은 포도의 클러스터처럼 될 것입니다 비골을 캡처 할 수 있습니다, 또는 당신은 정말 정상을 대표하지 않는 몇 가지 개별 폐포를 캡처 할 수 있습니다, 그래서, 당신이 당신의 유방 생검을 할 때 당신이 가지고있는 희망은 당신이 우유의 생산에 대한 책임 기능 조직을 말하는 단지 멋진 단어입니다, 이는 당신이 근실 조직을 수집하는 것입니다 , 대표샘플입니다.유방 선에 있는 감각 신경 종말의 대부분은 피부와 연관됩니다, 그래서 당신이 초기 절개를 만들려고 하는 지역의 적당한 준비를 완료하면, 피부를 마취하기 위하여, 그 때 부피 조직 자체와 관련되었던 어떤 감각 신경 결말의 방법으로 아주 조금이 있다는 것을 인식하고 평가하는 것이 중요합니다 동물이 느끼는 불편함은 대부분 피부와 관련이 있습니다. 따라서 이 조직으로 할 수 있는 다양한 것들이 있으며, 동물에게 공급된 것과 우유 단백질 출력 또는 우유 성분 출력의 반응을 관찰하는 것과 비교하여 동물이 어떻게 작동하는지에 대한 자세한 정보를 실제로 수집할 수 있습니다. 설명된 모든 방법은 버지니아 기술 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다.예정된 생검 하루 전에, 세척하고 동물, 특히, 우더를 문질러 분뇨와 더러운 물질을 제거합니다. 동물의 건강, 신체 상태 및 행동을 평가합니다. 건강한 소만 사용하세요.완전히 젖소. 동물을 짜내는 슈트로 옮기면 착유 2시간 이내에 땀샘의 우유 존재를 최소화하십시오. 머리 문으로 동물을 억제합니다.뒤로 앞으로 이동을 방지하기 위해 소의 머리에 로프 홀터를 놓습니다. 동물의 머리를 한쪽으로 당기고 로프를 스퀴즈 슈트에 묶어 빠른 릴리즈 매듭을 사용하여 머리를 제자리에 고정시합니다. 주사 부위를 70%의 이소프로필 알코올 면봉으로 청소하고, 정맥내 체중킬로그램당 플루닉스신 메글루민 1.1~2.2밀리그램을 투여하고, 경정맥을 통해 생검 15~20분 전에 투여한다.경정맥을 찾습니다. 경정맥의 기저에 압력을 가하여 경정맥을 올립니다. 주사기에 거품이 없는지 확인합니다.제기 된 경정맥에 바늘을 삽입하고 주사기에 혈액 의 0.5 밀리리터를 두 번 그리고 내용과 섞는다. 주사기에 혈액이 나타나지 않으면 바늘을 재배치하십시오. 바늘이 정맥에 거주하는 경우, 내용물들을 주입한다.바늘을 부드럽게 제거하고, 출혈을 방지하기 위해 주사 부위에 부드러운 압력으로 거즈를 바르십시오. 자일라진 염산염을 정맥내 투여, 0.01 ~ 0.05 밀리그램의 체밀 용기에서 체액 용기에 약 5~10분 전에 체액의 확립을 위한 충분한 시간을 허용한다. 꼬리를 들어 올리고 70 %의 이소 프로필 알코올 면봉으로 주사 부위를 청소하십시오.주사기에 거품이 없는지 확인합니다. 꼬리 용기에 바늘을 삽입하고 주사기에 혈액 0.2 밀리리터를 넣고 내용과 섞어 바늘이 용기에 상주되도록 합니다. 바늘이 상주하는 경우 주사기 내용물주입합니다.바늘을 부드럽게 제거합니다. 주사 부위에 부드러운 압력으로 거즈를 바하십시오. 그것은 정말 중요 한 두 반전을 가지고, 톨라졸린 처럼, 이것은 낙농 소자 자일라진의 효과에 민감한 때문에, 그리고 자일라진의 과다 복용 폐 부종을 일으킬 수 있습니다., 잠재적으로 젖소에 대 한 치명적일 수 있는, 그래서 과잉 세이션의 흔적에 대 한 당신의 소를 보고 하 고 이러한 발생 하는 경우, 다음 에 주어진될 수 있습니다.우리는 소들이 시술 중에 서기를 원합니다. 자일라진이 너무 많으면 앉을 수 있습니다. 보조가 절차에 대한 꼬리를 묶어, 우더에 생검 사이트를 선택, 일반적으로 결합 조직의 수집을 최소화하고 동맥 통으로 침투를 피하기 위해 상부 영역에서.생검 중에 이러한 혈관을 피하기 위해 큰 피하 혈관을 식별하기 위해 특별한주의를 기울여 피부를 관찰하고 눈에 띄게하십시오. 생검 부위 주변의 15-15센티미터 평방 영역에서 모발을 잘라서 포비도오드 요오드, 0.75% 사용 가능한 요오드 또는 클로르헤시딘 글루코네이트 스크럽으로 생검 부위를 준비합니다. 70%의 이소프로필 알코올을 적어도 세 번 번 하여 눈에 띄고 보이지 않는 모든 파편을 제거합니다.무균 스크럽 솔루션과 이소프로필 알코올을 원형 운동으로 적용하여 내부 아웃 방식으로 적용합니다. 방부제 스크럽 용액이 적어도 5 분 동안 피부와 접촉하도록 하십시오. 18G 바늘로 나비 주입 세트를 사용하여 절개 부위에 2% 리도카인 염산염의 6밀리리터를 피하하여 라인 블록을 만듭니다.더 깊은 조직에 침투하지 마십시오. 국소 마취가 3~5분 동안 확산되도록 하고, 절개 전에 스크럽 용액과 알코올의 또 다른 반복을 수행합니다. 기다리는 동안 생검 기구를 준비하십시오.진통을 제공하는 측면에서 하고 싶은 것은 피부를 둔감하게 하는 것입니다. 우리가 피부와 피하 조직에 더 많은 신경 내면을 가지고 있기 때문에, 그리고 parenchyma에서, 우리는 실제로 단지 스트레치 수용체에 관하여 말하고 있고, 이들은 피부와 피하 조직과 같은 외과 고통을 느끼지 않습니다. 사실, 당신은 parenchyma에 국소 마취제를 넣어 결국 경우, 당신은 절차 동안 출혈의 위험을 증가시킬 수 있습니다.생검 도구를 취급하고 절개를 위해 무균 기술을 사용합니다. 손을 씻고 눈에 보이는 오염을 모두 제거하고 멸균 수술 장갑을 바르십시오. 사용 순서대로 멸균 부위에 수술 기구를 배치합니다.10번 메스, 멸균 거즈를 가지고 생검 기구와 항상성 멸균 수건을 조립하십시오. 절차 하나, 핵심 생검 악기. 수술 장갑을 사용하여 핵심 생검 장비를 조립합니다.멸균 커튼에 멸균 조각 7개를 놓습니다. 블레이드를 도킹 시스템에 삽입합니다. 도킹 스테이션이 정렬되도록 2피스 위에 3피스를 삽입합니다.블레이드의 마지막 가장자리를 4피스의 도킹 시스템에 넣습니다. 4피스를 앞으로 밀어내고 4장 옆에 3장 옆에 있는지 관찰합니다. 장치에 5피스를 삽입합니다.도킹 스테이션이 정렬되었는지 확인합니다. 조각 2의 상단에 조각 6을 삽입합니다. 도킹 스테이션이 정렬되었는지 확인합니다.잠금 나사를 도킹 스테이션에 삽입합니다. 잠금 나사를 덮기 위해 3피스를 앞으로 밀어넣습니다. 공구를 활성화하여 4피스를 앞으로 밀고 공구 바깥쪽의 블레이드를 관찰합니다.블레이드를 공구로 되돌리기 위해 4개의 조각을 다시 당깁니다. 소가 충분히 진정되고 생검 부위가 충분히 마취되어 피부를 꼬집어 반응을 보장하십시오. 10번 메스를 사용하여 근해에서 탈산까지 피부와 피하 조직을 통해 2~3센티미터 의 수직 절개를 합니다.멸균 기술을 사용하여 무성 드릴에 생검 악기를 부착하십시오. 생검 도구에 대한 드릴을 놓고 도구가 드릴에 단단히 부착되어 있는지 확인합니다. 모든 절차 동안 개인이 꼬리를 상승시킴으로써 적절한 구속을 보장하십시오.시계 방향 회전과 저속을 사용하여 드릴을 켭니다. 공구가 회전하는 동안 절개를 통해 약 7.5 센티미터의 전체 생검 도구를 우더로 진행합니다. 드릴을 끄고 공구 의 4조각을 수동으로 확장하고, 시계 방향 회전과 저속을 사용하여 드릴을 켜고, udder에서 티슈 코어를 포함하는 계측기를 제거합니다.적어도 20 분 동안 멸균 수건을 사용하여 상처에 즉시 강한 압력을 가하십시오. 조직에 캐뉼라를 삽입합니다. 도구를 활성화하기 위해 조각을 앞으로 밀어 넣습니다.느린 시계 방향으로 회전합니다. 조직 샘플은 이제 캐뉼라 내부에 있습니다. 핀셋을 사용하여 생검 도구에서 조직을 제거합니다.1개의 X 인산염 완충식식에 견본을 유지하고 조직의 양을 평가합니다. 생검 후 10분마다 암소의 활력 징후를 최소 30분 동안 복용하십시오. 생검 부위에 20분 동안 압력을 가한 후 출혈을 확인하십시오.혈액의 물방울이있는 경우, 추가 5 ~ 10 분 동안 압력을 적용계속. 모든 출혈이 중지 된 후 5 밀리미터 간격으로 스테인레스 스틸 스테이플을 사용하여 절개를 닫습니다. 생검 부위에 에어로졸 붕대를 적용합니다.수술 후 50 분 동안 동물을 관찰하십시오. 절차 2, 바늘 생검 악기. 장치에 대한 제조업체의 지침을 따릅니다.멸균 기술을 사용하여 패키지에서 생검 바늘을 제거합니다. 손상이 관찰되면 바늘을 버리십시오. 장치에 바늘을 부착합니다.덮개를 닫고 장치를 수탉. 소가 충분히 진정되고 생검 부위가 충분히 마취되어 피부를 꼬집어 반응을 보장하십시오. 10번 메스를 사용하여 근해에서 탈산까지 피부와 피하 조직을 통해 1~2센티미터 의 수직 절개를 합니다.생검 바늘을 절개 부위에 삽입하여 피부에서 약 10~13cm 정도 삽입합니다. 생검 바늘 장치를 활성화하여 조직을 수집합니다. 젖꼭지에서 바늘을 제거합니다.적어도 20 분 동안 멸균 수건을 사용하여 상처에 즉각적인 강한 압력을 가하십시오. 바늘에서 조직을 제거 한 후, 절개를 닫기 위해 이전에 설명 된 절차를 따르십시오. 전체 절차는 동물 당 완료하는 데 약 45 분이 걸립니다.혈전은 생검분기에서 제거될 필요가 있습니다. 또한 가능하면 우유 수율과 음식 섭취량을 관찰해야합니다. 항상 수술 전, 도중, 그리고 수술 후에 동물의 건강과 웰빙을 보장하십시오.동물에게 투여되는 모든 약물을 문서화합니다. 생검 후 7~10일 동안 우유에 혈액이 있는지 확인하십시오. 후속 착유에서 생검 분기에서 손으로 혈전을 제거하고 완전한 우유 제거가 발생하는지 확인합니다.우유 수율을 관찰하고 가능하면 수술 용 스테이플이 제거 될 때까지 개별 일일 사료 섭취량을 관찰하십시오. 수술용 스테이플이 제거될 때까지 하루에 두 번 동물을 체온, 호흡 및 심박수 및 태도에 대해 모니터링합니다. 수술 스테이플이 제거 될 때까지 비종, 부드러움 및 배수의 흔적에 대한 생검 부위를 매일 두 번 확인하십시오.이러한 관찰이 관찰되는 경우 수의사와 상의하십시오. 절개 부위에서 스테이플을 제거 10 받는 일 후 생검 후, 치유 속도에 따라. 현지 또는 전신 감염의 징후가 관찰되는 경우 수의사와 상의하십시오.그래서, 생검을 복용 하 자마자, 혈액을 중단 하 고 따라서 그 조직에 영양분과 산소 공급, 그래서 만약 당신이 그 조직 코어를 제거에 매우 신속 하지 않습니다., 그리고 어떻게 든 조직 활동을 중지, 실험실에서 시간에 나중에 측정할 수 있습니다 농도 진정으로 생체 공학의 시간에 그 동물에서 무슨 일이 있었는지의 반영 되지 않을 수 있습니다. 전형적으로, 우리는 조직을 급속하게 제거하고, 그 활동을 보존하기 위하여 액체 질소로 그것을 동결하는 것을 플래시할 것입니다. 하나는 그 조직으로 할 수있는 또 다른 일, 이것은 실제로 우리가 수집 한 조직으로 했던 일, 하나는 분리하고 배양 시스템에서 그 조직에 존재하는 세포를 성장할 수 있었다.우리의 경우에, 우리는 그 조직 안에 있는 상피 세포에 관심이 있습니다, 그 실제로 합성 하 고 우유 구성 요소를 분 비 하는 세포 때문에, 그래서, 그 조직 조각에서 그 세포 배양에 배치 되었다, 그리고 실제로, 그들은 여전히 오늘 성장 하 고. 동물은 시술 후 10 일 동안 하루에 두 번 관찰되었습니다. 수술 기간 이나 수술 후 기간에 합병증이 발생하지 않았으며, 암소의 중요한 매개 변수는 정상 한계 내에 남아 있습니다.선형 모델은 생검 10 일 전에 동물이 하루에 23.35 킬로그램의 우유를 생산한다는 것을 보여줍니다. 동물은 생검 후 10 일 전부터 10 일 동안 우유 수확량에 상당한 변화를 보이지 않았습니다. 소 유방 선생검은 동물이 짧은 복구 시간을 가질 수 있도록, 최소 침습 절차입니다.따라서, 이 생검 절차는 우리가 동물에 반복적인 측정을 사용할 수 있는 많은 영양 예심 및 그밖 모형예에서 이용될 수 있습니다, 그래서, 예를 들면, 우리가 4개의 다른 영양 처리를 가진 4개의 기간이 있는 경우에, 우리는 쉽게 각 기간의 끝에 이 소 4개의 다른 시간을 생검할 수 있었습니다, 각 기간 사이 아마 1 주일 휴식 시간을 허용합니다 동물이 정상 생산으로 돌아갈 수 있도록 합니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리 프로토콜은 쥐 복부 유선을 해부하다 방법과 유선 전체 마운트를 준비하는 방법에 대해 설명합니다. 또한 세 최종 포인트 (터미널 최종 꽃봉오리의 번호, 상피 연신율과 차별화)을 사용하여 유선의 형태를 분석하고식이 수정에 노출된 쥐의 유방암 위험을 예측하는 이러한 결과를 사용하는 방법에 대해...

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이 문서는 실험 조건에서 소 폐 기관지 내시경 기술, 즉 bronchoscopically 안내 접종, 기관지 세척액, 기관지 솔질하고, 기관지 폐 생검을 설명합니다.

생물 의학 연구에 소 폐 : 시각적으로 유도 기관지, Intrabronchial 접종 및<em&gt; 생체</em&gt; 샘플링 기법

여기에서는 관내 주사를 통해 토끼 유선에 시약을 국부적으로 전달하는 기술에 대해 설명합니다. 또한 조영제의 고해상도 초음파 이미징을 통한 시각화 및 전달 확인을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

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extracellular vesicles / exosomes를 통한 유방 기초 상피 세포와 유방 Luminal 세포 사이 유선 형성 능력의 이전

설치류의 유선 선생 발달은 일반적으로 기술적 평가를 사용하거나 기본적인 신체적 속성을 측정하여 평가되었습니다. 분지 밀도는 객관적으로 정량화하기 어려운 유방 발달의 지표입니다. 이 프로토콜은 유선의 분기 특성의 정량 평가를위한 신뢰할 수있는 방법을 설명합니다.

Sholl 분석법을 이용한 유방 내 유선 마운트의 분지 밀도 정량화

우리는 성공적으로 슬라이드를 전체 마운트로 고정시킨 유방 조직을 조직 병리학 적 평가를 위해 성공적으로 제거, 가공, 절단 및 착색하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 생식 및 발달 테스트 지침 연구에서 유선 전체 마운트의 수집 및 평가를 촉진 할 수 있습니다.

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여기, 우리는 전체, 그대로 마우스의 격리에 대 한 프로토콜 세포 외 기질 (ECM) 식과 ductal 형태를 조사 하는 유 방 땀 샘을 제시. 마우스 #4 복 부 동맥은 8 10 주 오래 된 여성 미 쥐, 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정, 단면화 및 immunohistochemistry ECM 단백질에 대 한 사용 하 여 스테인드에서 추출 되었다.

세포 외 기질 식 및 선 형태 분석을 그대로, 전체 마우스 유 방 땀 샘의 절연

여기, 우리는 미토 콘 드리 아 산소 소비, 영양에 너 지론, 및 양성자 누출, 미토 콘 드리 아에서 ATP 비능률적의 주요 원인의 정의 개념을 측정 하기 위한 방법 공유. 이러한 결과 미토 콘 드리 아 기능을 평가할 수 있도록 영양소 사용률에 에너지의 30%에 대 한 계정 수 있습니다.

홀스타인 젖소에서 미토 콘 드리 아 호흡 추정 간 미토 콘 드리 아 산소 소비와 양성자 누출 속도 론 측정

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본 프로토콜은 레이저 스캐닝 컨포칼 및 다광자 현미경에 의한 수유 마우스 유선의 생체 내 이미징을 위한 손쉬운 기술을 설명합니다.

Intravital Subcellular Microscopy of the Mammary Gland(유선의 생체 내 세포내 현미경)

배우세요 소 유선 생검 기술을 통해 조직 채취 및 세포 배양 방법을 익히세요. 이 기술은 유방 생리학과 대사 연구에 필수적인 유전자 발현 및 단백질 분석에 활용됩니다.

소 유선 생 검 기술

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