Name: 잉크젯 프린터 기반으로 테스트 자동화 된 바둑판 배열 및 수동 시간 죽 일 방법 항균 시너지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: 학습하세요 잉크젯 프린터 기반 자동화된 바둑판 배열 방법과 수동 시간 죽이기 방법을 이용한 항균 시너지 테스트입니다. 이 기술은 다양한 항생제 조합을 신속하게 선별하여 내성 박테리아 치료에 활용할 수 있습니다.

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Thea 브 레 넌-Krohn 여는 유 니스 케네디 슈 라이버 건강의 국립 연구소 아동 지원 및 훈련 그랜트 (T32HD055148), 알레르기 국립 연구소와 전염병 교육 그랜트 (인간 발달 소아과 감염 증 연구 T32AI007061), 보스턴 어린이 병원 사무실 교수 개발 교수 경력 개발의 친교, 그리고는 알레르기 국립 연구소와 전염병 경력 개발 상 (1K08AI132716). J.E.K.는 알레르기 국립 연구소와 전염병의 보너스 번호 R33 AI119114에서 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다.

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D300 디지털 디스펜서와 관련된 소모품 Tecan (모리스 빌, 노스캐롤라이나)에 의해 제공 되었다. Tecan 연구 설계, 데이터 수집/해석, 원고 준비, 또는 게시 하는 결정에 있는 역할을 했다.

여기 설명 하는 두 가지 방법 모두는 그들의 개별 활동에 비해 사용 하는 제 활동에 대 한 정보를 제공 합니다. 자동된, 잉크젯 프린터 기반 디지털 시간 죽 일 방법은 더 밀접 하 게 같은에서 해당 프로토콜을와 하는 동안 임상 미생물학 절차 핸드북33에서 설명 하는 방법의 적응은 분배 방법 34참조.
바둑판 배열 방법에서 각 잘 추가할 항균 재고의 필요한 볼륨 뿐만 아니라 이러한 볼륨의 분배를 결정 하는 계산 자동화 된다, 따라서 설명서에 발생 하는 오류의 주요 잠재적인 소스 중 일부를 제거 바둑판 배열입니다. 그러나 여전히 필수적 이다,, 그는 탐정 결정 원래 주식 의도 농도에서 만들어집니다 목표 최종 농도 D300 소프트웨어에 올바르게 입력 됩니다. 384-잘 접시에 웰 스 항균 정지 처음에 어려울 수 있습니다 및 개호 추가 되도록 그 피 펫 팁 적절 한 우물을 입력 하 고 우물의 가장자리를 그 액체에서 물보라를 하지 않습니다. 자동된 액체 처리기 증가 속도 정확성 있는 세균 현 탁 액 우물에 추가 하는 휴대용 멀티 채널 피 펫 대신 사용할 수 있습니다. 프로토콜에 설명 된 대로 D300 계면 활성 제, 폴 20 (P-20), 적절 한 액체 처리의 추가 요구 한다. 다른 계면 활성 제, 폴 80, 0.002%의 농도에 colistin 마이크와 유기 체를 위한 colistin 마이크 낮은 지적 하고있다 < 표준 국물 microdilution 분석 실험에서 2 µ g/mL. 35 , 36 우리의 실험실 이전 시연 하는 농도 0.0015% 했다 D300 기반 마이크와 비교 결과에 영향을 주지 않습니다 P-20 BMD14참조. 여기에 제시 된 분석 결과 예제에서 최대 P-20 농도 0.0014%입니다.
일부 바둑판 배열 분석 우리가 발생 한 1 개의 문제는 건너뛴된 우물의 많은 수 이었다. 이 특정 항생제로 과도 한 속도로 발생 했습니다. 특히, carbapenem 저항 Enterobacteriaceae의 컬렉션에 대 한 조합의 화면에서 우리는 동안 발견 521 재판 (9.4%)의 49 여러 건너뛴된 웰 스, 인해 사용할 수 없었던 2 12 항생제의 테스트 (fosfomycin 및 cefepime) 46 이러한 시련 (94%)를 차지 했다. 이러한 증가 속도 inoculum 효과31,,3237될 약물에 더 가능성이 있을 수 있습니다. 노트, CLSI 국물 희석25 결과의 신뢰성에 대 한 우려 때문에이 약으로는 신뢰할 수 없는 결과 설명할 수 있습니다이 방법으로 fosfomycin를 테스트 권장 하지 않습니다. 일부 수정 탐정 찾아보십시오 자동된 바둑판 메서드를 만들 수 있습니다. 제 경우 워크플로 실험실 내에서 이유를 빈 우물에 보다는 오히려 이미 세균 현 탁 액을 포함 하는 접시에 적절 될 수 있습니다. 384-잘 접시는 여기 사용 되었다, 하는 동안 메서드 수 있습니다 또한 실시 96 잘 접시 분석 잘 볼륨의 적절 한 수정에. 96 잘 접시 형식의 특히 inoculum에 작은 변화에 민감한 항생제에 대 한 줄이는 건너뛴된 우물에 도움이 수 있습니다. FIC내가계산할 때 마이크가 상황에서 규모 (즉, 테스트 보다 더 높은), 약물 테스트는 테스트 되 고 유 기체의 유형에 대해 개별적으로 활동이 상황 등 있을 수 있습니다. 이러한 경우에는 FIC 수 수에 따라 계산 마이크 테스트 하는 가장 높은 농도 보다 높은 한 희석을 가정. 이것은 가장 보수적인 전략 저해 시너지 테스트 중 관찰은 어떤 희석에 대 한 최대 가능한 FIC 값을 가정 합니다. 예를 들어 실제 마이크 대신 위의 두 배로 희석 했다 높은 농도 테스트, 다음 해당 금융 고 보수적인 할당 보다 낮은 두 배 것.
정확 하 게 분석 결과 시간-죽 일에에서 약의 살 균 활동 평가, 특히 때 세포 벽 활성 항생제는 테스트28문화 로그 단계 성장 될 필수적 이다. 떨고 가진 외피의 3 시간 (K. 균),이 예제에 사용 되는 빠르게 성장 하 고 박테리아에 대 한 적절 한이 성장 단계에 도달 했지만 다른 양의 시간 다른 생물에 필요한 수 있습니다. 일반적으로 문화는 가시만 하지 무 겁 게 탁 표시 되어야 합니다. 시간의 적절 한 금액은 식민지 수 직렬 시간 포인트 (예: 매 30 분 4-6 시간)38에서 성장 곡선을 구성 하 여 확인할 수 있습니다. 시간 죽이기 연구에서 의도 시작 inoculum도 중요 하다. 시작 inoculum의 대상 농도 약 5 x 105 1 x 106 CFU/mL입니다. 여기에 설명 된 희석 (미디어 10 mL에 1.0 맥 팔 랜드 서 스 펜 션의 100 μ) Klebsiella 균 및 우리가 그것을 테스트는 다른 Enterobacteriaceae 종이이 inoculum을 생성 합니다. 다른 유기 체를 사용 하 여 실험에서 시작 inocula의 밀도 크게 이것 보다 낮거나 높은 경우 다른 희석 필요할 수 있습니다. (특정된 종에 필요한 적절 한 희석 수 확인할 수 0.5 또는 1.0 맥 팔 랜드 정지의 격판덮개 조사를 수행 하 여이 탁 대표는 초기 정지 해야 하는 금액을 계산 하는 얼마나 많은 유기 체를 확인 하 적절 한 최종 농도 도달 희석.) 있으면, 시너지 연구에서 접시의 검토, 항생제 포함 된 튜브의 시작 inoculum 성장 제어의 시작 inoculum 보다 훨씬 낮은 되었습니다,이 중 항생제 carryover 나타낼 수 있습니다 또는 매우 신속한 죽 여 박테리아의 도금에 대 한 항생제 포함 된 튜브에 박테리아의 추가와 제거는 약 수의 짧은 시간에. 낮은 후속 희석에 식민지의 수보다 undiluted 드롭 시리즈에 있는 식민지의 실제 수 이면이 항생제 carryover 효과 제안 합니다. 다른 옵션 전체 플레이트38 이상의 단일 약 수를 확산 하거나 샘플 아래로 회전 하 고, 상쾌한를 제거 하 고 다시39도금 전에 메 마른 염 분에서 중단을 포함 하 여이 효과 방지 하기 위한 설명 되어 있다. 각 시간이 시점에서 시간 죽 일 방법에서 그것은 또한 효율적으로 하지만 정확 하 게 각 문화 관에서 한 약 수를 제거 하 고 직렬 희석을 수행 하는 조사에 대 한 중요 한. 이 과정 동안, 특히에, 발생 하는 초기 시간 점 동안 지연 장기간 동안 문화 되지 않습니다 발생할 수 있습니다 incubated 고 흔들리고, 부주의 한 분배 및 직렬 희석 부정확 한 접시를 이어질 수 있는 반면 계산합니다. 확산 판 방법 접시 계산, 각 희석의 100 μ 전체 한 천 격판덮개 전염 됩니다에 비해 설명 드롭 플레이트 메서드는 훨씬 더 빠른, 훨씬 적은 수의 한 천 배지, 필요 하 고 최대도 빠른 계산에 대 한 허용 각 드롭에 대 한 식민지의 수 수는 30, 최대 300 식민지 일반적으로 확산 판에서 계산 될 수 있는 반면입니다. 그러나, 확산 판 메서드 수 사관이 기술을 더 편하다면 옵션 또한입니다. 상품 멀티 채널 피 펫 분배 후 서로 확산, 단일-채널 피 펫 더 넓게 간격 둔된 상품의 개별 응용 프로그램 대신 수행할 수 있습니다. 우리의 경험에 과도 한 확산을 줄이기 위해 듯 방울을 분배 하기 전에 4 ° C에서 격판덮개를 냉각.
여기서 설명의 한 가지 한계는 두 가지 유형의 시너지 효과 분석 결과 (바둑판 배열 및 시간-죽 일)의 결과 항상 조화 된, 이후 가장 시너지는 기사로 출판된 한 메서드 또는 다른 보다는 모두 함께 사용, 그것은 수 있습니다. 두 가지 유형의 분석에서 데이터를 통합 하는 방법을 알고 어려울. 때문에 우리가 개발 자동화 된 바둑판 배열 방법 간단 하 고 높은 처리량, 우리 사용 효과 스크린의 일종으로 격리의 큰 숫자에 대 한 조합을 테스트 하 고 어떤 농도 조합 했다 시너지 결정 하. 우리는 다음 조합 및 농도 바둑판 배열에서 효과적인 선택 시간 죽 일 연구의 더 작은 수 수행. 메모의 바둑판 분석 결과 일반적으로 수행 microbroth 희석 배율에 시간-죽 일 분석 결과 사용 큰 볼륨 (와 유사한 macrobroth 희석), 때문에 우리는 발견 금융 때때로 두 방법 사이 다른와 더 높은 일반적으로 필요한 시간 죽 일 분석 결과에서 활동을 설명 하 한 농도 이 현상을 언급 되었습니다 이전 macrobroth 및 microbroth 희석 마이크 시험 결과 그람 음성 이십시오26 한 때 더 큰 inocula (시간 죽 일 연구에 사용)는 비교에 사용 되는 표준 inoculum와 비교 했을 때 microbroth 희석과 바둑판 배열32분석 실험. 바둑판 배열의 특정 한계 microbroth 희석 마이크 테스트22에 내재 된 다양성 이다. FIC나 차단 시너지 계정으로이 변화 하면서 수학적6 같은 가변성 필연적으로 제기 하지 신뢰성과 바둑판 배열 결과의 일관성에 대 한 우려.
테스트 방법 (인공 성장 매체, 정적 항생제 농도, 그리고 제한 된 시간 코스에 박테리아의 경작을 포함 하 여) 모든 체 외 시너지에 제한으로 인해 이러한 방법으로 얻은 결과 확인 해야 합니다 및 추가 보조 기술을 사용 하 여 평가. 이러한 방법을 포함 체 외 pharmacokinetic/pharmacodynamic (PK/PD) 연구 (예를 들어, 빈 섬유 감염 모델40), 동물 모델, 그리고, 궁극적으로, 인간의 PK/PD 및 효능 연구. 여기, 잠재적인 시너지 활동 화면 조합에 있는 급속 한 메서드를 제공 하 여 설명 하는 자동화 된 바둑판 배열 방법을 더 허용 이러한 기술 활용 대상. 더 생체 외에서 매개 변수 및 임상 결과 사이 관계의 더 잘 체계적인 조사로 모든 이러한 방법의 자동화 확장에 중요 한 것을 테스트 하 고 그것의 임상 적용을 증가 하는 시너지 효과 사용 하 여.

Multidrug 저항 (MDR) 세균성 병원 체, 특히 MDR 그람 음성 박테리아 carbapenem 저항 Enterobacteriaceae (CRE) 등의 확산은 성공적인 조직과 치료 에 대 한 점점 더 제한 된 옵션 임상을 두고 있다 1, 소설 항균 약 발견2,3의 느린 속도 의해 악화 문제. 이러한 박테리아는 하나 또는 둘 다에 저항 하는 경우에 기존 항생제 MDR 박테리아의 치료에 사용 하기 위해 인양의 가능성을 제공 하는 조합에 사용 되는 두 약물 첨가제 보다 더 큰 효과 발휘 하는 항균 시너지 효과 항생제 개별적으로. 생체 외에서 시너지 효과 함께 사용 하는 경우, 테스트의 두 가지 보완적인 방법을 제공 하는이 문서에 설명 된 기술을 효율적으로 화면 항균 조합의 시너지 활동 (자동화의 증거에 대 한 관심을 조사 허용 바둑판 배열 방법) 그리고 더 억제 및 심사 단계 (수동 시간 죽 일 방법)에서 확인 된 유망한 조합에 의해 증명 하는 살인의 활동을 평가.
생체 외에서 시너지 테스트의 가장 일반적으로 사용 되는 방법 중 하나는 바둑판 배열 분석 결과, 두 개의 서로 다른 항생제는 세균에 대 한의 금지 활동 분리 최소 억제 농도 (MIC) 테스트의 수정 테스트 이상의 농도 조합4,5의 범위. 두 약물 첨가제 활동 함께 사용 하면 보다 큰 발휘, 결합 시너지6간주 됩니다. 그러나, 수동으로 바둑판 배열 설정 계산 diluting 및 pipetting 단계 및 힘들고 인간의 오류에 취약의 일련을 포함 한다. 이러한 제약 조건 테스트 항생제 조합과 세균 분리의 작은 숫자의 회 고 평가를 주로 하는 시너지 효과의 사용을 제한의 효과 없 그리고 결과 항상 연구7, 간에 일관 되지 않은 8,9,,1011. 또한, 시너지 테스트의 복잡도 기여 임상 미생물학 실험실에 그것의 불가능 하 조합 치료12, 의 임상 연구에서 생체 외에서 시너지 테스트 데이터의 가상 부재 13.
효율성과 바둑판 배열 방법의 처리량을 증가 하기 위하여 우리가 만든 자동된 마이크 테스팅 기술 이전 기술을 사용 하 여 잉크젯 인쇄를 정확 하 게 우리의 실험실에서 개발 사용 하 고 일관 되 게 작은 볼륨을 분배 결정 플레이트14에 우물으로 항생제 재고 솔루션. 플랫폼 복잡 한 계산 및 여러 pipetting 단계에 대 한 필요성을 obviates. 관련된 소프트웨어 계산 하 고 적절 한 양의 사용자는 단순히 원하는 농도 범위를 입력 하는 경우 2 차원 바둑판 배열을 만드는 항생제와 항생제의 재고 솔루션 농도 dispenses. 우리 처음 CRE 격리15 의 컬렉션에 대해이 메서드를 테스트 하 고 이후 colistin 포함 된 조합 colistin 저항 격리16에 대 한 활동에 대 한 테스트에 집중 했다. Colistin은 일반적으로 그람 음성 병원 균17,18, MDR과 colistin 저항의 치료에 사용 하기 위해 예약 하는 마지막 수단의 마약 렌더링 이미 MDR 박테리아 거의 팬 저항19, 이상적 이다 그들은 구분 하지 않습니다 개별적으로 약물을 사용 하 여 새로운 치료 전략의 개발을 위한 후보자. 우리 colistin과 단백질 합성 억제제 항생제 minocycline의 조합 시너지, 심지어에 대 한 내성을 했다이 약의 각각 개별적으로, 아마도 colistin 미치는 subinhibitory 때문에 긴장의 매우 높은 비율을 했다 발견 심지어 colistin 내성 박테리아에 permeabilizing 효력입니다. 이 문서에 예제로 사용 하 여이 조합을 선택 했습니다. 메모의 시너지 테스트 또한 사용할 수 있습니다 개별적으로 효과적인 둘 다는 두 약물의 향상 된 효능에 대 한 평가.
자동화 된 바둑판 배열 방법 신속 하 고 높은 처리량 시너지 테스트 수 있습니다. 그러나, 바둑판 배열 방법에 한계는 수 있습니다. 으로 수정된 마이크 분석 결과 데이터의 세균 성장 억제에만 그리고 살인에 제공 하지 않는 데이터 항생제 효과에 시간이 지남에. 대조적으로, 시간 죽이기 시너지 분석 실험의 수동 성과 더 많은 노동 집약 하지만 24 시간 코스20,21이상 억제와 살인에 정보를 제공 합니다. 우리는 사용 하는 시간-죽 여 분석 우리의 바둑판 배열 결과 확인 하 고 식별 시너지 조합 했다 살 균 여부 결정 하에 격리 된 것의 더 작은 수에.
두 바둑판 배열 및 시간-죽 여 시너지 방법 약물 조합의 활동에 귀중 한 정보를 제공 되며 내성 세균 병원 균에 대 한 잠재적인 새로운 치료 옵션을 평가에 특히 유용 합니다. 메서드는 또한 고유의 제한 사항이 있습니다. 표준 microbroth 희석 마이크 방법 1 2 배 희석22, 두 약물은 바둑판 배열에 함께 테스트 때 증가 알려진된 예상된 오류 범위를 하고있다. 시너지, 시너지 조합 약 1 / 4 그들의 각각 마이크6에 함께 활성 경우에 고려이 고려의 표준 정의 예상 변화, 그러한 변화 (어떤 결과를 생각 하지만 생물학과 기술적인 변동23의 조합)에서 필연적으로 생성 하지 확실히 시너지 결과의 신뢰성에 대 한 합니다. 시너지 테스트용 설립된 품질 관리 기준의 부족은 또한 현재 제한 이다. 아마도 모든 시너지 테스트 방법의 가장 중요 한 제한 때 생체 외에서 결과 임상 결과 사이 설립된 상관 관계의 부족 조합 환자24치료 하는 데 사용 됩니다. 간단 하 고 더 빠른 시너지 메서드를 여기에, 설명 하는 자동된 바둑판 배열 방법 테스트 하기 위해서는 더 나은 임상 시험 또는 환자 결과의 다른 평가 테스트 생체 외에서 시너지의 통합 촉진 수 있습니다. 미래에 생체 외에서 그리고 vivo에서 효과 사이의 관계를 특징.
우리가 여기에 제시 하는 자동화 된 바둑판 배열 메서드 높은 처리량 검열의 다양 한 조합에 대 한 옵션을 제공 하 고 시간의 주요 투자 없이, "높은 위험 높은 보상" 조합의 빠른 평가 허용 하 고 자원입니다. 우리는 이후에 설명 하는 시간-죽 일 방법 결합의 시너지 활동에 추가 지원 정보를 제공할 수 있습니다 고의 살 균 활동 및 항균 활동을 특성화 하는 데 도움이 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Escherichia coli 균주 ATCC 25922</td><td>ATCC</td><td>25922</td><td>QC 균주</td></tr><tr><td>0.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>USA Scientific</td><td>1605-0000</td><td></td></tr><tr><td>1 L 0.22 &micro; m 보틀탑 필터</td><td>Thermo Scientific Nalgene</td><td>597-4520</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm 붕규산 유리 원형 바닥 배양 튜브</td><td>Fisherbrand</td><td>14-961-26</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원뿔형 튜브</td><td>Phoenix</td><td>SS-PH15</td><td></td></tr><tr><td>15 x 100 mm 또는 15 x 150 mm Mueller Hinton 한천 플레이트</td><td>Thermo Scientific</td><td>R01620 또는 R04050</td><td></td></tr><tr><td>25 mm 스테인리스 스틸 클로저, 25 x 150 mm 유리 배양용 튜브</td><td>Bellco</td><td>2005-02512</td><td></td></tr><tr><td>25 x 150mm 붕규산 유리 둥근 바닥 배양 튜브</td><td>Bellco</td><td>2011-25150</td><td></td></tr><tr><td>348웰 멸균 투명, 평평한 바닥, 처리되지 않은 마이크로플레이트(뚜껑 포함)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>781186</td><td></td></tr><tr><td>50mL 원추형 튜브</td><td>Phoenix</td><td>SS-PH50</td><td></td></tr><tr><td>50mL 멸균 시약 저장용기</td><td>Corning</td><td>4870</td><td></td></tr><tr><td>96 딥 웰 폴리프로필렌 마이크로플레이트(2mL 웰 포함)</td><td>Fisherbrand</td><td>12-566-612</td><td></td></tr><tr><td>96웰 멸균 투명, 둥근 바닥, 처리되지 않은 마이크로플레이트(뚜껑 포함)</td><td>Evergreen</td><td>222-8032-01R</td><td></td></tr><tr><td>양이온 조정 Mueller Hinton 육수</td><td>BD 진단</td><td>212322</td><td></td></tr><tr><td>Colistin sulfate</td><td>Alfa Aesar</td><td>J60915</td><td></td></tr><tr><td>D300e 제어 소프트웨어</td><td>HP/Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DensiCHEK Plus McFarland 리더</td><td>bioM&eacute; rieux</td><td>21250</td><td></td></tr><tr><td>엑셀 스프레드시트 소프트웨어</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Extra long SHARP 10 &micro; L 정밀 장벽 팁</td><td>Denville Scientific</td><td>P1096-FR</td><td></td></tr><tr><td>HP D300 디지털 디스펜서</td><td>HP/Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HP D300 T8+ 카세트</td><td>HP/Tecan</td><td>30097370</td><td></td></tr><tr><td>Minocycline hydrochloride</td><td>Chem-Impex</td><td>14302</td><td></td></tr><tr><td>Picus 12-채널 10-300 &micro; L 피펫</td><td>Sartorius</td><td>735461</td><td></td></tr><tr><td>Polysorbate 20</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP-337</td><td>브랜드 이름: Tween 20</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Fisher Chemical</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>분광 광도계</td><td>Tecan</td><td>Infinite M1000 PRO</td><td></td></tr><tr><td>Xplorer 12-channel 50-1200 &micro; L 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>2231000328</td><td></td></tr></tbody></table>

잉크젯 프린터 기반으로 테스트 자동화 된 바둑판 배열 및 수동 시간 죽 일 방법 항균 시너지

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

Multidrug 저항 (MDR) 병원 체의 속도 상승, 계속 새로운 제의 개발 능가 MDR 박테리아의 치료에 새로운 접근 필요 되 고 점점 더 있다. 이러한 방법 중 하나는 조합 치료에 두 개 이상의 항생제 치료에 대 한 감염을 함께 되는 마약 중 어느 하나 또는 모두 효과가 있을 수 있습니다 하지 혼자. 때 조합에 두 약물 발휘는 큰 첨가제 효과 보다 시너지 간주 됩니다. 시너지 활동의 체 외 조사 약물 조합 가능한 효능 평가에 중요 한 첫 단계 이다. 두 가지 주요 체 외 시너지 테스트 방법 개발 되었습니다: 바둑판 배열 및 시간 죽 일 연구. 이 문서에서 우리는 자동된 바둑판 배열 방법을 제시는 효율성과이 기술 표준 수동 시간 죽이기 시너지 방법의 정확도 높이기 위해 잉크젯 인쇄 기술의 사용. 자동화 된 바둑판 배열 수동 시간 죽 일 연구 시너지 활동 및 살인에 추가, 무료 데이터를 제공 하는 동안 높은 처리량 검사 분석 결과 검색할 수 있습니다.
바둑판 배열 박테리아 다른 농도 조합에 항생제와 인 큐베이 팅 및 숙박 부 화 후 성장 억제에 대 한 평가 표준 최소 억제 농도 (MIC) 테스트의 수정입니다. 바둑판 배열의 수동 성능 힘들고 오류가 일련을의 계산 및 희석이 필요합니다. 자동화 된 방법에서 제시 여기, 계산의 필요한 항생제 재고 솔루션 볼륨 잉크젯 프린터 기술을 통해 자동 분배. 시간 죽이기 시너지 분석 결과에서 박테리아 함께 개별적으로, 관심, 항생제와 함께 알을 품는 그리고 양적 문화에 대 한 24 시간에 걸쳐 샘플링 간격. 결과 조합 인지 시너지 및 살 균, 인지를 확인 하 고 시간이 지남에 저해 및 박테리아의 살해에 데이터를 제공 수 있습니다.

그림 1A 는 바둑판 배열 시너지 실험 0-32의 농도에 minocycline에 μ g/mL 0-16 μ g/mL의 농도에서 colistin 결합 되었고 대장균 스트레인 FDA CDC 0494에 대 한 테스트에서 그리드를 제공 합니다. 값은 광학 밀도 600 nm (OD600)에서 spectrophotometric 신호를 나타냅니다. 웰 스 (육안 검사에 의해 아무의 성장에 해당)는 0.07 아래 세600 값은 회색된 빨강, OD600 값 (육안 검사에 의해 성장에 해당)는 0.07 우물은 회색된 녹색 동안. 각 약물에 대 한 최소 억제 농도 (MIC, 굵게)은 박테리아의 성장을 억제 하는 약물의 가장 낮은 농도가 이다. Minocycline에 대 한 32 μ g/mL, 이며 colistin, 8 μ g/mL입니다. 음영 그림 1B에 유지 하지만 성장 저해입니다 우물 안에 값 소수 금지 농도 (FIC나) 인덱스 값으로 대체 됩니다. 이 다음과 같이 결정 됩니다: 각 잘에서 각 약물의 소수 억제 농도 인덱스 (FIC)은 약물의 마이크에 의해 잘에 항생제의 농도 나누어 계산 하 고는 FIC나 두 금융을 합산 하 여 계산 됩니다. FIC나 값이 0.5, 시너지 효과 대 한 구분 이라고 여겨진다, 웰 스 깨진 선 테두리 표시 됩니다 그리고 FIC나 최소값 (0.094)와 잘 굵게. FIC나 최소값 시너지 범위에 있기 때문에 조합은 시너지 간주 됩니다.
그림 2A 와 그림 2B 격자 그림 1A 및 1B 그림에서 그들에 유사한 보여주지만,이 경우에 조합 입증 하지 않습니다 격리 테스트 (K. 균 분리 BIDMC 4)에 대 한 시너지 효과 때문에 최소 FIC나 성장 대기는 이다 1 &gt; 0.5.
그림 3 여러 건너뛴된 웰 스 (Enterobacter cloacae 복잡 한 격리 BIDMC 27) 발생 한 바둑판 시너지 그리드에서 광학 밀도 수치를 보여 줍니다. 건너뛴된 우물 우물 세균성 성장 항생제의 높은 농도와 인접 한 우물에 세균 성장의 존재에도 불구 하 고 대기는. 표준 마이크 테스트 뿐만에 알려져,이 현상 이며 세균성 성장 특성에서 생물 다양성으로 인해 잘 잘 세균성 inoculum23 의 작은 차이에 항생제의 감도에 , 31 , 32. 경우 하나 이상의 건너뛴 바둑판 배열에서 잘 발생, 우리는 결과 삭제 하 고 분석 결과 반복.
3 조합 공화국 균 에 대 한 테스트의 시간-죽 여 시너지 결과 그림 4 선물 예 BIDMC 32 격리 합니다. 식민지 수 y에 로그 눈금에 표시 됩니다-축 및 시간, 시간, x-축. 24 h에 튜브에 빨간 바와, 24 h 튜브 사이 박테리아의 농도 차이 동안 일러스트는 박테리아의 농도 약물 조합 포함 된 튜브에 시작 inoculum의 차이 조합 및 혼자 가장 활발 한 에이전트를 포함 하는 튜브에 파란색 바와 그림입니다. 그림 4A colistin minocycline;의 조합에서 결과 보여줍니다. 이 결합은 시너지 (조합 하 고 가장 활성 에이전트 혼자 ≥2 로그10 CFU/mL 24 h에서 노출 하는 박테리아의 농도 사이의 차이) 및 살 균 (감소 inoculum 24 h ≥3 로그10 에서 농도에 시작 CFU/mL). 그림 4B colistin clindamycin의 조합, 시너지 했지만 살 균 했다 조합에서 결과 표시 합니다. 이 조합은 마약 혼자, 그러나 그들을 죽이지 않았어요도 박테리아의 성장을 억제. 그림 4C colistin 리스로 마이 신, 살 균도 시너지는의 조합에서 결과 표시 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig1.jpg"> 그림 1: 바둑판 배열 보여주는 시너지 (minocycline + colistin FDA CDC 0494 변형 대장균 에 대 한 테스트) 결과. 바둑판 배열 (A) Spectrophotometric 판독 및 성장 해석. 셀의 값은 광학 밀도 값 600 nm (OD600). OD600 값 0.07 (육안 검사에 의해 성장이 해당) 아래 셀 셀 세600 값 0.07 (육안 검사에 의해 성장에 해당)는 회색된 녹색 회색된 빨강, 있습니다. (B) 소수 억제 농도 지 수 (FIC나) 계산 합니다. 음영을 나타내는 성장 또는 성장이 유지 되었습니다. Colistin 및 x-와 yminocycline 값-축, 각각, 지금 대표 소수 금지 농도 (FIC), 또는 해당 열 또는 행 최소 억제 농도 (약물의 농도의 비율 마이크) 혼자 약의. 각 셀에 값이 있는 FIC나또는 두의 금융 합 잘에 마약. 큰 깨진된 라인 경계 상자는 FIC나 0.5와 웰 스를 포함합니다. 두꺼운 경계 셀은 최저 FIC나 는 성장 저해입니다, 나는 최소 FIC나잘을 나타냅니다. 최소 FIC나 0.5 이므로, 결합 시너지 간주 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig2.jpg"> 그림 2: 바둑판 배열 결과 시너지 (minocycline + colistin K. 균 에 대 한 테스트 BIDMC 4 격리)을 입증 하지 않는 조합입니다. 바둑판 배열 결과 그림 1A에 대 한 설명 된 대로의 600 nm 및 성장 해석에서 (A) 광학 밀도 값. (B) 소수 금지 농도 (FIC나) 인덱스 계산 그림 1A에 대 한 설명. 최소 FIC나 때문에 &gt; 0.5, 조합으로 간주 되지 않습니다 시너지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig3.jpg"> 그림 3: 바둑판 배열 결과 때문에 해석할 수 있지 않은 웰 스 (minocycline + colistin Enterobacter cloacae 복잡 한에 대 한 테스트 분리 BIDMC 27) 생략. 바둑판 배열 결과 그림 1A에 대 한 설명 된 대로의 600 nm 및 성장 해석에서 광학 밀도 값. 세균성 성장 항생제의 높은 농도와 인접 한 우물에 성장의 존재에도 불구 하 고 대기 건너뛴된 웰 스는 설명 했다. 결과 해석할, 하지 않으며 실험을 반복 해야 합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig4.jpg"> 그림 4: 시간 죽이기 시너지 결과 3 조합 공화국 균 격리 BIDMC 32에 대 한 테스트입니다. 식민지 수 y에 로그 눈금에 표시 됩니다-축 및 시간, 시간, x-축. 튜브에 24 h에 조합에는 박테리아의 농도 시작 inoculum의 차이 빨간 바와 그림입니다. 24 h에서 농도에 inoculum을 시작부터 감소 ≥3 로그10 CFU/mL 인 경우에, 조합은 살 균으로 간주 됩니다. 24 h는 조합을 포함 하는 튜브와 튜브 혼자 가장 활발 한 에이전트를 포함 하는 박테리아의 농도 차이 파란색 바와; 그림입니다. ≥2 로그10 CFU/mL 감소는, 결합 시너지 간주 됩니다. (A) Colistin (중부 표준시) + minocycline (최소), 시너지 효과 살 균 조합. (B) Colistin + clindamycin (CLI), 시너지만 아니라 살 균 조합. (C) Colistin + 리스로 마이 신 (ERY), 시너지도 살 균 조합. 이러한 결과 colistin 포함의 시너지 활동의 연구의 일환으로 처음 출판 되었다 조합 colistin 저항 Enterobacteriaceae, 우리가 그 colistin을 시연에 대 한 했다의 숫자와 함께 시너지 항생제만 개별적으로 활성화 되는 (예: clindamycin) 또는 주로 (예:에 리스로 마이)16그람 양성 세균 대 한. (리스로 마이 신, 스트레인에 대 한 바둑판 배열에 의해 시너지는 하지만 선정 되지 않은 시간-죽 여 그래서 그것은 비-시너지 조합 예를 들어 여기.) 우리는 가설 colistin 그람 음성 외부 막의 permeabilization에 의해 행동 알려져, clindamycin과 같은 약물의 항목을 수 있도록 colistin 내성 그람 음성 박테리아에 하위 permeabilizing 효력을 미치는 일반적으로 그람 음성 세포를 입력할 수 없습니다. 이 그림의 (A) 패널 브 레 넌 Krohn, Pironti, 그리고 커비 201816, 저작권 © 미국 사회 미생물학, 항균 성 대리인 및 화학요법에 대 한 수정 된 62(10), 2018, pii: e00873-18, doi: 10.1128/AAC.00873-18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

항균 시너지 테스트 조합에 사용 되는 두 개 이상의 항생제의 효과 평가 하는 데 사용 하 고는 일반적으로 두 가지 방법 중 하나에 의해 수행: 바둑판 배열 또는 시간 죽 일 분석 결과. 여기, 우리는 자동화 된, 잉크젯 프린터 기반 바둑판 배열 시너지 기술 및 고전적인 시간 죽이기 시너지 연구 제시.

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

수동 바둑판 어레이 시너지 테스트는 노동 집약적이고 오류가 발생하기 쉬운 방법입니다. 반면, 자동화된 잉크젯 프린터 기반 바둑판 방식은 속도, 정확성 및 처리량을 크게 향상시킵니다. 자동화된 체크보드 방법을 사용하면 시너지 조합에 대해 많은 수의 약물을 선별할 수 있으며, 시간 kill 방법은 이러한 조합의 활성을 확인하고 추가로 탐색할 수 있습니다.새로운 항생 발견은 저항의 퍼짐과 보조를 맞추지 않고, 시너지 조합의 조사는 저항하는 박테리아를 취급하기 위하여 기존 약을 구원하기 위한 가능성을 제안합니다. 우리는 항균제와 이 기술을 보여주기더라도, 또한 항균제의 그밖 종류와 또는 조합 약 또는 화합물 시험의 다른 모형을 위해 사용될 수 있었습니다. 이 비디오에서는 자동 식수판 배열 방법과 수동 시간 kill 방법을 보여 줍니다.먼저 바둑판 어레이 연구를 수행하여 유망한 조합을 식별한 다음 시간 별 검사 연구를 통해 이러한 연구를 더 조사하는 것이 좋습니다. 먼저, colistin 및 minocycline의 항균 스톡 솔루션을 만들고, 다음 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 스톡 솔루션에 대한 품질 관리를 수행합니다. 다음으로, 염화 나트륨 0.9%의 약 1밀리리터를 12mm-75mm 원형 하단 유리 배양 튜브에 추가합니다.박테리아의 하룻밤 접시에서 하나 또는 두 개의 식민지를 선택, 배양 튜브에 배치. 용액에 있는 박테리아를 중단하기 위하여 관을 부드럽게 소용돌이. 맥팔랜드 독자를 사용하여 박테리아의 농도를 확인합니다.0.5 맥팔랜드 탁도 판독을 달성하기 위해 더 많은 식염수 이상의 박테리아를 추가하여 농도를 조정합니다. 이어서, 50밀리리터 원추형 튜브에 30밀리리터의 정량 조정 된 뮬러-힌턴 국물에 서스펜션의 100 마이크로리터를 추가하여 1-300까지 박테리아를 희석시켜 밀리리터당 5배 10의 최종 세포 밀도에 도달한다. 이제 함께 제공되는 텍스트 프로토콜을 따라 인쇄용 항균제를 준비합니다.프로토콜을 저장한 다음 왼쪽 상단의 실행 버튼을 클릭한 다음 시작 단추를 클릭합니다. 플레이트 홀더에 384웰 플레이트를 적재하고 로드 플레이트 1 시너지 프롬프트 아래에 적재된 프레스를 누릅니다. 그런 다음 T8+카세트를 카세트 슬롯에 넣고 T8+카세트 프롬프트로드 아래에 로드된 누릅니다.메시지가 표시되면 카세트의 표시된 저장소에 항생제 스톡 솔루션을 추가하십시오. 각 솔루션이 추가된 후 채워진 버튼을 누릅니다. D300 디스펜서가 각 우물에 적절한 볼륨에 항생제 재고를 추가하고 실행 완료 상자가 나타나면 닫기를 클릭하고 플레이트를 제거하고 D300을 끕니다.다음으로, 이전에 준비된 세균 현탁액을 멸균 시약 저장소에 붓습니다. 멀티채널 파이펫을 사용하여 체크무늬 배열의 모든 우물에 서스펜션 의 50 마이크로리터를 추가합니다. 그런 다음 박테리아없이 양이온 조정 된 뮬러 힌턴 국물 50 마이크로 리터를 빈 우물에 추가하십시오.이것은 미디어의 멸균을 확인하기 위해 음의 통제가 잘 될 것입니다. 섭씨 35도 의 대기 인큐베이터에서 16~20시간 동안 배양합니다. 테스트를 분석하려면 함께 제공되는 텍스트 프로토콜을 따라가십시오.시간-킬 시너지 테스트를 위해 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 항균 스톡 솔루션을 다시 준비합니다. 이어서, 멸균식염수에서 시험 유기체의 0.5 맥팔랜드 현탁액을 만든다. 0.5 McFarland 서스펜션의 마이크로리터 100을 25x150mm 유리 라운드 바닥 배양 튜브에 25x150mm 유리 바닥 배양 튜브에 스테인레스 스틸 클로저와 함께 부드럽게 혼합할 수 있는 100마이크로리터를 추가합니다.멸균 접종 루프를 사용하여 희석된 현탁액한 한 방울을 혈액 식기판에 적어, 주변 공기에서 섭씨 35도에서 플레이트를 배양하여 접종 순도를 확인합니다. 튜브의 폐쇄를 교체하고, 로그산학상 성장에 도달할 때까지 적어도 3시간 동안 주변 공기에서 35도의 셰이커에 있는 시험관 랙에 배양한다. 초기 문화가 배양하는 동안, 5개의 오토클레이브 유리 배양 튜브에 양이온 조정 된 뮬러 힌턴 국물 10 밀리리터를 추가하십시오.시간 살인 시너지 연구를 위해, 적어도 하나의 약물은 개별적으로 성장 곡선에 영향을 미치지 않는 농도에 있어야합니다. 이는 시너지 연구 전에 개별 약물 농도의 효과를 평가함으로써 결정될 수 있다. 첫 번째 튜브에, 밀리리터 당 1 밀리그램 당 colistin 스톡의 10 마이크로 리터를 추가하여 밀리리터 당 1 마이크로그램의 최종 colistin 농도를 얻으며, 이는 이 예에서 사용되는 균주에 대해 효과가 없는 농도이기 때문이다.두 번째 튜브의 경우 밀리리터당 1밀리그램당 1밀리그램의 마이크로리터를 추가하여 밀리리터당 1마이크로그램의 최종 농도를 얻습니다. 이 농도는 또한 이 예에서 사용되는 균주에 대해 효과가 없습니다. 세 번째 튜브에 밀리리터 당 1밀리그램-미노사이클린 스톡 10마이크로리터와 밀리리터당 1밀리그램의 마이크로리터를 1밀리리터 당 콜리신 스톡에 추가합니다.이것은 튜브 1개와 2개에서 사용되는 콜리신과 미노사이클린의 동일한 양입니다. 네 번째와 다섯 번째 튜브에서는 항생제를 추가하지 않습니다. 이것은 각각 성장 제어 및 부정적인 제어 튜브가 될 것입니다.다음으로, 96개의 딥웰 폴리프로필렌 플레이트와 2밀리리터 웰을 사용하여 연속 희석을 위해 900마이크로리터의 멸균 식염수를 1~4개의 열로 B행에 추가하여 다중 채널 파이펫으로 1~4개의 열로 B행을 제공합니다. 문화권이 로그산학 성장 단계에 있을 때, 셰이커에서 배양 튜브를 제거하고 부드럽게 소용돌이시다. 서스펜션의 1밀리리터를 12x75mm 유리 배양 튜브로 옮기고 McFarland 판독기로 밀도를 확인합니다.밀도가 1.0 McFarland 미만인 경우 튜브를 셰이커로 반환하고 더 오래 배양합니다. 1.0 McFarland보다 큰 경우, 정지가 1.0 McFarland에있을 때까지 튜브, 소용돌이 부드럽게 소용돌이 및 다시 샘플링에 양이온 조정 뮬러 힌턴 국물을 추가합니다. 시작 무분동을 준비할 때 문화가 로그자리트 성장 단계에 있는 것이 중요합니다.성장 곡선을 구성하여 유기체가 이 단계에 도달하는 시기를 결정할 수 있습니다. 그런 다음 1.0 McFarland 서스펜션의 100 마이크로리터를 1~4개의 튜브에 넣고 부드럽게 소용돌이시다. 혼합 직후, 1, 2, 4, 6 및 24시간, 각 배양 튜브에서 150 마이크로리터 알리코트를 제거하여 멸균 파이펫 팁만 튜브에 들어가고 알리쿼트 철수 시 멸균되지 않은 피펫터 샤프트가 들어오게 한다.알리쿼트( aliquots)를 각각 96개의 딥웰 플레이트의 첫 번째 행에 연속 우물에 넣습니다. 각 지점에서 알리쿼트를 제거한 직후 35도 섭씨 주변 공기 인큐베이터의 셰이커에 튜브를 테스트 튜브 랙으로 반환합니다. 멀티채널 파이펫을 사용하여 플레이트 의 행 A에서 100마이크로리터를 제거하고 900마이크로리터의 식염수를 포함하는 행 B에 추가하여 1대 10 희석을 생성합니다.용액을 위아래로 4~5회 위아래로 피펫하여 혼합한 다음 팁을 버립니다. 첫째, 항생제 조건과 희석을 가진 뮬러-힌튼 천 접시를 도금할 라벨. 그런 다음, 추가 길이의 팁이 있는 멀티채널 파이펫을 사용하여 드롭 플레이트 방법을 사용하여 콜로니 카운트용 희석된 샘플을 플레이트로 플레이트한다.각 웰에서 마이크로리터 10개를 제거하고 적절하게 표시된 플레이트에 연속으로 조심스럽게 분배합니다. 모든 행이 플레이트에 분배될 때까지 계속합니다. 또한, 24시간 시점에서, 음의 대조관으로부터 직접 가져온 10마이크로리터 드롭을 이를 위해 전용 지점에 놓아 멸균을 테스트한다.그런 다음 모든 판을 반전시키고 밤새 주변 공기에서 섭씨 35도에서 배양하십시오. 그런 다음 각 영역에 있는 콜로니 수를 계산하고 세포 밀도를 계산합니다. 이중 계수 또는 누락된 식민지를 피하기 위해 플레이트 뒷면에 미세 팁 영구 마커로 식민지를 표시하십시오.각 희석 계열에 대해 3~30개의 콜로니로 방울을 식별합니다. 이 방울에서 식민지를 계산하고 희석 계수와 함께 카운트를 기록합니다. 여기에 표시된 체크어판 어레이 시너지 실험에서 밀리리터 당 0 ~32 마이크로그램의 농도에서 미노사이클린이 밀리리터당 0~16마이크로그램의 농도에서 콜리신과 결합되어 E.coli의 균주에 대해 테스트하였다.OD600 값이 07 미만인 웰은 성장을 나타내지 않으며 빨간색으로 차드되고 OD600 값이 07과 같으면 성장이 나타내고 녹색으로 그늘이 있습니다. 각 약물에 대해, 최소 억제 농도는 세균 성장을 억제하는 약물의 가장 낮은 농도이다. 미노사이클린의 경우 밀리리터당 32마이크로그램이며, 콜리신의 경우 밀리리터당 8마이크로그램입니다.섀도링은 여기서 유지되지만 성장이 억제되는 우물 내의 값은 분수 억제 농도 또는 FIC, 인덱스 값으로 대체됩니다. 각 음에서, 각 약물의 FIC 지수는 약물의 최소 억제 농도에 의해 잘 항생제의 농도를 분할하여 계산됩니다. 시너지 효과를 위한 컷오프로 간주되는 FIC 지수가 0.5 미만이거나 동일한 우물은 깨진 선 테두리로 표시되며, FIC 지수가 가장 낮은 우물은 굵게 표시됩니다.최소 FIC 값은 시너지 범위에 있기 때문에 조합이 시너지 효과로 간주됩니다. 성장이 억제되는 최소 FIC 지수가 0.5보다 큰 최소 FIC 지수이기 때문에 시너지 효과를 입증하지 못하는 사례의 예가 여기에 나와 있다. 마지막으로, 이 예에서, 몇몇 건너뛴 우물은 항생제의 높은 농도를 가진 인접한 우물에 있는 세균성장의 존재에도 불구하고, 억제되는 세균성 성장을 나타내는, 일어났습니다.체크 보드 배열에서 두 개 이상의 건너뛰기 잘 건너 뛴 경우 결과를 폐기하고 분석이 반복되어야합니다. 시간 살인 시너지 분석의 결과를 보여주는 그래프의 예가 여기에 제시되어 있습니다. 시간 살인 시너지 분석의 해석에 대한 자세한 내용은 함께 제공되는 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.시너지 조합의 활성에 대한 추가 정보는 약동학 및 약물 역학의 평가를 통해 동물 모델과의 생체 내 연구를 통해 얻을 수 있다. 박테리아로 작업 할 때 항상 개인 보호 장비의 사용을 포함하여 적절한 안전 절차를 따르십시오. 에어로졸을 생성하거나 고위험 병원균을 사용하는 경우 생물 안전 캐비닛에서 모든 작업을 수행하십시오.

antimicrobial-synergy-testing-inkjet-printer-assisted-automated

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 페그 플레이트를 사용하여 생물막을 효율적으로 제거하는 항균 화합물을 스크리닝하는 분석을 보여줍니다. 이 방법론은 항균 화합물로 처리한 후 생물막의 대사 상태를 모니터링하여 최소 생물막 박멸 농도를 쉽게 측정할 수 있습니다.

항균제 스크리닝을 위한 Peg Plate Biofilm Assay

(1) 세포 내 세균 병원체를 표적으로 하는 진핵 세포 침투 항균제를 동시에 식별하고 (2) 진핵 세포 독성을 평가하기 위해 고처리량 실시간 분석이 개발되었습니다. 그 후 동일한 기술의 변형이 디지털 디스펜싱 기술과 결합되어 용이한 고해상도, 용량 반응, 2차원 및 3차원 시너지 연구를 가능하게 했습니다.

높은 처리량, 실시간, 세포 내 항균 활동의 이중 판독 테스트 및 진핵 세포의 세포 독성

시너지 마약 조합은 어렵고 경험적으로 확인할 수 있다. 여기, 우리는 식별 하 고 시너지 작은 분자를 확인 하는 방법을 설명 합니다.

오버랩2 방법으로 시너지 약물 조합의 높은 처리량 식별

여기 우리는 혈 청에서 항 체의 Shigellacidal 활동을 측정 하는 프로토콜을 제시. 혈 청은 박테리아와 외 인 보수, 인 큐베이 팅, 혼합 그리고 반응 혼합물은 한 접시에 도금. 실행 가능한 박테리아는 계산, 자동된 식민지 열거자를 사용 하 고 살 균 titer를 결정 하는 데 사용 되는 식민지를 형성 한다.

높은 처리량 Shigella-특정 살 균 시험

이 프로토콜은 하나의 실험에서 4개의 약 사이에서 얻을 수 있는 모든 가능한 조합을 공부하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 결과를 평가하기 위해 표준 96-웰 플레이트 마이크로 희석 분석 및 분수 억제 농도(FIC)의 계산을 기반으로 한다.

쿼드러플-체커보드: 약물 조합을 연구하기 위한 3차원 체커보드 수정

여기서는 상업적으로 이용 가능한 실시간 ATP 기반 발광 미생물 생존도 분석을 사용하여 예방적 임상 적용을 시뮬레이션하기 위해 항생제 용출 고분자의 항균 효능을 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 약물 용출 물질의 종적 활성을 모니터링할 수 있으며 항균 약물 전달 플랫폼을 테스트하는 데 널리 적용할 수 있습니다.

약물 용출 물질의 종방향 항균 활성을 측정하는 새로운 방법

여기에서는 지능형 고처리량 항균 감도 검사/파지 스크리닝 시스템의 원리, 구조 및 지침을 소개합니다. 그 응용은 중국 산둥성의 가금류에서 분리한 살모넬라균 을 예로 들어 설명합니다. Lar 지수를 계산하고 항생제 내성 평가에 대한 중요성을 종합적으로 논의합니다.

지능형 고처리량 항균 감수성 검사/파지 스크리닝 시스템 적용 및 항생제 내성 LAR 지수

이 프로토콜은 양이온성 펩타이드 Mel4와 펩타이드 모방 RK758의 항균 활성과 세포독성을 생성하고 평가하는 방법을 설명합니다. 화학 합성, 재조합 발현, 표준화된 기능 분석법을 통합함으로써, 펩타이드 및 소분자 모방체의 생산 및 시험을 위한 효율적인 워크플로우를 제공합니다.

항균 펩타이드 및 그 모방체의 생산 및 시험

숙주 세포 요인은 설치 및 Kaposi의 육종 (KS)의 유지에 중요한 역할을한다. 우리는 KSHV에 감염된 DMVEC 전지 변경 숙주 세포 요소를 식별하는 방법을 설명하고, KS 종양 조직 인치 바이러스에 의해 변경 세포 유전자 소설 치료제에 대한 잠재적인 대상 (S) 역할을합니다.

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Mycobacterium 결핵의 항균 자화율 시험에 도전하지만, 환자 치료를 위해 중요합니다. 이 microtiter 플레이트 형식 12 antimycobacterial 마약 테스트를 제공하며 적절한 치료에 도움이됩니다 최소 억제 농도 (MIC) 값을 제공합니다.

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학습하세요 잉크젯 프린터 기반 자동화된 바둑판 배열 방법과 수동 시간 죽이기 방법을 이용한 항균 시너지 테스트입니다. 이 기술은 다양한 항생제 조합을 신속하게 선별하여 내성 박테리아 치료에 활용할 수 있습니다.

잉크젯 프린터 기반으로 테스트 자동화 된 바둑판 배열 및 수동 시간 죽 일 방법 항균 시너지

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