로봇 시스템을 사용 하 여 처리 하 고 저 승 Murine 샘플 조직학 분석 포함
January 7th, 2019
Murine 조직 처리에 대 한 표준화의 부족 인간의 표본에 비해 murine histopathological 분석의 품질을 줄일 수 있습니다. 여기, 선물이 murine 염증 및 uninflamed 저 승 조직 처리 및 인간의 샘플을 포함에 대 한 정기적으로 사용 하는 로봇 시스템의 타당성을 보여의 histopathological 검사를 수행 하는 프로토콜.
이 자동화 된 프로토콜은 인간 샘플의 처리 및 포함에 일상적으로 사용되는 로봇 시스템으로 뮤린 조직의 조직 병리학적 준비를 허용하여 샘플의 품질을 크게 증가시합니다. 이 기술의 주요 장점은 방법론 적 변수의 수를 줄이고 절차 단계의 표준화를 향상시킨다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 프란체스카 보기오가 될 것입니다.
프란체스카 보기오는 내 실험실에서 일하는 병리학자입니다. 작은 핀셋을 사용하여 중성 완충 포르말린에서 고정 된 뮤린 결장 조직 샘플을 페트리 접시의 단면 작업 플레이트로 옮기는 것으로 시작합니다. 멸균 메스를 사용하여 결장수를 0.2~0.3센티미터 의 조각으로 자르고 핀셋을 사용하여 1개의 세그먼트를 지향파라핀 포함 카세트의 3개의 비인접 플라스틱 돌출 팁에 배치합니다.
네 개의 가장자리를 조심스럽게 밀어 카세트를 닫고 그리드를 플라스틱 지지 프레임에 삽입합니다. 그런 다음 지원 프레임에 레이블을 지정하여 샘플을 식별하고 카세트를 그리드로 전송합니다. 처리 하기 한 시간 전에 자동화 된 프로세서를 설정 합니다.
파라핀이 녹았다는 것을 나타내는 계측기가 자동화된 프로세서에 금속 바구니를 수동으로 삽입합니다. 모든 카세트가 삽입되면 바구니를 닫고 레토르트의 뚜껑을 엽니다. 바구니를 프로세서 전용 하우징에 삽입하고 레토르트 뚜껑을 닫습니다.
계측기 컴퓨터의 터치스크린을 사용하여 테이블에 제공된 방식에 따라 구현될 솔루션, 타이밍 및 온도의 시퀀스를 선택하는 작업 프로토콜을 정의합니다. 전용 컴퓨터 아이콘을 클릭하여 카세트 바구니가 포함된 레토르트에 프로토콜을 할당하고 시작 단추를 클릭합니다. 기기가 전용 아이콘과 알람 톤으로 프로토콜의 끝을 확인하면 레토르트 뚜껑을 열고 프로세서에서 바구니를 제거합니다.
조직이 포함되기 한 시간 전에 자동화 된 임베드를 켜고 파라핀이 악기의 파라핀 목욕 온도계에 의해 표시된 대로 완전히 녹을 때까지 기다립니다. 프로세서 바구니에서 임베더 랙까지 최대 32개의 가공 카세트를 수동으로 전송하고 메인 임베드리드 뚜껑을 엽니다. 터치스크린을 사용하여 랙이 삽입되고 있음을 로봇 시스템에 알리고 입구 하우징 뚜껑을 엽니다.
입구 하우징에 최대 4개의 랙을 삽입하고 입구 하우징 뚜껑을 닫습니다. 그런 다음 터치스크린을 사용하여 테이블에 표시된 대로 포함 절차를 시작합니다. 계측기가 전용 아이콘으로 프로토콜의 끝을 확인하면 콘센트 랙을 제거하고 메인 임베드리드 뚜껑을 닫습니다.
그런 다음 랙에서 임베디드 블록을 저장소 상자로 옮기습니다. 결장 단축, 및 프로 염증 유전자의 대장 발현은, dextran 나트륨 황산염 또는 DSS 유도 염증의 존재를 득점하기 위한 널리 사용되는 매개 변수입니다. 장 라미나 프로프리아로 염증 세포의 침투는 또한 DSS 처리에 의해 크게 강화됩니다.
입증된 바와 같이 자동화에 의해 처리된 처리되지 않은 견본의 H&E 염색은, DSS 처리한 동물에게서 견본에 비교된 염증성 세포, 상피 변경 및 점막 건축에 있는 변경의 더 적은 침투를 보여줍니다. 자동화된 기기에 의해 수행된 뮤린 조직 제제 및 포함의 품질은 CD20 및 말로리 트리크롬 스테인닝을 위한 면역조직화학 염색에 의해 추가적으로 확인할 수 있다. 특히, 자동화된 샘플 처리는 수동 방법에 의해 처리된 샘플보다 조직학적 파라미터의 높은 비율을 일관되게 평가할 수 있게 한다.
자동 프로세서가 준비될 때까지 기다리기 위해 그리드에 조직을 올바르게 삽입하고 파라핀이 완전히 녹을 때까지 기다립니다. 이 방법은 인간 병리학자의 뮤린 모형에서 이용될 인간 조직학 견본의 자질로, 어떤 murine 조직의 조직학 분석을 능력을 발휘하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 기술은 이미 염증 성 조직 염증을 연구하기위한 성공적인 연구였으며 대장 뮤린 암 모델을 연구하는 데 유용 할 것입니다.
이 프로토콜에 사용되는 일부 시약은 위험하므로 이 절차를 수행 할 때 항상 보호 장갑, 고글 및 실험실 코트를 착용해야합니다.
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개요
이 기사는 일반적으로 인간 샘플에 사용되는 로봇 시스템을 사용하여 생쥐 조직의 조직병리학적 준비를 위한 자동화된 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 샘플 품질을 향상시키고 절차적 단계를 표준화하여 생쥐 조직 처리의 표준화 부족 문제를 해결합니다.
주요 연구 구성 요소
과학 분야
- 조직병리학
- 로봇 자동화
- 생쥐 조직 분석
배경
- 생쥐 조직 처리에는 표준화가 부족합니다.
- 조직병리학적 분석의 품질이 저하될 수 있습니다.
- 로봇 시스템은 인간 샘플 처리에 일상적으로 사용됩니다.
- 생쥐 조직에 대한 방법 개선은 연구 결과를 향상시킬 수 있습니다.
연구 목적
- 생쥐 조직 처리를 위한 표준화된 프로토콜을 시연합니다.
- 생쥐 샘플의 조직병리학적 분석 품질을 향상시킵니다.
- 효율성과 일관성을 향상시키기 위해 로봇 시스템을 활용합니다.
사용된 방법
- 집게를 사용하여 고정된 생쥐 결장 조직 샘플을 이동합니다.
- 무균 스칼펠을 사용하여 결장을 0.2에서 0.3cm 조각으로 잘라냅니다.
- 조직 조각을 파라핀 임베딩 카세트의 인접하지 않은 팁에 배치합니다.
- 처리 및 임베딩을 위해 로봇 시스템을 활용합니다.
주요 결과
- 자동화된 프로토콜은 샘플 품질을 현저하게 향상시킵니다.
- 조직 처리 과정에서 방법론적 변수를 감소시킵니다.
- 절차적 단계의 표준화를 향상시킵니다.
- 실험실에서 일상적인 사용을 위한 타당성을 입증했습니다.
결론
- 로봇 시스템은 생쥐 조직을 효과적으로 처리할 수 있습니다.
- 표준화는 신뢰할 수 있는 조직병리학적 분석에 중요합니다.
- 이 프로토콜은 연구 실천을 개선하기 위해 채택될 수 있습니다.
자주 묻는 질문
Executive Industry Relevance
Standardized tissue processing is critical for reliable preclinical evaluation in inflammatory bowel disease and colorectal cancer models. Automated robotic systems reduce methodological variability, enhancing reproducibility and predictive confidence in histopathological endpoints. This approach supports translational continuity by aligning murine sample quality with human histology standards.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables rigorous interrogation of therapeutic hypotheses in murine colitis models through consistent tissue preparation.
- Operational Value: Reduces observer bias and technical noise in phenotypic scoring of inflammation and epithelial damage.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Provides standardized tissue sections for quantitative immunohistochemical analysis of biomarkers like CD20.
- Operational Value: Ensures assay readiness and reproducibility across compound screening campaigns in colitis models.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant systems by maintaining histological fidelity from discovery through preclinical validation.
- Operational Value: Enables risk-adjusted advancement decisions based on reliable histopathological readouts of colonic shortening and inflammatory infiltration.
Pipeline & Workflow Integration
The method integrates into the discovery continuum from early target validation through preclinical efficacy testing in murine inflammation models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by reducing methodological artifacts in tissue sectioning and staining.
- Screening: Delivers assay standardization and quantitative outputs for reliable compound evaluation in DSS-induced colitis.
- Analytics: Generates consistent histopathological measurements enabling cross-condition comparison and statistical rigor.
- Translational Research: Maintains continuity from murine models to human pathology through standardized processing aligned with clinical histology workflows.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for processing murine intestinal tissues across multiple therapeutic programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduced mechanistic ambiguity in histological scoring.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of tissue processing across laboratories.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk in IBD and oncology programs.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on reliable histopathological endpoints.
Implementation Considerations
- Requires expertise in histopathology and robotic system operation.
- Dependence on automated processors and embedders compatible with murine cassette formats.
- Need for cross-team standardization of tissue trimming and cassette loading procedures.
- Adaptation considerations for non-colonic murine tissues beyond colonic inflammation models.
- Practical limitation: Manual steps remain for tissue trimming and cassette loading prior to automation.
