Name: 양서류에서 난소 모니터링 및 제어를위한 생식 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: 배우세요 양서류 생식 기술을 통해 난소 모니터링 및 회복 가능한 난소 절제술을 수행하는 방법을 알아보세요. 이 기술은 동물을 안락사시키지 않고 난자를 채취하여 번식 능력을 유지할 수 있게 합니다.

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Natalie Calatayud는 바바라 듀란트 박사에게 초음파 교육 및 지원에 감사드리며, SDZG의 연구 동료 직책에 재정 지원을 수여한 S.A.(EISA)의 익스플로라도라도라 드 임무에블스(EISA)에 감사드립니다. 원고에 대한 의견뿐만 아니라 공식 검토자에 대한 의견 카일리 지팡이 박사에게 감사드립니다 (누구든지 될 수 있습니다). 조나단 Dain 덕분에 우리의 2018 여름 펠로우, 사진을 제공하기위한 보존 연구를위한 샌디에고 동물원 연구소 (그림1A,B). 모니카 스눕스는 동물원 및 수족관 보존 기금 협회와 디즈니 월드와이드 보존 기금에 감사를 표하며 포로가 된 강인인구를 확립하기 위한 재정적 지원을 제공하고 있습니다. 또한, 수륙 양용 옹호자 인 아이리스 드 라 모테 (Iris de la Motte)의 개인 기부를 통해 지원도 받았습니다. 감사합니다, 씨 크리스토퍼 DeChant와 박사 마크 캠벨 연구에 중요한 기여를 주어집니다.

저자는 공개 할 것이 없다.

직접 취급, 육안 관찰 및 형태 측정은 비침습적 기술을 제공하며 여성 생식 단계를 결정하기위한 첫 번째 평가 기준입니다. 그러나, 이 연구 결과는 gravid 난소가 항상 촉진에 의해 확실하게 확인될 수 없다는 것을 보여줍니다. 종에 따라, 그라비드 난소는 때때로 반투명 (그림13A,B) 또는 동물의 복부 측에 완전히 반투명 한 피부를 통해 시각적으로 검출 될 수있다 (그림13C). oviposition를 완료한 암컷은 중력 여성에 비해 그들의 외관에 명백한 변경을 보여줄 수 있습니다 (예를 들면, 느슨한 피부 및 그들의 바디 질량의 30%까지의 손실, 그림 13D). 번식 하는 동안, 남성과 여성 배 란 및 배 란에 근접에 대 한 정보를 제공 하는 특정 행동을 표시 합니다. R. muscosa 표시의 경우에 암컷은 oviposition에 가깝다는 것을 여자는 손잡이를 입력하는 여성으로 시작합니다.
Anurans와 Caudates에 초음파 기술을 적용하면 계란의 유무및 oviposition가 개발 된 계란의 완전 또는 부분 방출과 관련이 있는지 여부를 진단 할 수 있습니다. 따라서, 이 방법은 복부 피부 투명성, 또는 표피 일관성에 의해 변화하는 시각화 기술을 통해 gravid/비 gravid 상태를 결정하는 데 국한되지 않고 생식 상태의 보다 완전하고 정확한 평가를 제공합니다. 다른 수륙 양용 종. 초음파는 동물에 대한 비교적 용이하고 적은 스트레스로 수행 될 수 있으며 (도5 및 도 13)생식 주기를 특성화하고 생식 상태를 결정하는 데 사용할 수 있습니다4. 종에 익숙해지는 것이 중요합니다. 그러나, 이 연구 결과는 Necturus와 R. muscosa가 생식 단계의 유사한 분류를 허용하는 그들의 생식 패턴에 있는 일반적인 발달 표시를 공유한다는 것을 보여주었습니다 (그림 5). 이 기술을 통해 이제 계란 개발포로 Necturus와 R. muscosa에서 높은 이며 이 두 종 계절 패턴을 따릅니다 증거가 있다. 이러한 현상에 대한 이유는 알려지지 않았고 추가 조사가 필요하지만 초음파를 사용하지 않으면 난소 보존 및 부분 배란과 같은 난소 기능 장애의 여러 영역이 발견되지 않았을 것입니다. 이 기술에 대한 미래의 응용 프로그램은 여성이 어떤 주어진 년에서 번식을 위해 선택되어야하는지 여부와 oviposition이 완료되었는지 여부를 결정하는 데 사용됩니다.
R. muscosa에제시 된 혈액 수집 프로토콜, 효과적 이며 동물에 게 최소한의 고통을 일으키는, 포로와 야생 잡힌 된 Anurans에서 호르몬 프로필을 공부 하는 최적 (Calatayud, 게시 되지 않은). 날짜를, 포로 R. muscosa의 연간 호르몬 프로필에 관한 아무 정보 존재 하 고, 따라서, 호르몬그들의 건강 및 재생에 영향을 미치는 방법에 대 한 지식. 더욱이, 이 종의 암컷이 연례 브리더가 아닐 수도 있다는 증거와 함께, 호르몬 프로파일링은 난소 주기를 추적하는 또 다른 방법이 될 것입니다. 초음파와 함께, 호르몬 분석은 여성이 oviposition에 대한 준비가 될 것입니다 무엇의 더 나은 예측으로 이어질 수 있습니다. 게다가, 작년에, 포로 R. muscosa 인구에 있는 성교의 2개의 케이스는 문서화되었습니다. 또한, 엄지 패드의 개발은 오래된 창립 여성의 일부에 주목하고있다. 이 대 한 이유는 현재 조사 하지만 초기 결과 남성 호르몬 수준에 변화에 관련 될 수 있습니다 제안 (Calatayud, 게시 되지 않은). 다른 나이의 여성에 있는 분별 있는 호르몬 주기는 왜 여성이 남성 관련 이차 성적인 특성을 개발할 수 있고 이것이 노후화 인구에서 예상될 수 있는지 여부를 이해하는 것을 도울 것입니다.
외인성 호르몬 치료는 포로 양서류에서 자주 발생하는 생식 기능 장애를 극복하기 위해 사용되었습니다. 그러나, 이 연구에서 R. muscosa와 Necturus 인구에 대 한, 호르몬 치료 및 제어 여성 사이의 oviposition에 유의 한 차이 2 그리고 5 년의 기간 동안 각각 발견 되었다. 이 호르몬 관리 프로토콜을 나타낼 수 있습니다., 복용량, 프라이밍 및 호르몬 조합 사용 종에 대 한 적절 한 되지 않았습니다. 개별 적인 여성 생식 역사의 가까운 분석은 R. muscosa는 또한 취급한 여성에서 관찰된 호르몬 효력의 부족을 설명할 수 있던 연례 사육을 경험하지 않을 수 있다는 것을 건의합니다. 여성의 일정 비율이 지속적으로 매년 번식을 건너 뛰었기 때문에, 종의 자연사를 이해하는 것은 외인성 호르몬에 대한 필요성이 있는지 여부와 가장 효과적 일 수 있습니다 때 를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 문서에 설명 된 절차는 종의 숫자에 적용 할수 있습니다, (표 1) 5g에서 150g에 이르기까지 아누란입니다; 큰 동물은 다른 주사기와 바늘 게이지를 요구할 수 있습니다. 주사의 위치는 근육 내, 복막 내, 하위 절단 또는 상하 주사를 필요로하는 일부 호르몬에 따라다릅니다 (그림 7).
난소 절제술의 목적을 위한 수술은 배아학 연구를 위한 난모세포를 얻기 위하여 각종 양서류 종에서 이용된 일반적인 방법입니다. 난소 절제술은 또한 인구 통제 및 계란 보유와 같은 의학 문제점을 위해 표시될 수 있습니다. 연구 목적으로 난모세포 수확이 수행되는 부분 난소절제술의 경우, 수술은 동물이 생식상태로 남아 있는지 확인해야 합니다. PGF2α의 투여는 여성 R. muscosa에서계란 보존을 해결하는 몇 가지 약속을 보여 주었다. 몇몇 개별에서, PGF2α는 이전에 보유한 계란의 완전한 증착을 유도했습니다 그러나 그 외에서는 모든 계란을 제거하기 위하여 수동 스트리핑을 요구하는 부분적인 증착만 발생했습니다. PGF2α는 R. muscosa에서난자 보존을 위한 수술의 대안으로 작용할 수 있지만, 다른 양서류에서 유사한 병리학적 상태를 치료하는 능력은 종별 유효성 검사를 필요로 합니다. 외과 적 개입이 Anuran 또는 Caudate 환자를 위해 위임될 때, 절개가 이루어지기 전에 마취의 적당한 비행기를 보장할 필요가 있습니다. 각 taxa에 대한 이 연구에 설명된 규범적 유도 및 복구 응답을 평가하고 모니터링하기 위해 예리한 관찰 기술이 필요합니다. 일단 특정 해부학, 적절한 외과 적 접근법, 지혈, 부드러운 조직 조작 및 적절한 수술 후 관리에 익숙해지면 생식 수술은 압도적 인 장애물을 제기하지 않습니다.

양서류는 오랫동안 연구 분야의 넓은 범위에 의해 중요한 생물학적 및 의료 모델로 인식되었습니다. 제노푸스 래비스와 X. 열대성, 레오파드 개구리(구 라나) 피피엔스및 액소로틀(Ambystomamexicanum)과같은 특정 종을 연구하여 얻은 데이터가 적용되었습니다. 인간을 포함한 여러 가지 척추동물 종. 이들과 다른 양서류를 연구에서 나온 수의학, 축산 및 보조 생식 기술은 포로에서 희귀 한 인구의 성공적인 치료, 유지 보수 및 지속 가능성을 개발하는 임무를 맡은 사람들에게 도움을 제공합니다. 1개 , 2개 , 3개 , 4.
위험 수륙 양용 종1,2에많은 멸종의 조류를 반전하기 위해 전 시투 보존 기반 접근법의 동시 사용에 대한 관심이 얻고있다. 이 문서는 현재 아누란과 카우다테의 모델 종에서 수륙 양용 난소 기능을 모니터링하고 제어하는 데 사용할 수있는 방법론을 제공합니다. 추가적으로, 계란 보유의 일반적인 생식 병리학을 다루기 위하여 기존 기술이 제출됩니다.
많은 분류학 단에서와 같이, 양서류 난소 통제는 환경과 생리학 사이 단단히 동기화된 상호 작용의 시리즈를 관련시킵니다. 온도와 포토기간(근접 신호라고 함)은 눈과 뇌에 의해 디코딩되어 유전적, 호르몬 및 일주기 적 과정(궁극적인 신호)으로 빠르게 변환됩니다3,4. 이 문서에서 다루는 난소 기능을 모니터링하고 제어하는 방법은 침습적 및 비침습적 기술을 포함합니다. 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 연구 및 교육 요구 사항은 비 침습적 인 기술을 신체적 고통이나 정신적 고통을 최소화하지 않고 통증 완화 약물을 필요로하지 않는 것으로 정의합니다5. 여기에서, 비침범성 기술은 육안 검사 및 촉진, 행동 관측, 형태 측정 평가 및 초음파를 포함합니다. 반대로, 혈액 수집, 호르몬 관리 및 수술 (난소 절제술 및 유지 된 계란의 제거)의 기술은 약간의 통증이나 불편 을 초래할 수 있으며 마취 또는 절차 후 약물 치료가 필요할 수 있기 때문에 침습적인 것으로 분류됩니다.
비침습적 난소 모니터링 기술은 대부분의 포로 양서류에 대한 일일 치료 루틴에 쉽게 통합될 수 있습니다. 종에 따라 난소 중력은 종종 간단한 육안 검사 (유리 개구리)에 의해 결정될 수 있습니다. 다른 경우에, 촉진은 여성이 gravid인지 여부를 나타낼 수 있습니다. 체중, 주전자 우로스타일 길이(SUL), 주전자 통풍구 길이(SVL) 및 표준 질량 지수(SMI)와 같은 다양한 신체 상태 지수(BCI)는 계란4,6,7의유무를 예측하는 데 사용할 수있습니다. 8,9. 그러나, 대부분의 나이 고려하지 않기 때문에 결과의 해석과 함께주의해야한다, 체형 또는 조성물 (예를 들어,물 유지 대 난소 질량 또는 지방) 6. 확실한 생식 진단은 난소 주기4,7의난자 발달 및 준비에 관하여 얻은 더 깊이 있는 지식을 가진 초음파를 통해 달성될 수 있습니다. 초음파는 또한 생식 병리 및 관련 생리 적 상태를확인하고 모니터링 할 수있는 수단을 제공합니다 4,8.
건강 상태에 관한 정보를 제공하는 것 외에도 혈액 샘플링을 사용하여 생식 호르몬을 측정할 수 있습니다. 호르몬 프로파일링이 최종 목표인 경우, 전신 스테로이드 데이터를 혼동할 수 있는 스트레스 관련 영향을 피하는 것이 중요합니다. 잠재적으로 강력한 모니터링 도구 하는 동안, 아직 어떤 수륙 양용 종에서 외 인 호르몬 관리에 타고난 내분비 학적 반응을 보여주는 연구. 혈액은 여러 사이트에서 안전하게 채취할 수 있습니다. 개구리에서 이것은 복부 복부 정맥, 언어 신경총, 대퇴 정맥 및심장 9,10을포함합니다. 카우다테에서는 복부 꼬리 정맥에서 혈액이 수집됩니다. 침략의 정도, 필요한 구속의 양, 마취제의 필요성, 표적화되는 장기의 섬세함 및 동물의 크기는 수륙 양 환자를위한 수집 기술을 선택할 때 고려해야 할 요소입니다. 이 기사는 원래 Forzan et al. 9에 의해 설명 된 대로 개구리의 안면 상악또는 근육혈관에서 혈액 수집 기술을 발표 할 예정이다.
난소 대조군은 종에 따라 다르며, 따라서 호르몬 프로토콜을 테스트하고 최적화해야 합니다. 계절성 및 관련 순환 호르몬 milieu 이외에, 난소 통제는 또한 문헌에 있는 작은 정보가 있는 반복한 호르몬 행정에 포로에 소요된 시간 및 노출에 있는 나이, 소요된 시간 및 에 단단히 연결될 수 있습니다11 , 12세 , 13. 생식 행동, 게임 생산, 성숙 및 난투를 유도하는 호르몬 요법의 구현은 포로와 관련된 일반적인 생식 문제를 해결하기위한 널리 보고 된 접근 방식이되었습니다4, 8,14,15,16. 척추동물에서 재생을 제어하는 메커니즘은 매우 보존되어 있기 때문에, 다수의 호르몬, 뉴로펩타이드 및 시판되는 약물이 다른 분류학 그룹에서 치료적으로 사용되고 있으며, 이는 또한 다수의 여러 가지에서 안정적으로 사용될 수 있다. 수륙 양용종 (표 1). 생식샘 자극 호르몬 방출 호르몬 (GnRH) 그리고 인간 융모 성 생식샘 자극 호르몬 (hCG) (또는 이의 변화, 즉, PMSG 및 eCG)17,18,개별적으로 또는 조합, 수륙 양용 포로에 광범위하게 사용되었습니다 포함 사육 프로그램 : 남부 로키 마운틴 보리얼(아낙시루스 보레아스 보레아스)4,19,20; 두드, 더스키 고퍼 개구리, 라나 세보사 (랑혼 외, 미공개)7; 걸프 코스트 워터독, 넥터스 베이에리20; 와이오밍 두드, 아낙시루스 박스터리18; 황소 개구리, 라나 카테스비아나21; 미국 두드개, 아낙시루스 아메리칸러스22; 잔디 개구리, Lymnodyaster 타스 마니엔시스23; 코퀴, 엘류테로다이실루스 코퀴24; 제노푸스, 제노푸스 라에비스25; 건터의 두드리고, 프세듀오프린 겐테리26; 북부 표범 개구리, 리토바테스 피피엔스; 아르헨티나 뿔개구리, 세라토프리스 화려한; 크랜웰의 뿔개구리, C. 크랜웰리; 미국의 지상 개구리, 오돈토프레누스 아메리카누스27; 그리고 소방관(살라만드라)228. 스테로이드 호르몬, 프로게스테론 (P4)과 같은 덜 일반적으로보고되지만, 아뇨란의 일부 종에서 배란과 배란을 유도에 좋은 효능을 입증했다16,18,29. 프로스타글란딘 (특히 프로스타글란딘 2-알파 (PGF 2α))은 코르티코 스테로이드30,31,32,34와 함께 배란에 관여하고 동안 높은 수준에 도달합니다. 배란 단계31.
시험관내 연구에서, PGF2α는 배란(31)의 강력한 유도제이며, 생체 내에서는 라나 무스코사4,30,32에서보존된 난자의 oviposition을 유도할 수 있다. 뇌하수체 추출물은 또한 배란 유도제15,16,34; 그러나, 생물 안전 및 질병 전송을 위한 잠재력을 둘러싼 관심사는 이 접근을 고려할 때 포로 사육 식민지를 위한 수시로 억지력35.
이 문서의 마지막 섹션은 외과 적 수술을 자세히 설명하며 난소 연구를 확장하거나 생식 병리의 해결을 돕기위한 대체 접근 법을 제공합니다. 난소 절제술은 배아 연구를 위한 난모세포를 얻기 위하여 양서류에서 일반적으로 행해냅니다. 그러나 다른 옵션이 실패할 때 보존 된 계란에 대한 해결책을 제공 할 수도 있습니다. 이 절차는 침략적이지만, 완전한 마취와 절개를 요구하여 계란 덩어리를 노출시키지만 안락사를 요구하지는 않습니다. 또한, 부분 난소 절제술 후, 동물은 완전한 회복을 할 수 있으며 수술 후 생식 활성을 계속 할 수있습니다8,36.
아래에 기술된 프로토콜은 아누란과 카우다테에서 난소 제어 및 모니터링의 침습적 및 비침습적 방법을 설명합니다. 아누란의 기술을 설명하기 위해 선택된 특정 종은 R. 점막과 X. laevis를포함한다. 넥터루스 마쿨로서스, N. 베이에리, N. 알라바메시스,및 A. 멕시카눔은 카우다테에서 유사하게 기술을 설명하는 데 사용되는 종을 포함한다.

<table><tbody><tr><td>GE logiq Book XP 및 8C-RS 프로브 4e10MHz GE Medical Systems</td><td>GE 의료 시스템</td><td>GE logiq Book XP</td><td>초음파</td></tr><tr><td>Aloka 500 7.5mHz 선형 또는 IBEX 다중 주파수(10-6mHz) 마이크로 볼록</td><td>GE 의료 시스템</td><td>8C-RS(10MHz)</td><td>초음파 프로브</td></tr><tr><td>BD 일회용 U-100 인슐린 주사기(28-29G 바늘)</td><td>Mettler Electronics Corp CA</td><td>Sonigel</td><td>초음파 젤(수용성, 무염)</td></tr><tr><td>Hormone</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gonadotropin 방출 호르몬 BACHEM</td><td></td><td>4012028</td><td>동의어: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9] - GnRH 아세테이트 약어: GnRH</td></tr><tr><td>Lutenizing 호르몬 방출 호르몬</td><td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td><td>4033013; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; L1898</td> <td>< 강한 > 동의어 : < / 강한> Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 아세테이트 염; [D-Ala6}-LHRH 아세테이트 염 수화물 약어: LHRH</td></tr><tr><td>인간 융모막 성선 자극 호르몬</td><td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td><td>4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10</td><td>동의어: 융모성 성선 자극 호르몬-&beta; (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU) 약어 : hCG</td></tr><tr><td>프로스타글란딘 2 &alpha;</td><td>시그마-알드리치</td><td>P40424;</td><td>동의어: (5Z, 9&alpha;, 11&alpha;, 13E, 15S) - 9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2&alpha; &빼기; 트리스; 약어: PGF2&alpha;</td></tr><tr><td>여포 자극 호르몬</td><td>시그마 Aldrich</td><td>F4021, F8174</td><td>동의어: 돼지, sheep 약어: FSH</td></tr><tr><td>프로게스테론</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46665; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; P7556</td><td>동의어: Vetranal; P4 수용성 약어: P4</td></tr><tr><td>뇌하수체 추출물</td><td>na</td><td></td><td>동의어: 양서류 종 derivation 약어: PE</td></tr><tr><td>임신 암말 성선 자극 호르몬</td><td>Prospec; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 리 바이오솔루션즈; 시그마-알드리치</td><td>HOR-272; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 493-10; 9002-70-4</td><td>동의어: 임산부 혈청 Gonadotropin 약어: PMSG</td></tr><tr><td>Metaclopromide</td><td>시그마 Aldrich</td><td>M0763</td><td>동의어: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide 약어: MET</td></tr><tr><td>Lucrin</td><td>BACHEM; 시그마-알드리치</td><td>4033014; &nbsp; &nbsp; L0399</td><td>동의어: Leuprorelin acetate 약어: Lucrin</td></tr><tr><td>Lutalyse</td><td>Pfizer</td><td></td><td>동의어: PGF2&alpha; - Dinoprost tromethamine 약어: Lut</td></tr><tr><td>Pimozide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1793</td><td>동의어 : 1 - [1- [4,4-bis (4-Fluorophenyl) butyl] -4-piperidinyl] -1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one 약어 : PZ</td></tr><tr><td>Amphiplex</td><td>위</td><td></td> 참조 <td> 동의어 : 성선 자극 호르몬 방출 호르몬 방출 호르몬 + metoclopramide 약어 : GnRH + MET</td></tr><tr><td>Ovopel Ovopel</td><td></td><td>na</td><td>동의어 : GnRHa + 도파민 수용체 길항제 (1 펠릿 / kg 투여) 약어 : Ovo</td></tr><tr><td>Ovaprim</td><td>Pentair 수생 생태계</td><td>Ova10</td><td>동의어 : 연어 성선 자극 호르몬 + domperidone 약어 : Ova</td></tr><tr><td>Domperidone</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>D122</td><td>동의어: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)프로필]piperidine 약어: DOM</td></tr></tbody></table>

양서류에서 난소 모니터링 및 제어를위한 생식 기술

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

양서류에서 난소 제어 및 모니터링은 다각적인 접근이 필요합니다. 성공적으로 생식 행동과 생리 적 또는 분자 연구를위한 gametes및 배아의 취득을 유도 할 수있는 몇 가지 응용 프로그램이 있습니다. 양서류는 척추동물 연구의 1/3에 1/4에 기여하고, 이 맥락에서 관심은 생식 과정과 배아 발달의 과학 계의 지식에 그들의 기여입니다. 그러나, 이 지식의 대부분은 종의 소수에서 파생됩니다. 최근, 전 세계적으로 양서류의 감소는 보존 주의자에 의해 증가 개입을 요구하고있다. 멸종 위험에 대한 응답으로 계속 등장하는 포로 회복 및 보증 식민지는 기존의 연구 및 임상 응용 프로그램이 인간의 치료하에 보유 된 양서류의 생존과 번식에 매우 중요합니다. 어떤 포로 인구의 성공은 건강과 재생산과 자신의 종의 가장 다양한 유전 적 표현을 앞으로 수행 실행 가능한 자손을 개발하는 능력에 설립된다. 연구원과 수의사에게 난소 발달과 건강을 모니터링하고 제어하는 능력은 필수적입니다. 이 문서의 초점은 모니터링하는 데 사용할 수있는 다른 보조 생식 기술을 강조하고, 적절하거나 필요한 경우, 양서류에서 난소 기능을 제어하는 것입니다. 이상적으로, 어떤 생식 및 건강 문제는 적절한 포로 축산을 통해 감소되어야한다, 하지만, 어떤 동물과 마찬가지로, 건강과 생식 병리의 문제는 피할 수 없다. 비침습적 기술에는 행동 평가, 육안 검사 및 촉진 및 신체 상태 지수 및 초음파 계산을 위한 형태 측정이 포함됩니다. 침습적 기술은 호르몬 주사, 혈액 샘플링 및 수술을 포함합니다. 난소 조절은 필요한 적용 및 관심 종에 따라 여러 가지 방법으로 행사될 수 있다.

수륙 양용 생물학의 연구는 많은 분류학 그룹의 유기체를 구동 하는 생식, 생리, 배아 및 개발 프로세스에 대 한 귀중 한 정보를 제공 합니다. 여기에서, 우리는 양서류에 있는 난소 통제 그리고 감시를 공부하기 위하여 이용될 수 있는 다른 방법론에 포괄적인 가이드를 제출합니다.

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

이 ovariectomy 기술은 우리의 의학 연구 또는 보유한 계란의 병리 상태를 극복하기위한 다른 응용 프로그램에 대한 양서류 oocytes를 얻기위한 복구 가능한 수술 절차를 사용합니다. 그것은 연구 목적을 위해 양서류 난모를 얻기 위하여 안락사를 요구하지 않습니다. 사실, 부분적인 오비절제술 후 수륙 양용 피사체는 생식 활성 사후 회복이 될 수 있다.골반 사지 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 등삼 재구체 위치에 마취 여성 아누란을 배치하고, 10 ~ 15 초 동안 포비달 요오드 용액으로 수술장을 닦아 촉촉하고 멸균 거즈를 사용합니다. 수술 부위에 투명멸 식 플라스틱 커튼을 놓고 주변 피부를 촉촉하게 유지하여 증발을 줄인 다음, 15 번 또는 11 메스 블레이드를 사용하여 어깨와 클로카 사이의 중간 코롬에서 3mm perimedian 피부 절개를 합니다. 면 에프티핑 어플리케이터를 사용하여 필요에 따라 절개 주변의 모든 작은 용기에 국소압력을 가하고 복막을 연속적으로 절개할 수 있습니다.눈꺼풀 리트랙터를 사용하여 음수 절개를 철회하고 혈관을 구문화하지 않고 계란 덩어리의 일부를 절제하십시오. 완전한 오방 절제술을 위해 주변 혈관을 소거하고 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여 중단 된 상반합 패턴으로 ceototomy 절개를 닫습니다. 이러한 Necturus와 유리 개구리와 같은 다른 양서류 종은 피부 투명성의 다양한 정도를 나타내며 생식 상태를 경피적으로 시각화하는 능력에 영향을 미칩니다.일부 종에서는 최근 배란 된 동물과 비교하여 중력인 암컷 사이에서 형태학적 차이를 감지 할 수 있습니다. 이 예에서, 최근에 배란 된 여성 라나 muscosa는 그녀의 피부와 그녀의 얇은 외관의 flaccidity에 의해 중력 여성과 구별 될 수있다. 라나 무사에서 oviposition의 행동 단계는 남성이 적극적으로 여성과 amplexus를 추구하는 구애를 포함, 라나 muscosa 남성마운트와 단단히 여성의 등에 걸레.amplexus 동안, 남성은 부드러운 펌핑 방식으로 여성을 짜냅니다. 암컷 라나 무스코사(Rana muscosa)는 주위를 돌아다니며 간헐적인 손잡이 행동을 보여주며, 결국 계란이 붙어있을 수 있는 표면에 기대어 복부를 적극적으로 펌핑합니다. oviposition 직후, 여성 난소는 1 단계 범주로 돌아갑니다.이 기간 동안 여포는 초음파를 수행 할 때 시각화하기가 어렵습니다. 2단계는 난소 전체에 분산된 반향점의 출현으로 표현된다. 3단계는 노른자, 성숙한 여포를 나타내는 어두운 중심이 있는 더 크고 둥근 에코제닉 점의 존재에 의해 결정됩니다.포로 여성 Necturus의이 대표적인 4 년 평가에서, 계란 개발은 높았지만, oviposition는 보장되지 않았다. 체비티에서 유체 이득과 수반되는 계란을 가진 몇몇 암컷은, 이 영향 받은 라나 및 Necturus에 표시된 것과 같은 파열된 혈관의 몇몇 표시와 더불어 과도한 둘레 및 팽윤을 보여주었습니다. 외과 적 접근은 난소 병리학을 관리하기 위해 사용될 수 있더라도, 이 기술은 또한 게임및 배꼽 연구에 관여할 수 있습니다.수술 후, 개업자는 수륙 양용 피사체의 지속적인 전반적인 건강을 모니터링하기 위한 이 원고에 설명된 첫번째 프로토콜로 돌아갈 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 수정 Xenopus의 oocytes 호스트 전송 방법을 사용하여

우리는 하나의 세포에서 형광을 사용하여 conformational 변화의 특정 사이트 분석과 함께 막 단백질의 이온 전달의 속도론을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 이온 채널 전송기 및 이온 펌프에 적응하고 단백질 subunits 사이의 거리 제한을 결정하기 위해 이용하실 수 있습니다.

막 단백질의 Conformational 역학 검사 현장에서 사이트 이동 형광 라벨링과

우리는 Xenopus 난모세포에서 효소의 이종 발현을 통해 K+-역수송 P형 ATPase의 활성을 정량화하고 원자 흡수 분광 광도법으로 개별 세포로의 Rb+ 또는 Li+ 흡수를 측정하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 방사성 동위원소 플럭스 실험에 대한 민감하고 안전한 대안으로 복잡한 동역학 연구를 용이하게 합니다.

오세영, K와 H, K-ATPase에 의해 양이온 교통 측정<em&gt; Xenopus</em원자 흡수 분광 광도법에 의한&gt; Oocytes : 방사성 동위 원소의 Assays에 대한 대안

이 동영상은 배아의 주 문화를 성장하는 데 사용되는 절차를...

동시 사전 및 사후 신경 Electrophysiological 녹화에서<em&gt; Xenopus</em&gt; 신경 근육 공동 문화

Xenopus laevis 미성숙 난모세포를 조작하는 방법, 난자에서 난자로의 체외 성숙 및 세포질 내 정자 주입을 설명합니다. 이 프로토콜은 일부 모계 단백질의 분해와 수정 시 관심 유전자의 과발현을 허용하므로 초기 배아 발달에서 특정 요인의 역할을 연구하는 데 가치가 있습니다.

조작 및<em&gt; 체외</em의&gt; 성숙<em&gt; 아프리카 발톱 개구리 laevis의</em세포질 내 정자 주입에 이어&gt; 난 모세포, 배아 발달을 연구하는

이 프로토콜은 vasculature를 시각화하고 Xenopus tropicalis 의 복잡성을 정량화하기위한 형광 기반의 방법을 보여 줍니다 . 혈관은 생체 내에서 심혈관 질환 발달을 연구하기 위해 유전 적 및 / 또는 약리학 적 조작 후 배아의 박동 심장에 형광 염료를 주입 한 후 수분 내에 영상화 될 수있다.

의 배아 혈관 신생에 대한 시각화 및 정량 분석<em&gt; Xenopus tropicalis</em

수족관에 서식하는 물고기의 생식 생태학을 연구 할 수있는 일련의 기본 방법이 설명되어있다. 이들은 스쿠바 (SCUBA)를 사용하여 물고기를 수집하고 생선을 운송하며 수족관에 보관 된 야생 잡은 생선의 생식 행동을 관찰하는 데 유용한 프로토콜입니다.

Aquaria에서 물고기의 생식 생태학 연구를위한 기본 방법

성장 인자 ß 를 변형할 때 가족 전구체 단백질은 제노푸스 라예비스 배아에서 ectopically 발현될 때, 그들은 분화하고, 갈라지고, 초기 가스트루라 단계로 늦은 블라술라에서 시작되는 blastocoele로 분비됩니다. 우리는 면역 blot 분석을 위한 blastocoele 캐비티에서 분열 제품을 심는 방법을 설명합니다.

제노푸스 라레비스 배아의 블라스코클로로 분비된 성장 인자 변형 분석 가족 분열 제품

여기에서는 회전식 문신 기계로 성인 Xenopus laevis (아프리카 발톱 개구리)에 문신을 새기는 방법을 설명합니다. 적절한 문신을 하면 몇 달 동안 지속되는 어둡고 쉽게 읽을 수 있는 숫자가 생성되며 연구 및 기록 보관 목적으로 동물을 쉽게 구별할 수 있습니다.

로타리 문신 기계로 Xenopus laevis 를 문신하는 방법

성체 수컷 X. laevis에서 한 개의 고환을 외과적으로 제거하는 프로토콜을 제시하여, 나중에 두 번째 고환을 사용할 수 있게 합니다. 이 프로토콜은 체외 수정에 필요한 수컷 개구리 수를 줄이는 것을 목표로 합니다.

성체 수컷 Xenopus laevis의 단측 사인 절제술

배우세요 양서류 생식 기술을 통해 난소 모니터링 및 회복 가능한 난소 절제술을 수행하는 방법을 알아보세요. 이 기술은 동물을 안락사시키지 않고 난자를 채취하여 번식 능력을 유지할 수 있게 합니다.

양서류에서 난소 모니터링 및 제어를위한 생식 기술

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