Name: 단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 펩 티 드 배합 금 나노 입자를 사용 하 여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: 배우세요 금 나노입자 펩티드 하이브리드를 이용한 단백질 키나아제 C 델타 억제제 전달 방법으로 허혈-재관류 유발 급성 폐 손상을 효과적으로 치료하는 기술입니다. 이 시스템은 세포 내 흡수를 향상시켜 낮은 용량으로도 우수한 치료 효과를 제공합니다.

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이 작품은 건강 연구의 캐나다 학회 (PJT-148847), 사역의 연구와 혁신의 온타리오 (재-08-029), 캐나다 첫 번째 연구의 우수 프로그램, 토론토 대학에서 디자인 하 여 의학에서 연구 보조금에 의해 지원 됩니다. 박사 Mingyao 리 우 제임스와 메리 Davie의 자 폐 상해, 수리, 및 재생 이다.

1입니다. 펩타이드 솔루션의 준비
<ol><li>검색은 펩 티 드 (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL)-20 ° C 냉장고를 상 온 (RT) 해 동. 참고: 병은 펩 티 드에 비응축에서 습기를 방지 하기 위해 폐쇄 유지.</li>
	<li>한 눈금에 각 펩 티 드의 0.01 g 무게. 별도 50 mL 원뿔 관으로 각 펩 티 드를 넣어.</li>
	<li>P2 튜브에 이온된 (DI) 수의 18.74 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>P4 튜브를 디 물 16.93 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>PKCδi 튜브를 디 물에 희석 50% 이기의 8.21 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>소용돌이 짧게 펩 티 드 솔루션. 5 분 동안 sonicator (40 MHz)에서 50 mL 원뿔 튜브를 넣어.</li>
	<li>Biosafety 캐비닛을 펩 티 드 솔루션을가지고. 준비 하는 모든 펩 티 드 솔루션 1 m m 이어야 한다입니다.</li>
	<li>새로운 50 mL 원뿔 튜브에 각 펩 티 드 솔루션의 1 mL를 전송. P2, P4의 튜브에 디 물 19 mL을 추가 하 고 각 솔루션은 50 µ M을 희석 하 고 자체 튜브에 저장 되도록 PKCδi 튜브를 50% 이기의 19 개 mL를 추가.</li>
</ol>2입니다. 한나라당/PKCi의 정립
<ol><li>펩 티 드 BSC에 한나라당 솔루션에 추가 되어야 한다</li>
	<li>15 mL 튜브에 475 μ p2, P4의 25μL 및 δPKCi 솔루션의 500 μ를 추가 합니다. 같은 15 mL 튜브에 20 nm 한나라당 솔루션 (7.0x1011 입자/mL)의 9 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>Biosafety 내각을 종료 합니다. 15 mL 튜브를 알루미늄 호 일로 감싸 줍니다. 두고 RT에서 통에 하룻밤.</li>
	<li>캐비닛에 biosafety 샘플을 반환 합니다. 각 1.5 mL microtubes에 한나라당/PKCi의 aliquot 1 mL.</li>
	<li>원심에 4 ° c.에 15,294 x g에서 30 분 동안 마이크로 원심 분리기 튜브</li>
	<li>상쾌한 biosafety 캐비닛 아래 각 튜브에서 제거 합니다. 참고: 한나라당 펠 릿 그대로 유지 하 고 발음 하지는 상쾌한 제거를 주의 해야 합니다.</li>
	<li>다시 요구 하는 농도 따라 원하는 용 매에는 펠 릿을 일시 중단 합니다. 적용 가능한 용 매 디 물, 수 PBS, 0.9 %NaCl. 참고: 한나라당/PKCi의 1 mL에서 출발, 한나라당 펠 릿 1011 입자, 제조업체에서 제공 하는 한나라당 농도에 따라 x 6.3을 포함 되어 있습니다. 1.3 x 0.9%의 500 µ L에 1012 입자 관리를 NaCl, 0.9%의 232 µ L 추가 3 알 약의 각각에 NaCl. 함께 그들을 풀링 후 우리 다음 한나라당/PKCi 솔루션의 500 µ L을 수집할 수 있습니다. 참고: 원하는 혼합 용 매 한나라당/PKCi 펠 릿을 희석 하기 전에, 그렇지 않으면 한나라당/PKCi를 집계 합니다.</li>
</ol>3. 한나라당/PKCi 하이브리드 용 해도의 평가
<ol><li>아크릴 베트에 한나라당/PKCi 솔루션의 0.5 mL를 붓으십시오. 대 일 분 광 광도 계에 아크릴 베트를 놓고 피크 흡수15를 테스트 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014%3B+focus+theme%3A+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li>
<li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+graft+dysfunction%3A+definition%2C+risk+factors%2C+short-+and+long-term+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical%22%5BJournal%5D)">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li>
<li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia%3A+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li>
<li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li>
<li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction%3A+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li>
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<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li>
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<li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li>
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<li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration%3A+Effect+of+particle+size%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B-Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li>
<li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li>
<li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li>
</ol>

저자는이 프로젝트에 공개 없다.

적절 한 배합을 보장 하기 위해, 그것은 중요 δPKCi 솔루션 1.6에서 설명 쥡니다 단계를 겪 습입니다. ΔPKCi 펩 티 드 순서는 sonicator 50% 이기 솔루션에서 PKCi를 녹이는 데 도움이 그래서 소수 moieties를 포함 되어 있습니다. 또한, 그것은 매우 꼼꼼하게, 2.7 단계에 설명 된 용 매를 혼합 하는 것이 중요입니다.  다음이 단계는 제대로 하지, 때문에 δPKCi 펩 티 드23의 집계 경우이 한나라당/PKCi 하이브리드는 하지 잘 공식화 됩니다. 
  한나라당 기반 약물 배합에는 여러 가지 이점을 제공합니다. 첫째, GNPs 종합 될 수 쉽게 몇 나노미터에서 ~ 100에 이르기까지 잘 제어 크기에 nm. 일반적으로, 더 작은 크기의 GNPs 제공할 수 있습니다 약물 세포로 큰 것 작은 것 들 수 쉽게 그들의 대상 지역24로 확산으로 보다 더 효율적으로.  둘째, GNPs는 그들에 게 안전한 약물 수송을...

폐 이식 말기 폐 질환1환자를 저장합니다. 그러나, 폐 이식 후 심각한 합병증 걸림돌이 남아 있다. 폐 이식 다음 초기 단계에서 기본 이식 부전 가장 유해한 합병증1이며 그 주요 원인이 국 소 빈 혈 reperfusion (IR)-유도 된 급성 폐 손상2.
차가운 보존에서 기증자 폐 물질 대사는 매우 낮은 수준으로 제한 됩니다. 그러나, 반응 산소 종 및 산화 질소 합성 혈액 흐름3의 중단으로 인해 활성화 됩니다. 이식 후 혈액 순환을 복원 하 고 반응성 산소 종 및 냉 허 혈 중에 생성 된 산화 질소 염증과 세포 죽음, 조직 상해의 결과 강화 한다.
부상을 방지 하기 위해 IR, 단백질 키 니 아 제 Cδ 억제제 (PKCδi)은 마음, 두뇌 및 폐4,,56,7,8에서 사용 되었습니다. 이러한 연구는 그 PKCδi 감소 염증 그리고 apoptosis reperfusion 동안 보여주었다. 그것은 또한 쥐 및 폐 이식 모델6폐 IR 부상을 하지 못했습니다. PKCδi은 일반적으로 세포 관통 펩 티 드, 문신, 세포내 배달용으로 활용 됩니다. 그러나, 그것은 혼자 문신 펩타이드는 일반적인 생물 학적 효과, angiogenesis, apoptosis, 그리고 여러 cytokines9,,1011의 금지의 승진을 포함 하 여 표시 되었습니다. 나노 입자, 작은 입자를 1에서 100 까지의 직경12nm 마약 배달13촉진에 후보자로 탐험 되었습니다. 특히, 금 나노 입자 (GNPs) 비 침 투 하 고 무 독성으로 간주 됩니다. 따라서, 우리는 펩 티 드 근거한 약14,15약물 전달 매개체로 GNPs를 개발 했습니다.
GNPs의 표면 분자 인식16,17, 화학 감지18, 이미징19, 약물 전달 등 특정 응용 프로그램에 대 한 조작할 수 있습니다. 20 nm GNPs 및 2 개의 짧은 펩 티 드를 포함 하는 한나라당/펩 티 드 하이브리드 시스템 개발 되었습니다 (P2: CAAAAE 및 p 4: CAAAAW) 비율로 95:5, GNPs의 표면 특성을 수정 하려면. P2 펩 티 드, 끝, 부정 청구 글루탐산 (E)와 함께 수성 해결책에서 GNPs 안정화 하 고 끝에, 소수 성 트립토판 (W)와 P4 펩타이드, GNPs 셀14로 입구. 이러한 펩 티이 드의 N terminus에 시스테인 (C) 잔류물 골드 표면14켤레 수 thiol 그룹을 포함 합니다. 이 펩 티 드/한나라당 하이브리드 추가 PKCδi (CSFNSYELGSL)를 전달 하기 위해 사용 되었다. PKCδi에 P2:P4의 최적화 된 어 금 니 비율은 47.5:2.5:50 이다. GNPs PKCδi (한나라당/PKCi)와 함께 활용 된 증류수, 0.9%에에서 안정적인 NaCl, 그리고 PBS 소 알 부 민 또는 소 태아 혈 청14를 포함 하는. 한나라당/PKCi의 정 맥 주입 폐15의 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 방지 하기 위해 표시 되었습니다. 이 문서에서는 한나라당/PKCi를 공식화 하는 방법에 설명 하 고 한나라당/PKCi의 물리 화학적 특성을 평가 하는 방법에 설명 합니다. 한나라당20,,2122에 활용 된 다른 펩 티 드 기반 약물을 공식화 하기 위해 유사한 방법을 사용 했습니다. 이 문서는 세포내 약물 전달에 대 한 소설이 공식에 더 많은 관심을 그릴 것입니다 바랍니다.

<table><tbody><tr><td>음전하를 띤 글루탐산 펩타이드 (P2)</td> <td>CanPeptide</td><td></td><td>서열 : CAAAAE-NH2 길이 : 6aa 개질 : C- 말단 아미드 < > 수량 : 50mg 순도 : >95 %</td></tr> <tr><td>소수성 트립토판 펩티드 (P4)</td> <td>CanPeptide</td><td></td><td>서열 : CAAAAW-NH2 길이 : 6aa 수정 : C 말단 아미드 < > 수량 : 50mg 순도 : >95%</td></tr><tr><td>&델타; PKCi 펩타이드</td><td>CanPeptide</td><td></td><td>Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 길이: 11aa 개질: C-terminal amidation 수량: 50mg 순도: >95%</td></tr><tr><td>원뿔형 튜브(50ml)</td><td>코닝 생명 과학</td><td>3582070</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 튜브(15ml)</td><td>코닝 생명 과학</td><td>3582096</td><td></td></tr><tr><td>아세토니트릴</td><td>시그마-알드리치</td><td>271004-100ML</td><td></td></tr><tr><td>초음파 발생기</td><td>브랜슨 초음파 공사</td><td>Branson 2510MTH</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브</td><td>Diamed.ca</td><td>AD 150-N</td><td></td></tr><tr><td>금 나노 입자 용액</td><td>Ted Pella</td><td>15705-5</td><td>입자 크기는 20nm</td></tr><tr><td>록킹 플랫폼 쉐이커</td><td>VWR international</td><td>40000-304&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>Acryl cuvette</td><td>SARSREDT</td><td>67.758</td><td></td></tr><tr><td>UV-Vis 분광 광도계</td><td>Agilent</td><td>Caty 60 UV-Vis</td><td></td></tr></tbody></table>

단백질 키 니 아 제 c 델타 억제제 펩 티 드 배합 금 나노 입자를 사용 하 여

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 (PKCδi)은 국 소 빈 혈 reperfusion 유도 장기 부상을 방지 하기 위해 유망 약 이다. 그것은 일반적으로 세포 관통 펩 티 드, 문신, 세포내 전달에 활용 됩니다. 그러나, 문신 일반적인 생물 학적 활동을 보이고 있다. 금 나노 입자 (GNPs) 인식된 독성 없이 약물 전달 매개체로 사용할 수 있습니다. 따라서, PKCδi를 제공 하는 한나라당/펩 티 드 하이브리드를 사용 했습니다. 두 개의 짧은 펩 티 드 (P2: CAAAAE 및 p 4: CAAAAW), 95:5 비율로 한나라당의 표면 특성을 수정 하는 데 했다. GNPs PKCδi (한나라당/PKCi)와 함께 활용 된 증류수, 안정는 0.9 %NaCl, 그리고 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 소 혈 청 알 부 민 또는 소 태아 혈 청에 포함 된. 한나라당-PKCi의 정 맥 주입 이전 폐의 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 방지 하기 위해 표시 했다. 이 문서는 한나라당/PKCi 공식화 한나라당/PKCi의 physiochemical 속성을 평가 하는 프로토콜을 설명 합니다. 한나라당과 다른 펩 티 드 기반 약물을 공식화 하 유사한 방법을 사용 했습니다. 이 문서 잘하면이 소설 세포내 약물 전달 기술을 vivo에서 응용 프로그램에 더 많은 관심을 그릴 것입니다.

주의 해야 한나라당/PKCi 하이브리드의 생물 속성을 평가 하기 위해 한나라당 경향으로 용 매에서 집계. 한나라당 집계 되는 경우 솔루션의 색상 분홍색에서 자주색 (그림 1a) 변경 합니다. 대 일 분 광 광도 계 더 민감하게 변화를 감지할 수 있다. 한나라당/PKCi 집계 되지 경우 흡수 피크 525에 있어야 한다 nm (그림 1b). 한나라당은 집계 흡수 피크 오른쪽으로 이동 됩니다. 분석, 집계 ΔOptical 밀도 형성 하는 경우의 대체 방법으로 (ΔOD 525에서 OD = nm-440에서 OD nm) 감소.
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정 맥 합성 펩 티 드, 단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제, 국 소 빈 혈 reperfusion 유발 급성 폐 상해 감소를 제공 하는 골드 나노 펩 티 드 하이브리드를 사용 이전 했습니다. 여기 우리가 약물 배합의 상세한 프로토콜을 보여줍니다. 다른 세포내 펩 티 드 유사 하 게 공식화 될 수 있습니다.

단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 펩 티 드 배합 금 나노 입자를 사용 하 여

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

20나노미터의 금 입자를 두 개의 특정 짧은 펩타이드에 사용하는 당사의 독특한 약물 전달 시스템은 생리용으로 금 나노 입자를 안정화하고 세포 섭취를 향상시켜 펩티드 기반 또는 기타 약물을 세포에 효과적으로 전달할 수 있습니다. 우리의 GNP 펩티드 하이브리드는 합성하기 쉽고 안정적입니다. 금 나노입자 펩타이드 하이브리드를 약물 운반체로 사용함으로써 펩티드 약물을 세포로 효과적이고 풍부하게 전달할 수 있습니다.우리는 우리의 GNP / PKCi 하이브리드로 폐에 있는 허혈 재관류 상해를 취급했습니다. GNP는 세포질로 PKC 억제제 펩티드를 가져옵니다. 이러한 전달 방법은 다른 전달 방법보다 PKCi의 낮은 투여량을 사용하여 더 심한 폐 손상을 감소시킬 수 있었다.이 절차를 시작하려면 냉동고에서 섭씨 영하 20도에서 펩티드를 회수하고 실온에서 해동하십시오. 마이크로 스케일을 사용하여 해동된 각 펩타이드의 0.01 그램을 계량하고 각 펩티드를 별도의 50 밀리리터 원내 튜브로 옮기는다. P2 튜브에 18.74 밀리리터의 탈이온된 물과 16.93밀리리터의 탈온화된 물을 P4 튜브에 넣습니다.PKC 델타 억제제 튜브에 탈온화 물에 희석된 50%의 아세토닐트리어 8.21밀리리터를 추가합니다. 펩티드 솔루션을 간략하게 소용돌이시다. 그런 다음 튜브를 40 메가 헤르츠의 초음파 처리기에 5 분 동안 놓습니다.그 후, 바이오 세이프티 캐비닛으로 솔루션을 전송합니다. 50mL 원상관을 5분 동안 초음파 처리기로 넣는 것이 중요합니다. 이 단계를 건너 뛰면 한나라당/PKCi가 집계를 형성할 것입니다.각 펩티드 용액의 1밀리리터를 새로운 50밀리리터 원뿔 튜브로 옮기십시오. P2와 P4를 포함하는 튜브에 19 밀리리터의 탈온화된 물을 추가합니다. 그리고 PKC 델타 억제제가 들어 있는 튜브에 50%의 아세토닐릴 19밀리리터를 첨가한다. P2 용액 475밀리리터, P4 용액의 마이크로리터 25개, PKC 델타 억제제 용액 500마이크로리터를 15밀리리터 튜브에 추가합니다.그런 다음 동일한 튜브에 20 나노미터 GNP 용액의 9 밀리리터를 추가합니다. 생물 안전 캐비닛에서 결합 된 용액을 제거하고 알루미늄 호일로 튜브를 감쌉니다. 하룻밤 동안 튜브를 셰이커에 놓습니다.다음 날, 생물 안전 캐비닛에 샘플을 반환합니다. GNP/PKCi 용액의 밀리리터 알리쿼트 1개를 1.5밀리리터 마이크로 튜브로 옮기습니다. 마이크로 원심분리기의 마이크로 튜브를 15294g, 섭씨 4도에서 30분 동안 원심분리합니다.마이크로 튜브를 생물 안전 캐비닛으로 다시 옮기고 각 튜브에서 슈퍼네텐트를 제거하면서 GNP 펠릿이 방해받지 않도록 합니다. 필요한 농도에 따라 원하는 용매에서 각 펠릿을 재연합니다. 한나라당/PKCi 하이브리드 용해도를 평가하기 위해 한나라당/PKCi 솔루션 0.5밀리리터를 누적 큐벳에 부었다.UV-Vis 분광계에 큐벳을 놓고 피크 흡수를 테스트합니다. 이 연구에서는, 단백질 키나아제 C-델타 억제제는 GNP/PKCi 하이브리드를 형성하기 위하여 금 나노입자와 결합됩니다. 금 나노 입자가 용매로 집계되는 경향이 있기 때문에 하이브리드의 생물 학적 특성을 평가할 때주의를 기울여야합니다.나노 입자가 집계되면 용액의 색상이 분홍색에서 보라색으로 변경됩니다. 샘플은 높은 수준의 감도로 감지할 수 있는 UV-Vis 분광계로 분석됩니다. 하이브리드가 집계되지 않으면 흡수의 피크는 525 나노미터여야 합니다.한나라당이 집계되면 흡수의 절정이 오른쪽으로 이동하게 된다. 볼 수 있듯이, 골재가 형성되면 델타 광학 밀도가 감소합니다. 한나라당 펩타이드 하이브리드를 제조할 때, GNP 용액에 대한 펩티드의 비율을 기억하는 것이 중요하다.이 GNP/PKCi 포뮬러는 폐 이외의 장기 시스템에서 허혈-재관류 손상에 사용될 수 있다. 그 펩티드가 N-종부에서 시스테인 잔류물이 있는 경우 모든 펩티드는 GNP에 부착할 수 있다. 즉, GNP 펩티드 하이브리드는 다른 펩티드 약물을 세포로 수송하는 데 사용될 수 있다.합리적으로 설계된 펩타이드는 그 세포 안에 특정 단백질 단백질 상호 작용을 가져올 수 있는 새로운 기술입니다. 여기에서 개발된 이 기술은 새로운 펩티드 약물의 전달이나 기존 약물의 수정된 버전에 사용될 수 있다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

B 타입 젤라틴 기반 공학 nanovectors 시스템 (GENS)은 췌장암의 치료 체계 유전자 전달 및 transfection을 위해 개발되었습니다. 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) nanparticles의 표면에 특정 펩타이드와 수정함으로써, 그들은 EGFR 수용체에서 대상 수와 같은 높은 세포내 글루타티온의 농도로, 환경을 감소 밑에 플라스미드 놓습니다.

표피 성장 인자를 사용하여 인간의 췌장 암 세포의 유전자 전달 및 Transfection은 다행 기반 엔지니어링된 Nanovectors를 수용체 타겟

단백질-단백질 상호작용을 표적으로 하기 위한 REPLACE 전략의 구현을 설명합니다. REPLACE는 최적화된 펩티드 억제제를 약물과 같은 분자로 전환하기 위한 합성 및 컴퓨터 접근 방식을 포함하는 반복 전략입니다.

를 통해 교체 단백질 - 단백질 상호 작용의 억제제의 개발 : 설계 및 개발 비 ATP 경쟁 CDK 억제제에 응용

우리는 암의 광음향 이미징을 위해 금 나노막대를 포함하는 세포 운반체의 준비 및 타당성을 보여줍니다.

금 나노 막대를 포함하는 세포 차량의 제조 및 광 음향 분석

Toll-like receptor (TLR) 신호 전달은 많은 인간 염증성 질환의 병태 생리학에서 중요한 역할을하며, 생체 활성 나노 입자에 의한 TLR 반응을 조절하는 것은 많은 염증성 질환에서 유익한 것으로 기대된다. THP-1 세포 기반 리포터 세포는 TLR 신호 전달의 새로운 억제제를 확인하기위한 다양하고 강력한 스크리닝 플랫폼을 제공합니다.

Toll-like Receptor Signaling의 억제제에 대한 식세포 면역 세포에서의 생체 활성 나노 입자의 스크리닝

우리 생체 10 nm 금 나노 입자, 표면에 폴 리 에틸렌 글리콜을 코팅 하 여 공업화를 합성 하는 방법을 설명 합니다. 이러한 입자 사용 생체 외에서 수 있으며 vivo에서 나노 세포와 세포 외 공간에 치료제를 제공에 대 한 기존의 나노 크기와 접근 하기 어려운.

기능성된 10 nm 폴리머-코팅 된 금 입자 피 대상에 대 한 및 약물 전달의 합성

이 프로토콜 lysine-티로신-페닐알라닌 (KYF) tripeptide로 안정 된 올레 acids-platinum(II) 공액 nanoemulsion 합성 하는 효율적인 방법을 설명 합니다. 된 KYF는 공액의 자기 조립을 통해 가벼운 합성 조건에서 nanoemulsion 양식.

올레산의 Tripeptide 안정 Nanoemulsion

이 프로토콜에서, 독소루비신로드 AS1411-g-PEI-g-PEG 변형 금 나노 입자는 3 단계 아마이드 반응을 통해 합성된다. 이어서, 독소루비신은 암 치료를 위한 암세포를 표적으로 하기 위하여 장전되고 전달된다.

표적 약물 전달을 위해 독소루비신으로 로드된 압타머-PEI-g-PEG 수정 금 나노 입자의 합성

이 연구는 약물 펩티드 상호 작용을 식별하기위한 전략을 제시하는 것을 목표로했다. 이 전략은 석영 결정 마이크로 밸런스 (QCM) 바이오 센서에 기초한 약물 인식 짧은 펩타이드의 바이오 패닝을 포함하고, 단백질에 대한 약물 인식 및 약물 결합 부위의 음장 에 대해 얻은 정보를 정량적으로 평가하기위한 생물 정보학 분석이 뒤따릅니다.

약물 단백질 상호 작용의 글로벌 검증을 위한 바이오센서 기반 고처리량 바이오패닝 및 생물정보학 분석 전략

이 연구는 [68Ga] D-도데카펩티드 길항제의 양전자 방출 단층 촬영 이미징을 기반으로 전신에서 프로그래밍된 죽음 리간드 1의 분포를 평가하는 비침습적 실시간 방법을 개발했습니다. 이 기술은 기존의 면역조직화학에 비해 장점이 있으며 면역관문 차단 요법의 혜택을 받을 적절한 환자를 식별하는 효율성을 향상시킵니다.

프로그래밍된 죽음 리간드 1 발현 이미징을 위한 68갈륨 표지 D-펩타이드 PET 추적자 개발

이 문서 디블록 공동 폴리머를 사용하여 폴리머 기반 nanoparticles를 합성하는 nanoprecipitation 방법을 설명합니다. 우리는 디블록의 합성 공동 고분자, nanoprecipitation 기술, 그리고 잠재적인 애플 리케이션을 설명합니다.

Nanoprecipitation 기법을 통해 디블록 고분자 Nanoparticles의 제형

배우세요 금 나노입자 펩티드 하이브리드를 이용한 단백질 키나아제 C 델타 억제제 전달 방법으로 허혈-재관류 유발 급성 폐 손상을 효과적으로 치료하는 기술입니다. 이 시스템은 세포 내 흡수를 향상시켜 낮은 용량으로도 우수한 치료 효과를 제공합니다.

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