Name: 추출 및 대만 그린 프로 폴리스의 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 학습하세요 에탄올 용매를 이용한 대만 그린 프로폴리스 추출 및 항균 활성 분석 방법을. 이 프로토콜은 생물학적 활성 평가를 위한 신뢰할 수 있는 품질 결정 기법을 제공합니다.

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이 원고는 월 러 스 학술 편집 편집 했습니다.

1입니다. 에탄올 추출 화합물의 준비
<ol><li>냉동된 대만 그린 프로 폴리스는 5 월에서 7 월 대만에 벌 통에서 수집 된의 10 g의 무게 그리고 향미료 분쇄기를 사용 하 여 그것을 갈기. 대만 그린 프로 폴리스의 모든 조각을 어떤 큰 입자 없이 정밀한 분말에 지상은 확인 합니다.</li>
	<li>에탄올 (60%, 70%, 80%, 95%, 및 99.5%)과 물 플라스 크를 분리 하 여 지상 프로 폴리스의 각 농도 10 g을 혼합의 다양 한 농도의 100 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>25 ° C에서 품 어와 48 h에 대 한 250 rpm에서 플라스 크를 흔들어.</li>
	<li>에탄올 추출 물 25 μ m 기 공 크기 필터 종이 통해 필터링.</li>
	<li>부피 측정 플라스 크를 사용 하 여 95% 에탄올과 그들의 원래 볼륨 (100 mL)에 filtrates를 다시 구성.</li>
	<li>-20 ° c.에 에탄올 추출 물 저장 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
</ol>2입니다. HPLC의 에탄올 추출 물 준비
<ol><li>15 분 동안 40 ° C에서 진공 증발에 의해의 에탄올 추출 물 10 mL를 집중.</li>
	<li>24 h에 대 한 45 ° C에서 건조 문제를 구워.</li>
	<li>95% 에탄올 10 mL와 건조 문제 reconstitute</li>
	<li>필터 1 mL의 에탄올 0.45 μ m 기 공 크기와 무 균 주사기 필터를 사용 하 여 추출 합니다.</li>
	<li>0.22 μ m 기 공 크기와 무 균 주사기 필터를 사용 하 여 에탄올 추출 물 refilter filtrate 수집 이며 HPLC를 사용 하 여 직접 분석할 수 있습니다.</li>
</ol>3. HPLC를 사용 하 여 Propolin 콘텐츠 분석
<ol><li>
Propolins의 표준 곡선의 설립
	<ol>
<li>88.8:11.2 (v/v) 메탄올: 물 솔루션의 모바일 단계 1 리터를 준비 합니다.</li>
		<li>준비 propolin의 직렬 희석 (C, D, F, 및 G) 표준 농도 (15.625 mg/mL, 31.25 mg/mL, 62.5 mg/mL, 및 125 mg/mL, 각각)를 용 매로 모바일 단계 솔루션을 사용 하 여.</li>
		<li>높은 농도에 낮은 농도에서 순차적으로 역 상 열에 propolin 표준 농도의 20 µ L을 주입.</li>
		<li>30 ° C를 1 mL/min 흐름 속도에서 HPLC 열을 설정 합니다.</li>
		<li>자외선 검출기의 파장 280 설정 및 레코더 시간 20 분을.</li>
		<li>적어도 3 표준 분석 x.</li>
		<li>농도 (x 축)에 대 한 측정 응답 (y 축)를 플롯 소프트웨어, 시트 계산을 사용 하 고 수식 및 R-제곱 값과 표준 곡선을 만듭니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
분석 에탄올 추출 s
	<ol>
<li>2.5 역 상 열에 단계에서 얻은 에탄올 추출 물 20 µ L을 주입.</li>
		<li>30 ° C를 1 mL/min 흐름 속도에서 HPLC 열을 설정 합니다.</li>
		<li>자외선 검출기의 파장 280 설정 및 레코더 시간 20 분을.</li>
		<li>적어도 3 표준 분석 x.</li>
		<li>각 propolin에 대 한 피크 영역을 사용 하는 단계 3.1.7에서에서 얻은 표준 곡선을 위한 방정식을 사용 하 여 에탄올 추출 물에서 propolin의 농도 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 최소 억제 농도 최소 살 균 농도 분석
참고: microdilution 메서드는 에탄올 추출 propolins에서 대만 그린 프로 폴리스의 항균 효능을 평가 하기 위해 사용 됩니다.
<ol><li>
시험 생물의 준비
	<ol>
<li>황색 포도상구균 및 대장균, 세균성 긴장을 해 동 하 고, 문화 그들 tryptic 간장 국물과 영양 국물에 각각 24 h에 대 한 37 ° C에서.</li>
		<li>S. 구 균 tryptic 간장 국물과 대장균 영양 국물을 사용 하 여 2 세대를 사용 하 여 통과 하 고, 다음, 한 천 배지에서 개별 식민지를 계산 하 여 콜로 니 형성 단위를 계산.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
에탄올의 준비에 대 한 추출 항균 활동 테스트
	<ol>
<li>15 분 동안 40 ° C에서 진공 증발 하 여 1.5 단계에서 얻은 에탄올 추출 물 집중.</li>
		<li>디 메 틸 sulfoxide (DMSO)와 건조 문제를 다시 구성 하 고 추출 12.8 mg/ml의 농도 조정 합니다.</li>
		<li>직렬 희석을 만드는 (농도: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 그리고 640 µ g/mL) 에탄올의 국물을 사용 하 여 추출.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
최소 억제 농도 테스트
	<ol>
<li>96 잘 접시에 0.156에서 640.0 µ g/mL에 이르기까지 희석된 에탄올 추출 물의 10 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>국물을 사용 하 여 100 µ L 볼륨을 조정 하 고 모든 희석에 5 %DMSO 유지.</li>
		<li>96 잘 접시로 100 µ L 세균성 문화 (1 x 106/mL)의 예방.</li>
		<li>에탄올의 다양 한 농도 포함 하는 문화 inoculum 48 h에 대 한 37 ° C에서 추출 합니다.</li>
		<li>탁도 및 590에서 광학 밀도 (microplate 리더)를 사용 하 여 세균의 성장을 분석 결정 최소 억제 농도 (MIC) nm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
최소 살 균 농도 테스트
	<ol>
<li>한 천 배지 위에 성장이 전시 마이크 테스트의 각 우물에서 액체 문화 10 µ L 예방</li>
		<li>24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
		<li>아니 볼 수 세균성 성장 밝혀 최저 농도 파악 하 여 살 균 활동을 확인 합니다. 농도 세포의 성장을 완전히 제거 될 최소 세균 농도 (MBC)으로 간주 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

저자는 선언할 수 없다.

연구 보고는 단식, 에탄올, 다양 한 농도 사용 하 여 브라질 프로 폴리스 추출17; 사용 될 수 있습니다. 그러나, 과정은 시간이 많이 걸리는17. 그것은 적어도 10 일 브라질 프로 폴리스17에서 생리 활성 화합물, 페 놀 등을 추출 했다. 또는, 37 ° C, 50 ° C, 또는 30 분 동안 70 ° C에서 난방과 함께에서 에탄올 추출 추출 하는 브라질 프로 폴리스19,,2122제안 되었습니다. 그것은 브라질 프로 폴리스 있는 생리 활성 화합물 차동 에탄올19의 비율에 따라 추출 될 수 있는 결정 했다. 프로 폴리스에 생리 활성 화합물의 추출 효율 브라질 프로 폴리스와 대만 그린 프로 폴...

프로 폴리스 Apis mellifera꿀벌 종에 의해 생성 하는 자연 수 지 혼합물 이다. 프로 폴리스는 민속 약에 고 대부터 널리 사용 되었다. 연구는 최근 그 프로 폴리스는 미생물 감염 및 염증1방지 하기 위한 유익한 했다. 수많은 학문은 설명 했다 주요 생리 활성 화합물 프로 폴리스에는 플 라 보노 이드, 페 놀 산 에스테 르, prenylated p-coumaric 산 및 diterpenic 산2,3. 날짜 하려면, 대만 그린 프로 폴리스에서 10 prenylated flavanone 파생 상품-고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)4,5,,67통해 확인 되었습니다. 이 중 가장 풍부한는 propolins C, D, F, G5,7. 대만 그린 프로 폴리스의 상당한 생물학적 효과 propolins8의 그것의 높은 콘텐츠와 상관 된다.
프로 폴리스에 생리 활성 화합물의 농도 계절과는 프로 폴리스를 얻은 지리적 위치에 따라 크게 다릅니다. 유럽 프로 폴리스에는 플 라 보노 이드 aglycone 및 페 놀 산9주로 포함 되어 있습니다. 브라질에서 프로 폴리스의 주요 생리 활성 화합물은 prenylated p-coumaric 산 artepillin C10등. 연구는 시즌11대만 그린 프로 폴리스에서 총 propolin 콘텐츠를 결정 하기 위한 중요 한 요소는 설명 했다. 대만 그린 프로 폴리스에 propolin 콘텐츠 이며 높은 여름 (5 월-7 월)에 가장 낮은 겨울11에. 프로 폴리스의 항균 속성 수 생물 학적 활동의 지표로 널리 간주 되었습니다. 일반적으로, 다양 한 지역에서 수집 하는 프로 폴리스의 샘플 전시가 비슷한 항균 재산; 예를 들어 일반적으로 거의 모든 그람 양성 세균에 대해 효과적 이며 그람 음성 세균10,,1213에 대 한 제한 된 항균 효과 전시. 프로 폴리스에는 플 라 보노 이드 간의 상호 시너지 작용 항균 효과14를 시연 했다. 마찬가지로, 대만 그린 프로 폴리스15그람 양성 세균 대 한 항균 효과가 보고 되었다. 또한, 연구는 또한 대만 그린 프로 폴리스8propolins의 상호 작용에서 항균 효과 확인.
프로 폴리스에 생리 활성 화합물의 특성은 화학 성분의 근원의 그것의 소스에 따라 달라질 수 있습니다 때문에 어렵습니다. 따라서, 그것은 대만 그린 프로 폴리스의 품질을 결정 하기 위한 가능 하 고 반복 가능한 방법을 확립 하는 데 필요한입니다. 그러나, 아무 표준 절차는 대만 그린 프로 폴리스 추출 및 이후의 기능 분석에 대 한 설립 되었습니다. 프로 폴리스 추출16,17,18,,1920각종 유기 및 무기 용 제를 적용 하는 여러 가지 방법은 제안 되었습니다. 프로 폴리스는 질 성 혼합물 이므로 연구 유기 추출 무기 추출8,,1819보다 낫다는 것을 증명 하고있다. 대만 그린 프로 폴리스의 항균 속성에 총 propolin 농도 대만 그린 프로 폴리스의 품질의 주요 지표. 따라서,이 연구의 목적은 용 매로 에탄올을 사용 하 여 추출 하 고 대만 그린 프로 폴리스의 항균 속성 특성에 대 한 프로토콜을 제시 하는 것 이다.

<table><tbody><tr><td>에탄올</td><td>: Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr>, <tr><td>Whatman no. 4 여과지</td><td>: Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>: Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>역상 RP-18 컬럼</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>황색포도상구</td>균 <td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>대장균</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>트립틱 콩 육수</td><td>시그마-알드리치</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>영양 육수</td><td>시그마-알드리치</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>시그마-알드리치</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>향신료 분쇄기</td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더</td><td>분자 장치</td><td>EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC 시스템</td><td>Agilent</td><td>1200 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>진공 증발</td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td> (회전 증발 농축</tr></tbody></table>기)

추출 및 대만 그린 프로 폴리스의 분석

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

대만 그린 프로 폴리스 prenylated 플 라 보노 이드에 풍부 하 고 생물학 등과, 항 산화, 항균, 항 암 제 들의 광범위 한 범위를 전시. 대만 그린 프로 폴리스의 생리 활성 화합물은 propolins, 즉 C, D, F, 및 g. 대만 그린 프로 폴리스에 propolins의 농도 계절과 지역에 따라 다릅니다. 따라서, 그것은 대만 그린 프로 폴리스의 품질을 결정 하기 위한 표준과 반복 가능한 절차를 설정 하는 중요 한입니다. 여기, 우리가 현재 에탄올 기반 추출, 고성능 액체 착 색 인쇄기, 항균 활동 분석 대만 그린 프로 폴리스의 품질 특성에 사용 하는 프로토콜. 이 메서드는 99.5%와 95% 에탄올 추출 대만 그린 프로 폴리스, 그로 인하여 떨어졌다는 항균 속성이 있는 propolins의 높은 농도에서 최대 건조 문제 수율 달성을 나타냅니다. 이러한 연구 결과 현재 프로토콜 신뢰할 수 있는 고 대만 그린 프로 폴리스의 품질을 결정 하기 위한 반복 가능한 간주 됩니다.

에탄올 추출에 대 한 긍정적인 대표적인 데이터는 표 1에 표시 됩니다. 대만 그린 프로 폴리스에서 건조 문제 항복 에탄올의 농도와 긍정적으로 연관 되었다. 95%, 99.5% 에탄올 추출 물 높은 마른 물질 대만 그린 프로 폴리스에서 항복 했다. 물 추출 용 매로 사용 되었다 대만 그린 프로 폴리스에서 가장 낮은 건조 문제 항복 발생 했습니다. 이러한 결과 에탄올 등 유기 용 매, 대만 그린 프로 폴리스 추출에 대 한 최고의 수행을 나타냅니다. C, D, F, G 표준 propolins의 신호 확인 되었다 고 HPLC (그림 1a)를 사용 하 여 계량. 에탄올 추출 물에서 propolins의 신호는 개별 propolin 표준 및 HPLC (그림 1b)를 사용 하 여 특징 이었다. 일반적으로, 대만 그린 프로 폴리스에 propolins ...

우리는 용 매로 에탄올을 사용 하 여 추출 하 고 대만 그린 프로 폴리스 항균 활동을 전시 하는 특성에 대 한 프로토콜을 제시.

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

여기서, 항균 활성을 억제하는 대만 녹색 프로폴리스를 추출하고 특성화하기 위해 용매로서 에탄올을 사용하는 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 대만 녹색 프로폴리스의 품질을 결정하는 신뢰할 수 있고 반복 가능한 방법입니다. 시범 절차는 춘팅 첸과 이수안 치엔 박사 과정 학생이 될 것입니다.우선, 무게 100 대만 녹색 프로폴리스의 그램. 향신료 분쇄기를 사용하여 프로폴리스를 갈아서 큰 입자가없는 미세 분말로 분쇄되도록하십시오. 5개의 플라스크를 설정하고 각각 물에 에탄올의 다양한 농도의 100 밀리리터를 추가합니다.각 플라스크에서 10그램의 지상 프로폴리스를 에탄올 용액에 넣고 섭씨 25도에서 48시간 동안 250RPM에서 흔들어 서 배양합니다. 그 후 25마이크로미터 모공 크기의 필터 용지를 사용하여 에탄올 추출물을 필터링합니다. 볼륨 플라스크를 사용하여, 95 %의 에탄올과 100 밀리리터의 원래 볼륨으로 여과를 재구성.재구성된 추출물을 사용 준비가 될 때까지 영하 20도에 보관하십시오. HPLC용 추출물을 준비할 준비가 되면 진공 증발을 사용하여 각 추출물의 10밀리리터를 섭씨 40도에서 10분 동안 농축합니다. 건조 물질을 섭씨 45도에서 24시간 동안 굽습니다.그런 다음, 95%에탄올의 10 밀리리터로 건조 물질의 각 샘플을 재구성합니다. 0.22 마이크로미터 모공 크기의 주사기 필터를 사용하여 각 추출물을 다시 필터링하고 HPLC를 사용하여 직접 분석을 위해 여과물을 수집합니다. 표준 곡선 을 확립하기 시작하려면 88.8 에서 11.2의 비율로 이동 상 메탄올의 1 리터를 물 용액에 준비하십시오.모바일 위상 솔루션을 용매로 사용하여 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 프로폴린 표준 농도의 직렬 희석을 준비합니다. 각 표준 농도의 20 마이크로리터를 가장 낮은 농도에서 최고수준으로 순차적으로 역상 컬럼에 주입한다. 그런 다음 HPLC 컬럼을 섭씨 30도로 설정하고 UV 검출기의 면제 길이를 280나노미터로 설정하고 유량은 분당 1밀리리터로 설정하고 레코더 시간을 20분으로 설정합니다.표준을 세 번 이상 분석합니다. 그런 다음 계산 시트 소프트웨어를 사용하여 측정 응답을 농도에 연결하여 결정된 방정식 및 R 제곱 값으로 표준 곡선을 생성합니다. 추출물 분석을 시작하려면 각 추출물의 20마이크로리터를 역상 열에 주입합니다.HPLC 열을 섭씨 30도의 온도와 분당 1밀리리터의 유량으로 설정합니다. UV 검출기의 면제 길이를 280나노미터로 설정하고 레코더 시간을 20분으로 설정합니다. 추출물을 적어도 세 번 분석합니다.이어서, 표준 곡선을 사용하여 각 에탄올 추출물에서 프로폴린의 농도를 결정한다. 시험 유기체 및 에탄올 추출물을 준비한 후, 희석 된 에탄올 추출물 10 마이크로 리터를 96 웰 플레이트의 우물에 밀리리터 당 0.156에서 640 마이크로 그램에 넣습니다. 국물을 사용하여 각 웰의 볼륨을 100 마이크로리터로 조정하여 모든 희석제에서 5%DMSO를 유지관리합니다.다음으로, 96 웰 플레이트의 각 우물에 세균 배양의 100 마이크로리터를 접종. 48시간 동안 섭씨 37도에서 문화. 590 나노미터에서 마이크로 플레이트 판독기를 사용하여 탁도에 따라 세균 성장을 분석하고 최소 억제 농도를 결정합니다.그 후, 각 우물에서 액체 배양의 10 마이크로 리터를 접종한 후, 한천 판에 성장을 나타냈다. 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양하세요. 세균 활성을 결정하기 위해 눈에 보이는 세균 성 성장이 없음을 밝힌 가장 낮은 농도를 식별합니다.세포 성장을 완전히 제거한 농도는 최소 세균 농도로 간주됩니다. 이 연구에서, 대만 녹색 프로폴리스는 에탄올로 추출됩니다. 건조 물질 수율은 에탄올의 고농도를 사용할 때 가장 높은 것 같다, 물을 사용할 때 가장 낮은.이러한 결과는 유기 용매가 이 추출 중에 가장 잘 수행되고, 수율이 에탄올 농도와 긍정적으로 연관되어 있음을 나타낸다. 마찬가지로, 프로폴린의 농도는 추출 시 에탄올 농도와 긍정적으로 연관된 것으로 보이며, 95%와 99.5%의 에탄올 추출물에서 얻을 수 있는 프로폴린의 가장 높은 수율이다. S 아우레우스와 대장균에 대한 에탄올 추출물의 항균 영향은 조사됩니다.S 아우레우스에 대한 평균 최소 억제 농도는 밀리리터 당 10~20마이크로그램으로 보이며 평균 세균 농도는 밀리리터당 20마이크로그램인 것으로 보인다. 그러나 물 추출물은 S 아우레우스에 대한 항균 영향을 미치지 않았습니다. 물 또는 에탄올 추출물을 사용할 때 대장균에 대한 항균 영향은 관찰되지 않습니다.주요 실험 절차 중 하나는 연마 하는 동안 대만 녹색 propolis의 균일성을 피하는 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

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학습하세요 에탄올 용매를 이용한 대만 그린 프로폴리스 추출 및 항균 활성 분석 방법을. 이 프로토콜은 생물학적 활성 평가를 위한 신뢰할 수 있는 품질 결정 기법을 제공합니다.

추출 및 대만 그린 프로 폴리스의 분석

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