Name: 재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: 학습하세요 지방 조직에서 콜라게나제 없이 기계적 방법으로 기질 혈관 분획(SVF)을 분리하는 기술을. 원래 세포외 기질을 보존하여 재생 의학 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 중국 (81471881, 81601702, 81671931)의 국립 자연 과학 재단, 중국의 광 동 지방 (2014A030310155), 및 (2014B009, Nanfang 병원의 관리자 재단의 자연 과학 재단에 의해 지원 되었다 2015Z002, 2016Z010, 2016B001)입니다.

이 연구 윤리 검토 보드 Nanfang 병원, 광저우, 중국에에서 의해 승인 되었다. 지방 조직 건강 한 기증자 했다 서 면 통지 해준 동의 연구에 참여 하에서 수집 되었다. 모든 동물 실험 Nanfang 병원 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 하 고 국민 건강 및 의료 연구 위원회 (중국)의 지침에 따라 수행 했다.
1. ECM/SVF-젤 준비
<ol><li>베스트 지방입니다.<ol>
<li>정 맥과 3 mm 멀티 포트-0.75에 직경에서 1 m m의 여러 날카로운 측면 구멍을 포함 하는 인간에서 지방 흡입을 수행 흡입 압력의 atm.</li>
		<li>멸 균 가방에 lipoaspirates의 200 mL를 수집 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>콜맨 지방 준비.<ol>
<li>4 50 mL 튜브에는 lipoaspirates를 전송 하 고 여전히 10 분 동안 서 서가 걷이 지방 수 있도록.</li>
		<li>전송, 넓은 팁 피 펫을 사용 하 여 두 50 mL 튜브에 꼭대기 층에 지방을 수집 하 고 하단 계층에서 액체 부분 삭제.</li>
		<li>사용 하 여 50 mL 튜브, centrifugate 뚱뚱한 층 1200 x g 실 온 (RT)에서 3 분.</li>
		<li>콜맨 지방으로 상위 레이어 (약 80 mL)를 정의 합니다.</li>
		<li>넓은 팁 피 펫을 사용 하 여 20 mL 튜브에 콜맨 지방의 상단 2/3를 전송 하 고 저밀도 지방으로이 부분을 정의 합니다.</li>
		<li>넓은 팁 피 펫을 사용 하 여 다른 20 mL 튜브에 콜맨 지방의 더 낮은 1/3를 전송 하 고 고밀도 지방으로이 부분을 정의 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>저밀도 지방에서 ECM/SVF-젤을 생성 합니다.<ol>
<li>저밀도 지방 20 mL intershift에 여성에 게 여성 Luer 잠금 커넥터 (2.4 m m의 내부 직경)에 의해 연결 된 2 개의 20 mL 주사기를 사용 하 여.</li>
		<li>(20 mL/s)에서 안정적인 변화 속도 유지 하 고 8 x 6 x 반복.</li>
		<li>Centrifugate 2000 x g RT에서 3 분 대에서 혼합물.</li>
		<li>추가 사용에 대 한 실시간에 넓은 팁 피 펫을 사용 하 여 10 mL 튜브에서 위에 기름 부분을 수집 합니다.</li>
		<li>ECM/SVF-젤 (그림 1A), 넓은 팁 피 펫을 사용 하 여, 중간 계층에서 끈적끈적한 물질을 수집 하 고 아래 계층에 액체를 폐기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>고밀도 지방에서 ECM/SVF-젤을 생성 합니다.<ol>
<li>고밀도 지방 15 ml (단계 1.3.4에서에서 수집) 오일의 5 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>주사기 6 사이 혼합된 지방 intershift x 8 x는 있어 유제 내에서 관찰 될 때까지.</li>
		<li>Centrifugate 2000 x g RT에서 3 분 대에서 혼합물.</li>
		<li>위에 기름 부분을 삭제 합니다.</li>
		<li>넓은 팁 피 펫을 사용 하 여 중간 계층 (ECM/SVF-젤)에 끈적끈적한 물질을 수집 하 고 아래 계층에 액체를 폐기.</li>
		<li>1.3.5-1.4.5 단계에서 ECM/SVF 젤을 믹스.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 누드 마우스 ECM/SVF-젤 이식 모델
<ol><li>누드 마우스 anesthetize (8 주 오래 된, 여성)와 isoflurane (1%-3%) 흡입 마 취는 동물 작업 룸입니다.</li>
	<li>전송 ECM/SVF-젤 1 mL 주사기.</li>
	<li>무딘 침투 정으로 1 mL 주사기를 연결 합니다.</li>
	<li>마우스의 각 측면에 피하는 캐 뉼 러를 삽입 합니다.</li>
	<li>ECM/SVF-젤의 0.3 mL를 주사.</li>
</ol>3. 조직 ECM/SVF-젤 주입 후 3, 15, 및 90 일에 수확
<ol><li>Anesthetize isoflurane (1%-3%)와 쥐 흡입 마 취입니다.</li>
	<li>자 궁 경부 전위 방법으로 쥐를 희생.</li>
	<li>수술가 위로 중간 마우스의 등 쪽 피부에 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>부 고는 마우스의 양쪽에 지방 이식 수확. 밤새 RT에서 4 %paraformaldehyde 지방 이식 포함 합니다.</li>
	<li>에탄올의 농도 증가에 직물을 탈수: 70% 에탄올, 변화 2, 1 시간 각각; 80% 에탄올, 하나의 변경, 1 h; 95% 에탄올, 하나의 변경, 1 h; 100% 에탄올, 3 변화, 1.5 h 각; 크 실 렌, 3 변화, 1.5 h</li>
	<li>파라핀 왁 스 (58-60 ° C), 변화, 2 h 2로 조직 침투</li>
	<li>파라핀 블록으로 조직을 포함 합니다. 약 4 µ m의 두께에서 섹션을 잘라내어 슬라이드에 넣어.</li>
</ol>4. hematoxylin와 오신 얼룩
<ol><li>I, II, 및 III (각 10 분) 크 실 렌에서 그들을 몸을 담글 하 여 파라핀 블록 슬라이드를 deparaffinize.</li>
	<li>감소 하는 농도 (100%, 100%, 95%, 80%, 70%)을 통해 전달 하 여 조직 단면도 rehydrate 3 분의 에탄올 목욕.</li>
	<li>증류수 (5 분)에서 조직 섹션 린스.</li>
	<li>되며 5 분 동안에 직물 단면도 착 색.</li>
	<li>1% 산 알코올에 20 분 Decolorize의 수돗물을 실행 조직 섹션 린스 (1% 70% 알코올에 HCl) 5 미 린스 섹션은 다시 파란색까지 수돗물을 실행에 대 한.</li>
	<li>피 펫, 하 여 슬라이드에 직접 오신 Y 염료의 2 ~ 3 방울을 추가 하 고 10 분 동안 설정 하는 염료.</li>
	<li>슬라이드 1-5 분 동안 수돗물에 씻어.</li>
	<li>증가 농도 (70%, 80%, 95%, 100%, 100%)에서 슬라이드를 탈수 3 분의 에탄올의</li>
	<li>5 분 동안 크 실 렌에서 슬라이드 I 및 II를 선택을 취소 합니다.</li>
	<li>설치 미디어에서 슬라이드 탑재 합니다.</li>
</ol>5. immunofluorescent 얼룩
<ol><li>Deparaffinize 크 실 렌의 조직 단면도 I, II, 및 III (각 5 분).</li>
	<li>다양 한 농도 (100%, 100%, 95%, 95%, 70%)을 통해 전달 하 여 조직 단면도 rehydrate 3 분에 대 한 알코올 목욕.</li>
	<li>10 분에 대 한 실시간에 메탄올에 3% H2O2 솔루션에서 섹션을 품 어.</li>
	<li>슬라이드 2 린스 증류수, 5 분 x.</li>
	<li>슬라이드 슬라이드 바구니에 드롭. 10 m m 구 연산 염 버퍼 (pH 6.0)의 300 mL를 추가 하 고 10 분 동안 95-100 ° C에서 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>멋진 20 분에 대 한 실시간에 슬라이드.</li>
	<li>슬라이드 2 린스 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS), 5 분 x.</li>
	<li>슬라이드에 10% 태아 둔감 한 혈 청의 100 µ L을 추가 하 고 1 시간에 대 한 실시간에 습도 챔버에 품 어.</li>
	<li>4 ° C에서 1 차적인 항 체 용액 (기니 피그 반대로 마우스 Perilipin, 1:400)와 섹션을 밤새 품 어.</li>
	<li>PBS 3 가진 슬라이드 린스 x, 5 분.</li>
	<li>이차 항 체 솔루션 섹션을 품 어 (염소 항 기니 돼지-488 IgG) 실시간에서 2 h</li>
	<li>PBS 3 가진 슬라이드 린스 x, 5 분.</li>
	<li>깨끗 한 티슈로 섹션 주위 물 닦으.</li>
	<li>슬라이드에 대 한 섹션을 충당 하기 위해 원에 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 및 알 렉 사 Fluor 488 활용 된 isolectin를 드롭.</li>
	<li>coverslips를 탑재 하 고 어둠 속에서 말리.</li>
	<li>형광 현미경 슬라이드를 관찰 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Bateman, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Fat+to+Fight+Disease%3A+A+Systematic+Review+of+Non-Homologous+Adipose-Derived+Stromal%2FStem+Cell+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies.</a> Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).</li>
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<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Extracellular+Matrix%2FStromal+Vascular+Fraction+Gel%3A+A+Novel+Adipose+Tissue-Derived+Injectable+for+Stem+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Adipose Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel: A Novel Adipose Tissue-Derived Injectable for Stem Cell Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (4), 867-879 (2017).</li>
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<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Long-Term+Volume+Retention+of+Stromal+Vascular+Fraction+Gel+Grafting+with+Enhanced+Angiogenesis+and+Adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved Long-Term Volume Retention of Stromal Vascular Fraction Gel Grafting with Enhanced Angiogenesis and Adipogenesis.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (5), 676-686 (2018).</li>
<li>Sun, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+stem+cell-derived+exosomes+in+tissue+engineering+and+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+the+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Applications of stem cell-derived exosomes in tissue engineering and neurological diseases.</a> Reviews in the Neurosciences. 29 (5), 531-546 (2018).</li>
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<li>Qiu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+Centrifuged+Lipoaspirate+Fractions+Suitable+for+Postgrafting+Survival%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Identification of the Centrifuged Lipoaspirate Fractions Suitable for Postgrafting Survival.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 137 (1), 67-76 (2016).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

줄기 세포 기반 재생 치료는 다른 질병에서 큰 잠재적인 혜택을 보이고 있다. ASCs는 뛰어난 치료 후보 조직 복구 및 소설 조직15의 재생 능력을가지고 하 쉽기 때문에. 그러나, 그것의 임상 응용 프로그램을 확장 하는 셀과 콜라6처리에 대 한 격리를 복잡 한 절차 때문에 한계가 있다. 따라서, 콜라의 사용 없이 줄기 세포를 얻기 위해 간단한 기술을 개발 하기 위해 필수적 이다.
이 연구에서 우리는 네이티브 지방 ECM에 의해 보호 되는 SVF 세포를 지방 조직의 순전히 기계적 과정을 제시. 또한,이 과정은 콜라 무료. 이전 비교 연구 다른 intersyringe 처리 시간 및 10 mL/s 흐름 속도에서 1 분은 ECM/SVF-젤12생산을 위한 최적의 프로토콜 표준 콜맨 지방의 intersyringe 처리를 보여주었다. 이동 하는 intersyring...

그들은 다양 한 질병1에 대 한 대체 치료 처방을 제공할 수 있도록 줄기 세포 치료 조직 수리 및 재생에 대 한 패러다임의 변화를 제공 합니다. 줄기 세포 (예를 들면, 유도 만능 줄기 세포와 배아 줄기 세포) 큰 치료 잠재력을가지고 하지만 셀 레 귤 레이 션 및 윤리적인 고려 사항으로 인해 제한 됩니다. 지방 유래 중간 엽 기질/줄기 세포 (ASCs)는 쉽게 lipoaspirates에서와 같은 제한; 적용 되지 않습니다 얻을 따라서, 그것은 실용적인 재생 의학2에 대 한 이상적인 셀 유형이 되고있다. 또한, 그들은 nonimmunogenic 이며 헌 지방3에서 풍부한 자원을.
현재, ASCs 주로 지방이 많은 직물의 콜라 중재 소화에 의해 얻을 수 있습니다. 지방이 많은 직물의 실질 혈관 분수 (SVF) ASCs, 내 피 뿌리 세포, pericytes, 및 면역 세포에 포함 되어 있습니다. 효소 고밀도 SVF/ASCs를 얻는 유익한 효과를 표시 했다, 비록 여러 국가에서 입법은 엄격 하 게 콜라4를 사용 하 여 셀 기반 제품의 임상 적용을 규제 합니다. SVF 세포를 얻기 위해 1 시간 30 분 콜라와 함께 지방 조직 소화 준비와 생물 학적 오염 두 외 인 물질의 위험을 증가. 부착 문화와 일 주 소요, ASCs, 정화 특정 실험실 장비가 필요 합니다. 또한, 대부분의 연구에서 SVF 전지와 ASCs 서 스 펜 션에 사용 됩니다. 세포 외 기질 (ECM) 또는 다른 항공사의 보호 없이 프리셀은 취약 하 고 주입 후 가난한 셀 유지가 발생할 손상 치료 결과5. 이러한 이유로 모두 줄기 세포 치료의 추가 응용 프로그램을 제한합니다.
콜라-중재 소화 하지 않고 지방 조직에서 ASCs를, 원심 분리, 자르고, 분쇄, pureeing, 고 닦지, 기계 등 여러 기계적 처리 절차, 개발된6,7 되었습니다. , 8 , 9. 이러한 방법은 기계적으로 성숙한 adipocytes 및 그들의 석유를 포함 하는 소포를 방해 하 여 조직과 ASCs를 응축 하 생각 된다. 또한, ASCs의 높은 농도 포함 하는 이러한 준비 동물에서 재생 의학 모델8,,910로 상당한 치료 잠재력을 보여주었다.
2013 년에 Tonnard 외. 유화 lipoaspirates intersyringe11처리 하 여 생산 관련 기술을 접목 하는 nanofat를 소개 했다. 이동 하는 intersyringe에 의해 만들어진 전단 힘 선택적으로 성숙한 adipocytes를 끊을 수 있다. 우리 SVF 세포와 ECM/SVF-젤12분류 한 ECM 떠나 lipoaspirates에서 대부분의 지질 및 액체를 제거 하는 순전히 기계적 처리 방법 개발 그들의 결과에 따라. 여기, 우리 인간 파생 된 지방 조직 ECM/SVF-젤 생산의 기계적 프로세스의 세부 사항을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488-conjugated isolectin GS-IB4</td><td>Molecular Probes</td><td>I21411</td><td></td></tr><tr><td>기니피그 안티-마우스 페리핀</td><td>Progen</td><td>GP29</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermofisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>와이드 팁 피펫</td><td>Celltreat</td><td>229211B</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경&nbsp;</td><td>라이카&nbsp;</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr><td>누드 멋진&nbsp;</td><td>Southern Mdical University</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>광학 현미경&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Cornig</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>멸균 백</td><td>Laishi</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>마이크로톰</td><td>Leica&nbsp;</td><td>CM1900</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Heraus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

재생 치료를 위한 lipoaspirates의 기계 micronization

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Stromal 혈관 분수 (SVF); 다양 한 질병에 대 한 재생 도구가 되고있다 그러나, 입법 콜라를 사용 하 여 셀 제품의 임상 적용을 엄격 하 게 통제 한다. 여기, 우리는 순전히 기계적 과정에 의해 지방 조직에서 SVF 셀 및 기본 세포 외 매트릭스의 주사 혼합물을 생성 하는 프로토콜을 제시. Lipoaspirates는 원심 분리기에 투입 되며 1200 x g 3 분에 합니다. 중간 계층은 수집 하 고 (고밀도 하단) 지방과 저밀도 지방 상단에 2 개의 층으로 분리. 상위 계층은 직접 intersyringe를 이동 하 여, 8 x 6 x 20 mL/s의 속도로 유화 됩니다. 유화 지방 2000 x g 3 분,에서 centrifuged 그리고 기름 층 아래 끈적끈적한 물질을 수집 하 고는 세포 외 기질 (ECM)으로 정의 / SVF 젤. 꼭대기 층에 오일 수집 됩니다. 오일의 약 5 mL는 고밀도 지방 15 mL에 추가 하 고 intersyringe를 이동 하 여, 8 x 6 x 20 mL/s의 속도로 유화. 유화 지방 2000 x g 3 분에 centrifuged 그리고 끈적끈적한 물질은 또한 ECM/SVF-젤. 누드 마우스에 ECM/SVF-젤의 이식 후에 이식 수확 이며 더 시험에 의해 평가. 결과이 제품에는 정상적인 지방 조직으로 재생성을 보여줍니다. 이 절차는 간단 하 고 효과적인 기계적 분리 절차 SVF 세포 재생 목적을 위해 그들의 자연적인 지원 ECM에 포함 된 응축입니다.

ECM/SVF-젤 콜맨 지방을 처리 한 후 폐기 기름의 볼륨 최종 볼륨의 80%를 차지 하 고 지방 조직 기름 층 아래 보존의 20%만 ECM/SVF-젤 (그림 1A)로 간주 됩니다. ECM/SVF-젤은 27 G 정밀한 바늘;을 통해 갈 수 있도록 하는 부드러운 액체 같은 질감 그러나, 콜맨 지방 그리고 큰 섬유와 필수 지방 구조의 구성 18 G 정 (그림 1B)를 통해 갈 수 있습니다.
이식 후 3 일에 다 수 소형 preadipocytes 여러 세포내 지질 작은 물방울, 광범위 한 잘 vascularized 결합 조직, 및 선 동적인 세포 침투의 등장. 하루에 15에 시작, 염증 세포의 수 점차...

여기, 우리는 일련의 유화 및 여러 centrifugations를 포함 하는 기계적인 프로세스를 통해 지방 조직에서 stromal 혈관 분수를 얻기 위해 프로토콜 제시.

재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...

리포아실리페로부터 기질 혈관 분획 또는 SVF를 얻으려면 콜라게나아제로 소화가 필요하며, 이는 생물학적 오염의 위험을 증가시킵니다. 콜라게나아제 없이 SVF를 얻을 수 있는 더 좋은 방법을 개발해야 합니다. 이러한 기술을 통해 간단한 기계적 공정을 통해 기본 세포 외 매트릭스에서 SVF를 얻을 수 있습니다.절차를 시연하는 것은 우리 실험실에서 졸업한 학생 인 Xihang Chen이 될 것입니다. 지방 샘플을 얻은 후, 리포아시브를 50 밀리리터 튜브로 옮기고 수확한 지방이 10분 동안 평형화되도록 합니다. 다음으로, 넓은 팁 파이펫을 사용하여 튜브의 상단 층에서 지방을 새로운 50 밀리리터 튜브로 끌어당기고 원심분리에 의해 지방을 회전시합니다.튜브의 상부 층은 콜맨 지방 분획입니다. 콜맨 지방의 상부 2/3을 새로운 15 밀리리터 튜브로 옮기십시오. 이 부분은 저밀도 지방으로 간주됩니다.콜맨 지방의 하부 3분의 1을 두 번째 15 밀리리터 튜브로 옮춥시다. 이 부분은 고밀도 지방으로 간주됩니다. 저밀도 지방에서 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤을 생성하려면 여성이 여성 luer lock 커넥터에 연결된 20 밀리리터 주사기를 사용하여 저밀도 지방의 10 밀리리터를 인터시프트하십시오.이것은 지방세포를 파괴하는 핵심 단계입니다. 인터시고지 변속이 수행되는 속도와 시간은 최종 제품의 품질에 기여합니다. 마지막 인터시프트 세션 후 원심분리로 지방을 수집하고 상단 오일 층을 15 밀리리터 튜브로 옮긴다.그런 다음 끈적끈적한 중간 세포외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤 층을 새로운 15 밀리리터 원추형 튜브로 옮킨다. 고밀도 지방에서 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤을 생산하려면 저밀도 오일 분수의 2 밀리리터를 고밀도 지방 샘플의 5 밀리리터에 추가하십시오. 에멀젼 내에서 플립질이 관찰될 때까지 입증된 혼합 지방을 인터시프트한다.원심분리로 플렉소드를 수집하고 상단 오일 층을 폐기하십시오. 그런 다음 끈적 끈적한 중간 층을 수집하고 저밀도 세포 외 세포 외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤 샘플과이 분획을 혼합합니다. 콜맨 지방을 세포외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤로 처리한 후, 버려진 오일의 부피는 최종 부피의 80%를 차지하며, 오일 층 아래에 보존된 지방 조직의 20%만이 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤로 간주된다.세포 외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤은 27 게이지 미세 바늘을 통과 할 수있는 부드러운 액체 와 같은 질감을 가지고 있습니다. 그러나, Coleman 지방은 단지 통과 할 수있는 큰 섬유와 통합 지방 구조로 구성되어 있습니다 18 게이지 캐뉼라. 이식 후 셋째 날에는 여러 세포 내 지질 방울, 광범위한 잘 혈관 화 결합 조직 및 침투 된 염증 세포가있는 작은 크기의 사전 지방세포가 많이 나타납니다.15일째부터 염증성 세포의 수가 점차 감소하기 시작하고, 지방세포는 성숙해지기 시작합니다. 90일째까지, 이식편에 있는 혈관 결합 조직의 대부분은 성숙한 지방세포로 대체되었습니다. 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤 이식은 또한 이식 후 3 일 동안 몇 개의 페리리핀 양성 지방을 포함하고, 작은 크기의 사전 adipocytes와 함께, 다중 세포 내 지질 방울이 15 일에 나타나기 시작한다.하루의 각 필드 90 세포 외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤 이식 섹션 수많은 perilipin 양성 선포 세포와 새로 형성 된 혈관을 전시. 유동 세포측정은 제품 내의 세포 집단을 결정하기 위해 수행될 수 있다. 및 전자 현미경 검사법은 제품의 미세 구조를 시각화하기 위해 수행 될 수있다.이 기술은 외과 의사와 연구원이 지방 조직에서 네이티브 세포 외 매트릭스 섬유와 SVF 세포의 높은 농도와 제품을 얻을 수있는 간단한 방법을 제공합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은의 고립을 설명 지방 - 파생 lipoaspirate과 골격 재생을 평가하는 4mm 중요한 크기 calvarial 결함의 생성의 stromal 세포를.

Lipoaspirate에서 수확 지방 - 파생 Stromal 셀을 사용하여 임계 크기 Calvarial 결함 모델의 수리

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

림프절은 면역 반응을 조율하고 백신을 위한 중요한 표적인 면역 조직입니다. 생체 재료는 더 나은 표적 림프절을 위해 채택되고 항원 또는 유수품의 전달을 통제하기 위하여 채택되었습니다. 이 논문은 이러한 아이디어를 결합하여 생체 적합성 폴리머 입자를 림프절에 주입하는 기술을 설명합니다.

생분해성 폴리머 입자의 림프절 내 주입

여기, 선물이 지방 조직 유래 stromal 혈관 분수와 인간의 골 관절염 환자에서 연골 같은 조직의 재생성 하 여 무릎 기능을 개선 하는 응용 프로그램을 생성 하는 프로토콜.

지방 조직 유래 Stromal 혈관 분수 잠재적인 연골 재생을 위한 생산의 임상 프로토콜

방법과 프로토콜의 정확한 공개는 줄기 세포 요법의 대규모 흡수에 중요합니다. 여기에서, 우리는 라디칼 전립선 절제술 (RP)에 이어 발기 부전 (ED)의 치료로서 단일 동굴 내 주사에 사용되는 지방 유래 재생 세포를 분리하는 프로토콜을 제시한다.

급진적 인 전립선 절제술에 따른 발기 부전의 치료를위한 지방 유래 재생 세포의 분리

여기서, 우리는 폐쇄된 시스템 장치를 사용하여 인간 지방 조직 효소-무마이크로 단편화를 제시한다. 이 새로운 방법은 생체 내 이식, 시험관 내 배양, 및 추가적인 세포 격리 및 특성화에 적합한 지방 조직의 서브 밀리미터 클러스터의 획득을 허용한다.

세포 표현형 및 분비 특성화를 위한 인간 지방 조직 미세 단편화

본 프로토콜은 ADSC 단리를 위한 개선된 방법론을 기술하여 문헌에 비해 시간 이득과 함께 엄청난 세포 수율을 초래한다. 이 연구는 또한 장기 동결보존 후 비교적 많은 수의 생존 가능한 세포를 얻기 위한 간단한 방법을 제공합니다.

지방 조직에서 중간엽 줄기세포를 얻는 기술 및 장기 냉동 보존에서 기질 혈관 분획 특성 분석

피브린 하이드로겔과 함께 기계적으로 분리된 기질 혈관 분획(SVF)은 조직 공학 및/또는 상처 치유 목적을 포함한 다양한 적응증에 대해 생존 가능한 지방 유래 기질 세포를 위한 쉽고 효율적인 운반체를 제공합니다. 여기에서는 중개 연구 및 임상 응용을 위한 기계적 SVF(mSVF)-피브린 하이드로겔 구조체의 준비를 제시합니다.

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

여기에서는 자가 지방 조직을 서로 다른 물리화학적 특성과 기능을 가진 다양한 지방 구성 물질로 변환할 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

지방을 특수 성분으로 전환하기 위한 혁신적인 지방 조직 분획

이 프로토콜은 캡사이신이 적재된 α-락트알부민 나노미셀을 포함하는 용해성 마이크로니들 패치의 제작을 설명합니다. 이 방법은 소수성 바이오액티브를 지방 조직에 표적으로 경피 전달하는 재현 가능하고 최소 침습적인 접근법을 제공하여 효율적인 국소 지방 감소를 촉진하고 비만 관리 분야에서의 응용 가능성을 확장할 수 있습니다.

경피 캡사이신 전달 및 지방 조직 감소를 위한 α-락트알부민 나노미셀이 적재된 용해성 마이크로니들 패치 제작

학습하세요 지방 조직에서 콜라게나제 없이 기계적 방법으로 기질 혈관 분획(SVF)을 분리하는 기술을. 원래 세포외 기질을 보존하여 재생 의학 연구에 활용할 수 있습니다.

재생 치료를 위한 Lipoaspirates의 기계 Micronization

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