DOI: 10.3791/58785-v
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이 프로토콜에 대 한 3 차원 구조적된 암 세포 (spheroids)에서 실시간으로 immunotherapeutic 리디렉션된 T-셀 (자동차 T-세포) 세포 독성을 평가 하기 위해 설계 되었습니다.
이 방법은 3D 구조 종양 세포에 대한 면역 세포 세포 독성의 평가에 대한 면역 요법 분야에서 중요한 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 간단하고 고급 이미징 기술과 민감한 면역 학적 분석법을 결합한다는 것입니다. PBS의 5 밀리리터로 관심있는 대장암 세포 라인을 세척하고 섭씨 37도에서 5 분 동안 트립신의 0.5 밀리리터로 플라스크 바닥에서 세포를 제거합니다.
현미경으로 분리를 확인한 후, 완전한 배지의 10 밀리리터로 세포 해리 효소를 중화시키고 원심분리에 의해 세포를 수집한다. 밀리리터 농도당 세 번째 세포에 1.5배 10회에서 세포를 재보일시 하여 셀을 계산하고 재중단하기 위해 5밀리리터의 신선한 완전 배지에서 펠릿을 다시 중단한다. 그런 다음 200 마이크로리터의 세포를 96웰 원형 바닥 플레이트의 각 우물로 시드하고 5%CO2 및 95%의 습도를 가진 37도 섭씨 인큐베이터 내부에 자동 이미징 장치에 플레이트를 배치합니다.
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