Name: 유도 및 실험적인 근 Murine 모델의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: 학습하세요 쥐에서 렌즈 유도 근시를 유도하고 평가하는 표준화된 방법을 통해 안구 굴절률과 축 길이 변화를 측정하는 기술입니다. 이 프로토콜은 재현 가능한 결과를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 SDOCT, 굴절 및 각 막 곡률, 3 차원 프레임 데이터, M. 미 야우 치; 재현 씨 Sanshouo의 측정에 대 한 조언 F. Schaeffel에 대 한 조언을 몬태나 Pardue 감사 합니다. K. Tsubota; Y. 다나카; S. 콘도; C. 마사다; M. 부; Y. 미; Y. 하기와 라; A. 이시다; Y. 토 미타; Y. Katada; E. Yotsukura; K. 다카하시; 그리고 중요 한 면담을 위해 Y. 왕입니다. 이 작품은 과학적 연구에 대 한 (KAKENHI, 숫자 15 K 10881) 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 (문 부 과학성)에서 TK. 보조금 inAid에 의해 지원 되었다 이 작품에서 Tsubota 실험실, Inc. (일본 도쿄) 근 시 연구에 대 한 권한을 부여 하 여 지원 됩니다.

모든 절차는 게이오 대학의 학부의 동물 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 ARVO 문을 안과 및 비전 연구, 동물 실험에서 게이오에 기관 지침에 동물의 사용에 대 한 준수 대학, 그리고 동물 연구: 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침.
1. 쥐에 대 한 안경 조립
<ol><li>안경 (그림 1a) 조립에 필요한 부품을 준비 합니다. 각 마우스에 대 한 모든 다음 준비: 머리 거치 한 나일론 스틱, 하나 더 높은 및 1 낮은 티타늄 프레임, 실험, 10 m m의 길이와 M1.4 크기 나사 하나, M1.4 크기 나사 한 너트, 하나의 일반의 목적에 따라 적절 한 능력을 가진 두 개의 렌즈 0.3 m m의 두께와 M1.4 크기 나사 세탁기 그리고 2 개의 인공 손톱 팁 (테이블의 자료). 참고: 프레임의 두 가지 서로 다른 높이와 존재. 1 마우스에 대 한 높은 프레임 및 낮은 프레임 집합으로 사용 됩니다. 높은 프레임 비전 필드 대칭 수 있도록 낮은 사람 위에 넣어 되어야 합니다. 프레임과 렌즈는 특별히 설계 및 저자의 연구 그룹에 의해 제조. 이러한이 문서의 해당 저자에 연락 하 여 사용할 수 있습니다. 다른 부분 소매 도구 상점에서 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>별도로 오른쪽과 왼쪽 눈에 대 한 프레임을 조립 한다.<ol>
<li>최고의 보호 효과 달성 하기 위해 외부 방향으로 얼굴을 손톱 끝을 정렬 합니다. 손톱 팁과 마우스 비전 필드 (그림 1b) 마스킹 피하려고 약 130 ° 되도록 프레임 사이의 각도 조정 합니다. 인공 손톱 팁 cyanoacrylate 접착제를 사용 하 여 프레임을 준수 합니다. 참고: 손톱 팁 마우스에 의해 긁힘을 렌즈를 보호 하기 위해 도울 수 있다. 손톱 끝의 방향 반대 해야 높은 프레임과 하단 프레임은 오른쪽 눈과 왼쪽된 눈 각각 사용 하기 때문에.</li>
		<li>적어도 12 h 건조, 다음 사용 하 여 손톱 깎기는 손톱의 모양을 조정 하는 접착제를 위한 대기 팁 절단과 트리밍에 의해 1 cm × 1 cm에 대 한 것.</li>
		<li>Cyanoacrylate 접착제를 사용 하 여 프레임에 렌즈를 준수 합니다. 프레임에 렌즈를 넣어 손으로 누르고 프레임 가로. 렌즈의 가장자리에서 cyanoacrylate 접착제를 주입 하 고 표면 장력에 의해 접착제 확산. 참고: 접착제 것 이다 침식 렌즈의 투명도 영향을 미칠, 그래서 접착제는 렌즈의 주변 부분에만 지 다는 것을 확인. 사용 0 디 옵 터 (D) 렌즈 렌즈 제어 및 근 시를 유발 하는 렌즈 빼기. 렌즈 (–50 D에 –10 D) 마이너스의 다른 힘의 효과 있다4설명 되어. 근 시 유도 최대화 하기 위해 –30 D 렌즈 근 시 유도 대 한는 것이 좋습니다. FDM 1.5 mL microtube 디퓨저로의 뚜껑에 렌즈를 변경 하면 동일한 장치와 유도 될 수 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>막대기의 편평한 측에서 세탁기와 함께 나일론 막대기에 나사를 조입니다. 안경 및 실험 전에 막대기를 각각 준비 하 고 더 사용 (그림 1c)에 대 한 재고. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
</ol>2. 굴절 및 알 기준선의 측량.
<ol><li>Mydriatic 에이전트 5 mg/mL tropicamide 및 안구의 각 측에 5 mg/mL phenylephrine 염 산 염을 포함 하는 눈동자를 팽창의 한 방울을 적용 합니다. 전신 마 취 전에 적어도 5 분 기다립니다. 참고: 일반 눈동자 팽창 마 취 이후에 측정을 좌우 하는 가역 백 내장을 일으킬 것입니다. 항상 일반 마 취 전에 눈동자를 팽창 하 고 적어도 5 분 기다립니다. Mydriatic 에이전트의 한 방울 (약 0.05 mL) 더 많은 에이전트는 다음 단계를 해 할 것입니다 하는 동안 마우스 눈의 눈동자를 dilating 충분 하다.</li>
	<li>전신 마 취 아래 마우스를 넣어. 부드럽게 완전히 anaesthetized 때까지 그것의 눈을 지원 해주에서 마우스를 유지 하는 마우스의 뒤로 피부 파악. 충분할 때 그것은 테이블에 자유롭게 마우스 주위에 이동 하지 않습니다 경우에 전신 마 취의 깊이 판단 한다. 참고: 조합의 midazolam (40 μ g/100 μ), medetomidine (7.5 μ g/100 μ) butorphanol 주석산 (50 μ g/100 μ)는 여기 쥐 0.01 mL/g 복 주사의 볼륨에 대 한 일반적인 마 취에 대 한 사용 됩니다. 일반적으로, 5 분 미만 잠들 마우스 필요 합니다. 전신 마 취의 장시간 낮은 체온 및 느린 심장 박동을 발생합니다. 전신 마 취 제 주사 후 10 분 이내 모두 측정을 마무리 하는 측정에의 잠재적인 영향을 피하기 위해 하는 것이 좋습니다. 마 취 칵테일에 butorphanol 진통의 약 4 시간을 제공 합니다. 전신 마 취에 대 한 적절 한 조리법은 기관에 의해 다른 수 있습니다.</li>
	<li>적외선 photorefractor4,,914를 사용 하 여 마우스 눈의 굴절을 측정 합니다. 눈동자의 센터에서 첫 번째 Purkinje 이미지를 유지 하 고 굴절 광학 축 따라 측정을 마우스 눈의 방향을 조정 합니다. 측정 후 같은 절차 (그림 2a)와 반대 눈을 측정 합니다. 참고: 굴절에 대 한 측정 값은 광학 축을 따라 마우스의 위치에 의해 강하게 좌우 된다. 첫 번째 Purkinje 이미지 눈동자의 중앙에서 ± 3도 내 맞춤 확인 하십시오. 굴절 측정4에 있는 눈동자의 방향으로의 미세 조정에 대 한 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 시스템의 작업 대를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>SD-10 월 시스템4,,1516를 사용 하 여 마우스 눈의 알을 측정 합니다. 광학 신경 (그림 2b) 근처 밝은 경계에 각 막 정점에서 거리로 알을 정의 합니다. 참고: 유사한 굴절의 측정으로, 알은 강하게 영향을 마우스 눈의 방향으로. 각 막 정점 각 막의 표면에 점 모양의 반사에 의해 확인할 수 있습니다. 망막의 경계는 매우 광학 신경 순간 헷갈리는 될 것입니다. 방향 측정을 위해 충분히 명확 하지만 광학 신경에서 너무 멀리 경계를 조금 조정 합니다.</li>
</ol>3. 마우스 두개골에 프레임 고정.
<ol><li>각 눈에 건조를 방지 하기 위해 0.1% 정화 나트륨 hyaluronate 눈 방울 한 방울을 적용 합니다. 참고: 눈 방울 눈 표면에서 굴절 및 축 길이 측정의 가치를 좌우할 것 이다. 모든 측정 할 때까지 마 취 후 눈 방울을 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>찰 흙의 사면에 마 취 마우스의 턱을 넣어 또는 아무것도 두개골의 초기 비행기를 만들기 위해 베개 가로 수로 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>머리를 소독 하 고 귀와 눈을 70% 에탄올과 면봉을 사용 하 여 두 피.</li>
	<li>귀와 눈을 위한 두개골 수술가 위 핀셋을 사용 하 여 0.8 c m2 에 대 한 노출 사이의 피부를 잘라. 치과 에칭 액체 및 면 면봉을 사용 하 여 여과 제거. 수술가 위, 핀셋 각 마우스의 수술 전에 70% 에탄올 소독. 참고: 클리핑 머리 하 고 멸 균 장갑을 착용 해야 합니다.  이 절차를이 수행 하기 전에 관련 동물 보호 위원회의 규정을 확인 하십시오. 대부분의 경우, 자체 치료 치과 접착제 시스템에 첨부 파일 중 하나로 치과 에칭 액체를 찾을 수 있습니다. 치과 에칭 액체를 사용할 수 없는 경우 대신 70% 에탄올을 사용 합니다.</li>
	<li>올바른 위치에 메모리를 수정할 수 있도록 렌즈 없이 프레임 세트를 조립 한다. 마우스 머리에 프레임을 넣어. 조심 스럽게 빈 프레임 중간에 두 눈은 되도록 프레임의 위치를 조정 합니다.</li>
	<li>자기 치료 치과 접착제 시스템을 사용 하 여 연결 마우스 머리에 스틱. 수 마우스 눈에 adhere 시스템 흐름의 액체를 하도록 하지 않도록 주의. 참고: 자체 치료 치과 접착제 시스템을 사용 하기 위한 방법을 제품 사이 다르다. 신중 하 게 지시를 참조 하십시오. 주의: 일부 치과 접착제 시스템에 시 약의 독성이 있을 수 있습니다.</li>
	<li>약 5 분을 기다립니다 고 프레임과 너트에서 신중 하 게 스틱 (그림 3a)의 위치를 변경 하지 않고.</li>
	<li>Intraperitoneally 수 있도록 마우스 마 취에서 회복을 더 빠르게 0.75 mg/kg atipamezole 염 산 염 주사. 으로 개별 완전히 복구 될 때까지 마우스를 넣어. 두지 마십시오 마우스 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 프로토콜 여기 일시 중지 될 수 있습니다.</li>
</ol>4. 근 시 유도 및 나중에 유지 보수 개시
<ol><li>마우스 마 취에서 완전히 복구할 수 있도록 수술 후 적어도 24 시간을 기다립니다. 지팡이 잡고 하 고 렌즈와 프레임에 넣어. 유치는이 시간 포인트 (그림 3b)에서 시작 됩니다. 참고: 마 취에서 회복 하는 동안 불편을 최소화 하 고 치과 접착제 시스템 응고에 대 한 충분 한 시간을 주고, 그것은 좋습니다 쥐 완전히 마 취에서 회복 후 프레임에 넣어. 수 지 시멘트 접착 시스템의 완전히 두 피 컷을 다룰 것입니다. 따라서, 구체적인 수술 후 치료 필요 감염을 방지 하 고 수술 후 통증 장황 합니다. 프레임에 처음으로 후 바로 마우스 끝날 렌즈의 존재를 의식 하 고 그것을 많이 긁어. 총 동작 몇 시간 후 정상으로 다시 것입니다. 정상적인 쥐에 동일한 밀도와 렌즈와 마우스를 보관할 수 있습니다.</li>
	<li>프레임을 제거 하 고 청소 렌즈와 손톱 팁 면봉으로 적어도 일주일에 두 번 렌즈의 투명도 유지 하기 위해. 참고: 그것는 마 취를 제거 하 고 프레임에 대 한 마우스를 넣어 필요가 없습니다. 고통을 줄일 수 있습니다 그들과 함께 작업 하는 동안 걸어 그들을 않고 앉아 쥐에 대 한 지원을 제공 합니다.<ol>
<li>임시 측정은 필요한 경우, 마 취에서 마우스를 넣어 하 고 앞에서 설명한 마우스를 측정 한다. 유치는 마우스 마 취에서 회복 후 계속 될 수 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>일주일에 두 번 이상 감 금 소를 청소. 참고: 렌즈 선명도 유지 하는 것이 도움이 됩니다. 사이의 마우스 케이지 음식 찌 꺼 기를 여과 하는 그물을 퍼 팅도 도움이 될 수 있습니다.</li>
	<li>몸 무게와 총 동작을 모니터링 합니다. 비교와 같은 그들 전체 실험 과정에서 훼손 되지 않은 쥐 나이. 참고: 일부 긁 동작을 제외 하 고 몸 무게를 포함 한 중요 한 변화가 치료 쥐 실험 생쥐 사이 발견 된다.</li>
</ol>

<ol><li>Dolgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myopia+boom%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The myopia boom.</a> Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).</li>
<li>Ohno-Matsui, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Asia-Pacific+Journal+of+Ophthalmology+%28Philadelphia%2C+Pa%29%22%5BJournal%5D)">Pathologic Myopia.</a> Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).</li>
<li>Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+deprivation+and+lens-induced+myopia%3A+are+they+different%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+%26+Physiological+Optics%22%5BJournal%5D)">Form deprivation and lens-induced myopia: are they different.</a> Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+murine+model+of+experimental+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A highly efficient murine model of experimental myopia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2026(2018).</li>
<li>Torii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Violet+Light+Exposure+Can+Be+a+Preventive+Strategy+Against+Myopia+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression.</a> EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).</li>
<li>Smith, E. L. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Long-Wavelength+Lighting+on+Refractive+Development+in+Infant+Rhesus+Monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).</li>
<li>Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wavelength+composition+and+temporal+modulation+of+ambient+lighting+strongly+affect+refractive+development+in+young+tree+shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews.</a> Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+quantitative+profiling+of+differential+retinal+protein+expression+in+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+using+fluorescence+difference+two-dimensional+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis.</a> Molecular Medicine Reports. , (2018).</li>
<li>Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+refractive+state+and+deprivation+myopia+in+two+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice.</a> Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+experimental+myopia+has+features+of+primate+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Mouse experimental myopia has features of primate myopia.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).</li>
<li>Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head-mounted+goggles+for+murine+form+deprivation+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Head-Mounted+Spectacle+Frame+for+the+Study+of+Mouse+Lens-Induced+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia.</a> Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278(2016).</li>
<li>Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Goggles+for+controlling+the+visual+environment+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Goggles for controlling the visual environment of small animals.</a> Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine-xylazine+anesthesia+causes+hyperopic+refractive+shift+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).</li>
<li>Chou, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+elongation+of+eye+size+in+DBA%2F2J+mice+compared+with+C57BL%2F6J+mice%3A+in+vivo+analysis+with+whole-eye+OCT%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).</li>
<li>Park, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+axial+length+measurements+in+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Assessment of axial length measurements in mouse eyes.</a> Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).</li>
</ol>

마우스 안경의 디자인 특허 (no. 201741349 응용 프로그램)에 대 한 적용 되었습니다.

있는지 확인 하려면 마우스 머리에 안정적으로 고정 될 안경,이 프로토콜의 여러 단계 큰 관심을 지불 될 필요가 있다. 과 치과 접착제 시스템을 사용 하기 전에 완전히 제거 되어야 합니다. 두개골에 피는 또한 주의 정리 될 필요가 있다. 약간 미세 하 게 조정 하는 것은 직후에 접착제의 응용 프로그램 허용, 접착 시스템을 건조 하기 전에 자주 메모리를 이동 하지 마십시오. 신중 하 게, 접착 시스템의 지시에 따라 특히 최종 혼합물의 각 성분의 비율. 때 마우스를 잡고 안경 또는 수술 후 후속 측정의 유지 보수 동안 할 파악 하지 마우스의 시체와 함께 스틱 함께. 두개골 지팡이 사이 상대 운동 막대기의 아래로 떨어지는의 가장 빈번한 원인입니다. 적절 한 수술 및 장악 기술, 개인 막대기를 드롭다운 수 20 개인을 포함 하 여 3 주 실험에서 1 미만 것입니다.
머리카락과 음식 찌 꺼 기는 눈과 렌즈 사이의 간격으로 풀 수 있습니다. 이것은 렌즈의 투명도 영향을 미칠 뿐만 아니라 또한...

근 시의 보급 최근에 극적으로 증가 했다, 그것의 발병 및 진행의 메커니즘은 여전히 크게 unknow1. 근 시의 가장 특징적인 표현 형의 축 길이 (알), 망막 합병증 이나 심지어 실명2에 대 한 위험 증가 신장 이다. 근 시의 병 인을 이해 하 고 효과적인 치료법을 개발에 강력한 근 시 동물 모델 및 안정적인 표현 형 평가 필요 하다.
짧게, 두 가지 방법을 유도 하는 동물에서 근 시 상태에 대 한 존재: 모양 박탈 근 시 (FDM)와 렌즈 유도 근 (임)3. 전 눈 앞 디퓨저를 장소 또는 근 표현 형에 따른 안구의 정상적인 발전을 좌우 하는 이미지를 보이지 않게 하기 위해 눈 꺼 풀 sutures. 렌즈는 망막 뒤에 초점을 이동 하는 눈 앞에 마이너스 후자의 장소. 망막 초점의 변화를 감지 하 고 망막 및 초점을 다시 맞추고 하 안구 elongates. FDM, 눈 꺼 풀 닫히거나 디퓨저, 눈 앞에서 수정 되었습니다 후 거의 추가 정비 필요 합니다. 임, 렌즈 투명 유지 하기 위해 청소를 위해 이륙 해야 합니다. 따라서, FDM 기술적으로 유도를 상대적으로 쉽습니다. 그러나, FDM과 임의 메커니즘은 서로 다른, 그리고 어떤 방법을 모방한 인간의 근 시 더 나은 아직 논쟁3. 임의 장점 중 하나는 마우스4의 경우 적어도 FDM, 비해 강한 표현 형.
근 시 유도에 사용 된 동물 등 여자5, 원숭이6, 트리 shrews7, 기니 돼지8, 마우스4. 유전자 조작, 풍부한 제공 항 체, 그리고 번 식에 대 한 낮은 비용의 가능성을 고려 하면 쥐 되었을 수 있습니다 첫 번째 선택 myopia의 동물 모델. 그러나, 다른 더 큰 동물에 비해, 렌즈 또는 마우스 눈 앞 디퓨저 수정은 상대적으로 젊은 마우스 오른쪽 등 특히 어려운 이유 후. 국 소 의약품 안전 청 또는 여러 중간 아이 측정을 필요로 하는 실험, 이동식 수 프레임에 필요한 이기도 합니다. 또 다른 도전은 정교한 기술 및 평가 하는 장치는 마우스 안구의 작은 형태학 변화 이다. 날짜 하려면, 다른 유도 및 다른 연구 팀에서 사용 되는 프로토콜을 측정 그것은 어렵게 만들 비교 하 고 결과 반복 하 여 실험실에서. 세부 표준 프로토콜은 필요 합니다.
이전 작품 렌즈 또는 확산 기9,10 및 머리 거치가 글 프레임11,12바느질을 붙이는 등 마우스 눈 앞에서 해결 하기 위해 여러 방법을 설명 합니다. 쥐에 강력 하 고 효율적인 실험 근 시 유도 위한 ameliorated 프로토콜을 개발 하기 위해 우리의 새롭게 설계 된 프레임에 함께 존재가 글 헤드 장착 기술11,12,13 하 고. 프로토콜은 출생 후 하루 21 (p21) 이유 직후 젊은 쥐에 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 고기 굴절 등 알의 안정적이 고 정확한 평가 위해 프로세스를 최적화 합니다. 우리는이 표준화 된 프로토콜 근 쥐 근 시 연구에 대 한 더 쉽게 접근할 수 있는 모델을 만들 수 있습니다 바랍니다.

<table><tbody><tr><td>나사</td><td>NBK</td><td>SNZS-M1.4-10</td><td></td></tr><tr><td>와셔</td><td>MonotaRO</td><td>42166397</td><td></td></tr><tr><td>너트</td><td>MonotaRO</td><td>42214243</td><td></td></tr><tr><td>스틱</td><td>DMM Make</td><td>none</td><td>은 인증자가 설계하고 DMM에서 임대한 3D 프린터로 출력합니다.</td></tr><tr><td>프레임</td><td>DMM Make</td><td></td><td>인증자가 설계하지 않고 DMM Make에서 임대한 3D 프린터로 출력합니다.</td></tr><tr><td>렌즈</td><td>레인보우 콘택트 렌즈</td><td>없음</td><td>회사에서 마우스 사용을 위해 사용자 정의</td></tr><tr><td>cyanoacrylate 접착제</td><td>OK MODEL</td><td>MP 20g</td><td></td></tr><tr><td>치과 접착제 수지 시멘트</td><td>SUN MEDICAL</td><td>슈퍼 본드</td><td>에는 마우스 두개골 골막을 제거하는 데 사용되는 에칭 액체가 포함되어 있습니다</td></tr>. 적외선 <tr><td>광 굴절기</td><td>Steinbeis Transfer Center</td><td>없음</td><td>University of T&uuml의 Frank Schaeffel 박사가 설계하고 제공합니다. bingen</td></tr><tr><td>스펙트럼 도메인 OCT</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td></td></tr><tr><td>트로피카 아미드, 페닐 에프린 염산염 용액</td><td>Santen</td><td>Mydrin-P</td><td></td></tr><tr><td>midazolam</td><td>Sandoz K.K.</td><td>마취제</td>메데토미딘을 위한 <td>SANDOZ</td> 성분</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Orion Corporation</td> 마<td>취제</td><td></td></tr><tr><td>butorphanol tartrate</td>를 위한 Domitor 성분&nbsp;<td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>마취제 성분</td></tr><tr><td>0.1 % 정제 히알루 론산</td><td>나트륨 Santen</td><td>Hyalein</td><td></td></tr><tr><td>atipamezole 염산염</td><td>Zenoaq</td><td>antisedan</td><td></td></tr></tbody></table>

유도 및 실험적인 근 murine 모델의 평가

Inducement and Evaluation of a Murine Model of Experimental Myopia

근 시의 murine 모델 비교적 쉬운 유전자 조작으로 인해 근 연구를 위한 강력한 도구를 수 있습니다. 동물에서 근 시를 유발 하는 한 가지 방법은 주 (유도 하는 렌즈 근 시 임) 눈 앞에서 렌즈 뺀 분명 넣어 하는 것입니다. 그러나, 유도 및 평가 대 한 현존 프로토콜 연구실 실험실에서 다릅니다. 여기, 우리가 새로 설계 하는 마우스를 사용 하 여에 임 안경 유도를 매우 실용적이 고 재현 가능한 방법을 설명 합니다. 방법 수정 하면서 마우스 눈 앞 안정적으로 렌즈 수 있습니다 국 소 또는 청소를 위해 이륙 하는 렌즈 관리 마약. 표현 형 강력 하 고 효율적 이며 분산 작습니다. 여기 설명 하는 방법은 마우스는 실험에 대 한 가능한 기간 연장 이유 후 바로 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 준 기술 굴절 및 축 길이 측정에서 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 조언. 우리 여기에서 설명 하는 단계별 프로토콜 희망과 상세한 기사 myopia 근 시 실험을 더 원활 하 게 수행 하 고 데이터 비교 연구소에서 연구원을 도울 수 있다.

에 먼저, 모든 필요한 부품 (그림 1a) 준비 하는 경우 확인 합니다. 조립된 안경의 작품의 예는 그림 1b에서 표시 됩니다. 프레임과 너트의 본체를 제외한 모든 다른 부품은 각 마우스에 대 한 일회용입니다. 완성 된 안경의 집합 그림 1 c에 표시 됩니다. 다른 연령대와 마우스에 맞게 두 프레임 사이의 각도 변경 합니다.
굴절 측정의 예는 그림 2a에 표시 됩니다. 이것은 3 주 p21에서 시작-30 D 렌즈에 의해 유도 된 마우스 눈 이다. Note 마우스는 바로 카메라9앞을 보고 하는 것을 의미 하 고 ...

이 프로토콜에서 우리 실험 근 유도 사용 하 여 마우스에 새롭게 설계 된 안경, 눈 매개 변수 측정에 안정적이 고 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 필요한 기술의 전체 과정을 설명 합니다.

유도 및 실험적인 근 Murine 모델의 평가

Murine model of myopia can be a powerful tool for myopia research because of the comparatively easy genetic manipulation. One way to induce myopia in ...

이 방법은 마우스에서 렌즈 유도 근시를 유도하고 평가하는 것에 대한 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 렌즈를 안정시키는 방법과 같은. 이 기술의 주요 첫 번째 단계는 모든 단계가 최적화되고 표준화되어 실험실 전체에서 정확하고 재현 가능하며 유사한 결과를 수집할 수 있다는 것입니다.일반적으로, 이 방법에 새로운 사람들은 어떤 연습없이 안정적으로 마우스 머리에 안경을 붙이는 것은 매우 어렵기 때문에 투쟁이다. 각 마우스에 대해 다음을 준비합니다. 머리에 장착된 나일론 스틱 1개.하나 더 높고 하나의 낮은 티타늄 프레임. 실험의 목적에 따라 적절한 힘을 가진 두 개의 렌즈. 10mm 길이 M1.4 사이즈 나사.M1.4 사이즈 나사용 너트 1개. 0.3밀리미터 두께의 M1.4 크기의 나사에 대한 1 개의 일반 와셔. 그리고 두 개의 인공 손톱 끝.오른쪽 안경 프레임을 조립하려면 손톱 끝을 어기고 외부 방향을 향하여 최상의 보호 효과를 얻습니다. 그리고, 마우스-비전 필드를 마스킹하지 않도록 손톱 끝과 프레임 사이의 각도를 약 130도로 조정한다. 시아노아릴레이트 접착제를 사용하여 인공 손톱 끝을 프레임에 부착하고 접착제가 12시간 동안 완전히 건조되도록 합니다.네일 클리퍼를 사용하여 완전히 부착된 손톱 끝을 약 1센티미터 모양으로 트리밍하고 렌즈를 프레임에 놓습니다. 렌즈 가장자리에서 시아노아아크레이트 접착제를 주입하고 접착제가 표면 장력에 의해 퍼지게 합니다. 접착제가 건조하면 나사를 나일론 스틱에 넣고 스틱의 평평한 면에서 와셔와 함께 조입니다.그런 다음 오른쪽 프레임 팁의 반대 방향으로 각진 손가락 끝으로 왼쪽 프레임을 동일한 방식으로 준비합니다. 축 길이의 굴절의 기준선 측정을 위해, 밀리리터 트로피아미드 당 5밀리그램과 눈알의 각 측면에 밀리리터 페닐레프린 염산염당 5밀리그램을 함유한 마이드리아제 1방울을 적용하여 동공을 팽창시킵니다. 전신 마취 전에 적어도 5 분 동안 기다렸다가 적외선 사진 굴절의 뷰파인더 내의 눈 중 하나의 방향을 조정하여 제자의 중앙에 첫 번째 Purkinje 이미지를 배치하고 광학 축을 따라 굴절을 측정합니다.동일한 방식으로 다른 눈을 측정한 후, 마우스를 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 시스템에 배치하고 각막 소용돌이에서 광학 신경 근처의 가장 밝은 경계까지의 거리로 축 길이를 정의한다. 이전에 준비된 고글 프레임을 마우스에 고정하려면 먼저 각 눈에 0.1%의

inducement-and-evaluation-of-a-murine-model-of-experimental-myopia

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 쥐 모델에서 안구 표면 염증 및 마이봄샘 기능 장애를 유도하는 방법을 보여줍니다. 면역원을 사용하여 마우스의 면역 체계를 자극한 후 동일한 면역원으로 재자극하면 안구 표면 염증이 촉진되어 호중구에서 생성된 응집체를 통한 마이봄샘 분비물이 막히고 안구건조증을 유발합니다.

쥐 모델에서 안구 표면 염증을 유도하는 방법

이 비디오에서 마취된 쥐는 홍채각막각을 차단하기 위해 자기장 아래 전방에 자기 구슬을 주입하는 안구 시술을 받습니다. 이 막힘은 섬유주 그물망을 방해하여 수액 배출을 막고 안압을 증가시켜 망막 신경절 세포와 시신경을 손상시킵니다. 이것은 녹내장과 같은 상태로 발전합니다.

Experimental Glaucoma Induction via Iridocorneal Angle Obstruction In a Mouse Model

출처: Jiang, X., et al. 실험적 근시의 쥐 모델의 유도 및 평가. J. Vis. Exp. (2019)이 영상은 커스텀 렌즈 프레임을 장착하여 마우스에 근시를 유발하는 시술을 보여줍니다. 프레임은 치과 접착제로 노출된 두개골에 고정되고 오목 렌즈를 삽입하여 망막 뒤의 초점을 이동합니다. 이 설정은 안구 신장을 자극하여 근시를 유발합니다.

Developing Myopia in a Mouse Model through Lens-Induced Defocusing(렌즈 유도 디포커스를 통한 마우스 모델의 근시 개발)

만성 안구 고혈압 쥐의 눈 섬유주 레이저 광응고술을 사용하여 유도된다. 안압 (IOP)는 레이저 치료 후 몇 개월 동안 상승합니다. 시력 실험 동물의 대비 감도의 감소는 optomotor 테스트를 사용하여 모니터링 할 수 있습니다.

비주얼 결함의 특성을 만성 안구 고혈압의 레이저 유도 마우스 모델

우리는 녹내장을 모델링하기 위해 쥐의 눈에 자기 미세구를 주입하여 안압(IOP) 상승을 유도하는 방법을 제시합니다. 이것은 강한 압력 상승과 광범위한 신경 세포 사멸로 이어집니다. 이 프로토콜은 수행하기 쉽고, 반복 주입이 필요하지 않으며, 안정적이고 오래 지속되는 안압 상승을 생성합니다.

실험 녹내장은 안구하는 미소 자석을 투여 한

우리는 축 신장 토끼 눈에 리보플라빈과 UVA와 공막 가교의 효과를 보여줍니다. 축 방향 신장은 오른쪽 눈의 눈꺼풀 (안검 봉합을) 봉합하여 (남성과 여성) 십삼일 된 뉴질랜드 토끼 유도 하였다.

공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-A 방사선을 사용하여 교차 결합

여기에서는 신생혈관 연령 관련 황반변성(AMD)의 혈관 특징을 재현하는 실험 모델인 마우스 레이저 유도 맥락막 신생혈관화(CNV) 프로토콜을 제시합니다. 일단 마스터하면 다양한 실험 측정을 테스트하기 위한 모델 시스템으로 CNV를 안정적이고 효과적으로 유도할 수 있습니다.

레이저에 의한 맥락막 신생 혈관에 대한 마우스 모델

여기서는 관찰 녹내장, 망막 신경절 세포의 손실을 초래 쥐 눈 안압을 유도 프로토콜을 제시한다. 자기 마이크로 비드는 전방에 주입과 방수의 유출을 차단하는 자석을 이용하여 홍채 각막 각도에 매료된다.

자기 마이크로 비드 폐색 모델 마우스의 녹내장 안구 고혈압 종속 유도합니다

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

여기에서는 망막 변성, 녹내장, 당뇨병 성 망막증 및 근시 모델에서 생체 내 망막 및 안구 구조를 시각화하기 위해 스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층 촬영 (SD-OCT)을 사용하는 방법을 설명합니다.

광학 간섭 단층 촬영을 사용한 설치류 모델에서 안구 질환의 생체 내 구조 평가

안구 표면 염증은 안구 표면 조직에 해를 끼치고 눈의 중요한 기능을 손상시킵니다. 본 프로토콜은 마이보미안 샘 기능장애(MGD)의 마우스 모델에서 안구 염증을 유도하고 손상된 조직을 수집하는 방법을 기술한다.

안구 표면 염증의 유도 및 관련 조직의 수집

학습하세요 쥐에서 렌즈 유도 근시를 유도하고 평가하는 표준화된 방법을 통해 안구 굴절률과 축 길이 변화를 측정하는 기술입니다. 이 프로토콜은 재현 가능한 결과를 제공합니다.

유도 및 실험적인 근 Murine 모델의 평가

더 많은 동영상 탐색