Name: 장 이식-비교-호스트 질병 및 라이브 쥐에서 미니 내 시경 평가의 유도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: 학습하세요 생쥐에서 미니 내시경을 이용한 장 이식-대-숙주 질병 관련 결장 염증 평가 방법을. 비침습적 반복 평가로 조직 채취 없이 장 건강을 모니터링할 수 있습니다.

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이 연구는 공동 연구 센터 (CRC) 221 (CRC/TR221-DFG, #324392634; 프로젝트 B03) (정) 하 고 (정)을 CRC 1181 (CRC-DFG, 프로젝트 B05)에 의해 지원 되었다, 모두 도이치 가운데 (DFG, 독일 연구 재단)에 의해 자금.

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저자는 공개 없다.

프로토콜 유도의 방법론과 장 GvHD 동안 관찰 장 형의 미니 내 시경 평가 설명 합니다. 그것은 전체 질병 과정 (즉, 저 승 표현과 최대한 질병 활동까지 진행의 발병)에서 경도 noninvasively 장 GvHD을 공부 하는 과학자의 광범위 한 용도로 사용 됩니다.
그러나, 있다 몇 가지 중요 한 단계와 중요 한 한계는 실험 각각 과학적인 문맥에 기술을 적용 하기 전에 알고 있어야 필요가 제시 방법론에 내재. 첫째, 비록 우리가 성공적으로 작은 조직 적합성 일치 하지 않는 모델 시스템11장 GvHD 관련 저 승 변의 미니 내 시경 평가 사용, 여기에 제공 된 프로토콜은 현재 MHC에 독점적으로 적용 난 완벽 하 게 일치 하지 않는 급성 GvHD 모델 클래스. 완전히 GvHD 모델을 일치 하지 않는 MHC 클래스는 일반적이 고 자주 사용5, 그것을 잘 설립이 강하게 영향, 예를 들어, 이후 ...

조 혈 악성 직접 발생 하는 조 혈 줄기 세포 격실에서와 통제, 빠르게 진행, 그리고 심각한 면역 중재 장애는 종종 여 보세요-HCT1,2를 수행 하는 표시. 그러나, 전조 도움이 접목 대 종양 응답의 발생에 대 한 회계, 비록 기증자 세포는 자주 유도 및 홍보 여 보세요-HCT 받는 내 건강 한 조직 구성의 원치 않는 면역 중재 공격 이식-비교-호스트 질병3이라고 하는 프로세스. 발현 용기, 소위 장 GvHD는 심각한 형태의 정기적으로 높은 사망률1,2,4와 관련 된 급성 GvHD의 가장 무시 무시 한 합병증을 나타냅니다.
여 보세요-HCT의 전반적으로, murine 모델 식별 하 고 GvHD5병 기본 면역 중재 메커니즘 연구 귀중 한 도구로 떠오르고 있다. 그러나, 운동 평가, 예를 들어, 라이브 마우스 오버시 소설 치료 개입의 유익한 효과 정기적으로에 따라 임상 GvHD의 결정 점수6. 이러한 점수 반영 하기 위해 적당 한 동안, 예를 들어, 전체 질병 부담 (즉, 조직의 GvHD), 임상 점수 부족 감도 안정적으로 거울 기관 특정 발현을 (예:, 에). 따라서, 예를 들어 이러한 시스템을 일반적으로 점수를 기반으로 하는 특정된 치료 개입의 창 자-보호 효과 대해 결론, 짧은을.
소설 전신의 발명을 통해 주요 발전에도 불구 하 고 이미징 형식 중 발광 또는 형광 유전자 마우스 모델7,8의 사용과 함께 직접 하 고 구체적으로 방법론 평가 장 라이브 쥐에서 GvHD의 형상 부족. 따라서, 다음 섹션에 설명 된 장 GvHD 표현 형의 내 시경 평가의 프로토콜 뒤에 근거는이 장애물을 극복 하는. 또한, 동기 부여는 또한 숫자를 줄이기 위해 실험 쥐 이후, 지금까지, 셀룰러, 형태학, 분자 특성의 상세한 평가 (예:, 분자 생물학 또는 histopathology) 장 GvHD의 징후는 궁극적으로 실험 마우스의 희생을 필요 했다.
우리의 기관 이전 syngeneic colitis 모델9동안 저 승 발현의 미니 내 시경 평가의 방법론에 보도 했다. 여기에 제시 된 프로토콜에서 우리 세련 하 고는 colonoscopic 적응 점수 행렬 alloreactive의 이식 시 장 GvHD와 라이브 쥐에 alloresponse 기반 colitis HCT 및 기증자 세포는 MHC 클래스에서 나 완벽 하 게 일치 하지 않는 설정 . 우리는 장 GvHD 관련 저 승 병 변을 반영 하는 적당 한 4 개의 매개 변수를 확인. 또한, 우리는 쉽게 주어진된 시간에 주어진된 마우스에 장 GvHD의 심각도 대 한 독자에 게 알리는 새로운 점수 결과 어떤 단일 결정의 미세 조정 등급 수 있는 시스템을 설립. Histopathological 분석 특정 임계값 위 내 시경 점수 중간에 높은 급료 조직 염증 예측 안정적으로 확인 했다. 따라서, 미니 내 시경 평가를 일상적으로 실험 쥐의 희생을 요구 하는 표준 histopathology 작업 대신 나타내는 나타납니다. 중요 한 것은,이 프로토콜 거의 모든 주어진된 시간 지점에서 적용 될 수 있습니다 그리고 질병10,11의 과정에서 반복적으로 사용할 수 있습니다. 또한, 생물 발광 종속 접근의 사용, 반면 유전자 intercrossing 수정 쥐 처럼 아무 노동 강렬 하 고 시간이 많이 소요 조치가 필요 하 고, 따라서, 방법론의 거의 모든 마우스 라인에 적용 될 수 있다 관심입니다.
여 보세요-HCT 환자 심한 장 GvHD의 해로운 임상 관점을 주어 함께 찍은 빠른 과학적 진보와 기본 면역 병 인 분자 메커니즘에 더 많은 통찰력은 절실히 필요 합니다. 마찬가지로 중요 한, 윤리적인 고려 사항 요구 지식의 이득 실험 쥐의 최소한의 사용으로 달성 되어야. 따라서, 모두 장 GvHD 탐험 연구 커뮤니티에 클레임 모니터링 하 고 라이브 실험 마우스에서 장 GvHD 학년 실험 작업 체인에 콜론의 직렬 미니 내 시경 평가 구현 하 여 고급 수 인정 모델, 설명 하 고 여기에 제시 된 프로토콜에서 검증.

<table><tbody><tr><td>BIOBEAM 2000 감마 조사기</td><td>Gamma-Service Meical GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td> <td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>D8662-6x500ML</td><td></td></tr><tr><td>셈켄 집게(길이: 13cm, 톱니형, 곡선 팁)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11009-13</td><td></td></tr><tr><td>경화 가위(길이: 8.5cm, 직선 팁, 절삭날: 24mm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>R8758-500ML&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>피하 주사 바늘 (26 G)</td> <td>B. Braun Melsungen AG</td><td>4657683</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Sarstedt Ag &</td><td>Co.KG 62,547,254</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro를 가진 세포 여과기; m 메쉬 스크린</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>염화암모늄 (NH4Cl)</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>11209</td><td>ACK 용해 완충액</td></tr><tr><td>성분 에틸렌디아민테트라아세트산 디소듐 염 이수화물 (Na2EDTA)</td><td>Carl Roth GmbH & Co.KG</td><td>8043.2</td><td>ACK 용해 완충액</td></tr> 성분 <tr><td>중탄산칼륨 (KHCO3)</td><td>Merck KGaA</td><td>1,048,540,500</td><td>ACK 용해 완충액</td></tr><tr><td>CD90.2 MicroBeads, 마우스</td><td>Miltenyi Biotec GmbH</td><td>130-049-101</td><td>T 세포 고갈된 골수 세포를 분리하기 위한 자석 세포 분리</td></tr><tr><td>Pan T 세포 분리 키트 II, 마우스</td><td>Miltenyi Biotec GmbH</td><td>130-095-130</td><td>비장 T 세포를 분리하기 위한 자석 세포 분리</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.2 항체 (clone: 104; lot: B252126; RRID: AB_493731)</td><td>Biolegend</td><td>109822</td><td></td></tr><tr><td>Pacific Blue anti-mouse CD3 항체 (clone: 17A2; lot: B227246; RRID: AB_493645)</td><td>Biolegend</td><td>100214</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-mouse CD4 항체 (clone: GK1.5; lot: B225057; RRID: AB_312691)</td><td>Biolegend</td><td>100406</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-mouse CD45.1 항체 (clone: A20; lot: B217246; RRID: AB_1134168)</td><td>Biolegend</td><td>110730</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 anti-mouse CD8a 항체 (clone: 53-6.7, lot: B247008; RRID: AB_312753)</td><td>Biolegend</td><td>100714</td><td></td></tr><tr><td>여과된 소 세럼&nbsp;</td><td>Pan Biotec</td><td>P40-47500</td><td>FACS 완충액 성분&nbsp;</td></tr><tr><td>96웰 폴리스티렌 V-바닥 플레이트</td>: <td>Greiner Bio-One</td><td>651201</td><td></td></tr><tr><td>폴리스티렌 둥근 바닥 튜브(5mL)</td><td>Falcon</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>BD LSRFortessa II 유세포 분석기</td><td>BD Bioscience Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 내부가 있는 인슐린 주사기 (30 G)</td><td>BD</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>Oxy Vet Oxymat 3</td><td>Eickemeyer</td><td></td><td>산소 농축기&nbsp; 마취용</td></tr><tr><td>NarkoVet&nbsp;</td><td>Eickemeyer</td><td>213062</td><td></td></tr><tr><td>플렉시글라스 챔버&nbsp;</td><td>Eickemeyer</td><td>214620</td><td></td></tr><tr><td>직선 전진 망원경</td><td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>64301 AA</td><td>대장내시경</td></tr><tr><td>검사 보호 및 검사 덮개를</td> 위한 실험 설정의 일부 <td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>61029 C</td> 작업 채널이 있는 <td>대장내시경</td></tr><tr><td>검사 칼집</td> 실험 설정의 일부 <td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>61029 D</td><td>대장내시경</td></tr><tr><td>검사 생검 겸자</td><td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>61071 ZJ&nbsp;</td><td>대장내시경 검사를 위한 실험 설정의 일부</td></tr><tr><td>&nbsp; 175와트 SCB 크세논광원</td><td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>20132120</td><td>대장내시경</td></tr><tr><td>광섬유 광 케이블</td><td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>495 NL</td><td>대장내시경 검사 실험 설정의 일부</td></tr><tr><td>이미지 1 S3 카메라 헤드</td><td>KARL STORZ SE & Co</td><td>KG 22220030</td><td>대장내시경 검사 실험 설정의 일부</td></tr><tr><td>이미지 1 SCB 카메라 제어 장치</td><td>KARL STORZ SE & Co KG</td><td>22200020</td><td>대장내시경</td></tr><tr><td>LCD 모니터</td><td>Olympus</td> 실험 설정의 일부 <td>OEV181H</td><td>대장내시경</td></tr><tr><td>검사 Forane / Isofluran</td><td>AbbVie Inc.를</td> 위한 실험 설정의 일부입니다.<td>B506</td><td></td></tr><tr><td>포름알데히드 용액 37 %</td><td>Carl Roth GmbH & Co.KG</td><td>7398.1</td><td></td></tr><tr><td>5.0 mL 디스펜서 팁&nbsp;</td><td>에펜도르프 AG</td><td>30089456</td><td></td></tr></tbody></table>

장 이식-비교-호스트 질병 및 라이브 쥐에서 미니 내 시경 평가의 유도

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

급성 이식-비교-호스트 질병 (GvHD) 가장 심각한 합병증을 환자 이전 수용자 조 혈 줄기 세포 이식 (여 보세요-HCT) 얼굴 나타내고 빈약한 임상 결과와 자주 연결 됩니다. 예를 들어, GvHD 발현 피부의 설립된 면역 진압 치료에 일반적으로 반응 및, 따라서, 복용 하지 치명적인 코스, 존재와 용기, 중간-낮은 부분 중 특히 장 GvHD의 강도 강하게 승부를 하 고 전반적으로 급성 GvHD. 치료 옵션을 가진 환자의 생존은 본질적으로 고전 면역 진압 요원 양보만 적당 한 질병 완화 효과. 따라서, 조직 상주 면역 폭포에 대 한 상세한 지식을 장 microbiota에 변화와 stromal 응답, 그리고 장 GvHD 발병 후 사전 이벤트 및 기본 메커니즘을 이해 필요가 긴급의 병 인 혁신적인 치료 옵션을 개발 하 고. GvHD의 murine 모델 식별 하 고 기능적으로 평가 하는 분자와 상 장 GvHD 운전 경로 자주 고용 된다. 그러나, 구체적으로 모니터링 하 고 시간이 지남에 장 염증 평가 수단 본질적으로 부족 때문에 평가 하 고 급성 GvHD 학년 설립된 점수는 정기적으로 오히려 조직의 GvHD를 반영 하는 다양 한 매개 변수 구성 발현입니다. 장 GvHD의 상세한 평가를 연구 함으로써 본질적으로 경도 제외 안락사 마우스를 사용 하 여 제한 되었습니다 (즉, 운동) 주어진된 실험 조건 하에서 저 승 구획의 분석 (예를 들어, 항 체 중재 proinflammatory cytokine의 봉쇄) (즉, vivo)에서 살아있는 쥐에서. 여기에 설명 된 여 보세요 HCT 취급 생쥐의 원심 결 장의 미니 내 시경 현장 평가 수 장의 염증과 b)에서 다운스트림 분석에 대 한 조직 샘플을 수집 하는 옵션의 다양 한 측면의 상세한 거시적인 평가 a)를 관측 기간 동안 다양 한 시간 포인트. 전반적으로, 미니 내 시경 접근 전 임상 비 침 투 적인 모니터링 및 평가 장 GvHD의 주요 사전 제공.

변의 장 GvHD 관련 원심 콜론의 미니 내 시경 평가 설명 하는 현재 프로토콜 설립 이었고 심한 급성 GvHD 모델의 조직 유도 이전 대상이 쥐에. 이 연구에서는 사용 하는 완전히 모델 시스템 어떤 BALB/c에서 마우스 했다 치명적 반구, T-세포 고갈 수용자 골 수 이식에 의해와GvHD 유도 alloreactive C57BL/6 c d 3의 행정에 의해 일치 하지 않는 MHC 클래스 + T 림프 톨. T-세포 고갈 골 수 세포와 비장 T 세포 GvHD 유도 자력 분리에 의해 순화 되었다. 이러한 세포 인구의 순도, cytometry에 의해 결정 되었다 및 정화 과정의 대표적인 결과 그림 1, 총 골 수 세포에서 T 세포의 충분 한 고갈 및의 일관 된 농축에에서 표시 됩니다. 비장-파생 CD3+ T 세포 이전에 그들의 전송 전에 방사능된 쥐. <strong class="xfi...

여기, 선물이 수용자 조 혈 줄기 세포 이식에 설명 합니다 및 원심 콜론의 반복적인 미니 내 시경 평가 존재, 특성, 그리고 라이브 내 저 승 염증의 심각도 대 한 현장에서 프로토콜 쥐 장 이식-비교-호스트 질병에서 고통.

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

살아있는 마우스에 있는 결장의 미니 내시경 평가는 충진성, 조혈 줄기 세포 이식에 급성 그래프 대 숙주 질병, GvHD의 장 발현을 조사하기 위한 중요한 실험적인 지원을 제공합니다. 급성 GvHD 관련 대장염의 비침습적 평가는 금 본위제 조직 병리학의 작업 대체품으로 기능할 수 있으므로 조직 표본을 불필요하게 얻기 위해 반복되는 동물 희생을 렌더링합니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 후 베라 Buchele 될 것입니다.수령인 BALB/c 마우스의 총 신체 조사 후 하루, 깨끗한 작업 칼집에 대한 경향 위치에 CD-45.1 라이브 5B6 SJL 기증자 마우스를 배치하고, 하나의 아킬레스 건에서 모피를 들어 올리기 위해 심킨 포셉의 13cm 곡선과 톱니 티드 팁을 사용합니다. 직선 팁으로 강화 된 8.5cm 미세 가위를 사용하여 집게와 발 뒤꿈치 사이에 피부를 절개하고 절개를 추리하여 뒷다리에서 피부와 털을 제거합니다. 피부가 뒷두부에서 제거되면 각 엉덩이, 발목 및 무릎 관절을 잘라냅니다.모든 뒷다리의 허벅지와 생크를 얼음 위에 PVS로 채워진 92mm 페트리 접시에 넣고 각 뼈에서 가능한 한 많은 근육을 조심스럽게 제거하여 청소된 각 대퇴골과 경골을 젖은 얼음에 있는 멸균 RPMI 1640 배지의 50mL 튜브로 옮겨 넣습니다. 골수를 분리하려면 한 번에 하나의 뼈를 신선한 RPMI 1640 배지로 채워진 새로운 92mL 페트리 접시로 옮기고 메스를 사용하여 각 뼈의 끝을 잘라냅니다. 다음으로, 26게이지 바늘을 장착한 1mL 주사기를 사용하여 1mL의 신선한 배지로 뼈를 한 번에 1mL의 신선한 배지로 플러시하여 5mL의 배지를 포함하는 50mL 수집 튜브로 플러시한다.모든 뼈가 플러시되었을 때, 부스러기 골수 조각을 여러 번 부드럽게 피펫하여 40 마이크로미터 메쉬 스크린 셀 스트레이너를 통해 세포를 새로운 50mL 수집 튜브로 필터링하기 전에 단일 셀 서스펜션을 생성합니다. 원심분리에 의해 세포를 펠렛하고 실온에서 3분 동안 염화칼륨 용해 버퍼의 5mL에서 세포를 다시 중단한다. 인큐베이션의 끝에서, PVS의 10 mL로 반응을 중지하고 세포를 다시 원심 분리합니다.계산을 위해 2mL의 신선한 PVS에서 펠릿을 다시 중단하고, 다운스트림 흐름 사이토메트릭 분석을 위해 6회 10번을 제6세포 알리쿼트에 따로 둡니다. 다음으로, 제조자의 지시에 따라 골수 단일 세포 현탁액으로부터 CD90.2 양성 T 세포를 자기적으로 고갈시키고, T 세포 고갈 된 용액의 6 세포 알리쿼트의 1회 10을 제쳐 놓고 세포 순도 및 분해 후 분해 후 의 하류 흐름 세포 측정 분석을 위해 시판되는 세포 정화 키트를 사용합니다. 이어서, 30게이지 바늘을 장착한 1mL 주사기를 사용하여 각 조사 받는 동물의 정맥 부비동의 소리항 공간에 정맥내100 마이크로리터에서 제5 T 세포 고갈된 골수 세포에 5배 10회 주입한다.다음 날, 기증자 동물에서 수확한 비장을 50mL 수집 튜브에 40 마이크로미터 메쉬 스트레이너에 넣고 주사기 플런저를 사용하여 스트레이너를 통해 비장 조직을 튜브로 누릅니다. 스트레이너와 플런저를 PVS로 세척하여 모든 비장 구종을 수집하고 원심분리로 세포를 펠렛합니다. 적혈구 용해가 입증된 후, 백혈구를 다시 중단하고, 다운스트림 흐름 세포 분석용 6회 10번을 제6세포 알리쿼트로 따로 둡니다.총 비장세포로부터의 총 CD3 양성 T세포 절연의 경우 제조업체의 지시에 따라 시판되는 세포 정화 키트를 사용하고, 분리 전후의 세포 순도 및 조성물의 다운스트림 흐름 세포 측정 분석을 위해 양성 셀 분획으로부터 10~6번째 CD3 양성 T-셀 알리쿼트를 1회 따로 따로 설정한다. 이어서, 각 수신자 마우스의 소리항 공간에 정맥내적으로 PVS의 100 마이크로리터에 제5 내5개의 내소활성 CD3 양성 T 세포에 7회 10회 주입하여 GvHD를 유도한다. 탈색 대장 부위의 미니 내시경검사에 의해 GvHD 관련 병변을 채점하려면, 한 손으로 꼬리 뿌리 바로 위에 받는 동물의 꼬리를 들어 올리고, 다른 손으로 항문들을 통해 직장에 내시경을 조심스럽게 삽입한다.공기 스트림은 대장 루멘을 팽창하는 동안, 천천히 조심스럽게 내시경을 복부 방향으로 앞으로 이동합니다. 대장 내시경을 피하기 위해 이 포지셔닝을 돕기 위해 라이브 비디오 화면을 사용하여 루멘의 중간 부위에 내시경을 유지하십시오. 비디오 스트림을 기록하고 염증을 채점하기 시작하여 그림과 같이 매개 변수를 채점하여 결장의 GvHD 관련 염증을 평가합니다.점수점이 있는 경우 내시경을 부드럽게 약간 앞뒤로 이동하여 다양한 매개 변수를 평가합니다. 매개 변수 투명도 및 대변 일관성을 평가하기 위해 내시경을 대장 벽과 관련하여 더 넓은 거리에서 배치합니다. 병변의 세분성과 혈관을 평가하기 위해 내시경을 식민지 벽에 근접하게 배치하고 내시경 의 끝으로 대장 벽에 잘 투하된 장력을 신중하게 적용합니다.점수 매기기 프로세스가 완료되면 기록을 중지합니다. 대조군과 비교하여, 항생성 조혈 세포 이식은 수용자 동물에서 임상 GvHD 점수를 점진적으로 증가와 함께 전신 GvHD 표현형의 재현 가능하게 강력한 유도를 생성한다. 이러한 미니 내시경 평가 기준은 탈모 결장에서 장 GvHD-질병 관련 병변의 정확한 설명, 채점 및 채점 파라미터에 대한 알로 반응 중심의 대장염 점수 파라미터의 맥락에서 이전에 보고된 syngeneic 대장염으로부터 특별히 조정되었다.실제로, 미니 내시경 기반 채점 시스템은 본질적으로 GvHD가 없는 대조마우스로부터 장 염증의 심각한 징후를 가진 기증자 림프구 수신 마우스의 쉬운 차별을 가능하게 합니다. 대조적으로, 대조마우스의 결장 조직은 대장염의 미니 내시경 검출 가능한 징후의 가상 부재와 합의하여 염증의 온화한 조직 병리학 적 징후를 표시하지 않았다.더욱이, 미니 내시경 및 조직 병리학적으로 평가된 대장염 활동과 전신 GvHD 점수 사이의 상관 관계 연구는 미니 내시경 학적으로 3 개 이하의 일부 점수를 안정적으로 조직 병리학 적등급 등급에서 얻은 중상 에서 높은 등급의 GvHD 관련 대장 염증 점수의 부재를 예측한다는 것을 보여줍니다. 또한 내시경 평가된 장 GvHD의 심각도는 전신 GvHD 질병 활성과의 상관관계를 나타낸다. 대장 염증의 미니 내시경 평가 결과를 표준화하고 시간이 지남에 따라 다른 마우스와 실험에 걸쳐 비교성을 보장하기 위해, 정의 된 해부학 부위를 점수를 위해 선택되어야한다.대장 염증을 채점하는 것 외에도 미니 내시경 설정 내의 내장 작업 채널은 표준 조직 병리학과 같은 다양한 다운스트림 분석에 적용되는 보기 유도 조직 생검을 검색 할 수 있습니다. 미니 내시경 검사의 비침습적 특성으로 인해 급성 GvHD 관련 대장염은 거의 언제든지 동일한 동물 내에서 반복적으로 평가될 수 있으므로 장 GvHD에 매혹적인 통찰력을 얻을 수 있습니다.

induction-intestinal-graft-versus-host-disease-its-mini-endoscopic

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마우스 작은 창자 이식 모델은 면역 거부하고 화면의 새로운 immunosuppressive 약물 mechanismes을 연구하는 중요한 도구로 인식되었습니다. 그러나이 모델은 관련된 기술이 매우 기술적으로 도전하기 때문에 사용하는 제한됩니다. 이제 우리는 수정 기법을 소개합니다.

마우스에 작은 창자 이식

손쥐 골수 이식은 인간에 이식 - 대 - 호스트 질병에 관한 면역 메커니즘을 연구 할 수있는 널리 사용되는 기술이다. T 세포 거래 패턴을 모니터링 할 수있는...

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em&gt; 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용&gt; T 셀 모니터링

작은 창자 이식은 되돌릴 장 실패 환자에 대한 인정 치료 옵션이되었습니다. 쥐의 orthotopic 작은 창자 이식 우리의 실험 모델은 장 이식을 복잡하게 기본 immunologic과 염증 프로세스를 처리 할 수​​있는 신뢰할 수있는 도구로 제공하고 있습니다.

쥐 Orthotopic 작은 창자 이식

이 비디오는 동종 조혈모세포와 GvHD 유도 비장 동종성 T 림프구를 사용하여 치사량에 방사선 조사를 받은 마우스에서 장 이식편대숙주병(GvHD)의 유도를 보여줍니다. 이 프로토콜은 중증 급성 장 GvHD 모델을 확립하여 질병의 메커니즘을 이해하고 혁신적인 치료 옵션을 개발하는 데 도움이 됩니다.

동종 골수 및 비장 세포 이식을 통한 마우스 모델에서 이식편 대 숙주 질환 유도

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

우리는 단단한 내시경을 사용하여 마우스의 결장 병리학 치료를 위한 치료제의 효능을 종단적으로 모니터링하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 살아있는 마우스에서 개별 종양의 치료 반응을 특성화하고 잠재적인 질병 재발을 모니터링하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다.

라이브 마우스의 직렬 내시경 이미징을 사용하여 소장 병변에 대한 새로운 치료제의 효능의 비 침습적 평가

여기에서는 syngeneic CD4+CD45RBhigh T cell을 T 및 B cell 결핍 수용자로 이식하여 마우스에서 결장 염증을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. 임상적 및 조직병리학적 특징은 인간의 염증성 장 질환을 모방합니다. 이 방법을 사용하면 결장 염증의 시작과 질병의 진행에 대한 연구를 할 수 있습니다.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

여기서, 우리는 xenogeneic 이식편 대 숙주 질환(xenoGVHD) 모델에서 질병을 유도하고 점수를 매기는 프로토콜을 제시한다. xenoGVHD는 인간 T 세포의 면역 억제를 연구하는 생체 내 모델을 제공한다. 추가적으로, 우리는 면역 억제를 정량화하는 공구로 디지털 PCR를 가진 조직에서 인간 적인 T 세포를 검출하는 방법을 기술합니다.

디지털 PCR을 사용하여 마우스 조직에서 인간 T 세포의 Xegeneic Murine 모델 및 정량화에서 이식편 대 숙주 질환의 유도 및 채점

여기에서, 우리는 화학요법 유도한 점막염의 모형을 사용하여 소장 상해 및 보상 과증식의 중요한 종점 그리고 증식 마커를 설치하는 프로토콜을 제시합니다. 우리는 세포 주기 특정 마커를 사용하여 작은 장 무게, 토굴 깊이 및 융모 높이를 엔드포인트로 사용하여 증식 세포의 검출을 입증합니다.

화학요법 유도점막염의 마우스 모형을 사용하여 작은 장 상해 그리고 적응을 평가하기 위하여 중요한 종점 및 증식 마커

유전 적 감수성, 점막 면역 및 장내 미세 생태 학적 환경의 상호 작용은 염증성 장 질환 (IBD)의 발병 기전에 관여합니다. 이 연구에서는 IL-10 결핍 마우스에 분변 미생물 이식을 적용하고 결장 염증 및 심장 기능에 미치는 영향을 조사했습니다.

인터루킨 10-결핍 마우스 모델에서 분변 미생물 이식의 치료 평가

이 프로토콜은 이식 거부 반응에 대한 약물 개입의 시간 경과 평가를 위해 회장루를 사용한 쥐 기반 장 이식 모델을 설명합니다.

종단 예후 평가를 위한 외부 회장루를 사용한 장 이식의 쥐 이식 거부 반응 모델

학습하세요 생쥐에서 미니 내시경을 이용한 장 이식-대-숙주 질병 관련 결장 염증 평가 방법을. 비침습적 반복 평가로 조직 채취 없이 장 건강을 모니터링할 수 있습니다.

장 이식-비교-호스트 질병 및 라이브 쥐에서 미니 내 시경 평가의 유도

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