Name: 절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: 배우세요 E13 마우스 배아 신경 줄기 세포 절단 및 배양 기법을 통해 신경 발생과 줄기 세포 생물학을 연구하는 방법을 알아보세요. 이 프로토콜은 높은 세포 수율과 신경구 형성을 제공합니다.

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이 작품은로 양 연구소에 의해 지원 되었다.

모든 수술과 동물에 대 한 절차로 양 연구소, 테헤란, 이란 동물 윤리 위원회에 의해 승인 되었다.
1. 버퍼 (HEPES-MEM), 세포 배양 및 세포 배양 배지를 세척 하는 수술 기구 준비
<ol><li>압력가 마로 소독 그들 일상적인 소독 지침에 기반 하 여 수술 도구 (가 위, 메스 블레이드 핸들 및 집게)을 소독.</li>
	<li>HEPES 메모리 버퍼의 적절 한 볼륨을 준비 (약 100 mL 각 임신 쥐에 대 한 충분 하다). HEPES 메모리 버퍼에 항생제 (10% 페니실린/스)의 높은 농도 추가 합니다. 항생제의이 농도 미생물 오염의 위험을 줄이기 위해 필요 합니다.<ol>
<li>HEPES 메모리 버퍼를 준비 하려면 메모리 (최소 필수 매체), 100 mL를 HEPES 분말의 0.5958 g을 추가 하 고 잘 섞으십시오. 7.3-7.4에 pH를 조정 하 고 매체 0.22 μ m 필터를 사용 하 여 필터링.</li>
	</ol>
</li>
	<li>NSC 중간 포함 neurobasal 매체 (NB) 20 ng/mL EGF, 10 ng/mL bFGF, 보충 1 %100 x N2 보충 또는 1 %B27 보충 (비타민 A) 없이 1 U/mL 헤 파 린, 1%, L-글루타민, 1% 비 필수 아미노산 (NEAA), 1% 페니실린/스, 그리고 0.1 m m β-mercaptoethanol입니다.</li>
</ol>2. 동물 수술과 마이크로 해 부
<ol><li>임신의 13번째 날에 임신 마우스 anesthetize (여기, 사용 BALB/c 스트레인 세 4 개월) 케 타 민-xylazine의 복 주입, 100 mg/kg, 10mg/kg으로 체중 각각.<ol>
<li>동물의 발에 고통 스러운 자극 (예를 들어, 집게와 핀치)을 발휘 하 여 깊은 마 취를 확인 하 고 아무 통증 반사 때 자 궁 경부 전위에 의해 동물을 희생.</li>
	</ol>
</li>
	<li>깨끗 하 고 살 균 70% 에탄올을 분사 하 여 복 부의 피부.</li>
	<li>복 부에 피부를 제어 하 고 피부와 기본 근 복 강 및 자 궁 뿔 밝히기에 위로 잘라.<ol>
<li>배아를 포함 하는 위, 자 궁 뿔을 제거 하 고 차가운 HEPES 메모리 버퍼의 25 mL를 포함 하는 50 mL 원뿔 튜브로 그들을 전송.</li>
		<li>층 류 흐름 후드 원뿔 튜브를 배치 하 고 후드 뚜껑을 열고. 튜브 및 린스 3 번 충분 한 양의 파편과 혈액을 제거 하는 신선한 감기 HEPES 메모리 버퍼에서 밖으로 자 궁 뿔을가지고.</li>
	</ol>
</li>
	<li>10 cm 배양 접시 찬 HEPES 메모리 버퍼의 7-10 mL를 포함 하는 자 궁 조직을 전송 합니다. 자 궁 뿔 찬 HEPES 메모리 버퍼의 7-10 mL를 포함 하는 새로운 요리를 좋은 위 및 배아를 사용 하 여 엽니다. 이제 마이크로 해 부 작업에 대 한 해 현미경 배아와 10 cm 접시를 넣어.</li>
	<li>강철 메스 블레이드 핸들에 팁을 추진 하 여 25-27 G 주사기 바늘의 끝을 구 부. 팁은 70-90 °의 각도에서 구 부 러 때까지 바늘의 끝을 구 부. 바늘의 끝에 벤드를 보고 해 현미경 바늘의 팁을 확인 하십시오. 참고: 자연스럽 게, 배아는 접시에 측면 위치가 있다.</li>
	<li>그들의 위치를 변경 하지 않고 태아의 몸과 목 좋은 집게로 누른 다음 태아 머리의 정면 온 바늘 팁의 구부러진된 부분을 삽입 합니다. 작은 출혈 또는 혈 병 거기 있을 것 이라고.<ol>
<li>바늘 끝으로 이동 합니다. 볼록한이 마 쪽으로 그리고 머리의 뒤쪽 내부 구부러진된 부분을 실행 하는 동안 피부와 두개골을 극복 하 고 기본 두뇌를 손상 하지 않는 있는지 확인 하십시오.</li>
		<li>두뇌를 폭로 하 고 뇌 아래 지역에 피부의 측면 쪽에서 바늘을 삽입을 옆으로 바늘 끝으로 피부를 밀어. 해 부 두개골에서 나와 그것을 추진 하 여 두개골에서 뇌를 제거 합니다.</li>
		<li>두뇌 꾸준한 곡선된 겸 자 사용 하 고 마이크로-가 위를 사용 하 여 노출 절 예 하 각 반구의 피 질을 잘라.</li>
		<li>두뇌를 보유 하 고 신경 줄기 세포 매체를 포함 하는 15 mL 원심 분리기 관으로 해 부 절 예 하 장소. 절 예 하 그것의 중간과 옆 부분과 명확 하 게 표시 됩니다.</li>
		<li>이 절차를 반복 하 여 모든 두뇌 마이크로 해 부 했습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>튜브의 하단에 대 한 피 펫 팁을 배치 하 여 해 부 절 예를 잘라. 서 스 펜 션 4 ~ 5 배는 단일 세포 현 탁 액에 대 한 조직 헤어 위아래로 플라스틱<ol>
<li>원심에서 110 x g 5 분 제거에 대 한 정지는 상쾌한 고 다시 0.05% 트립 신-EDTA의 1 mL에 셀을 일시 중단.</li>
		<li>10 분 동안 37 ° C에 세포 현 탁 액을 품 어 고 트립 신 활동 중지 콩 트립 신 억제제 (25 µ g/mL)의 해당 볼륨을 추가 합니다. 아래로 트립 신이 완전히 활성화 되었는지 확인에 세포 현 탁 액 플라스틱</li>
		<li>5 분은 상쾌한 제거를 다시 완전 한 NSC 매체의 1 mL에 셀을 일시 중단 하 고 셀의 수를 계산에 대 한 110 x g에 세포 현 탁 액을 원심.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적당 한 크기 조직 배양 플라스 크에 NSC 매체에서 세포 (2 x 105 셀/mL) 접시. 5 mL 전송 T25, T75 및 T175 플라스 크를 40 mL 20 mL. 참고: Neurospheres 5% CO2습도 인큐베이터에서 37 ° C에서 3 일 문화 후 표시 됩니다. 6-7 일 후 구체 150-200 µ m 직경에서을 측정 해야 하 고 서브 컬쳐에 대 한 준비가 될 것입니다. 7 일 후 1 백만 주 NSCs를 배양 하 여 셀의 수는 3-4 백만에 증가 합니다.</li>
</ol>3. trypsinization 및 Neurospheres의 뿌리고
<ol><li>하위는 neurospheres, 하려면 원심 분리기 튜브에 일시 neurospheres와 매체를 전송 하 고 5 분 동안 110 x g에서 원심는 상쾌한 다음 삭제 합니다. 0.05% 트립 신-EDTA의 1 mL을 추가 하 고 10 분 동안 37 ° C에서 품 어.<ol>
<li>부드럽게 최대 콩 트립 신 억제 물 및 피 펫은 neurospheres 사용 하 여 트립 신을 비활성화 하 고 확인까지 그들 단일 셀.</li>
	</ol>
</li>
	<li>110 x g 5 분 동안에 세포 현 탁 액을 원심는 상쾌한 삭제 하 고 다시 NSC 매체의 1 mL에 셀을 일시 중단. 이 세포는 다음 하위 또는 Laminin에 문화에 대 한 준비와 폴 리-L-Ornithine 코팅 고급 실험에 대 한 표면.</li>
	<li>다음 subculture에 대 한 새로운 플라스 크 (수행 단계 2.8)에 NSCs를 전송 하 고 NSC 매체에 문화. 신경 감 별 법 문화 NSCs bFGF와 폴 리-L-Ornithine Laminin에 EGF의 부재에서 NSC 매체에서의 유도 대 한 코팅 판 (그림 1B).</li>
	<li>코팅 절차 완전 셀 문화 접시에 충분 한 양의 희석된 폴 리-L-ornithine 솔루션 (25 µ g/mL)를 추가 하 여 셀 문화 표면 코트이 고 2 h 37 ° C에서 품 어.<ol>
<li>폴 리-L-ornithine 발음 하 고 PBS 가진 잘 2 x 린스. 완전히 문화 표면 영역을 커버 하 고 셀을 도금 하기 전에 2 h. Aspirate는 laminin에 대 한 37 ° C에서 품 어 또는 접시 필요할 때까지 4 ° C에서 저장 5 µ g/mL laminin의 충분 한 볼륨을 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 교류 Cytometry 분석 결과
참고: NSCs, 신경 그리고 glial 세포의 특정 마커 표현의 교류 cytometry 분석 결과13측정할 수 있습니다. 프로토콜 메 논 외.를 사소한 수정13 을 기반으로 합니다.
<ol><li>해리 neurospheres 또는 코팅된 접시에서 교양된 NSCs trypsinization 그들 단일 세포를 분리. 고정 버퍼 (2 %paraformaldehyde (PFA) PBS에)의 500 µ L의 세포 현 탁 액 (약 1 백만 셀은 충분히 얼룩에 대 한 각 항 체와 함께), 100 µ L을 추가 하 고 15 분 동안 RT에 튜브를 품 어.</li>
	<li>워시 튜브를 5 분에 대 한 110 x g에서 원심 분리기 1 mL의 PBS 추가 하 여 셀 삭제는 상쾌한 고 튜브에 약 100 µ L를 떠나 셀 펠 릿 resuspend.<ol>
<li>트윈-20 세포를 permeabilize (0.7 %PBS 트윈-20) 세포 현 탁 액의 100 µ L에 트윈 20 버퍼의 500 µ L을 추가 하 여. 궤도 셰이 커 (100 rpm)에 15 분 동안 RT에 튜브를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>원심 분리와 PBS 세척을 반복 합니다. 제거는 상쾌한 튜브에서 완전히, 펠 릿만을 남겨두고. 100 µ L 희석된 주 항 체 (안티 마우스 βtub III, GFAP와 1: 200 농도에서 항 체 Nestin 토끼)의 1% 소 혈 청 알 부 민, 혈 청 10% (염소 혈 청) 및 0.5%를 포함 하는 희석 버퍼에 추가 트윈-20 PBS와 부드럽게 혼합 triturate. 궤도 통에 30 분 동안 RT에 튜브를 품 어.</li>
	<li>PBS 한번 셀을 세척 하 고는 상쾌한 튜브에서 완전히 제거, 펠 릿만을 남겨두고.<ol>
<li>100 µ L 희석된 이차 항 체의 추가 (안티 염소 토끼 FITC 활용 1: 500 농도에) PBS 셀 펠 릿을 부드럽게 혼합 하 triturate. 어둠 속에서 통에 30 분 동안 RT에 튜브를 품 어.</li>
		<li>워시 샘플 2 x PBS와 흐름 버퍼를 한번 누른 다음 씻어. 원심 및 다시 교류 cytometer 분석 흐름 버퍼의 약 150 µ L에서 세포를 일시 중지.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언.

신경 줄기 세포의 적합 한 소스를 사용 하 여 하는 것은 신경에 대 한 매우 중요 합니다. 신경 줄기 세포는 태아 두뇌의 다른 지역에서 수확 될 수 그리고 그들은 신경 그리고 glial 세포의 특정 유형을 생성할 수 있습니다. 성숙한 신경 그리고 glial 세포를 생성 하도록 유도 하는 신경 줄기 세포의 분화의 유도 대 한 몇 가지 방법이 있다. 수많은 보고서를 나타내는 특정 문화권 조건과 영양 요소 연대에서 그들은 신경14, oligodendrocytes15,16 및 이다17체 외에을 생성할 수 있다. 문학에서 데이터에 따라, 예 절 하 억제 및 흥분 성의 뉴런 GABAergic18 와 dopaminergic19 종류 등의 다른 형식을 생...

신경 줄기 세포 (NSCs) 성인과 태아 두뇌의 다른 지역에 있으며 그들은 신경 그리고 glial 세포1의 다른 종류를 생성 하는 경향이 있다. 2 성인 포유류 두뇌 subventricular 영역 및 태아 두뇌에 예 절 하는 NSC 풍부한 지역3. 개발 두뇌 절 예 하는 대뇌 피 질의 수 및 특히 GABAergic 수3의 대부분을 제공합니다. 또한 더 적은 침략 적 방법이 있다 미 발달 줄기 세포 (ESCs)에서 신경 줄기 세포 생성에 대 한 또는 동물에 대 한 수요 감소 유도 만능 줄기 세포 (Ipsc) 사용. ESCs 또는 Ipsc NSCs를 생성 하는 것이 가능한4,5는 사실에도 불구 하 고 그것은 몇 가지 장단점이 성인 또는 태아 뇌6,7, 신경 줄기 세포의 분리에 비해 8. ESCs와 신경 고기 향해 Ipsc의 분화 유도 대 한 프로토콜은 항상 시간과 비용을 소모 하 고 성공 (70-80 %Nestin 양성 세포)5 속도 낮은 동물 뇌 (NSCs의 직접 절연 비교 이상 99 %Nestin 양성 세포)9. 또한, 줄기 세포는 여러 구절10,11후 그들의 유전적 안정성과 차별화 추세를 잃게됩니다. 비록 NSCs로 체세포의 직접 변환에 대 한 다른 새로운 보고서는,이 세포 유전자 조작 하 고 모든 랩12에 쉽게 액세스할 수 있습니다. 따라서, 거기는 여전히; 동물 뇌에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 큰 수요가 그것은 수술 기법을 개선 하 여 동물 사용의 수량을 줄일 수 있습니다. 수술 시간을 단축 하 고 기술을 개선, 그것은 손상에서 세포를 유지 하 고 각 동물에서 NSCs의 가장 높은 속도 얻을 수 있습니다.
여기, 우리는 마우스 E13 태아 뇌에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 단순 하 고 재현할 수 기법을 소개합니다.

<table><tbody><tr><td>15 mL 튜브</td><td>Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Adson 펜치, 12 cm, 직선</td><td>WPI</td><td>14226</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>접시 10cm&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>드레싱 펜치, 12.5 cm, 직선</td><td>WPI</td><td>15908</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 핀셋, 11 cm, 직선</td><td>WPI</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Merck</td><td>100983&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>글루타메이트</td><td>시그마&nbsp;</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 FITC 결합 2차 항체</td><td>Sigma</td><td>AP307F</td><td></td></tr><tr><td>염소 세럼</td><td>Sigma</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Heparin&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>h3149</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>83264</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>90909C</td><td></td></tr><tr><td>인슐린사이린지와 25-27 게이지 바늘&nbsp;</td><td>SUPA 의료</td><td>A1SNL127</td><td></td></tr><tr><td>라미닌</td><td>시그마&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Sigma</td><td>M2279</td><td></td></tr><tr><td>N2 보충제</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NB 매체</td><td>Gibco</td><td>21103-31</td><td></td></tr><tr><td>비필수 아미노산(NEAA)</td><td>Ca</td><td></td> 및 Mg 없는 Gibco 11140050 <td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>20012050</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>5140122</td><td></td></tr><tr><td>폴리-L-오르니틴</td><td>시그마</td><td>&nbsp; P4957</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 마우스 베타 튜불린-III 항체</td><td>시그마</td><td>T2200</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 마우스 GFAP 항체</td><td>시그마</td><td>G4546</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 마우스 네스틴 항체</td><td>시그마</td><td>N5413</td><td></td></tr><tr><td>메스 핸들 # 3</td><td>WPI</td><td>500236</td><td></td></tr><tr><td>가위 곡선</td><td>WPI</td><td>14396</td><td></td></tr><tr><td>날카로운 직선 가위</td><td>WPI</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>대두 트립신 억제제</td><td>Roche</td><td>10109886001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 플라스크, T25</td><td>BD</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 플라스크, T75</td><td>BD</td><td>353024</td><td></td></tr><tr><td>트윈 20</td><td>시그마</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 가위,&nbsp; 8cm, 스트레이트&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-메르캅토에탄올</td><td>시그마</td><td>M6250</td><td></td></tr></tbody></table>

절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

신경 줄기 세포 (NSCs) multipotent 이며 중앙 신경 시스템 (CNS)의 세 가지 주요 셀 형식을 야기할 수 있습니다. 생체 외에서 문화 및 확장 NSCs의 신경의 기능을 연구 하는 신경에 대 한 셀 및 그들의 상호 작용을 함께 glial 세포의 적당 한 소스를 제공 합니다. 성인 또는 배아 포유류 두뇌에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 몇 가지 보고 된 기술이 있다. NSCs 배아 CNS의 다른 지구에서 격리를 microsurgical 동안, 라이브 및 확장 가능한 줄기 세포의 가장 높은 비율을 얻기 위해 뇌 세포에 피해를 줄이기 위해 매우 중요 하다. 쥐 태아의 뇌에서이 세포의 고립 동안 스트레스 감소를 위한 가능한 방법은 수술 시간의 감소입니다. 여기, 우리 E13 마우스 배아 절 예 하에서 이러한 셀의 빠른 격리 개발된 기술을 보여 줍니다. 수술 절차 포함 절단 정면 온 두개골, 수확 절 예 하 고립 된 두뇌의 기정에서에서 두뇌를 추출 구부러진된 바늘 팁, 태아의 자 궁에서 E13 마우스 배아를 수확 단일 셀 서 스 펜 션을 얻기 위해 NSC 매체에 수확된 조직 그리고 마지막으로 neurospheres를 생성 하기 위해 현 탁 액 문화에서 도금 셀의 분리.

마이크로 해 부, 셀 고립과 Neurosphere 문화. 여기, 우리는 마우스 E13 뇌 미세 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 신속 하 고 효율적인 방법을 제시. 이 문서는 정면 온에 잘 파열을 통해 E13 마우스 배아 두개골에서 전체 뇌를 제거 하는 것을 보여줍니다. 이 방법으로 뇌 영 덜 손상 그리고 두뇌의 다른 부분에서 세포를 분리 가능 합니다. 수확된 셀 NSC 매체 bFGF와 EGF, 존재에 neurospheres를 생성할 수 있으며 그들은 직경에서 150-200 µ m 크기 문화 (그림 1A)에서 7 일 후. Neurospheres는 사용 하 여 0.05 %trypsin / EDTA 그들 Laminin/폴 리-L-Ornithine-코팅 요리에 그들의 문화와 단일 세포 그들은 나뭇가지 처럼 neurite 연장 하 고 7-10 일 후 신경 형...

여기, 전자13 마우스 배아 절 예 하에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 새로운 microsurgical 기술을 소개합니다.

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

이 비디오 프로토콜의 목적은 배아 마우스 신경 줄기 세포 격리 및 문화에 대한 소스와 효율적인 프로토콜을 수립하는 것입니다. 안녕하세요, 저는 메리암 사데기 자데입니다. 저는 로이안 연구소의 세포 및 분자 생물학 석사 학생입니다.오늘 저와 제 동료는 13개의 배아 마우스 신경절 저울에서 신경 줄기 세포를 수확하는 방법을 보여주고 싶습니다. 안녕하세요, 나는 바하레 알리자데 쇼르예스탄입니다. 저는 로이안 생명공학연구소의 줄기세포학과에서 세포및 분자생물학 석사학생입니다.안녕하세요, 나는 레자 데가니 - 바르남카스티입니다. 또한 저는 로이안 연구소에서 세포 및 분자 생물학을 공부하고 있습니다. 외과 적 절차는 자궁에서 각 13 마우스 배아를 수확 포함.두개골에서 뇌를 추출 구부러진 바늘 팁으로 배아의 폰타넬의 전면을 절단. 고립 된 뇌의 미세 해부는 신경절 명성을 수확합니다. 단일 세포 현탁액을 얻기 위해 신경 줄기 세포 배지에서 수확 된 조직의 해리.그리고 마지막으로, 신경 세포를 생성하기 위해 현탁액 배양에서 세포를 도금. 70%에탄올로 살포하여 복부 부위의 피부를 깨끗하고 소독합니다. 피부를 위쪽 복부를 제어한 다음 피부를 잘라내고 가위로 얼굴을 밑줄로 밑줄로 하여 복강과 자궁 뿔을 발견합니다.가위로 배아를 함유한 자궁 경적을 제거하고 25ml의 차가운 HEPES MEM 버퍼를 포함하는 50ml 원뿔 튜브로 옮긴다. 라미날 흐름 후드 아래에 원문 튜브를 놓습니다. 후드 아래 캡을 엽니다.자궁 뿔을 튜브에서 꺼내서 신선한 차가운 HEPES MEM 버퍼의 충분한 부피로 세 번 헹구어 파편과 혈액을 제거하십시오. 자궁 조직을 7~10ml의 차가운 HEPES MEM 버퍼를 함유한 10cm 페트리 접시로 옮춥니까. 미세 한 가위를 사용하여 자궁 뿔을 열고 차가운 HEPES MEM 버퍼의 7 ~ 10 ml를 포함하는 새로운 접시에 배아를 전송합니다.이제 미세 해부 작업을 위해 해부 현미경 아래에 배아와 함께 10cm 접시를 넣습니다. 강철 메스 블레이드 핸들에 팁을 밀어 주사기 바늘의 끝을 구부립니다. 팁이 70~90도 각도로 구부러지때까지 바늘 끝을 구부립니다.해부 현미경 아래 바늘의 끝을 확인하여 바늘 끝에서 굴곡을 확인하십시오. 자연적으로 태아는 이것에 있는 측면 위치가 있습니다. 그들의 위치를 변경하지 않고, 미세 한 포셉으로 배아의 목과 몸을 잡고 배아 헤드의 폰타넬의 앞쪽에 바늘의 구부러진 부분을 깊은 삽입.거

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 동영상은 배아 생쥐의 개발​​ 피질에서 neuroprecursors의 절연에 사용되는 방법을 설명합니다. , 자궁에서 태아를 제거하는 대뇌 피질의 조직을 해부하고, 고립 대뇌 피질을 소화에 대한 절차는 표시됩니다.

마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화

이 비디오 프로토콜은 배아 일 14 마우스 뇌의 ganglionic eminences에서 신경 줄기 세포의 분리 및 확장에 대한 neurosphere 분석의 응용 프로그램을 보여줍니다.

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

척수에서 마우스 배아 motoneurons를 분리의 대체 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 계정에 렉틴은 낮은 친화 신경 성장 인자 수용체 p75NTR에 바인딩할 수있다는 사실이 걸립니다. 이 렉틴과 기반 preplating는 p75NTR에 대한 특정 항체와 비슷한 정화 수 있습니다.

마우스 배아의 Motoneurons의 렉틴 기반 격리와 문화

신경 튜브의 배아 신경 능선의 분리가의 사용을...

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

이 비디오는 쥐 뇌의 굵은 아래 영역에서 신경 줄기 세포를 분리하고 배양하는 과정을 보여줍니다. 그것은 조직을 해부하고, 효소 해리를 일으키고, 분화 인자로 배양하여 성숙한 신경 세포로 발달하는 것을 포함합니다.

Isolation and Culturing of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

이 동영상은 마우스 배아 줄기 세포(mESC)에서 신경전구세포(NPC)를 체외에서 생성하는 방법을 보여줍니다. mESC는 현탁액에서 배양되어 배아체(EB)를 형성한 다음, 부착 배양에서 레티노산 처리를 통해 NPC로 분화하도록 유도됩니다.

마우스 배아 줄기 세포에서 신경 전구 세포를 생성하는 기술

이 동영상은 출생 후 쥐 소뇌에서 줄기세포를 분리하여 신경세포로 분화하는 방법을 보여줍니다. 분리된 세포 현탁액의 줄기세포는 항체로 코팅된 마그네틱 비드를 사용하여 정제되고 배양되어 신경구를 형성합니다. 그런 다음 신경구는 신경 세포를 생성하기 위해 분화 매질에서 유지됩니다.

출생 후 마우스 소뇌에서 줄기세포의 분리 및 신경 세포로의 분화

여기서 우리는 subventricular 영역과 개인 성인 쥐의 치아 이랑 (dentate gyrus)에서, 부착 단층 또는 neurosphere를 하나로서, 신경 전구 세포 배양의 동시 발생에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

하나의 마우스, 두 문화 : 분리 및 성인 신경의 문화가 개인 마우스의 두 신경 인성 영역에서 줄기 세포

이 프로토콜은 무혈청 단층 방법을 사용하여 배아 줄기 세포에서 신경 전구 세포를 생성하는 방법을 자세히 설명합니다. 이러한 전구 세포는 성숙한 신경 세포 유형을 유도하거나 신경 사양 과정을 연구하는 데 사용할 수 있으며 복합 스크리닝을 위한 멀티웰 형식 확장에 적합합니다.

혈청이없는 단층 문화 마우스 배아 줄기 세포의 신경 분화

성체 신경 줄기세포(aNSCs) 확장을 위한 배양 시스템을 구축하면 치료를 위한 aNSC를 검사하고 적용할 수 있습니다. 굳은살하영역(subcallosal zone, SCZ)은 최근 성체 마우스에서 새로운 신경아세포 형성 영역으로 인식되고 있습니다. 여기에서는 SCZ-aNSC의 분리, 확장 및 분화 방법에 대해 설명합니다.

마우스 뇌량 밑 영역에서의 분리 및 성인 신경 줄기 세포의 문화

배우세요 E13 마우스 배아 신경 줄기 세포 절단 및 배양 기법을 통해 신경 발생과 줄기 세포 생물학을 연구하는 방법을 알아보세요. 이 프로토콜은 높은 세포 수율과 신경구 형성을 제공합니다.

절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화

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