Name: Colletotrichum fioriniae 물, 클로 프롬 기반 블루베리와 크랜베리 꽃 추출 물 개발 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 32 s
Description: 학습하세요 Colletotrichum fioriniae 병원균의 생체 분석법을 통해 블루베리와 크랜베리 꽃 추출물이 병원균 발달에 미치는 영향을 실시간으로 평가하는 방법을 배우세요.

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우리는 윌리엄 S. 하인즈, 미스터 부여 크랜베리 연구 기금 뉴저지 블루베리와 크랜베리 연구 협의회, Inc. 지원에 대 한 감사. 우리는 또한 제니퍼 Vaiciunas (지도 꽃 준비), 크리스틴 Constantelos (곰 팡이 문화 및 꽃 준비), 데이비드 존스 (꽃 준비 및 기사), 랭 글 리 Oudemans (꽃 준비, 촬영/사진), 제시 감사 합니다. 린치 (꽃 준비), 록 산 Tumnalis (일반 지원), 그리고 수많은 학생/여름 수련.

<ol><li>Pszczółkowska, A., Okorski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+of+anthracnose+disease+caused+by+Colletotrichum+fioriniae+on+blueberry+in+western+Poland%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">First report of anthracnose disease caused by Colletotrichum fioriniae on blueberry in western Poland.</a> Plant Disease. 100, 2167(2016).</li>
<li>Oudemans, P. V., Caruso, F. L., Stretch, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranberry+fruit+rot+in+the+northeast%3A+a+complex+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Cranberry fruit rot in the northeast: a complex disease.</a> Plant Disease. 82, 1176-1184 (1998).</li>
<li>Damm, U., Cannon, P. F., Woudenberg, J. H. C., Crous, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Colletotrichum+acutatum+species+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Studies+in+Mycology%22%5BJournal%5D)">The Colletotrichum acutatum species complex.</a> Studies in Mycology. 73, 37-113 (2012).</li>
<li>Marcelino, J., Giordano, R., Gouli, S., Gouli, V., Parker, B. L., Skinner, M., TeBeest, D., Cesnik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colletotrichum+acutatum+var.+fioriniae+%28teleomorph%3A+Glomerella+acutata+var.+flioriniae+var.+nov.%29+infection+of+a+scale+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">Colletotrichum acutatum var. fioriniae (teleomorph: Glomerella acutata var. flioriniae var. nov.) infection of a scale insect.</a> Mycologia. 100, 353-374 (2008).</li>
<li>Pennycook, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colletotrichum+fioriniae+comb.+%26+stat.+nov.%2C+resolving+a+nomenclatural+muddle%5BTitle%5D)+AND+%22Mycotaxon%22%5BJournal%5D)">Colletotrichum fioriniae comb. & stat. nov., resolving a nomenclatural muddle.</a> Mycotaxon. 132, 149-154 (2017).</li>
<li>Shivas, R. G., Tan, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+taxonomic+re-assessment+of+Colletotrichum+acutatum%2C+introducing+C.+fioriniae+comb.+et+stat.+nov+and+C.+simmondsii+sp+nov%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Diversity%22%5BJournal%5D)">A taxonomic re-assessment of Colletotrichum acutatum, introducing C. fioriniae comb. et stat. nov and C. simmondsii sp nov.</a> Fungal Diversity. 39, 111-122 (2009).</li>
<li>Wharton, P. S., Diéguez-Uribeondo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Anales+del+Jard%C3%ADn+Bot%C3%A1nico+de+Madrid%22%5BJournal%5D)">The biology of Colletotrichum acutatum.</a> Anales del Jardín Botánico de Madrid. 61, 3-22 (2004).</li>
<li>Prusky, D., Alkan, N., Mengiste, T., Fluhr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescent+and+necrotrophic+lifestyle+choice+during+postharvest+disease+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Quiescent and necrotrophic lifestyle choice during postharvest disease development.</a> Annual Review of Phytopathology. 51, 155-176 (2013).</li>
<li>Milholland, R. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMilholland%2C+RD+%22Compendium+of+Blueberry+and+Cranberry+Diseases%22">Compendium of Blueberry and Cranberry Diseases</a>. , American Phytopathological Society. St. Paul, MN. (1995).</li>
<li>DeMarsay, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Anthracnose+fruit+rot+of+highbush+blueberry%3A+biology+and+epidemiology%22">Anthracnose fruit rot of highbush blueberry: biology and epidemiology</a>. , Rutgers University. New Brunswick, NJ. Dissertation (2005).</li>
<li>Madden, L. V., Yang, X. S., Wilson, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+rain+intensity+on+splash+dispersal+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Effects of rain intensity on splash dispersal of Colletotrichum acutatum.</a> Phytopathology. 86, 864-874 (1996).</li>
<li>Yang, X., Madden, L. V., Wilson, L. L., Ellis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+surface-topography+and+rain+intensity+on+splash+dispersal+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Effects of surface-topography and rain intensity on splash dispersal of Colletotrichum acutatum.</a> Phytopathology. 80, 1115-1120 (1990).</li>
<li>Wharton, P. S., Dickman, J. S., Schilder, A. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+spore+release+by+Colletotrichum+acutatum+in+Michigan+blueberry+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Timing of spore release by Colletotrichum acutatum in Michigan blueberry fields.</a> Phytopathology. 92, 86(2002).</li>
<li>MacKenzie, S. J., Peres, N. A., Timmer, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+citrus+leaves+and+secondary+conidiation+response+to+citrus+flower+extracts+by+non-postbloom+fruit+drop+strains+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Colonization of citrus leaves and secondary conidiation response to citrus flower extracts by non-postbloom fruit drop strains of Colletotrichum acutatum.</a> Tropical Plant Pathology. 35, 333-342 (2010).</li>
<li>Leandro, L. F. S., Gleason, M. L., Nutter, F. W., Wegulo, S. N., Dixon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strawberry+plant+extracts+stimulate+secondary+conidiation+by+Colletotrichum+acutatum+on+symptomless+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Strawberry plant extracts stimulate secondary conidiation by Colletotrichum acutatum on symptomless leaves.</a> Phytopathology. 93, 1285-1291 (2003).</li>
<li>Waller, T. J., Vaiciunas, J., Constantelos, C., Oudemans, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+the+blueberry+floral+extracts+influence+secondary+conidiation+and+appressorial+formation+of+Colletotrichum+fioriniae%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Evidence the blueberry floral extracts influence secondary conidiation and appressorial formation of Colletotrichum fioriniae.</a> Phytopathology. 108, 561-567 (2017).</li>
<li>Gager, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+influence+of+cranberry+floral+wax+on+appressorium+formation+in+Colletotrichum+fioriniae%22">The influence of cranberry floral wax on appressorium formation in Colletotrichum fioriniae</a>. , Rutgers University. New Brunswick, NJ. Masters thesis (2015).</li>
<li>Podila, G. K., Rogers, L. M., Kolattukudy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+signals+from+avocado+surface+wax+trigger+germination+and+appressorium+formation+in+Colletotrichum+gloeosporioides%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Chemical signals from avocado surface wax trigger germination and appressorium formation in Colletotrichum gloeosporioides.</a> Plant Physiology. 103, 267-272 (1993).</li>
<li>Polashock, J. J., Caruso, F. L., Oudemans, P. V., McManus, P. S., Crouch, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+North+American+cranberry+fruit+rot+fungal+community%3A+a+systematic+overview+using+morphological+and+phylogenetic+affinities%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The North American cranberry fruit rot fungal community: a systematic overview using morphological and phylogenetic affinities.</a> Plant Pathology. 58, 1116-1127 (2009).</li>
<li>Miller, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((V-8+juice+agar+as+a+general+purpose+medium+for+fungi+and+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">V-8 juice agar as a general purpose medium for fungi and bacteria.</a> Phytopathology. 45, 461-462 (1955).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

C. fioriniae 응답 꽃 추출 물 (FEs)을 감지 하는 생물 검정 블루베리와 크랜베리 열매에 대 한 부패 pathosystems 개발 했지만 다른 원 예 작물에 쉽게 적용할 수 있습니다. 위의 상세한 프로토콜 포함 하 여, 많은 중요 한 데이터 집합을 얻는 귀중 한 되었지만에 국한 되지 않음: 시간 코스 정보 다양 한 FEs의 존재 곰 팡이 성장 단계에 관련 된 수많은 병원 체의 여러 격리에 FE 효과 추출 기법 비교, C. fioriniae 성장과 분화, 개별 꽃 기관의 평가에 개별 화학 물질의 추출, C. fioriniae FE, 효과 존재 동안에 온도 효과 기후학 종속 왁 스 기사와 꽃 빗 물 효과. 이러한 기술을 사용 하 여 생성 된 데이터 제공 C. fioriniae 생활의 많은 명확 하 게 이해 단계 및 꽃 기간은 병원 체 썩 어 많은 열매의 관리에 중요 한 이유를 부분적으로 보통 또한 있다.
처음에, 모든 꽃은 활성동일 하 게 처리 된-FE, 하지만 추출 과정 전체 꽃을 사용 하 여 쪽으로 이동 했습니다. 꽃 해 부 시간이 소요 되었고 결과 FEs의 bioactivity에 매우 작은 영향을 했다. 그러나, 개별 꽃 기관 수 있고 되어 평가 사용 하 여이 프로토콜, 하지만 신중 해야 합니다로 이동 완전히 꽃 조직 (보충 영화 1, 2.3 단계에 대 한 자세한 주의 사항), macerate이 될 수 있습니다 릴리스 미세한 평가 왜곡 수 있는 철에 곰 팡이-독성/정적 화합물. 등 패스-침략 적 기사 덜 FE (보충 영화 2) 및 rw-FE는 수집의 그들의 용이성으로 인해 더 유리한 지금. 또한, 이러한 추출 기법 생물학적으로 활성 꽃 화학 신호를 얻으려고만 진공 여과 필요 합니다.
모든 기사에 이용 하는 꽃은 일반적으로 0-3 냉장 일전 추출 준비. 이 프로토콜의 도전 FE 회전율 (추출의 저장 장치를 통해 필드 컬렉션)의 시간 관리 이다. 이 여러 소스와 날짜에서 수많은 샘플에 의해 악화 되었다. 냉동된 꽃 해 동된 꽃 표시 악화 및 변색, 실제 정도로 평가 하지 않았습니다. 그러나, 일단 물 기반 FEs 준비 된, 냉동을 반복 하 고 녹고에 아무런 영향을 보이고 있다 그래서 만큼 철 FE의 bioactivity는 신속 하 게 검정 준비 (가능한 3 년 된 FE) 후 refrozen.
클로 프롬 기반 추출 유리 coverslips에 채널-FE 증발을 통해 2 차원 평면에서 3 차원 꽃/과일 표면 왁 스 병원 체 응답의 조사 수 있습니다. 그러나, 채널-FE에서 입금 하는 왁 스의 실제 결정 구조는 그들이 수집 표면에 동일 가능성이 크다. 만약 곰 팡이 응답 특정 왁 스 구조에서 vivo에서 조사의 주요 초점 의미, 보완 기술 구현 되어야 합니다. 클로 프롬 기반 추출 물에 기초를 둔 기사 보다 더 많은 스토리지 유지 보수가 필요합니다. 어둠 속에서 ch-FE 추출 물 유지, 이외 줄지어 PTFE 세포 배양 모자와 증발 누수에 대 한 정기적으로 검사할 필요가 포장 씰링 parafilm 튜브를 필요에 따라 대체.
꽃 빗 물 유출 모니터링의 개념 특정 질병 모니터링 도구 발전의 아이디어에 뿌리입니다. 빗 물 수집 장치 컬렉션 장치 캡처 빗 물 꽃의 실행으로 다른 많은 식물 구조에 적응 될 수 있다. 이 이렇게 꽃 자극의 어떤 주어진된 시간에 필드에 존재 하는 및 시즌 내내 감시 될 수 있다 여부에 정보를 제공 합니다. 또는, 수집 장치는 얼마나 꽃 단서는 세탁 주어진 동안 일로 이벤트를 확인 하려면 여러 캐노피 위치에 배포할 수 있습니다. 미래에 실험, rw-FE 쓰게 됩니다 균 응용 프로그램을 시작 해야 하 고 때 그들은 안전 하 게 끝낼 수 있습니다. 또한, 기후학 종속 왁 스 기사 (프로토콜 섹션 9)를 모니터링 하 여 병원 체 생물학 꽃 기간의 중요성이 되고있다 훨씬 더 분명. 그 부분 또한 일시적으로 분리 되어 있는 호스트 표면 왁 스의 측면-의해-측면 비교를 위해 사용할 수 있는 메서드를 제공 하, 이러한 생물 검정의 유연성을 보여 주기 위해 포함 되었다. 꽃 추출 기술과 생물 검정을 사용 하 여 생성 하는 데이터 유형 지표를의 병원 체, 병원 체 생물학, 및 미래 제어 전략을 위한 목표에 중요 한 특정 화학 클래스를 나타냅니다.

Colletotrichum fioriniae Highbush 블루베리 (Vaccinium corymbosum L.), 큰 미국 적갈색 (macrocarpon V. Aiton)1,2의 과일 썩 음을 발생합니다. 이 병원 체는 C. acutatum 종3,4,,56 에서 최근 delineated 했다 고 블루베리 탄의 원인 요원과 회원이 크랜베리 과일 부패의 복잡, 수많은 다른 식물 질병 전세계7발생 뿐만 아니라. C. fioriniae 하지 명백한 되는 과일 성숙9의 최종 단계에서 때까지 꽃과 증상 개발 중 발생 하는 감염 한 잠재성, hemibiotrophic 라이프 스타일8, 있다. 블루베리와 크랜베리, 과일 부패 균 응용 프로그램 피는 기간 동안만 적절 하 게 제어 됩니다. 병원 체는 휴면 블루베리 꽃 봉 오리 비늘10 overwinters 하 고 꽃 중 sporulates. Conidia는 비가 시작 분산11,12 통해 캐노피를 통해 이동 하 고 inoculum 증강을 강력 하 게 꽃 기간13에 상관 되었다. 꽃은 감귤 류의 게시물 꽃 과일의 구성 요소 드롭 (PFD)14 뿐만 아니라 딸기 탄15, 두 경우 모두 일으키는 중요 한 호스트 꽃 Colletotrichum 종의 응답 Vaccinium에 고유 하지 않습니다. 병원 체를 sporulate입니다. 이러한 모든 경우 C. fioriniae 과 꽃 동안 감염 기타 병원 균에 꽃 화학 신호의 시간적 역학을 평가 하는 효과적인 방법에 대 한 필요성을 강조. 여기에 설명 된 방법으로 제공 하는 통찰력 점점 더 귀중 한 되 고 있다.
이 프로토콜 꽃 추출 (FE) 조달의 방법 하 고 유리 coverslip 생물 검정15,16을 통해 철에 대 한 C. fioriniae 응답 평가 안내. 꽃 추출 기법은 두 개의 주요 유형; 나뉩니다. 물 추출 (액티브-FE, 수동 (패스-FE), 및 필드 빗 물 기반 (rw-FE)), 그리고 클로 프롬 기반 (ch-FE)17 기사. 물 추출 물 동원 꽃 화학 단서의 검사에 대 한 수 있습니다. 이 동원된 신호 철 크게 감염16, 감염 발생에 필요한 습기를 제공 하는 속도 증가 때문에 감염의 가능성이 중요 한 구성 요소는. 또한, 그들은 꽃 자극 일로-이벤트 이전 블루베리와 다른 자르기 시스템14,16에 관찰로 중 캐노피 내내 세척 될 수 있다로 더 자연 스러운 상태를 나타냅니다. 클로 프롬 기반 꽃 기사 (ch-FE)도 호스트 표면에 병원 체 응답에 관한 귀중 한 정보17,18, conidia 취약에 입금 한 번의 초기 성장 단계를 elucidating 왁 스 제공 호스트 기관 (즉, 꽃, 난소 및 개발 과일). 병원 체 계절의 변화에 대응 호스트 표면 왁 스에도이 프로토콜을 사용 하 여 모니터링할 수 있습니다. 따라서, 생물 검정 물 기반 FE 또는 클로 프롬 기반 FE이 두 재료 사이의 고유의 차이 완화 하기 위해 협력을 맞게 조정 됩니다.
생물 검정에서 생성 된 데이터 추출 물-기반 보조 conidiation 클로 프롬 기반 기사 보다 높은 수준의 자극 밝혀 최종 appressorial 응답 되었다, 따라서 여러 화합물 연루 철에. 흥미롭게도, 이러한 성장 반응의 둘 다 때 여러 stimulatory 화합물을 나타내는 블루베리와 크랜베리 꽃에서 실행 했다 빗 물을 사용 하 여 세척 될 수 있다 꽃의 표면에서 관찰 되었다. 따라서, 꽃 자극에 대 한 모니터링 농업 시스템에서 병원 체 성공의 확률에 대 한 통찰력을 제공할 것입니다.
이 프로토콜의 궁극적인 목표에 도움이 꽃이 정보를 사용할 수 있는 시작 방법론 꽃 화학 신호에 대 한 응답에서 버섯 모양 식물 병원 체에 생성 초기 생물 정보에 대 한 방법론을 제공 하는 사이트별 질병 관리 및 의사 결정 프로세스입니다.

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; m 모공 크기, 아세테이트 살균 필터</td><td>VWR</td><td>101102-280</td><td>블루베리 꽃 추출물(FE) 설명&nbsp;</td></tr><tr><td>200-1000 &마이크로; l 팁이있는 피펫</td> <td>-</td><td></td> <td>장비, 범위 내에서 모든 것이 적절합니다</td></tr><tr><td>40-200 &micro; l 팁이있는 피펫</td> <td>-</td><td></td> <td>장비, 범위 내에서 모든 것이 적절한</td></tr><tr><td>5-40 &micro입니다. 팁이 있는 l 피펫</td><td>-</td><td>-</td><td>장비, 범위 내의 모든 제조사는 적절할 것입니다</td></tr><tr><td>에어 스프레이 건 일회용 페인트 스프레이 컵과 연결 어댑터&nbsp;</td><td>Harbour Freight</td><td>97098</td><td>블루베리 빗물(rw-)FE 컬렉션</td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>Amsco</td><td>3011</td><td>장비, 매체 준비</td></tr><tr><td>바 메쉬 매트(플라스틱 메쉬 시트)</td><td>Winco</td><td>BL-240</td><td>패시브(패스)-FE 컬렉션</td></tr><tr><td>탁상용 타이머</td><td>Fisher</td><td>Scientific 06-662-47</td><td>장비, FE 준비</td></tr><tr><td>검은색 압력/진공 호스</td><td>VWR</td><td>62994-795</td><td>진공 필터 구성 요소</td></tr><tr><td>Buchner funnel</td><td>Coors USA</td><td>60240</td><td>진공 필터 구성 요소, 55mm 필터 종이 디스크</td></tr><tr><td>수용 Bunsen 버너&nbsp; &nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>장비</td></tr><tr><td>칼슘 카보네이</td>트 <td>Fisher Scientific</td><td>C64-500</td><td>미디어 구성 요소</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Sorvall&nbsp;</td><td>RC 5B Plus</td><td>장비</td></tr><tr><td>원심분리기 튜브(15ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-527-90</td><td>장비</td></tr><tr><td>원심분리기 튜브(50ml)</td><td>VWR</td><td>10025-694</td><td>장비, rw-FE 컬렉션</td></tr><tr><td>치즈클로스(50등급)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS240</td><td>장비, FE 준비</td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>VWR</td><td>JT9175-3</td><td>화학, 트리클로로 메탄 : 분석 등급, &ge; 99% 순수, 분자생물학용, 과산화수소가 없는</td></tr><tr><td>옥수수 가루 한천 (CMA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11132</td><td>&nbsp; 프리믹스 매체, 경사면에 분리 보관</td></tr><tr><td>코튼 블루 염색</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>61335</td><td>락토페놀 코튼 블루 염색</td></tr><tr><td>Difco Agar</td><td>VWR</td><td>90004-032</td><td>미디어 구성 요소</td></tr><tr><td>드릴 프레스</td><td>델타</td><td></td> <td>장비, rw-FE 컬렉션</td></tr><tr><td>EASYpure LF 초순수</td><td>Barnstead</td><td>D738</td><td>장비, 탈 이온수 공급원</td></tr><tr><td>에탄올 (95 %)</td><td>-</td><td>-</td><td>화학</td></tr><tr><td>필터 플라스크 (500 ml)</td><td>Pyrex</td><td>No. 5340</td><td>진공 필터 구성 요소</td></tr><tr><td>흄 후드</td><td>해밀턴</td><td>-</td><td>장비, 클로로포름 사용</td></tr><tr><td>깔때기 (7 X 7 cm)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60820-110</td><td>크랜베리 rw-FE 컬렉션, FE 준비</td></tr><tr><td>일반 유리 슬라이드&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-038-101</td><td>생물 검정 전도도</td></tr><tr><td>일반 플라스틱 펌프 스프레이 병</td><td>VWR</td><td>16126-454</td><td>pass-FE 컬렉션, 최소 250ml 용량</td></tr><tr><td>유리 세포 배양 튜브</td> <td>-</td><td></td> <td>ch-FE</td></tr><tr><td>유리 커버 슬립 보관 (22 x 22mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td><td>생물 검정 전도도</td></tr><tr><td>Glass Van Tieghem 세포 (수동 절단 유리관)</td><td>- </td><td>-</td><td>클로로포름 (ch)-FE 생물 검정, (8 mm OD 6 mm ID)</td></tr><tr><td>유리 피펫 (1-100 &마이크로; l)</td> <td>해밀턴 주식회사</td><td># 710</td><td>ch-FE 생물 검정</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td>락토 페놀 코튼 블루 염색</td></tr><tr><td>혈구 계</td><td>Bright-Line</td><td>5971R10</td><td></td></tr><tr><td>장비 젖산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W261106</td><td>Lactophenol 코튼 블루 염색</td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>Labconco</td><td>3730400</td><td>장비, 무균 작업 환경</td></tr><tr><td>금속 프로브 (일반)&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>장비&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브 (2 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td>수처리 혼합물 저장 및 준비</td></tr><tr><td>현미경, Leica DMLB</td><td>Leica</td><td>020-519.010</td><td>장비</td></tr><tr><td>모르타르 (세라믹)</td><td>Coors USA</td><td>60313</td><td>진공 필터 구성</td></tr><tr><td>요소 니트릴 장갑&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td>꽃 컬렉션</td></tr><tr><td>종이 디스크 (종이 타월 잘라내기)</td> <td>사무 기본 사항</td><td>KCC01510</td><td>습도 조절 in bioassay</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td>플라스틱 파라핀 필름&nbsp;</td></tr><tr><td>유봉 (세라믹)</td><td>Coors USA</td><td>60314</td><td>진공 필터 구성</td></tr><tr><td>요소 페놀 결정</td><td>Fisher Scientific</td><td>A92-100</td><td>락토페놀 면-파란 얼룩</td></tr><tr><td>비닐 봉투 (~100 mm X 152 mm)</td><td>Uline</td><td>S1294</td><td>장비, 꽃 냉장</td></tr><tr><td>플라스틱 세포 배양 접시 (지름 9cm)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td>(페트리 접시), 생물학적 분석 전도도</td></tr><tr><td>폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE) 라인 캡&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60927-228</td><td>ch-FE</td></tr><tr><td>Pyrex 비커 보관 (100 ml)</td><td>Pyrex</td><td>No. 1000</td><td>ch-FE</td></tr><tr><td>Pyrex 빵 팬</td> 준비<td>-</td><td>-</td><td>pass-FE 컬렉션</td></tr><tr><td>Pyrex 졸업 실린더</td><td>-</td><td>-</td><td>장비, FE 준비</td></tr><tr><td>밀봉된 플라스틱 용기 (30 mm X 13 mm X 7 mm)&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>생물 검정 전도도</td></tr><tr><td>날카로운 뾰족한 해부 가위</td><td>Fisher Scientific</td><td>8940</td><td>장비, 치즈 천 및 종이 디스크 절단</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 메쉬 스트레이너</td><td>VWR</td><td>470149-756</td><td>ch-FE</td></tr><tr><td>스텝 드릴 비트 준비 (스텝 비트)</td><td>Dewalt-Equipment</td><td></td><td>, rw-FE 수집</td></tr><tr><td>멸균 루프 (콤비 루프)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-602&nbsp;</td><td>배양 준비</td></tr><tr><td>전화선 (내부 전선)</td><td>-</td><td>-</td><td>블루베리 rw-FE 수집</td></tr><tr><td>시험관 바구니&nbsp;</td><td>VWR</td><td>470137-792</td><td>플라스틱 메쉬 [딸기] 바구니를 쉽게 대체할 수 있음&nbsp;</td></tr><tr><td>V8 주스</td><td>캠벨 수프 회사</td> <td>-</td> <td>곰팡이 미디어 구성</td></tr><tr><td>요소 빈티지 플라스틱 메쉬 [딸기] 바구니</td><td>기부</td> <td>-</td> <td>패스 - FE 컬렉션, 시험관 바구니 (470137-792)를 대체 할 수 있습니다</td></tr> 소<tr><td>용돌이 지니 (소용돌이)</td> <td>피셔 사이언티픽</td><td>12-812</td><td>포자 현탁액 준비</td></tr><tr><td>Whatman No. 1 품질 55mm 서클</td><td>Whatman</td><td>1001-055</td><td>진공 필터 구성 요소</td></tr><tr><td>흰색 플라스틱 트위스트 타이 (100mm)</td><td>Uline</td><td>S-566W</td><td>크랜베리 rw-FE 컬렉션</td></tr></tbody></table>

colletotrichum fioriniae 물, 클로 프롬 기반 블루베리와 크랜베리 꽃 추출 물 개발

Colletotrichum fioriniae Development in Water and Chloroform-based Blueberry and Cranberry Floral Extracts

피는 기간의 기후학 및 병원 체 썩 어 곰 팡이 과일에 꽃 화학 신호의 시간적 역학을 정확 하 게 모니터링 하려면 꽃 추출 방법 및 coverslip 생물 검정 개발 되었다 Colletotrichum fioriniae를 활용 하 여. 블루베리와 크랜베리,이 병원 체 감염의 초기 단계에서 역할 꽃 놀이 때문에 피는 기간 동안 살 균 제를 적용 하 여 최적으로 제어 됩니다. 여기서 설명 하는 프로토콜에 설명 합니다 어떻게 꽃 추출 물 (FE) 해당 유리 coverslip 생물 검정에서 나중에 사용할 물, 클로 프롬 및 필드 빗 물 기반 메서드를 사용 하 여 얻은 했다. 다양 한 정보를 제공 하기 위해 각 철 봉사: C. fioriniae 의 동원된 꽃 화학 반응 물 (물 기반), 꽃 및 과일 표면 왁 스 (클로 프롬 기반), 및 필드 기반 모니터링의 병원 체 응답 신호 생체 외에서 관찰 한 농업 설정 이동 꽃 빗 물 수집. FE는 광범위 하 게 설명으로 어느 물 또는 클로 프롬-기반,이 두 재료 사이의 고유의 차이 대 한 보상을 설명 하는 적절 한 검정을 합니다. 꽃에서 실행 했다 빗 물 각 작물에 대 한 독특한 장치에서 수집 된 유연성과이 이렇게 다른 자르기 시스템의 응용 프로그램을 암시 했다. 생물 검정 신속, 저렴, 간단 하 고 다양 한 소스에서 물질로 꽃 화합물의 존재에 대 한 사이트별 spatiotemporal 정보를 생성 하는 기능을 제공. 이 정보 알릴 것 이다 궁극적으로 더 나은 질병 관리 전략, FE 감염 발생에 필요한 시간을 줄이기로 성장 하는 시즌 동안 병원 체 감염에 대 한 위험을 변경에 대 한 통찰력을 제공.

여기에 제시 된 결과이 방법론을 사용 하 여 수행할 수 있는 많은 분석 실험의 몇 가지 예입니다. 그림 1 은 물 기반 FE 검정에 그림된 가이드 그리고 그림 2 는 클로 프롬 기반 FE 생물 검정에 의해 보충. 그림 3 에서는 무슨 C. fioriniae 의 미세한 평가 두 물 및 클로 프롬 기반 생물 검정 (비교 SDW 컨트롤)에서 24 시간에 따라 예상 될 수 있는 시각적 가이드. 그림 4 크랜베리 다양 한 '스티븐 스' 채널-FE, 존재 C. fioriniae 는 24 시간 코스 연구 하 고이 연구의 결과 가져오기에 대 한 시각적 참조를 제공: FE 감염 구조를 형성 하는 데 필요한 시간을 감소 SDW에 비해. 그림 5 는 coverslip 검정 적갈색 꽃 빗 물 흐르는 빗 물 (CB "꽃" rw-FE)를 사용 하 여에서 수집 된 데이터의 예를 제공 합니다. 그림 6 다른 중요 한 결과 나타냅니다: 꽃 난소 채널-FE은 훨씬 더 보다 과일 채널-FE, 꽃의 수명 주기에서의 중요성을 나타내는 물질로 C. fioriniae. 추가 사진 및 동영상 추출 및 꽃 빗 물 수집 장치/배포, 시각화 및 액티브- 패시브- 추출 (영화 이외에 사용 하는 꽃의 중요 한 영상을 제공합니다 물 기반) 프로세스입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig1.jpg"> 그림 1 : 꽃 물-기반의 일반 개요 추출 (FE) 검정. 이 분석 결과 블루베리와 크랜베리 꽃 꽃 추출 물-기반에 대 한 이용 되었다: 액티브-꽃 추출 (액티브-FE), 수동-꽃 추출 (통과-FE)와 꽃 빗 물 흐르는 빗 물 (rw-FE). -FE 일반적으로 실험/변수 요소를 구성 하는 부분. 반대로-FE 부분 일정 하 게 유지 수 및 시간 포인트/시간 후 접종을 평가할 수 있다. 200 X 배율에서 4 필드 분석으로 설정이 했다. 약어: 살 균 이온된 수, SDW; A. 보기의 필드 당 지역 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig2.jpg"> 그림 2 : 꽃의 클로 프롬 기반 일반 개요 추출 (ch-FE) 검정. 이 분석 결과 블루베리와 크랜베리 (꽃, 난소 및 과일)를 위해 이용 되었다. 이 분석 결과, 1 부분 포자 정지 (conidial 농도 채널-FE 증발 때문에 일관성 유지)에 2 개 부품 SDW 수성 치료 혼합물의 한 유형을 사용 되었다. 이 분석 결과 여러 채널-FE (다양 한 식물 표면에서 왁 스), 또는 여러 시간 포인트/시간 후 접종 단일 채널-FE를 사용 하 여 비교에 사용할 수 있습니다. 약어: 살 균 이온된 수, SDW; 반 Tieghem [유리] 셀, VanT입니다. 셀입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig3.jpg"> 그림 3 : Colletotrichum fioriniae 물 기반 FE와 채널-FE 존재의 시각적인 비교. 이 분석 결과 블루베리 'Bluecrop'에서 (활성-FE, 물 기반) (곰 팡이 분리: BB #10)와 크랜베리 '스티븐 스' 클로 프롬 기반 (ch-FE) (곰 팡이 분리: CB PMAP182) 꽃 추출 SDW 컨트롤에 비교 했다. Conidia SDW (제어) (A) 활성의 존재를 비교할 때 보조 conidiation (반지)과 appressorium 형성 (화살촉)에 극적인 증가 관찰 했다-24 h 후 접종에 FE (B) . 그러나, 보조 conidiation이 아니었다으로 명백한 채널-FE (D);을 클로 프롬 검정 SDW 제어 (C)을 비교 했을 때 오히려, C. fioriniae 성장 appressorial 형성 쪽으로 이동. 표시 된 각 추출 유형, 물 기반에 대 한 일반적인 응답 이며 클로 프롬-기반으로, 호스트/꽃 종에 설명. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig4.jpg"> 그림 4 : 시간-과정 연구 (24 시간) Colletotrichum fioriniae 채널-FE 존재. 이 분석 결과에서 SDW 제어 (A-D) 와 크랜베리 '스티븐 스' 채널-FE (E-F) 시각적으로 검사 했다 0, 6, 12, 그리고 24 시간 후 접종 (여러 FE를 비교 하는 대신 가변 시간 점의 예). Appressorium 형성 (화살촉) 채널-FE에 6 h에서 시작 되 고 이후의 시간 포인트에 걸쳐 꾸준히 증가. 이 결과 피는 기간 동안 병원 체 생물학의 중요 한 요소를 회피 한다: 꽃 감염 구조를 형성 하는 데 필요한 시간을 단축. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig5.jpg"> 그림 5 : 한 생물 검정에 rw-FE를 사용 하 여 수집 된 데이터를 그래픽으로 표시. 빗 물 크랜베리 꽃 (CB "꽃" rw-FE)의 실행 및 단일 일로 이벤트 플러스는 표준 활성, 적갈색 물 꽃 추출 물 (CB 활성에서 어떤 크랜베리 식물 조직 ("땅" rw-FE) 손도 안 했다 처녀 빗 물 -FE) (긍정적인 제어)와 SDW (부정적인 컨트롤) 물 기반 coverslip 검정을 받게 되었고 C. fioriniae 성장에 대 한 평가. CB "꽃" rw-FE는 표준 CB로 활성보조 conidiation 및 appressorium 형성의 동일한 수준을 했다-수집 장치 캡처 동안 발표 하는 꽃 자극에 효과적 이었다는 것을 나타내는 24 h 후 접종에서 FE는 일로-이벤트입니다. 총 conidia (입금) 기본, conidia 및 새로 형성된 된 이차 conidia 구성 됩니다. 문자 나타냅니다 p &lt; 0.05 피셔의 적어도 상당한 차이 따라 상당한 차이가 테스트 (LSD); 대문자, 총 conidia; 소문자, appressoria입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig6.jpg"> 그림 6 : 크랜베리 기후학 기반 채널-FE 검정, 육안 검사. 종종 곰 팡이 썩는 과일에 대 한 질병 관리 꽃 시간 균 응용 프로그램을 포함 한다. 여기, 크랜베리 클로 프롬 기반 추출 물 (ch-FE) 적갈색 ('스티븐 스')의 여러 성장 단계에서 24 시간 후 접종에서 C. fioriniae 에 표면 왁 스의 효과 대 한 시각적으로 평가 했다. 6 (A), 7 월과 8 월에 수집 하는 미 성숙한 과일에에서 난소 수집 (B, C), 수확된 과일 10 (D), 월에서 수집과 SDW 컨트롤 (E) appressorial 형성 (화살촉)에 대 한 검사를 했다. 난소 채널-FE appressorial 형성,이 식물 기후학 (꽃) C. fioriniae의라이프 사이클에 매우 중요 하다의 가장 큰 크기를 했다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 1" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig1.jpg"> 보충 그림 1: 블루베리 꽃이 핌. 블루베리 꽃 만개 (뉴저지, 미국에서에서 4-5 월) 동안 기사 ('Bluecrop' 참조)에 대 한 수집 했다. 인접 한 꽃에서 corollas/난소의 중복 및 보충 그림 2 (적갈색 수직)에 비해 꽃이 핌의 전반적인 아키텍처를 note. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 2" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig2.jpg"> 보충 그림 2: 크랜베리 직. 크랜베리 꽃 만개 (뉴저지, 미국에서에서 6 월-7 월) 동안 기사 ('스티븐 스' 표시)에 대 한 수집 했다. Note 크랜베리 단일 화 서 (직 립), 그리고는 갈고리에 다양 한 꽃 단계, 코 롤 라의 형태를 유지 하는 물방울. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 3" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig3.jpg"> 보충 그림 3: 블루베리 빗 물 배포 (꽃). 블루베리 꽃 빗 물 수집 장치, 클러스터 inflorescences의 바로 아래 배치 완료. 플라스틱 코팅 와이어를 수직으로 하는 장치 사용 note <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 4" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig4.jpg"> 보충 그림 4: 블루베리 빗 물 배포 (줄기). 완성 된 블루베리 꽃 빗 물 수집 장치, 줄기는 꽃이 핌과 부시 대통령의 아래 절반 방법 배치. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 5" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig5.jpg"> 보충 그림 5: 블루베리 빗 물 배포 (크라운). 블루베리 꽃 빗 물 수집 장치, (크라운) 부시 대통령의 기지에 배치 완료. 참고 플라스틱 코팅된 전선 필요 하지 않은 경우 제거할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 6" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig6.jpg"> 보충 그림 6: 블루베리 빗 물 배포 (접지). 처녀 빗 물 수집 장치, 블루베리 나무에 인접 한 배치 완료. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 7" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig7.jpg"> 보충 그림 7: 크랜베리 빗 물 배포 (클로즈업). 깔끔하게 교차 와이어 타이 아래 자리 잡고 두 uprights 크랜베리 꽃 빗 물 수집 장치, 완료. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Figure 8" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig8.jpg"> 보충 그림 8: 크랜베리 빗 물 배포. 다중 크랜베리 꽃 빗 물 장치 늪지에 배포 완료. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplemental Movie 1" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie1.jpg"> 보충 영화 1: 활성, 물 기반 꽃 추출 물 (액티브-FE). 추가 비디오 지원 단계 2.3-2.5.1. 블루베리 'Bluecrop' 꽃 사용 되었다. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/active-FEextraction.mp4" target="_blank"> (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>
<img alt="Supplemental Movie 2" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie2.jpg"> 보충 영화 2: 수동, 꽃 추출 물 (통과-FE). 추가 비디오 지원 다음 단계 3.3-3.4. 블루베리 'Bluecrop' 꽃 사용 되었다. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/pass-FEextraction.mp4" target="_blank"> (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>
<img alt="Supplemental Movie 3" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie3.jpg"> 보충 영화 3: 크랜베리 꽃 빗 물 수집 장치 배포. 추가 비디오 지원 다음 6.4 단계. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/rw-FEdeployment.mp4" target="_blank"> (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>

여기, 생물 검정 곰 팡이 병원 체의, Colletotrichum fioriniae, 유리 coverslips에 블루베리 나 크 렌 베리 꽃 추출의 개발을 모니터링 하도록 설계 된 설명 합니다. 물, 클로 프롬 및 필드 빗 물-꽃 추출 기술을 어떻게이 정보를 적용할 수 있습니다에 대 한 통찰력 뿐만 아니라 자세한 위치를 기반으로 합니다.

Colletotrichum fioriniae 물, 클로 프롬 기반 블루베리와 크랜베리 꽃 추출 물 개발

To accurately monitor the phenology of the bloom period and the temporal dynamics of floral chemical cues on fungal fruit rotting pathogens, floral ...

이 프로토콜은 콜레토트라쿰 피오니아및 기간 꽃을 감염시키는 다른 식물 병원체에 대한 불소화학적 단서의 시간역학을 평가하기 위해 저렴하고 적응가능한 시스템을 제공합니다. 새로운 바닥 빗물 수집 장치는 사용자가 거의 실시간 현장별 방식으로 병원체 개발에 영향을 미치는 자연 각성제 및 조건을 모니터링할 수 있게 합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 자연적으로 감염된 호스트로부터 Colletotrichum 피오니아의 문화와 함께이 절차를 시작합니다.식민지가 포자화되기 시작하면, 세포 배양 접시를 함유한 또 다른 V 8 주스 한천에 연속 콘디아를 사용하여 고밀도 포자 문화를 생성합니다. 7일간의 성장 후, 표준 멸균 루프를 사용하여 고밀도 배양으로부터 소량의 코니디아를 수집하여 고밀도 컬처에 가볍게 닿음으로써 곡성 질량에 닿는다. 멸균 된 탈수 10 밀리리터를 포함하는 15 밀리리터 원심 분리 튜브에 이것을 저어주세요.이 샘플을 10초 동안 소용돌이시다. 표준 파이펫을 사용하여 샘플을 더 혼합하기 위해 여러 번 위아래로 뛰어 내리게됩니다. 그런 다음 소용돌이 시료 한 방울을 혈류계에 놓고 포자 농도를 추정합니다.5 밀리리터 최종 부피로 멸균 증류수의 밀리리터 당 010만 코니아로 농도를 조정합니다. 이것은 포자 현탁액이라고하며 생체 분석에서 사용하기 직전에만 이루어집니다. 클로로폼 기반 의 꽃 추출을 수행하려면 모든 구성 요소를 95 %의 에탄올로 두 번 청소하십시오.그런 다음 각 추출에 대한 오염을 방지하기 위해 클로로폼으로 부품을 두 번 청소하십시오. PTFE 라이닝 캡을 클로로폼으로 청소하지 마십시오. 청소 후, 거꾸로 건조 구성 요소를 따로 설정합니다.한 부분의 가공 꽃을 비커에 9개 부품클로로포형태로 결합한 다음 꽃과 클로로폼을 추가합니다. 스테인리스 스틸 스크린을 통해 30초 동안 부드럽게 소용돌이쳐 두 번째 비커로 스트레인합니다. 두 번째 비커에서 클로로폼 기반 추출물을 유리 배양 튜브에 붓고 PTFE 캡을 부착합니다.증발을 방지하기 위해 파라필름으로 캡을 감쌉니다. 생성된 클로로폼 기반 의 꽃 추출물을 어둠 속에 저장하여 실험용으로 사용할 때까지 섭씨 4도에서 빛의 분해를 줄입니다. 복제를 제공하기 위해 여러 샘플로 추출을 반복합니다.선택한 각 위치에 대한 수집 장치를 만들려면 드릴 프레스에 부착된 스텝 비트를 사용하여 스프레이 컵 하단의 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 구멍 의 상단에서 스프레이 컵의 입으로 직선을 잘라. 이제 스프레이 컵의 입에 플라스틱 코팅 와이어를 스레드 할 수있을만큼 큰 4 개의 등거리 구멍을 드릴.플라스틱 코팅 와이어의 한쪽 끝을 부착하여 한쪽 끝을 자유롭게 합니다. 페인트 스프레이 또는 컵 어댑터를 50밀리리터 원심분리기 캡 뚜껑에 실링할 수 있을 만큼 큰 구멍을 뚫습니다. 어댑터 스레드를 파라필름으로 밀봉하여 누출을 방지합니다.원심분리기 캡과 분무기 컵의 나사 부분에 모두 부착합니다. 그런 다음 메이트 된 50 mm 원심 분리 튜브를 부착합니다. 샘플링 위치당 4개의 수집 장치를 만듭니다.줄기에 맞게 분무기 컵을 구부려 선택한 위치에 장치를 배포합니다. 다른 줄기에 부착 된 플라스틱 코팅 와이어를 사용하여 분무기 컵의 절단 면을 위쪽으로 방향을 지정합니다. 이렇게 하면 꽃을 지나가는 물이 포획됩니다.크랜베리 꽃에서 빗물을 수집하기 위해, 첫 번째 열은 금속 프로브를 사용하여 깔때기의 입 주위에 8 개의 등거리 구멍을 뚫습니다. 비틀기 넥타이를 구멍 의 네 개에 삽입합니다. 다른 끝을 해당 구멍의 반대 위치에 부착하여 깔끔한 교차 패턴을 형성합니다.깔때기를 파라필름으로 스팀을 감싸고 따로 둡니다. 깔때기를 삽입할 수 있을 만큼 큰 구멍을 50밀리리터 원심분리기 캡에 단계비트로 드릴링합니다. 준비된 깔때기를 원심분리기 캡에 삽입합니다.강우량 또는 오버 헤드 관개 후 원심 분리기 튜브의 바닥 튜브 부분을 제거하고 교체하십시오. 빗물 수집 튜브는 박테리아 및 기타 곰팡이와 같은 유출에 동원된 천연 오염 물질에서 분해되는 경향이 있기 때문에 습윤 후 신속하게 변경되어야 합니다. 문화 접시에 종이 디스크 2층을 놓고 멸균 증류수 2밀리리터에 담가 둡니다.다음으로, 2밀리리터 미세원심분리기 튜브에 멸균 증류수와 수성 꽃 추출물을 동등한 양으로 섞는다. 그런 다음 준비된 2밀리리터 미세원심분리기 튜브에 포자 현탁액의 동일한 볼륨을 추가합니다. 결과 제제는 수성 처리 혼합물로 지칭된다.컨트롤을 위해, 꽃 추출물 부분을 생략하고 멸균 증류수로 대체하여 냉간 농도를 일관되게 유지합니다. 이제 미리 청소된 유리 커버립을 세포 배양 접시 에 담근 종이 타월 위에 놓습니다. 수성 처리 혼합물의 40 마이크로리터 액자를 커버슬립의 중앙에 놓습니다.제어를 포함한 원하는 치료를 위해 이것을 반복하십시오. 그런 다음 세포 배양 접시를 닫습니다. 모든 치료와 복제가 분배되면 복제된 모든 세포 배양 접시를 밀봉된 플라스틱 용기에 넣고 어둠 속에서 섭씨 25도에 배양하십시오.미리 결정된 시간 지점에서, 산을 반 보존하는 방울에 고정 마이크로리터 10개를 추가합니다. 일단 고정이 추가되면, 조심스럽게 현미경 검사를 용이하게하기 위해 유리 현미경 슬라이드에 그들 각각의 물방울 측면을 배치 커버립을 반전. 모든 커버립이 유리 현미경 슬라이드에 있을 때, 20 분 동안 유동 후드에 정착하고 부분적으로 건조하도록 둡니다.1 차 코니디아를 포함하여 커버 슬립에 존재하는 모든 코니디아를 계산, 발아 코니디아, 새로 형성 된 보조 코니디아, 뿐만 아니라 appressoria. 400배 배율 또는 총 면적 3.808 평방 밀리미터의 200배에서 작업합니다. 라미나르 플로우 후드에 2밀리리터 마이크로센심분리기 튜브에 두 개의 동일한 양의 멸균 증류수와 1부의 포자 현탁액을 추가합니다.클로로폼 기반 의 꽃 추출물 바이오아세이 수성 처리 혼합물을 따로 설정합니다. 연기 후드에 반 T 셀을 준비된 플라스틱 세포 배양 접시 안에 유리 커버슬립에 놓습니다. 원하는 클로로폼 기반 꽃 추출물 33마이크로리터를 세포 중앙에 분배하고 건조시 좋습니다.셀의 벽을 만지지 마십시오. 제어 치료를 위해 처녀 클로로폼을 추가하십시오. 클로로폼 기반 의 꽃 추출물이 건조되면, 반 T 셀의 중앙에 표준 파이펫과 준비 된 수성 처리 혼합물의 99 마이크로 리터를 분배.그런 다음 모든 세포 배양 접시를 닫고 배양하십시오. 미리 결정된 시간 지점에서, 반 T 셀에 고정제 15 마이크로리터를 추가하고 적절한 곰팡이 염색을 보장하기 위해 적어도 5 분 동안 앉을 수 있습니다. 그 시간 이후에는 반 T 셀을 조심스럽게 제거하십시오.이전과 같이 커버슬립 반전 및 데이터 수집 단계를 수행합니다. 접종 후 24시간 후 C.fiorniae의 현미경 평가시, 멸균 증류수와 수성 꽃 추출물이 있는 코니디아를 비교하면 이차 조정 및 압프레소리움 형성이 급격히 증가하는 것으로 나타났습니다. 그러나, 이차 조정은 클로로폼 바이오라세이 멸균 증류수 조절을 클로로폼 계 추출물과 비교할 때 명백하지 않았다.오히려 C.fiorniae 의 성장은 압제 형성으로 이동했습니다. 이 분석에서 멸균 증류수 제어 및 크랜베리 클로로폼 기반 꽃 추출은 0, 6, 12 및 24 시간 후 접종에서 시각적으로 검사되었습니다. Appressorium 형성은 클로로폼 기반 의 꽃 추출물에서 6 시간에서 시작하여 후속 시간 지점 전체에 걸쳐 꾸준히 증가했습니다.이 결과는 꽃이 감염 구조물을 형성하는 데 필요한 시간을 줄이라는 것을 찾는 것을 지원합니다. 과일 썩어가는 곰팡이에 대한 질병 관리는 종종 꽃 시간 살균제 응용 프로그램을 포함한다. 여기서, 크랜베리의 다중 성장 단계로부터의 크랜베리 클로로폼 계 추출물은 접종 후 24시간 후에 C.fiorniae에 효과적인 표면 왁스를 시각적으로 평가하였다.6월에 채취된 난소, 7월에 채취한 미숙한 과일, 8월에는 10월에 수확된 과일을 수확하고, 멸균 증류수 제어가 압제 형성을 위해 검사되었다. 난소 클로로폼 기반 추출물은 C.fiorniae의 수명 주기에서 꽃의 중요성을 나타내는 appressorial 형성의 가장 큰 크기를 했다. 병원체는 이 프로토콜의 가장 중요한 구성 요소입니다.곰팡이는 시험 사이의 일관성을 유지하기 위해 정기적으로 신선한 미디어로 이동해야합니다. 클로로폼을 가진 모든 작업은 안전상의 이유로 연기 후드로 수행해야 합니다. 여기에는 재료 및 유리 제품 준비, 추출 절차 및 클로로폼 기반 바이오아세이의 전도도가 포함됩니다.시간 지점, 병원체, 꽃 빗물 수집 또는 숙주 추출의 조합은 다양한 숙주 병원체 상호 작용을 평가하는 데 활용할 수 있습니다. 빗물 수집 장치 와 관련 바이오 아세이션은 다른 사람들이 수많은 경로 시스템에서 비 이벤트 중에 동원 된 호스트 각성제와 함께 작업 할 수 있게합니다.

colletotrichum-fioriniae-development-water-chloroform-based-blueberry

Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

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박층 크로마토 그래피 (T​​LC) 분판 및 식물 추출물의 생물학적 검정법은 항균 화합물을 확인하는

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혈관 평활근 세포 치료를위한 동결 건조 베리 파우더에서 폴리 페놀 추출 및 정제<em&gt; In Vitro</em

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헤드스페이스 고체-위상 미세 추출을 사용하여 블랙커런트 과일의 휘발성 화합물 프로파일링

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Mycoheterotrophic 식물에서 내생균 균류를 식별하기 위한 분리, 특성화 및 전체 DNA 추출

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폴리올 기반 기술을 사용한 화장품 응용을 위한 페놀 화합물 및 항산화제의 마이크로파 보조 추출

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곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis Hood) 사육 시스템 구축

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고처리량 형식을 이용한 미생물 2차 대사산물에 대한 잎 반응 평가

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Colletotrichum fioriniae 물, 클로 프롬 기반 블루베리와 크랜베리 꽃 추출 물 개발

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