Name: 쥐 골 골에서의 파 골 세포 전 구체의 분리, 정제 및 분화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 11 s
Description: 배우세요 쥐 골수에서 파골세포 전구체를 분리하고 정제하여 분화시키는 효율적인 방법을. 이 기술은 골다공증 및 골대사 질환 연구에 안정적인 세포 공급원을 제공하여 실험의 신뢰성을 높입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 중국 국립 자연과학 재단 (81473692)에서 용 마에 의해 지원 되었다. 저자는 중국 의학의 난징 대학에서 임상 의학의 첫 번째 대학의 의료 연구 센터의 모든 직원을 감사 합니다.

여기에 설명 된 동물을 포함 하는 모든 방법은 중국 의학의 난징 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 됩니다.
1. 설정
<ol><li>여러 방향으로 절단 1Ml의 피 펫 팁 (1cm)과 여러 1.5 mL 마이크로 원심 분리기 튜브를 준비 합니다. 20 분 동안 103 kPa 및 121 ° c에서 파이 펫 팁과 마이크로 원심 분리기 튜브를 넣고 멸 균 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>격리 절차 동안 고립 된 조직을 보존 하기 위해 얼음과 여러 살 균 요리 상자를 준비 하십시오.</li>
</ol>2. 배양 배지의 제조
<ol><li>완전 한 배양 배지를 준비 한다. 페니실린/streptomycin 1%의 최종 용액과 10%의 소 태아 혈 청 (FBS)을 포함 하는 최소 필수 매체 알파 (α-MEM)를 사용 하십시오.</li>
	<li>0.22 μ m 필터를 사용 하 여 2.1 단계에서 미디어를 필터링 합니다.</li>
	<li>골 골 유도 배지를 준비 한다. 용액 50 ml의 경우 µ의 mcsf를 1만 ng/m l (재료 표)의 농도로 추가 하 여 전체 배양 액의 49.875 mL에 125 넣고 (단계 2.2에서) 25 ng/ml-CSF의 최종 용액을 만듭니다.</li>
	<li>파 골 세포 유도 배지를 준비 한다. 용액 50 ml의 경우, 1만 ng/m l (재료 표)의 농도로 µ l의 rankl을 추가 하 여 골 수 유도 매체의 49.5 mL (단계 2.3에서)를 500 첨가 하 여 25 ng/ml-CSF 및 100 ng/ml rankl의 최종 용액을 만듭니다.</li>
</ol>3. 골 골 유래 세포의 분리
<ol><li>
안락사
	<ol>
<li>자 궁 경부 탈 구가 이어지는 CO2 흡입에 의해 4 개의 스와 규 다 들 래 쥐를 안락사 시키고, 1 분 동안 75% 에탄올에 담가 둔다. 참고: 동물이 같은 섹스와 비슷한 나이의 있는지 확인 합니다. 2 ~ 3 주에 해당 하는 동물은 권장 됩니다. 두 마리의 쥐는 원심 법을 위해 준비 되 고, 다른 두 마리는 전통적인 방법에 대 한 것 이다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
전통적인 방법
	<ol>
<li>동물 들을 소독 보드 위에 놓고, 부정사 위치에 두십시오. 무 균가 위를 사용 하 여 피부를 벗기기 위해 근 위 대 퇴 골에 작은 절 개 (약 1cm)를 만듭니다.</li>
		<li>열과 티 바이어스를 분해 합니다. 고관절, 무릎, 발목 관절 주위의 양측 연결 부품을 잘라 신중 하 고 부드럽게 티 바이어스와 페 머를 분리 합니다. 뼈 주위의 조직의 일부를 잘라; 철저 하 게. 전체 과정에서 티 바이어스와 열을 파괴 하지 마십시오.</li>
		<li>깨끗 한 뼈를 완전 한 배양 액의 5Ml를 가진 접시에 넣습니다. 멸 균가 위로 긴 뼈를 자르고 1 mL 주사기 바늘을 사용 하 여 골 수 구멍이 흰색으로 바뀔 때까지 10ml의 완전 한 배지로 조심 스럽게 세척 합니다.</li>
		<li>3.2.3 단계에서 세포 현 탁 액을 50 mL 튜브로 이송 한 다음, 70 μ m 스 트레이너로 필터링 하 여 나머지 조직을 제거 하였다.</li>
		<li>세포 현 탁 액에 적혈구 용 해 완충 액 (표) 5 mL를 추가 합니다. 얼음에서 8 분 동안 세포를 배양 합니다. 이어서, 세포를 250 x g 에서 5 분간 원심 분리 하 여 세포 펠 렛을 얻었다.</li>
		<li>배지를 흡입 하 고 전체 배지 10ml의 세포를 소생 시킵니다. 혈 세포 측정기를 사용 하 여 셀을 계산 하 고이 섹션에서 단계에 소요 된 시간을 계산 (섹션 3.2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
개선 된 방법
	<ol>
<li>동물 들을 소독 보드 위에 놓고, 부정사 위치에 두십시오. 피부를 벗 겨 내는 멸 균가 위 대 퇴 골에 작은 절 개 (약 1cm)를 만듭니다.</li>
		<li>열과 티 바이어스를 분해 합니다. 뼈 주위의 조직 부분을 제대로 차단 합니다 (완전히 제거 할 필요가 없음). 전체 과정에서 티 바이어스와 열을 파괴 하지 마십시오.</li>
		<li>인산 완충 식 염 수 12ml(PBS)를 사용 하 여 티 바이어스와 페 리머를 헹 구 고 반으로 자릅니다. 잘라 tibias와 페 릭을 1Ml의 피 펫 팁에 넣고 (1.1 단계부터),이는 마이크로 원심 분리기 튜브에 넣고 4°c에서 45 초 동안 1000 x g 에서 3 배 원심 분리 합니다.</li>
		<li>원심 분리 후 뼈가 들어 있는 피 펫 팁을 제거 하 고 골 골을 튜브에 남겨 둡니다. 완전 한 미디어의 200 μ l를 마이크로 원심 분리기 튜브에 넣고 파이 펫 팅을 반복 하 여 골 수를 철저히 분해 합니다.</li>
		<li>3.3.4 단계에서 세포 현 탁 액을 50 mL 튜브로 전송한 다음, 70 μ m 스 트레이너로 필터링 하 여 나머지 조직을 제거 하였다.</li>
		<li>혈 세포 측정기를 사용 하 여 셀 수를 계산 하 고이 섹션의 단계에 소요 된 시간을 계산 합니다 (절 3.3).</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 밀도 구배 원심 분리에의 한 정화
<ol><li>Α-MEM을 사용 하 여 3.2.6 단계 또는 3.3.5 단계에서 셀 서 스 펜 션을 2 mL로 조정 합니다.</li>
	<li>멸 균 실리 케이트 된 원심 관 1 개를 준비 하 고 튜브에 세포 분리 용액 (재료 표)을 8 mL 첨가 한다.</li>
	<li>4.1 단계에서 세포 현 탁 액을 세포 분리 용액에 추가 한다. 피 펫 팁을 튜브의 내부 표면에 부착 하 고 45 °를 내부 표면에 유지 합니다. 현 탁 액을 추가한 후, 세포와 분리 용액의 층 사이에 명확한 한계가 나타난다. 참고: 작업에는 큰 주의가 필요 하며 천천히 수행 해야 합니다.</li>
	<li>30 분 동안 500 x g 에서 수평 원심 분리기로 계층화 된 용액을 원심 분리기. 원심 분리 후, 대상 세포가 포함 된 흐린 두 번째 층을 위에서 아래로 흡 인 합니다. 참고: 원심 분리기의 가속 및 감속을 취소 합니다. 원심 분리 후 6 개의 층이 있다; 상기 제 1 층은 희석제 층이 고, 상기 제 2 층은 단 핵 세포 층이 고, 상기 제 3 층은 상기 1 층의 상기 투명 분리 액 층이 고, 상기 4 층은 상기과 립 세포 층이 고, 제 6 층은 적색 세포 레이어.</li>
	<li>대상 셀을 새 튜브로 전송 합니다. 5 mL의 PBS를 추가 하 여 셀 3 개를 세척 합니다. 각 세척 후, 표적 세포를 250 x g 에서 5 분간 원심 분리 하 여 세포 펠 렛을 얻었다.</li>
	<li>골 수 유도 매 질로 세포 펠 렛을 소생 하 고 혈 세포 측정기를 사용 하 여 셀을 셉니다. 2.3 단계에서 골 수 유도 배지 5 ~ 8 mL를 추가 하 여 30만 세포/m l의 최종 세포 용액을 얻었다. 24 웰 플레이트의 각 웰에 1 mL를 추가 합니다.</li>
</ol>5. 문화와 차별화
<ol><li>세포를 24 시간 동안 37 ° c에서 배양 한 후, 배지를 부드럽게 흡입 하 고 각 웰에 파 골 세포 유도 배지의 1 mL를 첨가 한다. 플레이트를 부드럽게 교 교 하 고 37 ° c에서 인큐베이터에 넣습니다.</li>
	<li>파 골 세포 유도 배지 마다 48 h를 변경 한다. 그렇게 하는 동안, 매체의 0.8 mL를 우물에 갈아 서 부드럽게 플레이트를 교 교 합니다. 참고: 크고, 모 기와 다 핵 파 골 세포는 일반적으로 4 ~ 6 일 주위에 도립 현미경으로 잘 관찰 되어야 합니다.</li>
</ol>6. 타르트 레이트 내성 산 성 인산 가수분해 효소 염색
참고: Multinucleate 파 골 세포는 4 ~ 6 일 후에 유도 (5 절)가 성공 하면 존재할 것입니다.
<ol><li>37% 포름알데히드, 32.5 mL의 아세톤 및 시트르산 용액 12.5 mL의 4 mL을 결합 하 여 고정 용액을 준비 합니다. 픽스 쳐 솔루션을 4°c에 보관 하십시오.</li>
	<li>50 µ L의 아질 산 나트륨을 첨가 하 여, 50 인산 염 용액의 50 µ l, 아세테이트 용액의 200 µ L 및 100 µ l를 추가 하 여 타 액 질 내 수성 (트랩) 얼룩 용액 (재료 표)을 제조 한다 타르 레이트 용액을 탈 이온 수 4.55 mL로 넣고 37 ° c로가 온 한다. 그런 다음 1 분간 반전 시켜 부드럽게 섞어 2 분간 방치 합니다.</li>
	<li>파 골 세포를 성공적으로 유도 한 후 배지를 흡입 하 고 PBS로 우물 3 배를 부드럽게 씻 습니다.</li>
	<li>고정 용액을 실 온 (RT)에 가져온다. 30 초 동안 우물에 2 mL의 고정 용액을 넣고 세포가 건조 되는 것을 허용 하지 않습니다.</li>
	<li>고정 용액을 흡 인 하 고, 37 ° c로 미리 데워 진 탈 이온 수로 3 배 부드럽게 씻은 다음, 물을 흡입 합니다.</li>
	<li>37 ° c에서 1 시간 동안 2 mL의 트랩 얼룩 용액을 넣고 어두운 곳에서 시료를 보관 하십시오.</li>
	<li>1 시간 후, 얼룩을 흡 인 하 고, 37 ° c로 미리 데워 진 탈 이온 수로 샘플을 부드럽게 씻은 다음, 물을 흡입 합니다.</li>
	<li>헤 마 톡 실린 용액에서 1 분 동안 세포를 중화 시켰다. 염색 후, 헤 마 톡 실린 용액을 흡 혈 하 고 세 배 세포를 탈 이온 수로 부드럽게 씻 습니다.</li>
	<li>명시 야 현미경으로 이미지 파 골 세포를 사용 하 고, 3 개 이상의 핵을 가진 함정+ 세포는 보라색으로 나타납니다.</li>
</ol>7. Toluidine 청색 염색을 이용한 골 재흡수 분석
<ol><li>
뼈 조각의 전처리
	<ol>
<li>마이크로 전기 톱에 의해 종 축을 따라 2cm 두께의 조각으로 신선한 소 대 퇴 골 피 질을 잘라. 그런 다음 단단한 조직 분쇄기로 슬라이스를 자르고 갈아 80 µm.</li>
		<li>1 시간 동안 탈 이온 수와 100 Hz 초음파로 비 커의 슬라이스를 씻고 3 배를 반복 합니다.</li>
		<li>2 시간 동안 75% 알코올에 슬라이스를 담가. 그런 다음 알코올을 흡입 하 고 깨끗 한 플랫폼에서 1 h에 대 한 조각의 각 측면을 자외선에 노출 시킵니다.</li>
		<li>세포를 심기 전에 적어도 2 시간 동안 배양 배지에 조각을 담가 둔다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Toluidine 블루 염색
	<ol>
<li>24 웰 플레이트에 전처리 된 뼈 슬라이스를 놓습니다. 4.6 단계에서 언급 한 바와 같이 세포를 식물로 하 고 제 5 항에 언급 된 바와 같이 세포를 유도 한다.</li>
		<li>파 골 세포가 나타난 후 (4 ~ 6 일 후), 0.25 M의 수산화 암모늄 1 mL를 사용 하 여 슬라이스를 세척 하 고 각각 5 분 동안 3 배를 초음파 처리 하 여 뼈 조각에 재흡수 구 덩이를 분석 할 수 있도록 살아있는 세포를 제거 합니다. 이어서, 수산화 암모늄을 제거 하 고 슬라이스 당 1Ml(wt/vol) toluidine 청색 용액 1 mL을 2 분 동안 조각 염색 한다.</li>
		<li>PBS로 슬라이스를 씻으십시오. 무작위로 5 개의 뷰를 선택 하 고 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 재흡수 영역에 대 한 반정량 분석을 수행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. 주사 전자 현미경
<ol><li>7.2.1 단계에서 뼈 슬라이스를 2 시간 동안 슬라이스 당 2.5% 알데하이드의 1 mL의 접두사에 접두사로 사용 하 고, 각각 1m 수산화 암모늄을 사용 하 여 3 분 동안 조각 3x을 초음파 처리 하 여 세포를 제거 하 고 수산화 암모늄을 제거 한다.</li>
	<li>뼈 슬라이스 3 배를 각각 PBS로 12 분 동안 씻으십시오.</li>
	<li>RT에서 2 시간 동안 1% osmic 산으로 뼈 슬라이스를 고정 합니다.</li>
	<li>에탄올 구배를 50%, 70%, 80%, 90% 및 95% 에탄올을 모든 그라데이션에 대해 15 분 동안 수행 하 고 에탄올을 15 분 동안 isoamyl 아세테이트로 교체 하십시오.</li>
	<li>금 팔라듐으로 슬라이스를 코팅 한 다음 주사 전자 현미경으로 분석 하십시오.</li>
</ol>9. 칼 시 토 닌 수용 체의 면역 형광 염색
참고: Multinucleate 파 골 세포는 유도가 성공 하면 4 ~ 6 일 후에 존재할 것입니다 (제 5 항).
<ol><li>매체를 흡입 하 고 부드럽게 PBS와 함께 잘 세 배를 씻어.</li>
	<li>4% 파라 포 름 알 데히드로 10 분간 세포를 고정 하 고 4°c로 냉각 시켰다.</li>
	<li>얼음에서 30 분 동안 0.3% 비 이온 성 계면 활성 제로 1 mL의 PBS를 첨가 하십시오. 그런 다음 0.3% 비 이온 성 계면 활성 제를 사용 하 여 PBS를 흡입 하 고 1 mL의 PBS를 5% FBS 얼음에 30 분 동안 첨가 합니다.</li>
	<li>PBS를 흡 인 하 고 4°c에서 하룻밤 동안 PBS에서 1:100 희석 한 항 칼 시 토 닌 수용 체 (안티 CTR)로 멤브레인을 배양 합니다.</li>
	<li>용액을 흡입 하 고, 알 렉 사-488-공액 항 토끼 IgG 항 체와 함께 멤브레인을 배양 하 여 RT에서 1 시간 동안 PBS에서 1000 희석 한다.</li>
	<li>용액을 흡입 하 고 PBS로 세 배 셀을 부드럽게 씻으십시오. RT에서 3 분 동안 Hoechst 33342 얼룩과 핵을 상쇄.</li>
	<li>용액을 흡입 하 고 PBS로 세 배 셀을 부드럽게 씻으십시오. 형광 현미경으로 CTR의 강도를 관찰 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+differentiation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Osteoclast differentiation and activation.</a> Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).</li>
<li>Kular, J., Tickner, J., Chim, S. M., Xu, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+regulation+of+bone+remodelling+at+the+cellular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">An overview of the regulation of bone remodelling at the cellular level.</a> Clinical Biochemistry. 45 (12), 863-873 (2012).</li>
<li>Park, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+the+reduced+enamel+epithelium+and+its+implications+for+bone+resorption+during+tooth+eruption%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Molecular+Histology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of the reduced enamel epithelium and its implications for bone resorption during tooth eruption.</a> Journal Of Molecular Histology. 44 (1), 65-73 (2013).</li>
<li>Boyde, A., Ali, N. N., Jones, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resorption+of+dentine+by+isolated+osteoclasts+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22British+Dental+Journal%22%5BJournal%5D)">Resorption of dentine by isolated osteoclasts in vitro.</a> British Dental Journal. 156 (6), 216-220 (1984).</li>
<li>Chambers, T. J., Revell, P. A., Fuller, K., Athanasou, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resorption+of+bone+by+isolated+rabbit+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Resorption of bone by isolated rabbit osteoclasts.</a> Journal of Cell Science. 66, 383-399 (1984).</li>
<li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast-like+cell+formation+and+its+regulation+by+osteotropic+hormones+in+mouse+bone+marrow+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Osteoclast-like cell formation and its regulation by osteotropic hormones in mouse bone marrow cultures.</a> Endocrinology. 122 (4), 1373-1382 (1988).</li>
<li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cells+are+involved+in+osteoclast+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cells are involved in osteoclast formation.</a> Endocrinology. 123 (5), 2600-2602 (1988).</li>
<li>Suda, T., Takahashi, N., Martin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+osteoclast+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modulation of osteoclast differentiation.</a> Endocrine Reviews. 13 (1), 66-80 (1992).</li>
<li>Yoshida, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+murine+mutation+osteopetrosis+is+in+the+coding+region+of+the+macrophage+colony+stimulating+factor+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The murine mutation osteopetrosis is in the coding region of the macrophage colony stimulating factor gene.</a> Nature. 345 (6274), 442-444 (1990).</li>
<li>Yasuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+differentiation+factor+is+a+ligand+for+osteoprotegerin%2Fosteoclastogenesis-inhibitory+factor+and+is+identical+to+TRANCE%2FRANKL%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+The+National+Academy+of+Sciences+of+The+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteoclast differentiation factor is a ligand for osteoprotegerin/osteoclastogenesis-inhibitory factor and is identical to TRANCE/RANKL.</a> Proceedings of The National Academy of Sciences of The United States of America. 95 (7), 3597-3602 (1998).</li>
<li>Lacey, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoprotegerin+ligand+is+a+cytokine+that+regulates+osteoclast+differentiation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation.</a> Cell. 93 (2), 165-176 (1998).</li>
<li>Marino, S., Logan, J. G., Mellis, D., Capulli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+culture+of+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Generation and culture of osteoclasts.</a> BoneKEy Reports. 3, 570(2014).</li>
<li>Pei, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluoride+decreased+osteoclastic+bone+resorption+through+the+inhibition+of+NFATc1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Fluoride decreased osteoclastic bone resorption through the inhibition of NFATc1 gene expression.</a> Environmental Toxicology. 29 (5), 588-595 (2014).</li>
<li>Arnett, T. R., Dempster, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+pH+on+bone+resorption+by+rat+osteoclasts+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effect of pH on bone resorption by rat osteoclasts in vitro.</a> Endocrinology. 119 (1), 119-124 (1986).</li>
<li>Arnett, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+is+a+major+stimulator+of+osteoclast+formation+and+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia is a major stimulator of osteoclast formation and bone resorption.</a> Journal of Cellular Physiology. 196 (1), 2-8 (2003).</li>
<li>Orriss, I. R., Arnett, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+osteoclast+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Rodent osteoclast cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 816, 103-117 (2012).</li>
<li>Quinn, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcitonin+receptor+antibodies+in+the+identification+of+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Calcitonin receptor antibodies in the identification of osteoclasts.</a> Bone. 25 (1), 1-8 (1999).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

시험관 내에서 파 골 세포를 얻고 연구 하는 능력은 뼈를 흡수 하는 질병의 메커니즘을 이해 하 고 새로운 치료제를 개발 하는 데 도움이 될 수 있는 골 대사를 연구 하고자 하는 모든 연구자에 게 중요 하 고 근본적인 기술입니다. 본 연구는 이전 방법에 기초 하 여 일부 수정과 프로토콜을 설명 했다.
골 수를 얻기 위해 피 펫 팁과 마이크로 원심 분리기 튜브를 사용 함으로써, 그것은 크게 전통적인 방법에 비해 골 수와 실험실 인력의 작업 부하를 얻는 작업 시간을 감소. 그동안,이 방법은 골 수가 손실 또는 바늘 스틱 부상의 위험을 방지. 이전 연구에서, 골 것 유래 세포는12,13의 분리 직후에 도금 되었다. 밀도 구배 원심 분리는 정산 계수의 차이에 따라 골 수 단 핵 구를 선택 하 여 사용 하였다. 밀도 구배 원심 분리의 과정에서, 세포 분리 매체의 첨가는 경계를 명확 하 ...

뼈 항상성은 뼈에 의해 조절 되는 복잡 한 생리 적 과정 이다-파 골 세포와 골 형성 조 골 술1. 골 아 세포 및 파 골 세포를 통해 매개 된 조 골 및 파 골의 활성 사이의 균형은 각각 뼈 건강 및 항상성 유지에 매우 중요 하며, 뼈 항상성에서의 섭 동이 뼈 질환으로 이어질 수 있기 때문에 비정상적인 뼈 성장 또는 뼈 밀도의 손실. 독특한 뼈-재흡수 세포로 서, 파 골 균은 골다공증, 치 주 염 및 인공 골 분해2,3을 포함 한 비정상적인 뼈 파괴와 관련 된 질병에 중요 합니다.
파 골 세포 배양의 개발은 주로 두 단계로 나뉜다. 보이 드 외4 와 챔버 스 외5 는 1980 년대 첫 번째 스테이지로 구성 된 방법. 그 (것) 들은 급속 한 개장 기간 인 신생 동물의 뼈에서 상대적으로 풍부한 파 골 세포를 얻었습니다. 파 골 세포는 특별 한 배지에서 뼈를 조각 내 고 교 반하여 방출 됩니다. 그러나,이 방법에 의해 얻어진 세포는 양과 순도가 낮다. 두 번째 단계는 골 수가6에서 유래한 조 혈 계보 세포를 이용 하 여 파 골 균 형성의 장거리 배양을 개발 하는 것 이었다. 1 α, 25-디 하이드 록 시 비타민 D3, 프로 스타 글란 딘 E2 (pge-2) 및 부 갑 상선 호르몬 (PTH)과 같은 배양 배지에 첨가 된 골 아 세포의 시스템을 통해 서 작용 하 여 파 골 형성을 자극 하는,8 . 그러나,이 방법에 의해 얻어진 파 골 세포의 순도 및 양은 현대의 분자 생물학 연구의 요구를 충족 시킬 수 없다. 이어서, 대 식 세포 콜로 니 자극 인자 (M-csf) 및 핵 인자-κ b 리간드 (rankl)를 위한 수용 체 활성 제를 발견 하 여 골 세포 형성을 용이 하 게 하는9,10,11및 M-csf를 사용 하는 방법 및 파 골 세포 형성을 직접적으로 자극 하는 RANKL은 전 세계적으로 널리 사용 되 고 있다. 그러나, 개선 해야 할 방법론에는 여전히 몇 가지 세부 사항이 있습니다.
현재 가장 일반적으로 사용 되는 파 골 세포 배양 법은 마 리노 외 (12 ) 및 페이 알13에 의해 기술 된 바와 같이, 종종 뼈 주위의 주위 조직을 제거 하 고 살 균 된 바늘을 사용 하 여 골 수를 세척 하는 것이 필요 완료 된 미디어. 이 과정에는 (1) 뼈 주위의 주위 조직을 제거 하는 것이 많은 시간과 훌륭한 외과 기술이 필요 하다는 사실을 포함 하 여, (2) 뼈가 깨지기 쉬우며 골 수 유출을 초래할 수 있다는 사실 (3)이 있습니다. 너무 작은 플러시, 그리고 (4) 바늘 스틱 부상의 위험이 있다. 이러한 문제를 방지 하기 위해 골 수를 바늘로 내뿜는 대신 골 수에 대 한 뼈가 들어 있는 튜브를 원심 분리 합니다. 여기에서는 전통적인 절차에 비해 적은 시간과 노력으로 골 수를 분리 하는 안정적이 고 안전한 방법을 소개 합니다. 밀도 구배 원심 분리의 사용과 함께, 우리는 시험관 내에서 완전히 분화 된 파 골 세포의 다량을 얻습니다.

<table><tbody><tr><td>Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) 키트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>자동 경조직 슬라이서</td><td>Lecia</td><td>RM2265</td><td></td></tr><tr><td>소 대퇴골</td><td></td><td></td><td>자체 구매</td></tr><tr><td>세포 인큐베이터</td><td>Heraus</td><td>BB16 / BB5060</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Sarana</td><td>s-fbs-au-015</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 IgG H& L (Alexa Fluor 488)</td><td>Abcam</td><td>ab150077</td><td></td></tr><tr><td>하드 티슈 그라인더</td><td>Lecia</td><td>SP-2600</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque Kit</td><td>TianJing Haoyang</td><td>TBD2013DR</td><td>규화 원심 튜브 amd 세포 분리 솔루션</td></tr><tr><td>Hochest33342</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>반전 위상차 현미경</td><td>Olympus</td><td>CKX31</td><td></td></tr><tr><td>도립 형광 현미경</td><td>Lecia</td><td>DMI-3000</td><td></td></tr><tr><td>MEM, 글루타민 없음</td><td>Gibco</td><td>11090-081</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신, 액체</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 칼시토닌 수용체</td><td>Bioss</td><td>bs-0124R</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 M-CSF</td><td>PeproTech</td><td>400-28</td><td></td></tr><tr><td>재조합 쥐 sRANK 리간드</td><td>PeproTech</td><td>400-30</td><td></td></tr><tr><td>적혈구 용해 완충액</td><td>압신</td><td>absin abs47014932</td><td></td></tr><tr><td>주사 전자 현미경 FEI</td><td></td><td>Quanta 200</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89649</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐 골 골에서의 파 골 세포 전 구체의 분리, 정제 및 분화

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

파 골 세포는 거 대 하 고, 다 핵 이며, 단 핵 구 또는 대 식 세포 전 구체의 융합에 의해 형성 되는 모노 이트-대 식 세포의 혈통을 뼈-의존 한다. 과도 한 뼈 재흡수는 골 수 질환을 선도 하는 가장 중요 한 세포 메커니즘 중 하나입니다, 골다공증을 포함 하 여, 치 주 염, 그리고 주위 인공 골 분해. 파 골 세포의 주요 생리 적 기능은 하이드 록 시 아파 타이트 미네랄 성분과 뼈의 유기 매트릭스를 모두 흡수 하 여 뼈 표면에 특징적인 재흡수 모양을 생성 하는 것입니다. 본문에 다른 세포에 비해 상대적으로 적은 파 골 균이 있다, 특히 성인 뼈에. 최근 연구는 더 짧은 시간에 더 성숙한 파 골 세포를 얻는 방법에 초점을 맞추고 있다,이는 항상 문제가 있었다. 분리 및 배양 기술의 몇몇 개선은 더 성숙한 파 골 세포를 얻기 위하여 실험실에서 개발 되었습니다. 여기에서는 특수 하 고 간단한 장치를 사용 하 여 기존 절차에 비해 적은 시간에 골 수를 분리 하는 방법을 소개 합니다. 밀도 구배 원심 분리를 사용 하 여, 우리는 고전적인 방법으로 확인 되는 쥐 골 수에서 완전히 분화 된 파 골 세포의 다량을 얻습니다.

이 프로토콜의 목적은 다 수의 파 골 세포 전 구체를 편리 하 게 분리 및 정제 하 고 파 골 세포를 성공적으로 유도 하는 것 이었다. M-CSF와 RANKL으로 보충 하 여 5 ~ 6 일에 거 대 한 파 골 세포를 볼 수 있었습니다. 파 골 세포의 형성은 트랩 염색에 의해 성공적으로 규명 되었다 (도 1a). 크고 보라색 세포는 여러 핵 (일반적으로 ≥ 3 개의 핵)을 가진 함정 양성 세포로 간주 되었습니다. 이 방법을 통해, 24 웰 플레이트 (도 1b)에서 파 골 세포 당 최대 30 개의 핵을 함유 하는 800 파 골 세포를 얻는 것이 전형적 이었다. 기존의 방법과 비교 하 여, 개선 된 방법은 전체 분리 진행에 약 20 분을 저장 하였다 (도 1c).
<p class="jove_content" fo...

파 골 세포는 조 혈 간세포의 대 식 세포 혈통에서 유래한 조직 특유의 대 식 세포 폴 리 에틸렌 이다. 이 프로토콜은 기존의 방법에서 발견 되는 사고의 위험을 줄이면서 많은 양의 파 골 세포를 얻을 수 있도록 골 수 셀을 분리 하는 방법을 설명 합니다.

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...

이 방법은 시험관내에서 완전히 분화된 골세포의 다량을 얻는 데 사용될 수 있기 때문에 중요하다. 이 방법의 주요 장점은 더 안정적이고 안전하며 전통적인 절차에 비해 적은 노력으로 적은 시간에 골수를 격리한다는 것입니다. 이 기술은 골다공증, 패러디염 및 periprosthetic 골다정수를 포함하여 뼈 대사 질병의 중요한 객체인 골다락의 안정한 근원을 제공할 수 있습니다.사소한 수정으로, 이 프로토콜은 또한 쥐 또는 그밖 동물에 있는 세포를 파생한 골수의 각종 종류를 얻기에 적합할 수 있습니다. 우선, 안락사된 동물을 소핀 위치에 있는 소독된 보드에 놓습니다. 멸균 가위를 사용하여 근해 대퇴골에서 약 1센티미터 길이의 절개를 만들어 피부를 벗겨냅니다.다음으로, 대퇴골과 티바이어스를 해부한다. 조심스럽게 부드럽게, 고관절 주위 양측 연결 부분을 잘라, 무릎, 발목 관절은 티바이어스와 대퇴골을 분리. 뼈 주위 조직의 일부를 잘라 철저 하 게 있는지 확인.그런 다음 청소된 뼈를 완전한 배양 배지 5밀리리터가 있는 접시에 넣습니다. 멸균 가위를 사용하여 긴 뼈를 잘라냅니다. 1 밀리리터 주사기 바늘을 사용하여 골수 구멍이 흰색으로 변할 때까지 10 밀리리터의 완전한 미디어로 골수 구멍을 조심스럽게 플러시하십시오.이 세포 현탁액을 50 밀리리터 튜브로 옮기고 70 마이크로미터 여과기로 필터링하여 나머지 조직을 제거합니다. 적혈구 용해 버퍼 5밀리리터를 넣고 8분 동안 얼음 에 세포를 배양합니다. 그 후, 세포 펠릿을 산출하기 위해 5분 동안 250배 G에서 세포를 원심분리한다.수퍼내티퍼를 흡인하고 완전한 매체의 10 밀리리터에서 세포를 재일시 중단합니다. 혈종계를 사용하여 셀을 계산하고 이 메서드에 대해 취한 작업에 소요된 시간을 계산합니다. 첫째, 소염된 보드에 안락사 된 동물을 척추 위치에 놓습니다.멸균 가위를 사용하여 근해 대퇴골에서 약 1센티미터 길이의 절개를 만들어 피부를 벗겨냅니다. 다음으로, 대퇴골과 티바이어스를 해부한다. 조직을 완전히 제거 할 필요가 없지만 뼈 주위의 조직의 일부를 잘라냅니다.PBS의 12 밀리리터로 티비아와 대퇴골을 헹구고 반으로 자른다. 스네핑된 티에비아와 대퇴골을 준비된 1밀리리터 파이펫 팁에 넣고 준비된 마이크로 원심분리기 튜브에 넣습니다. 원심 분리는 튜브를 1, 000 배 G에서 세 번, 45 초 동안 섭씨 4도에서 세 번 분리합니다.그 후, 튜브에서 뼈가 들어 있는 파이펫 팁을 제거하고 골수를 튜브에 둡시합니다. 튜브에 PBS 200 마이크로리터를 추가하고, 골수를 완전히 분해하기 위해 반복적으로 피펫을 위아래로 넣습니다. 이 세포 현탁액을 50 밀리리터 튜브로 옮기고 70 마이크로미터 여과기로 필터링하여 남은 조직을 제거합니다.그런 다음 혈전계를 사용하여 세포를 계산하고 이 섹션에서 취한 단계에 소요된 시간을 계산합니다. 멸균 실리코화된 원심 튜브에 세포 분리 용액 6밀리리터를 추가합니다. 희석된 셀 서스펜션을 튜브에 추가합니다.현탁액을 추가하면 셀 층과 분리 용액 사이에 명확한 제한이 나타납니다. 다음으로, 45도 각도로 튜브의 내부 표면에 파이펫 팁을 부착합니다. 30분 동안 500배 G의 수평 원심분리기에서 층화된 용액을 원심분리합니다.그 후 대상 셀을 위쪽에서 아래로 포함하는 흐린 두 번째 층을 흡인합니다. 대상 셀을 새 튜브로 전송합니다. PBS의 5 밀리리터를 추가하여 세포를 씻고 원심분리기를 5분 동안 250배 G로 세척합니다.총 3개의 세척을 위해 PBS와 원심분리기를 추가하여 이 세척 과정을 반복하십시오. 골수 유도 매체로 세포 펠릿을 다시 중단합니다. 혈세포계를 사용하여 세포를 계산합니다.그런 다음, 골수 유도 배지의 5~8밀리리터를 추가하여 밀리리터당 300, 000세포의 최종 세포 용액을 얻습니다. 이 셀 용액의 밀리리터 1밀리리터를 24웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 24시간 동안 섭씨 37도에서 세포를 배양한 후, 배지를 부드럽게 흡인시키고 각 웰에 1밀리리터의 골세포 유도 배지를 추가합니다.접시를 부드럽게 교반하고 인큐베이터에 반환합니다. 48시간마다 각 웰에서 0.8 밀리리터의 골세포 유도 배지를 제거하고 교체하십시오. 접시를 부드럽게 조인하여 인큐베이터로 돌려놓습니다.뼈 조각을 미리 치료하기 시작하려면 마이크로 전기 톱을 사용하여 신선한 소 대퇴골 뼈 피질을 세로 축을 따라 2 센티미터 두께의 슬라이스로 자른다. 슬라이스를 자르고 연마한 후, 탈이온화된 물의 비커에 담그고 1시간 동안 100 헤르츠에서 초음파를 적용하여 슬라이스를 씻으셔도 됩니다. 이 세탁 과정을 세 번 반복하십시오.세척된 슬라이스를 75%의 알코올로 2시간 동안 담급드시면 됩니다. 그런 다음, 알코올을 흡입하고 깨끗한 플랫폼에서 1 시간 동안 자외선에 슬라이스의 각 슬라이드를 노출. toluidine 블루 염색을 시작하려면, 24 웰 플레이트의 우물에 미리 처리 된 뼈 조각을 배치합니다.그 후, 24 웰 플레이트에 배양 배지를 추가하여 2시간 동안 뼈 조각을 담그게 한다. 식물 및 이전에 입증 된 바와 같이 세포를 유도. 골세포가 4~6일 후에 는 0.25 개의 어금니 암모늄 수산화물로 슬라이스를 씻으시면 됩니다.살아있는 세포를 제거하고 뼈 조각에 재흡수 구덩이의 분석을 허용하기 위해 각각 5 분 동안 슬라이스를 세 번 초음파 처리합니다. 그런 다음, 암모늄 수산화를 제거하고 2 분 동안 슬라이스 당 1 %의 toluidine 블루 용액의 1 밀리리터로 슬라이스를 얼룩지게합니다. PBS로 얼룩 조각을 씻으시다.무작위로 5개의 뷰를 선택하고 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 재흡수 영역의 반정량 분석을 수행합니다. 먼저, 실온에서 2시간 동안 슬라이스당 2.5%의 글루타랄데히드 1밀리리터로 뼈 조각을 접두사합니다. 전세 된 슬라이스를 3 분 동안 3 분 동안 3 번 초음파 처리하여 수산화 암모늄 1 개를 사용하여 세포를 제거합니다.그런 다음 수산화 암모늄을 제거하고 PBS로 뼈 조각을 세 번 씻고 각 세척은 12 분 동안 지속됩니다. 실온에서 2시간 동안 세척된 뼈 조각을 1%의 오스미산으로 수정합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 에탄올 그라데이션 탈수 작업을 수행합니다.그 후, 에탄올을 이소아밀 아세테이트로 15분간 교체하십시오. 슬라이스를 금 팔라듐으로 코팅하고 전자 현미경 검사를 스캔하여 분석합니다. 이 연구에서는 많은 수의 골세포 전구체가 분리되고 정제되었으며 성공적으로 골세포가 되도록 유도되었습니다.M-CSF와 RANKL을 보완함으로써, 거대한 골막세포는 5일에서 6일 동안 볼 수 있습니다. 이러한 골세포의 형성은 트랩 염색에 의해 성공적으로 확인된다. 크고 보라색 세포는 다중 핵을 가진 TRAP 양성 세포로 간주됩니다.이 방법을 통해, 24웰 플레이트에서 골세포당 30개의 핵을 함유하는 800개의 골세포를 얻는 것이 일반적이다. 기존 방법에 비해 이 향상된 방법은 전체 격리 프로세스 중에 약 20분을 절약합니다. 뼈 조각을 사용하여 뼈 흡수의 활성을 평가하는 것은 일반적인 시험관 내 방법입니다.toluidine 블루 스테인링을 통해 흡수 영역은 밝은 녹색으로 시각화됩니다. 뼈 구덩이의 구조와 특성은 전자 현미경 검사를 스캔하여 명확하게 관찰 할 수 있습니다. CTR, 골세포 특정 세포 마커 중 하나, 골세포를 식별 하 고 뼈에 있는 골세포의 형성을 연구 하는 것이 중요 하다.CTR의 긍정적 인 표현은 명확하게 골을 식별하고 대식세포 폴리 카리온에서 구별. CTR은 녹색색에 의해 면역형광 분석기에서 명확하게 표시되고, 파란색은 세포 핵을 나타낸다. 골수를 잃지 않도록 대퇴골과 티바이어스를 골절하지 않도록하십시오.이전에이 기술을 수행 한 적이없는 개인은 세포 수술 솔루션을 도울 때 어려움을 겪을 수 있습니다. 파이펫 팁은 튜브의 내부 표면에 부착하고 내부 표면에 45도 각도로 유지되어야 합니다.

isolation-purification-differentiation-osteoclast-precursors-from-rat

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

파골 세포는 신체의 주요 뼈 재 흡수 세포이다. 많은 수의 파골 세포를 분리 할 수​​있는 능력은 파골 세포 생물학의 이해에 상당한 발전을 가져왔다. 이 프로토콜에서는 배양 및 in vitro에서 파골 세포 활성을 정량화, 단리하는 방법을 설명한다.

마우스 골수에서 파골 세포의 유도

노치 신호는 세포 간의 직접 접촉에 의존하는 셀룰러 통신의 한 형태입니다. 체외에서 Notch 신호를 적절하게 유도하려면 Notch 리간드를 고정된 상태의 세포에 제공해야 합니다. 이 프로토콜은 마우스 파골세포 전구체에서 Notch 신호의 체외 자극 방법을 설명합니다.

마우스 파골 세포 전구체의 노치 신호 전달의 자극

이 원고 osteoclast 형성에서 복잡 한 1 rapamycin의 포유류/기계적 대상의 역할을 연구 하 고 마우스 골 수에서 분리 및 문화 osteoclasts에 생체 외에서 프로토콜을 설명 합니다.

RANKL 기반 Osteoclast 문화 분석 결과의 마우스 골 수 mTORC1 Osteoclast 형성에의 역할을 조사 하

이 문서에서는, 우리는 분리 하 고 마우스 긴 뼈에서 골 수 기질 세포와 조 혈 줄기 세포 분화 방법 제시. 두 개의 서로 다른 프로토콜에는 저조한 다른 세포 인구 확장 및 차별화 osteoblasts, adipocytes, osteoclasts에 적합 되 게 됩니다.

절연, 문화, 및 골 수 기질 세포와 생쥐에서 Osteoclast 창시자의 차별화

식별 하 고 자석의 조합 및 형광 정렬 (맥 및 FACS)를 사용 하 여 murine 골에서 골수성 창시자의 6 하위 집합을 격리 하는 방법을 보여 줍니다. 이 프로토콜은 생체 외에서 문화 분석 (스 또는 액체 문화), 입양 전송 실험 vivo에서 및 RNA/단백질 분석에 대 한 사용할 수 있습니다.

식별 및 Oligopotent 및 계보 커밋된 골수성 창시자 마우스 골 수에서 격리

이 문서에서는 쥐 하악에서 골수 메선 줄기 세포를 분리, 재배, 선별 및 식별하기 위한 전체 골수 준수 및 유동 세포 측정 선별을 결합하는 방법을 제시합니다.

쥐에 있는 간골 골수 관진 줄기 세포의 격리 그리고 경작

여기서 우리는 보조 순응 방법이라고 불리는 SD 쥐로부터 BMM을 분리하기위한 프로토콜을 제시합니다.<br...

이차 부착 방법에 의한 쥐 뼈로부터 단핵구-대식세포 계통 세포의 분리

파골세포는 신체의 주요 뼈 흡수 세포입니다. 이 프로토콜은 인간 말초 혈액 단핵구로부터 파골세포의 시험관내 분화를 위한 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다. 이 방법은 항상성 및 질병에서 파골세포 생물학을 더 깊이 이해하는 데 중요한 도구로 사용될 수 있습니다.

기능성 파골세포와 인간 말초 혈액 CD14+ 단핵구의 분화

이 연구는 쥐의 골수에서 풍부한 호중구 세포외 트랩(NET)을 분리하는 두 가지 기술을 간략하게 설명합니다. 한 가지 방법은 상용 호중구 분리 키트와 밀도 구배 원심분리를 결합하는 반면, 다른 방법은 밀도 구배 원심분리만 사용합니다. 두 접근법 모두 말초 혈액 호중구의 NET을 능가하는 기능적 NET을 산출합니다.

비슷한 용량의 쥐 골수 호중구를 분리하기 위한 독특한 접근법

이 프로토콜은 유도만능줄기세포(iPSC)에서 인간 파골세포의 분화를 제시하고 파골세포 및 파골세포 전구체의 특성 분석 방법을 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포에서 파골세포의 분화 및 특성화

턱뼈 골수에서 채취한 중간엽 줄기세포는 다양한 분화, 자가 재생, 면역 조절에 중요한 기능을 합니다. 그들은 유전자 치료, 조직 공학 및 재생 의학에서 전구 세포의 중요한 저장소로 부상했습니다. 여기에서는 쥐에서 턱뼈 골수 중간엽 줄기세포를 분리하는 독특한 방법을 제시합니다.

Technique for Isolation and Culture of Rat Jaw Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells(쥐 턱뼈 골수 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 기법)

배우세요 쥐 골수에서 파골세포 전구체를 분리하고 정제하여 분화시키는 효율적인 방법을. 이 기술은 골다공증 및 골대사 질환 연구에 안정적인 세포 공급원을 제공하여 실험의 신뢰성을 높입니다.

쥐 골 골에서의 파 골 세포 전 구체의 분리, 정제 및 분화

더 많은 동영상 탐색