Name: 조직 재생에 대 한 젤라틴의 젖은 회전-기반 성형 과정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-07T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: 배우세요 젤라틴 기반 생체재료의 젖은 회전 성형법을 활용한 조직공학 및 재생의학 연구 방법입니다. 이 기술은 신경계 치료와 혈관 대체에 활용 가능하며 초보 연구자도 쉽게 구현할 수 있습니다.

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이 연구는 국가 방위 정부 (MAB-105-070;에 의해 지원 되었다 MAB-106-077; MAB-107-032; MAB-107-065)의 과학 및 기술 (대부분 107-2320-B016-016), 세 배 서비스 종합 병원, 국가 방위 의료 센터, 대만 (TSGH-C106-046; TSGH-C106-115; TSGH-C107-041), 쳉-Hsin 종합 병원 그리고 국가 방위 의료 센터 협력 (CH-NDMC-107-8).

지방 조직으로는 제도적 검토 보드의 세 배 서비스 종합 병원에 의해 인증 정형 외과 수술에서 가져온, 타이 페이, 대만, R.O.C. 절차 동물 주제와 관련 된 국가에서 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었습니다. 국방 의료 센터, 대만 (R.O.C)입니다.
1. 젖은 프로세스 회전
<ol><li>
솔루션 준비
	<ol>
<li>5% (w/v) 솔루션 농도를 이중 증 류 물 100 mL에 젤라틴 가루 5g을 분해.</li>
		<li>어떤 거품 없이 완전히 균질 분산을 달성 하기 위해 하룻밤 60-70 ° C에서 천천히 혼합물을 저 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
젖은 회전
	<ol>
<li>섬유 형성 참고: 방법의 회로도 그림 1에 표시 됩니다. 회전 설정 연동 펌프 기계를 갖춘 하 높은-정밀 속도 제공 하 고 제어 흐름의 매끄러운 납품 ( 재료의 표참조).<ol>
<li>명확한 비닐 튜브에 솔루션 인젝터로 26 G x 1/2 인치 (0.45 m m x 12 m m) 주사기를 연결 합니다.</li>
			<li>100 mL 비 커 유리 응고 목욕으로 사용할 99.5% 아세톤 솔루션의 준비.</li>
			<li>연동 펌프 기계 21 rpm (3.25 mL/min)에서 실행 하 고 젤라틴 솔루션 배포 하기 전에 아세톤 솔루션에 몇 초 동안 서 보자.</li>
			<li>아세톤 솔루션에서 젤라틴 섬유 밖으로가 고 1:20 (w/w) polycaprolactone/dichloromethane (PCL/DCM) 솔루션의 2.5% (w/v)에 그들을 담가.</li>
			<li>섬유 건조 PCL/DCM 솔루션에 하룻밤 실 온에서 후드 젤라틴을 하자.</li>
		</ol>
</li>
		<li>관 형성 참고: 방법의 회로도 그림 1B에 표시 됩니다.<ol>
<li>24 G x 3/4 인치 (0.7 m m x 19 m m)의 말 초 정 맥 카 테 터를 사용 하 여 관 형으로.</li>
			<li>젤라틴 솔루션에 테 로드 누르고 거기 3에 대 한 s.</li>
			<li>아세톤 솔루션으로 카 테 터를 로드 하 고 1 분 동안.</li>
			<li>젤라틴 솔루션으로 카 테 터를 다시 로드 하는 방법 그것을 잡고 거기 3에 대 한 s.</li>
			<li>이 대체 프로시저 20 x를 반복 합니다.</li>
			<li>아세톤 솔루션에서 카 테 터를 꺼내와 성형된 튜브 5 분 동안 실내 온도에 건조 하 게.</li>
			<li>부드럽게는 hemostat를 사용 하 여 카 테 터에서 젤라틴 튜브를 꺼내와 신중 하 게 한잔에 2.5% (w/v)의 침수와 파스퇴르 피펫으로 PCL/DCM 솔루션 젤라틴 튜브를 전송.</li>
			<li>파스퇴르 피 펫 포함 젤라틴 튜브 및 PCL/DCM 솔루션 건조 하룻밤 실 온에서 후드를 하자.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 젤라틴 튜브의 형태
<ol><li>탄소 스텁에 말린된 젤라틴 튜브의 조각을 탑재 합니다.</li>
	<li>이온 스퍼터 coater 기계에 샘플을 넣어 ( 재료의 표참조)와 60에 대 한 골드 샘플 코트 s; 다음, 전자 현미경 검사 법을 검사 하 여 그 형태를 관찰 ( 재료의 표참조).</li>
</ol>3입니다. 인간 지방 줄기 세포의 문화
<ol><li>지방 조직 (임상 수술에 의해 구두 지방 조직에서 얻은) 10 mL의 0.1 M 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS), 1% 페니실린/스, 및 0.1% 포도 당으로 구성 된 전송 솔루션을 포함 하는 배양 접시에 놓습니다.</li>
	<li>메스 칼 날 작은 조각 (1 m m2미만)으로 조직을 잘라.</li>
	<li>15 mL 플라스틱 튜브를 5 분 동안 500 x g 에서 원심 분리기로 조직을 전송 합니다.</li>
	<li>제거는 상쾌한 고 37 ° c, 습도 분위기에서 0.1% 콜라와 Dulbecco의 수정된이 글의 중간 (4 m L-글루타민 m, 1 mM 나트륨 pyruvate, 및 15 mg/L 페 놀 레드의 구성 된 DMEM) 10 mL를 포함 하는 플라스틱 튜브에 앙금을 품 어 1 일에 대 한 95% 공기와 5% CO2를 포함 하는.</li>
	<li>5 분 동안 500 x g 에 플라스틱 튜브를 원심, 신중 하 게는 상쾌한 삭제 (만지지 마십시오는 앙금), 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 포함 된 DMEM의 10 mL를 추가 하 여 퇴적 물을 부드럽게 중단 하 고 그것은 37 ° C에서 1 일 서 보자 95% 공기와 5% CO2를 포함 하는 습도 분위기에서.</li>
	<li>5 분 동안 500 x g 에 플라스틱 튜브를 원심 및 삭제는 상쾌한 신중 하 게; 다음, 4 mL를 포함 하는 T25 문화 플라스 크에 줄기 세포 매체 (keratinocyte 혈 청 무료 매체 (K-SFM), 5 %FBS, N-아 세 틸-L-시스테인, ascorbic 산-2-인산 염, 스 고 암포의의 구성 된)는 앙금을 중단, 전송의 1 mL를 추가 줄기 세포 매체, 그리고 그것은 포함 된 95% 공기와 5% CO2습도 분위기에서 37 ° C에서 3 일 동안 서 보자.</li>
	<li>삭제는 상쾌한 0.25% trypsin ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA)의 1 mL을 추가 하 고 문화 술병의 바닥에서 세포를 분리 하려면 95% 공기와 5% CO2 3.5 분,를 포함 하는 습도 분위기에서 37 ° C에서 품 어.</li>
	<li>FBS의 1 mL을 추가 하 고 혼합물, 중단 microcentrifuge 관에 그것을 전송.</li>
	<li>500 x g 3.5 분에서 현 탁 액을 원심, 줄기 세포 매체의 1 mL와 앙금을 일시 중단 하 고 줄기 세포 매체;의 5 mL를 포함 하는 문화 플라스 크에 전송 그런 다음 포함 된 95% 공기와 5% CO2습도 분위기에서 37 ° C에서 그것을 유지.</li>
	<li>3 일 마다 줄기 세포 매체를 변경 하 여 subculture를 유지 합니다.</li>
</ol>4. 젤라틴 튜브에 세포의 경작
<ol><li>2 h;에 대 한 자외선과 젤라틴 관 소독 그런 다음, 75% (v/v) 에탄올에 몰두 하 고 그것을 씻어 잔여 에탄올을 제거 하려면 줄기 세포 매체와 2 배.</li>
	<li>
인간 지방 줄기 세포 (hASCs) 문화 플라스 크에서 수집 합니다.
	<ol>
<li>문화 플라스 크에서 매체를 제거 합니다.</li>
		<li>0.25 %trypsin-EDTA의 1 mL을 추가 하 고 37 ° c 95% 공기와 5% CO2 3.5 분, hASCs 문화 술병의 바닥에서 분리를 포함 하는 습도 분위기에서 품 어.</li>
		<li>FBS의 1 mL을 추가 하 고 혼합물, 중단 microcentrifuge 관에 그것을 전송.</li>
		<li>500 x g 3.5 분;에서 microcentrifuge 관을 원심 그리고는 상쾌한을 신중 하 게, 삭제 줄기 세포 매체의 1 mL와 앙금을 일시 중단 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>줄기 세포 매체의 3 mL를 포함 하는 6-잘 접시에서 젤라틴 튜브를 놓고 4 x 104 ; 튜브에 hASCs의 씨앗 포함 된 95% 공기와 5% CO2습도 분위기에서 37 ° C에서 2 주 동안 그들을 품 어.</li>
	<li>변경 줄기 세포 매체 3 일 마다 세포 성장에 대 한 충분 한 영양을 제공 합니다.</li>
</ol>5입니다. Immunocytochemistry
<ol><li>줄기 세포 매체를 제거 하 고 PBS 가진 잘 씻어.</li>
	<li>0.1% 아세트산 빙하 실 온에서 30 분으로 셀과 튜브를 수정 합니다.</li>
	<li>PBS로 세척 잘 2 배입니다.</li>
	<li>계면 활성 제 (NP-40, 0.05%)를 추가 그리고 실 온에서 10 분 동안 품 어.</li>
	<li>PBS로 세척 잘 3 배입니다.</li>
	<li>2% 정상 염소 혈 청을 추가 하 고 30 분 동안 실 온에서 품 어.</li>
	<li>솔루션을 가만히 따르다, 1 차적인 항 체 nestin (신경 조상 세포 마커), 추가 하 고 하룻밤 4 ° c.에 품 어</li>
	<li>PBS로 세척 잘 3 배입니다.</li>
	<li>이차 항 체 당나귀 안티 mouse fluorescein isothiocyanate (FITC)를 추가 하 고 샘플 2 h에 대 한 어둠 속에서 계속.</li>
	<li>PBS로 세척 잘 3 배입니다.</li>
	<li>Hoechst 33342 핵 얼룩 및 실 온에서 10 분 동안 품 어의 1 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>잘 씻어 부드럽게 형광 현미경으로 관찰 하 고.</li>
</ol>6. Vivo 생체 적합성 테스트에서
참고: 201-225 g 사이의 무게로 쥐 성공적으로 테스트 되었습니다이 프로토콜을 사용 하 여.
<ol><li>
마 취
	<ol>
<li>유도 하 고 유지 하는 마 취; 가급적 이면, anesthetize는 쥐 (8 주 된 Sprague Dawley 쥐, 여성)를 통해 tiletamine와 zolazepam의 근육 내 주사 (25 mg/kg + 25 mg/kg, 각각) 및 xylazine (5 mg/kg). 통증 자극 테스트를 수행 하는 anesthetization를 확인 하는 쥐의 손가락을 눌러.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 사이트의 살 균
	<ol>
<li>면도 및 (이상 목 뒤쪽) 쥐의 trapezius 영역의 피부를 깨끗 하 고 피부 (100mg/mL)의 무 균 상태를 준비 povidone-요오드 로션으로 닦아.</li>
		<li>세균성 전송 및 외과 사이트의 후속 오염 줄이기 위해 불 임 수술 커튼으로 쥐를 커버.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
젤라틴 튜브의 주입
	<ol>
<li>부드럽게 수술가 위를 쥐의 trapezius 영역의 피부를 잘라.</li>
		<li>2cm의 상처를 만들고 근 막 및 근육 사이의 레이어에 직접 젤라틴 튜브를 배치 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Postimplantation 수술
	<ol>
<li>나일론 봉합 된 상처를 닫고 povidone-요오드 솔루션 (100 mg/mL)와 그것을 닦아.</li>
		<li>Ketoprofen (2.5 mg/kg) 및 cefazolin (15 mg/kg)의 근육 주사를 통해 쥐를 유도.</li>
		<li>7 일 동안 무 균 조건 하에서 쥐를 유지.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
안락사
	<ol>
<li>쥐는 안락사에 AVMA 지침에 따라 CO2 질 통해 안락사 이다. 발가락과 꼬리 핀치, 뒤에 하트 비트를 위해 가슴을 만져 여 쥐의 죽음을 확인 합니다.</li>
		<li>부드럽게 메스 칼 날 쥐를 잘라, 이식된 조직, 제거 하 고 관찰에 대 한 사진을 찍어.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

우리는 간단한 젖은 조직 재생에 대 한 천연 고분자의 연구에 적용할 수 있는 기술 회전을 사용 하 여 젤라틴 기반 생체 재료의 개발을 제시. 이 작품 자체는 젤라틴의 속성을 최적화 하는 목적으로 다른 소스를 추가 하지 않고 훌륭한 단백질 소스로 젤라틴 제조의 가능성을 보여주었다. 젤라틴-기반 생체 재료의 개발 실 온 (22-26 ° C)에서 완전히 실행 되었다. 정확한 솔루션 농도 유지 하 고 모든 거품을 피하기 위해 솔루션을 매우 원활 하 게 교 반 부드러운 솔루션 준비는 프로토콜 내에서 중요 한 단계입니다. 솔루션에 거품의 모양, 주사기에 로드 하는 경우에 특히 응고 매체에 젤라틴의 형태로 적용 됩니다.
젤라틴-기반 바이오 폴리머 분자의 desolvation를 일으키는 원인이 되 고 고체 폴리머 단계11에 젤라틴 솔루션을 침전 하는 적당 한 응고 매체에 젤라틴 솔루션의 위상 전환을 통해 얻은 했다. 습식 방법 회전의이 기본 개념을 채...

조직 재생의 최신 개발 조직 공학, 의료 치료에 새로운 치료 전략의 개선에 대 한 도전을 나타내는 응용 프로그램을 포함 한다. 예를 들어 신 경계 재생, 다음 부상 또는 질병의 제한 가능성 전세계 중요 한 건강 문제가 포즈지 않습니다. 신 경계와 관련 pathophysiological 프로세스의 복잡성 때문에 안정화 수술의 구현 또는 전통적인 autograft 사용 표시 되었습니다 기능 결과에 혜택을 제공 하지만 대 한 강력한 증거가 없다 척추 고정 수술1,2의 효과. 손상된 된 영역에서 조직 손실 이며 hypertrophically 유도 이다3, 결국 밀도 glial 흉터4,5형성으로 바뀝니다. 이 매트릭스는 블록 신경의 복구6,7 을 작동 하 고, 따라서, 크게 방해 재생 방 벽으로 작동 합니다. 따라서, 적당 한 충전 간격 재 조직의 손실을 방지 하 고 신경 세포의 직접 교체를 제공 하 여 뿐만 아니라 손상된 된 영역 무결성을 유지 관리 하 여 흉터에 관련 된 결합 조직 형성을 줄일 것으로 예상 되 고 축 삭 재생을 촉진 하는 회로가
고분자 생체 조직 재생 치료, 자연 세포 외 기질 (ECM) 지원을 통해 셀 또는 축 삭 행동과 조직 진행의 규정에 따라 건설 기계로 선호 되었습니다. 섬유 포맷은 다양 한 재료 때문에 그것의 1 차원 구조8대 한 빌딩 블록으로 일반적으로 간주 됩니다. 섬유는 용융 압출 또는 습식 방법; 회전에 의해 일반적으로 얻을 수 있습니다. 그러나, 큰 크기와 비용의 장비와 이러한 방법을 수행 하는 데 어려움은 도전. 또한, 고분자 섬유에 관련 된 일의 대부분은 합성 또는 복합 재료에 집중 되었습니다. 천연 고분자 소재의 원천으로 인간의 신체에 대 한 더 나은 생체 적합성 속성을 제공합니다. 그럼에도 불구 하 고, 자연 고분자 섬유의 맞춤을 상대적으로 더 어렵습니다 보다 합성 폴리머 소스9. 따라서, 소재 섬유에 단백질의 풍부한 원천으로 자연적인 중합체의 변환은 중요 한 전략은-뿐만 아니라 소재 섬유 수 직접 따라서, 단위체에는 불필요 한 변환을 피하 원료에서 분리 하지만 단백질 섬유는 또한 좋은 모양 및 유리한 특성10있다.
이와 관련는 조직 공학에 대 한 실험실 규모에 구현할 수 있는 젖은 회전의 기본 개념을 통해 천연 고분자 섬유의 제조에 대 한 저렴 한 처리 방법에 설명 합니다. 젖은 회전 압출 및 응고 폴리머 솔루션의 적당 한 폴리머 nonsolvent에 의해 수행 됩니다. 응고 중에 첨가 하는 적절 한, 점성 솔루션 폴리머 분자 분해를 하면 됩니다. 위상 전환을 통해는 필 라 멘 트 다음 그들의 용 해도 잃게 되 고 고체 폴리머 단계11의 형태로 침전 된다. 이 개념을 언급 하는, 우리가 다음 확장 튜브 형태로 젤라틴의 개발 성형 프로세스, 조직 재생 응용 프로그램에 대 한 적절 한 간주 됩니다. 또한, 본질적으로, 우리는 또한 개발할 수 있습니다 젤라틴 섬유에서 자료의 어떤 모양 든 지 (예를 들어, 젤라틴 도관 올리고 여러 젤라틴 섬유에서), 다른 응용 프로그램을 원하는.
젤라틴, 생 분해성 천연 폴리머, 변성 및 분해 된 콜라겐, 콜라겐12의 모든 semicrystalline, 비정 질, 또는 3 배 나선형 상태를 포함 하 여에서 형성 된다. 그것은 잘 알려져 그 콜라겐은 척추 동물 및 무척 추 동물13,14, 신경 성장 유도 주요 ECM의 단백질 구조와 비슷한의 모든 결합 조직에 필수적인 구조 단백질, 동시에, glycosaminoglycan 척수 부상 중 분 비의 다량을 대체 합니다. 따라서, 소스로 젤라틴을 사용 하 여 모든 의료 차량에 대 한 좋은 선택 것입니다. 되 고 게다가 저렴 한 소스, 젤라틴은 또한 생 분해성 및 cytocompatible 및 임시 제거 필러15수를 임상적으로 입증 된. , 튜브 형태로 개발 여기 설명 하는 생체 외에서 그리고 vivo에서 테스트 젤라틴은 우수한 생체 적합성 고 미래의 조직 엔지니어링 응용 프로그램에 대 한 적합성을 보여줍니다. 인간 지방 줄기 세포 배양, 젤라틴 튜브 신경 셀 표식으로 긍정적인 nestin 얼룩을 사용 하 여 신경 조상 세포로 세포 분화를 향상. 또한,이 연구에서 설립 하는 방법에 의해 생산 격차 자료 작성으로 젤라틴 관리 하 고 안전 하 고 크게 혜택을 현재 조직의 향상을 위한 상호 천연 고분자를 개발 하는 조직 엔지니어 예정입니다. 재생 전략입니다.

<table><tbody><tr><td><강>용액 준비:</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>젤라틴 B형(돼지)</td><td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 10733</td><td>500g 바이알</td></tr><tr><td><강한>습식 방사 공정:</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>Gilson</td><td>모델 M312</td><td>Minipuls*3</td></tr><tr><td>플라스틱 튜브 커넥터</td><td>세계 정밀 기기</td><td>14011</td><td>1 박스</td></tr><tr><td>주사기</td><td>Sterican</td><td>5A06258541</td><td>26Gx1/2"(0.45 x 12mm)</td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 00010</td><td>2.5 L 바이알</td></tr><tr><td>Polycaprolactone CAPA 6500</td><td>Perstorp</td><td>24980-41-4-Dichloromethane</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Scharlau</td><td>CL03421000</td><td>1L 바이알</td></tr><tr><td>유리 파스퇴르 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A-Hemostat</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Shinetec 기기</td><td>ST-B021</td><td>-</td></tr><tr><td>말초 정맥 카테터(Introcan Certo)</td><td>B. Braun</td><td>1B03258241</td><td>24Gx3/4"(0.7 x 19mm)</td></tr><tr><td>젤라틴 튜브의 형태:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>이온 스퍼터 코터 기계&nbsp;</td><td>Hitachi</td><td>e1010</td><td>-</td></tr><tr><td>주사 전자 현미경</td><td>Hitachi</td><td>S-3000N</td><td>-</td></tr><tr><td>젤라틴 튜브의 세포 배양:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>488625</td><td>100 mL 바이알</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Gibco</td><td>923119</td><td>500 mL 바이알</td></tr><tr><td>Dulbecco의 변형된 독수리 배지&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>31600-034</td><td>분말</td></tr><tr><td>각질 세포-SFM 배지</td><td>Gibco</td><td>10744-019</td><td>500mL 바이알</td></tr><tr><td>T25 배양 플라스크</td><td>TPP</td><td>90025</td><td>VENT 유형</td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>Falcon</td><td>1209938</td><td>-</td></tr><tr><td>Immunocytochemistry:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phospate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>654471</td><td>500mL 바이알</td></tr><tr><td>아세트산 빙하</td><td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 00697</td><td>500 mL 바이알</td></tr><tr><td>NP-40 계면활성제(Tergitol 용액)</td><td>Sigma</td><td>056K0151</td><td>500 mL 바이알</td></tr><tr><td>Normal goat serum</td><td>Vector Laboratories</td><td>S-1000-20</td><td>20 mL 바이알, 농축</td></tr><tr><td>Nestin (1차 항체)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-23927-Donkey</td><td></td></tr> <tr><td>anti-mouse-fluorescein isothiocyanate ( 보조 항체)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-2099-Hoechst</td><td></td></tr> <tr><td>33342</td><td>Anaspec</td><td>AS-83218</td><td>5 mL vial</td></tr><tr><td>In vivo biocompatibility test:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tiletamine+zolazepam&nbsp;</td><td>Virbac</td><td>BC91</td><td>5 mL 바이알</td></tr><tr><td>자일라진</td><td>바이엘 한국</td><td>KR03227</td><td>10 mL 바이알</td></tr><tr><td>케토프로펜</td><td>아스타</td><td>1406232</td><td>2 mL 바이알</td></tr><tr><td>포비돈-요오드 용액</td><td>Everstar</td><td>HA161202</td><td>4 L 배럴</td></tr><tr><td>Cefazolin</td><td>China Chemical & 제약</td><td>18P909</td><td>1g 유리 병</td></tr><tr><td>메스 칼날</td><td>신 텍 기</td><td>ST-B021</td> <td>●</td></tr> <tr><td>서 지어 가위</td><td>신 텍 기</td><td>ST-B021</td><td>●</td></tr></tbody></table>

조직 재생에 대 한 젤라틴의 젖은 회전-기반 성형 과정

Wet-spinning-based Molding Process of Gelatin for Tissue Regeneration

이 문서는 monofilament 섬유 또는 다른 적절 한 형태의 젤라틴, 천연 폴리머로 조작 하는 저렴 한 메서드를 제공 합니다. 회전 방법 젖은 통해 젤라틴 섬유는 적당 한 응고 매체에 부드럽게 밀어 남에 의해 생산 됩니다. 이 젤라틴 섬유 및 직물의 기능을 모방 하는 능력의 기능 표면 증가, 젤라틴이이 개념을 참조 하 여 튜브 형태로 성형 수 있습니다. 생체 외에서 그리고 vivo에서 테스트 검사, 젤라틴 튜브 조직 공학에서 응용 프로그램에 대 한 좋은 잠재력을 보여 줍니다. 행동으로 적당 한 충전 간격 재, 젤라틴 (예를 들어, 긴장 또는 심장 혈관 시스템에), 손상된 된 영역에 조직을 대체할 뿐 아니라 줄기 세포와 신경 회로의 직접 교체를 제공 하 여 재생을 촉진 하 튜브를 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 천연 폴리머에 따라 소재를 만들기 위한 자세한 절차를 제공 합니다 그리고 구현 크게 조직 재생 전략을 실현 하는 데 도움이 상호 천연 고분자의 개발 혜택을 받을 것으로 예상 된다.

이 연구에서 우리는 성공적으로 섬유 (그림 2A)에 젤라틴과 사용자 친화적인 젖은 회전 개념을 통해 튜브 (그림 2B, C)을 개발. 이 젤라틴 기반 물자는 그들의 모양에 따라 어떤 의료 도구로 활용할 수 있습니다. 우리 생체 외에서 그리고 vivo에서 테스트를 수행 하 여 젤라틴 튜브의 생체 적합성 시험 기능 표면과 같은 소재의 프레임은 조직 재생을 위해 더 적당 한 고려 하 고.
젤라틴 튜브에 대 한 개요를 얻으려면, 먼저, 우리가 실시 형태학 관찰 스캐닝 전자 현미경 검사 법 (그림 3)를 사용 하 여. 결과 젤라틴 튜브의 표면이 매우 부드...

우리가 개발 하 고 젤라틴 기반 생체 조직 공학의 응용 프로그램에 대 한 사용의 건설에 대 한 젖은 회전 개념에 따라 프로토콜을 설명.

This article presents an inexpensive method to fabricate gelatin, as a natural polymer, into monofilament fibers or other appropriate forms. Through the ...

이 프로토콜은 단일 섬유 스트립에서 원하는 의료 응용 프로그램에 사용할 수있는 다양한 스트립으로 재료를 개발하기 위해 습식 방적의 기본 개념을 향상시킵니다. 이 기술은 간단하고 저렴하며, 관심있는 물질을 위한 단백질 자원에 천연 폴리머의 사용자 정의를 위한 합성 폴리머를 첨가할 필요가 없습니다. 이 기술은 중추 또는 말초 신경계 치료, 혈관 교체 또는 직접 요로 재건과 같은 감기 치료를 죽이는 생체 물질 적 개발로 확장 될 수 있습니다.이 방법은 조직 신경화 또는 재생 의학을 위한 전략으로 포함하여 의학 응용을 위한 것입니다. 이 기술은 초보자가 쉽게 구현 할 수 있습니다. 여러 성형 반복 후 최적의 형성을 유지하기 위해 솔루션의 품질을 항상 확인해야 합니다.젖은 회전 튜브를 형성하기 위해 먼저 24 게이지를 3 분기 인치 주변 정맥 카테터를 갓 준비 된 젤라틴 용액에 3 초 동안 담근 다음 갓 준비 된 아세톤 솔루션에 1 분 동안 침지합니다. 이 단계를 20번 반복합니다. 마지막 아세톤 침지 후, 성형 튜브를 실온에서 5분 동안 건조하게 하고, 하층 온도에서 2.5%의 폴리카폴락톤 디클로로메탄 용액을 사용하여 카테터에서 젤라틴 튜브를 유리 파스퇴르 파이펫으로 조심스럽게 옮기도록 한다.다음 아침, 75%에탄올에 튜브를 잠깐 잠정적으로 잠정적으로 잠정하기 전에 자외선 아래에서 2 시간 동안 젤라틴을 살균하십시오. 그런 다음 줄기 세포 배지로 튜브를 두 번 세척하여 잔류 에탄올을 제거합니다. 세포 배양으로 젤라틴 튜브를 육성하기 위해 배양 플라스크에서 인간 지방 줄기 세포의 수피네이트 끝을 0.25%의 1밀리리터로 대체하여 섭씨 37도및 이산화탄소 5%에서 3.5분 배양에 대한 트립신-EDTA를 1밀리리터로 대체한다.세포가 분리되면 태아 소 혈청의 1 밀리리터로 반응을 체포하고 세포 현탁액을 미세 원심 분리 튜브로 옮기십시오. 원심분리에 의해 세포를 수집하고 줄기 세포 매체의 1 밀리리터에서 펠릿을 재보힙. 그런 다음 젤라틴 튜브를 줄기 세포 배지 3 밀리리터를 포함하는 6웰 플레이트의 1웰에 놓습니다.세포를 세은 후, 세포 배양 배양기에서 2주 동안 튜브내로 줄기세포를 4번 10번 시드한다. 8주된 스프라그 Dawley 쥐의 발가락 핀치에 대한 반응 부족으로 적절한 수준의 침착을 확인한 후, 트라페지오 부위에서 모발을 면도하고 포비도네 요오드 용액으로 노출된 피부를 살균한다. 수술 부위의 세균 오염을 줄이기 위해 멸균 수술 커튼으로 쥐를 덮고 수술 가위를 사용하여 얕고 2센티미터 긴 피부 절개를 합니다.젤라틴 튜브를 근막과 근육 사이의 층에 직접 넣고 나일론 봉합사를 사용하여 상처를 닫습니다. 그런 다음 포비도오드 요오드 용액으로 절개를 살균합니다. 케토프로펜과 세파졸린의 근육 내 주입을 통해 쥐를 유도하고 7 일 동안 무균 조건하에서 동물을 유지합니다.이 사용자 친화적 인 습식 방사 개념은 섬유와 튜브로 젤라틴을 개발하는 데 사용할 수 있습니다. 전자 현미경 을 스캔하여 젤라틴 튜브의 형태학적 관측은 200 마이크로미터 의 내부 직경과 약 20 마이크로미터의 두께로 매우 매끄러운 표면을 나타낸다. 신경세포 마커 발현을 위한 인간 지방 줄기 세포 배양 젤라틴 튜브의 염색은 세포가 젤라틴 튜브에 침투및 부착하고 신경 전구 세포로 분화할 수 있음을 시사하는 다중 검출된 핵과 함께 마커에 대한 긍정적인 염색을 보여준다.젤라틴 튜브를 근막층으로 이식하면 적색, 붓기 또는 기타 염증 증상이 국소 조직 내에서 관찰되지 않고 잘 발달된 결합 조직으로 둘러싸여 있기 때문에 그 안전성 및 생체 적합성을 확인합니다. 이 절차를 2점 1로 시도하는 동안 각 솔루션의 특정 코팅 시간에 금형의 침지를 보장하는 것은 정확한 튜브 형태를 구축하는 데 매우 중요합니다. 이 절차에 따라, 우리의 실험은 조직 재생 전략에 대한 생체 재료의 결과를 정확하게 조사하기 위해 수행 될 수 있습니다 인간 질환의 동물 모델을 사용합니다.개발 후, 이 기술은 결정된 의료 응용을 위한 물질의 어떤 모형으로 간단한 상관 관계 특성 폴리머를 개발하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 정상적인 사용 조건하에서 폴리카폴톤 디클로로메탄 용액은 최소한의 환경 적 위험을 제시하는 것으로 간주되지만 적절한 생물 안전 캐비닛에서이 화학 물질로 어떤 단계를 수행하는 것을 잊지 마십시오.

wet-spinning-based-molding-process-of-gelatin-for-tissue-regeneration

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

Electrospun의 공사장 공중 발판은 조직 공학 응용 프로그램을위한 포스트 프로덕션을 처리할 수 있습니다. 여기 불임 (무균 생산 또는 멸균 포스트 생산)을 달성하기 위해하고 적절한 biomechanical 속성을 달성위한 두꺼운 공사장 공중 발판을 (멀티 layering이 열을 사용하거나 증기가 풀림으로) 제작을 위해, 복잡한 공사장 공중 발판을 (연속 회전으로) 회전하는 방법을 설명합니다.

조직 공학을위한 Electrospun의 Fibres의 Postproduction 처리

bioprinter는 희생 형에 따라 패턴 하이드로 겔을 만드는 데 사용되었다. 폴록 사머 형은 두 번째 히드로 겔로 채워질 그리고 세 번째 하이드로 겔로 채워졌다 빈 공간을 남겨 용출되었다. 이 방법은 생체 고분자의 복잡한 구조를 생성하는 빠른 용출과 폴록 사머의 좋은 인쇄 적성을 사용합니다.

모방의 창조 3D 세포 배양을위한 두 구성 요소 히드로 겔에 대한 Thermoresponsive 역 금형 인쇄

우리는 세포의 행동을 연구하는 전기 방사 막을 내 micropockets의 제조를위한 기술을보고합니다. 구체적으로, 우리는 PLGA (폴리 (락 티드 - 코 - 글리콜 라이드)) 마이크로 피처 구비 각막 생체 재료 소자의 생산을위한 마이크로 광과 전기 방사의 조합을 설명한다.

마이크로 광 및 전기 방사의 조합은 각막 재생을위한 틈새를 장착 멤브레인을 생산하는

이 연구에서는 콜라겐, 평활근 세포 및 내피 세포를 직접 배양하여 살아있는 혈관 조직을 신속하게 만드는 기술을 제시합니다. 또한 엔지니어링된 혈관 조직의 기계적 특성화를 위한 새로운 프로토콜이 설명됩니다.

혈관 조직 재생을위한 엔지니어링 3D Cellularized 콜라겐 젤

프로토콜 분해성 thermoresponsive hydrogels hydrazone 대량 규모, 미, 그리고 나노, 젤 나노 입자 및 nanofibers의 준비에 대 한 후자에 고분자 올리고의 cross-linking에 따라 제작에 대 한 설명 합니다.

자기 조립, 분해 Thermoresponsive Hydrogels 반응 압출, 마이크로, 통해 여러 길이 가늠 자에를 조작 하 고 전기

이 프로토콜 cryogelation 기술로 제작을 통합 하 여 탄력 있는 3D macroporous microcryogels의 제작을 설명 합니다. 재생 치료를 촉진 하기 위하여 쉽게 주입된 비보 수 또는 생체 외에서 높은 처리량 마약 검사에 대 한 배열로 조립 셀 로딩 시 3D microtissues 생성 됩니다.

주 사용 재생 치료와 높은 처리량 마약 검사에 대 한 3D Microtissues

미세 회전 및 재생성된 실크 fibroin monofilament의 미세 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.

미세 드라이 회전 및 재생성된 실크 Fibroin 섬유의 특성

여기에 제시된 젤라틴 메타크릴로일의 3D 바이오프린팅을 위한 방법이다.

젤라틴 메타크릴 하이드로겔 기반 바이오잉크의 3D 바이오프린팅 프로토콜

하이드로겔 형성 중 전단 처리는 전단력이 제거된 후 전단이 얇지만 빠르게 재구성되는 마이크로겔 현탁액의 생성을 초래합니다. 이러한 물질은 바이오프린팅 복합체, 세포 함유 구조의 지지 매트릭스로 사용되었습니다. 여기서는지지 베드 및 호환 가능한 바이오 잉크를 제조하는 데 사용되는 방법을 설명합니다.

부유 된 3D 바이오 프린팅을위한 겔화 동안 전단 처리에 의해 형성된 Agarose 유체 겔

이 기사에서는 미세유체 장치를 사용한 고처리량 젤라틴 메타크릴로일 마이크로겔 제조, 마이크로젤을 부유 가능한 분말(마이크로 에어로젤)로 변환, 마이크로겔의 화학적 조립을 위한 입상 하이드로겔 스캐폴드, 3D 바이오프린팅을 위한 미세 다공성이 보존된 입상 하이드로겔 바이오잉크 개발에 대해 설명합니다.

젤라틴 메타크릴로일 과립형 하이드로겔 스캐폴드: 고처리량 마이크로겔 제조, 동결건조, 화학 조립 및 3D 바이오프린팅

이 연구는 새로운 κ-carrageenan 서브 마이크로겔 현탁액 수조를 소개하여 놀라운 가역적 재밍-언재밍 전이 특성을 보여줍니다. 이러한 특성은 임베디드 3D 바이오프린팅에서 생체 모방 조직 및 장기를 구성하는 데 기여합니다. 고해상도와 세포 성장으로 심장/식도 유사 조직의 성공적인 프린팅은 고품질 바이오프린팅 및 조직 공학 응용 분야를 보여줍니다.

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 조직 유사 구조의 임베디드 바이오프린팅

배우세요 젤라틴 기반 생체재료의 젖은 회전 성형법을 활용한 조직공학 및 재생의학 연구 방법입니다. 이 기술은 신경계 치료와 혈관 대체에 활용 가능하며 초보 연구자도 쉽게 구현할 수 있습니다.

조직 재생에 대 한 젤라틴의 젖은 회전-기반 성형 과정

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