클러스터 Stomata 애기 thaliana 묘에 설탕 솔루션 집중 치료에 의해 위한 유도 시스템

이 방법은 식물 발달 생물학의 중요한 질문에 대답했습니다. 즉, 스토마타의 공간 분포의 중요성은 무엇입니까? 자당 솔루션을 사용하여 클러스터 된 스토마타에 대한 우리의 유도 시스템은 매우 쉽고 직접 아라비도시스 탈리아나의 형질 전환 또는 돌연변이 라인에 적용할 수 있습니다.

시작하려면 무라시게-스쿠그 중간 소금 1.1그램과 15그램의 자당을 비커에 넣으세요. 증류수 490밀리리터를 비커에 넣고 저어주바와 섞어줍니다. 수산화 칼륨을 사용하여 pH를 5.8로 조정합니다.

그런 다음 500 밀리리터의 증류수로 용액을 희석하고 희석된 용액을 중간 병으로 옮기습니다. 이 후 솔루션을 자동 복제합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 멸균 솔루션을 준비합니다.

그런 다음, 무균 조건하에서 작동, 약 배치 50 형질형 A.thaliana 씨앗1.5 밀리 리터 튜브에 형광 마커를 들고. 다음으로 튜브에 70%에탄올1밀리리터를 넣고 튜브를 5번 반전시켜 섞는다. 씨앗이 튜브 의 바닥에 가라 앉도록 허용 한 후, 마이크로 피펫으로 에탄올을 부드럽게 제거합니다.

씨앗에 살균 용액 1 밀리리터를 추가하고 튜브를 5번 반전하여 혼합합니다. 마이크로피펫으로 씨앗에서 살균 용액을 부드럽게 제거합니다. 그런 다음 멸균 물 1 밀리리터를 추가합니다.

무라시게 스쿠오 용액 1.5밀리리터를 24웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 그런 다음 각 우물에 두 개의 멸균 된 씨앗을 추가합니다. 파라필름의 두 층을 사용하여, 플레이트에 뚜껑을 테이프.

다음으로, 14일 동안 배양하기 위해 접시를 성장 챔버로 옮기다. 먼저 무라시게-스쿠그 용액 30마이크로리터를 24웰 플레이트에서 유리 슬라이드의 중심으로 옮긴다. 해부 가위를 사용하여 14일 된 모종에서 코틸레곤을 제거합니다.

무라시게스쿠오그 용액의 낙하를 향한 관찰면으로 코틸레던을 떠보아 보실 수 있습니다. 이전에 시각화된 실험 저널에 설명된 방법에 따라 코틸레곤을 준비합니다. 공초점 레이저 현미경의 단계에 표본을 설정합니다.

마지막으로 밝은 필드 조명을 사용하여 관측을 위해 클러스터된 가드 셀을 선택합니다. 이 프로토콜에서, 구내 클러스터링은 A.thaliana 모종에서 유도되었다. 자당없는 조건에서 자란 가드 세포보다 더 큰 엽록체를 갖는 배지를 함유하는 자당에서 자란 클러스터된 가드 셀.

엽록소의 확대는 엽록소 스트로마 마커 및 엽록소 자동 플루오레스센트로 확인되었으며, 이는 자당 처리로 엽록소에 전분 곡물이 축적되었다는 것을 시사한다. 추가적으로, GFP tub-6의 공초점 관측은 지혈 마이크로투알이 자당 없는 가드 세포에서와 같이 자당 처리된 세포에서 복사로 지향되었다는 것을 밝혔습니다. 사실 우리는 우연히이 방법을 발견했다.

발견 후, 우리는 클러스터 된 스토마타의 환경 반응을 조사했습니다. 우리는 우리의 시스템이 스토마타 분포의 중요성을 조사하는 데 도움이 될 수 있다고 믿습니다.