Name: Murine 모델 Monoarticular 무릎 통증의 통증의 자연과 갖는 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 학습하세요 생쥐 관절염 모델에서 유발 통증과 자발적 통증을 측정하는 민감하고 재현 가능한 방법을. 동적 체중 부하 소프트웨어와 압력 자극을 활용하여 통증 행동을 정량화하고 새로운 진통제 및 재생 치료법을 평가하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

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재향 군인 담당 훈장 수상 2 자금 I01 RX000379-05.

모든 동물 절차와 프로토콜 시스템 (VAHCS) 미네 아 폴리스 재향 군인 담당 의료 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 "가이드" 준수 (국가 학술 언론, 미국) 12.
1입니다. 동물의 선택
참고: C57Bl6 마우스 세 관절염 모델에 사용 됩니다.
<ol><li>남성 또는 여성 쥐를 사용 하지만 응답 관절염 통증을 성별 및 테스트할 모델의 병 인에 따라 달라질 수 있습니다.</li>
	<li>마우스는 성적 성숙에 도달, 더 이상 빠르게 성장 하 고 자발적인 관절염 통증 측정을 혼동 수 있는 개발을 선택 합니다. 참고: 12 주는 통증 측정 모델 설명 하지만이에 대 한 이상적인 시대 연구 설계에 따라 달라 집니다. 관절염의 개시에 나이 모델을 개발 하는 데 걸리는 시간 기간에 따라 달라 집니다. 급성 염증 성 관절염 (carrageenan 모델) 개발에 3 h를 요구 한다, 따라서 동물 유도 시 나이의 12 주. 만성 염증 성 관절염 (CFA 모델) 개발에 3 주를 요구 한다, 따라서 동물 유도의 시간에서 오래 된 9 주. 만성 퇴행 성 관절염 (콜라 모델) 개발에 4 주를 요구 한다, 따라서 동물 유도 시 8 주. 퇴행 성 관절염의 더 만성 모델은 나이의 6 주에 관절염을 유도 하 여 사용할 수 있습니다. 관절 손상의 개발의 6 주 수 있습니다. 그러나, 쥐에 만성 퇴행 성 관절염에는 상당한 갖는 통증을 생성 하지 않습니다.</li>
	<li>국가 상업적인 종 축 소스에서 동물을 가져옵니다.</li>
	<li>Ad libitum 설치류 다이어트와 물 표준 폴 리 카보 네이트 장에 최대 8 동물의 그룹에서 집 동물.</li>
	<li>72 ° C ± 1 ° C에서의 환경 조건과 명암 주기 12 h와 33% ± 1% 습도 유지 합니다.</li>
</ol>2. 내부 관절 주사는 무릎으로
<ol><li>30 G 2.5 m m 폴 리 에틸렌 튜브 내부 만든 칼 집과 0.5 인치 바늘의 길이 취재 하 여 살 균 만들기 0.38 m m와 1.09 m m, 떠나 바늘 돌기의 단지 2.5 m m 외부 직경의 직경. 너무 깊이 바늘을 삽입 하 고 관절을 뒤로 종료 되지 않습니다.</li>
	<li>단일 무릎 주사, 어떤 상용 전기 얼굴 털 트리머를 사용 하 여 면도 선택 하 고 providone-요오드 스크럽으로 소독.</li>
	<li>1 L/분 3 분 ± 1 분 유지 마 취는 nosecone를 사용 하 여 절차 동안에 대 한 100% o 2에서에서 3 %isoflurane 마우스 anesthetize 발가락 핀치에 의해 마 취 깊이 확인 합니다. 호흡 상태를 모니터링 하 고 적절 한 호흡을 유지 하기 위해 마 취 노출을 최소화 하는 것을 주의.</li>
	<li>슬 개 골 힘 줄 그냥 마우스 완전히 마 취 되 면 살 균 전 된 바늘을 사용 하 여 슬 개 골의 아래쪽 가장자리에 열 등을 통해 중간에 조인트를 입력 합니다. 앞쪽 중간 이렇게 공동을 입력 하 고 관심의 물질을 주입에 대 한 정확도 극대화 합니다.</li>
	<li>관절염 유발 물질과 진통 물질 주입에 대 한 동일한 접근 방식을 사용 합니다. 가짜 컨트롤 위에 하지 않고 어떤 물질을 주입으로 바늘을 삽입 하 여 생산 됩니다.</li>
</ol>3입니다. 관절염의 생산
<ol><li>위의 단계 2.3에서 동물 anesthetize</li>
	<li>안전 및 불 임에 대 한 층 류 두건에 일반적인 염 분으로 적절 한 농도를 희석 및 carrageenan, 완전 한 Freund의 보조 하 고 유형 IV 콜라의 적절 한 금액 (아래 참조)를 무게.</li>
	<li>2.5 %carrageenan 해밀턴 주사기를 사용 하 여 생산 급성 염증 성 관절염으로 무릎에 0.9% 멸 균 식 염 수에 희석의 10 µ l을 주입. 관절염 주사 후 3 h 봉우리.</li>
	<li>주사, 30 µ L (30 µ g)의 완전 한 Freund의 보조 제 (CFA) 무릎에 만성 염증 성 관절염을 생산. 1 주 3 주 주입 다음 봉우리 다음 만성 단계에서 봉우리는 초기 급성 염증 단계가 있다.</li>
	<li>만성 퇴행 성 관절염을 생산 하기 위해 10 IU 유형 IV 콜라를 포함 하는 10 µ L을 주입. 관절염 통증 봉우리 주사 후 4 주</li>
</ol>4입니다.의 evoked 관절 통증 측정
<ol><li>항상 고통 스러운 무릎13에서 크로스 오버 고통 응답 (올립니다)을 최소화 하기 위해 먼저 일반적인 비교 기 무릎을 검사 합니다.</li>
	<li>700 gf/c m2 의 일관 되 고 확고 한 압력을 적용 하는 심사 관 훈련 = Palpometer 수준 4;를 사용 하 여 10 psi 압력의이 수준에 적용 될 때 장치 4 경고음을 내보냅니다. 압력의이 양을 지속적으로 정상적인 관절에서 관절 보다는 관절염에서 큰 고통 응답을 이끌어내는 것입니다. 참고: 장치는 압력의 적절 한 수준을 적용 하는 때 4 경고음을 이끌어내는 공장에서 보정 됩니다. 장치를 사용 하 여 훈련만; 동물에서 사용 하지 마십시오 하지만 동물을 조사 하면 적용 압력은 훈련을 통해 배운.</li>
	<li>검지 손가락과 엄지손가락으로 목의 아저씨를 잡고 꼬리를 억제 4번째 및 5번째 손가락을 사용 하 여 캐주얼 움직임을 방지 하기 위해 마우스를 밀접 하 게 충분히 제 지. 마우스 노력 및 자극, 이산, 간단한 움직임을 만들 수 있어야 하지만 지속적으로 자유롭게 이동할 수 있게 해서는 안됩니다.</li>
	<li>엄지 및 검지 손가락 마우스를 금지 하는 동안 1 분에 대 한 초당 한 번 자유 재량의 약 공동 라인에 각 무릎의 측면 및 중간 면 반복된 회사 (Palpometer 수준 4) palpations를 동시에 관리 합니다. 마우스 검사;는 Palpometer를 사용 하지 마십시오 그것은 훈련에만 사용 됩니다.</li>
	<li>두 번째 관찰자 시간과 동물 vocalizes이 일 분 기간 동안 감 탈출 싸움의 수를 계산 했습니다. 싸움 vocalizations 합계 갖는 통증 점수입니다.</li>
	<li>항상 우리 연구에 걸쳐 동일한 심사 하 고 심사 관 및 관찰자의 눈을 멀게 실험 조건으로 확인.</li>
</ol>5입니다. 자연 스러운 관절 통증의 측량입니다.
참고: 고급 동적 체중 베어링 (ADWB) 장치 동물 각 사지에 지출 하는 총 시간 비율 및 각 다리에 부담 하는 총 무게의 백분율을 계산 합니다.
<ol><li>플라스틱 비 커를 물 2 L에 채워 넣어 라. 실험실 규모에 채워진된 비 커와 함께 장비와 함께 포함 되 고 결합 된 무게를 기록 하는 중간 조밀도 섬유판 및 거품 패드를 놓습니다.</li>
	<li>ADWB 프로그램 열고 마우스 센서 유형을 선택 합니다.</li>
	<li>각 실험 전에 시스템 보정:<ol>
<li>전체 교정 교정 메뉴에서 선택 합니다. 자체 값 및 거품 패드, 중간 밀도 섬유판, 플라스틱 비 커와 물 교정 무게의 중량으로 0.00을 입력 한 다음 다음을 선택 합니다.</li>
		<li>센서에 무엇이 든을 배치 하기 전에 자체 를 선택 합니다. 미리 보기를 얻을선택 하기 전에 제공 된 거품 패드, 중간 밀도 섬유판, 및 그 순서에 따라 물 2 리터와 가득 플라스틱 비 커와 센서 패드 커버. 일단 교정 무게 센서에 미리 보기를 얻을 선택 합니다.</li>
		<li>그것은 개별 센서 및 교정 표시기 의 값이 95 위에 균등은 교정 무게 조정, 정의 얻을선택. 이 프로세스는 개별 센서에 대 한 정규화 된 의미를 생성 하 고 개별 센서의 무결성을 확인. 마지막으로, 다음을 선택 합니다.</li>
		<li>교정 파일 교정 폴더에 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>새로 프로젝트 이름과 테스트할 첫 번째 마우스에 대 한 동물 이름을 입력 제공.</li>
	<li>찾아보기 선택 하 고 프로젝트에 대 한 만들어진 보정 파일을 엽니다. 비디오 캡처 사용 을 선택 하 고 확인을 선택 합니다 확인, 다음선택 합니다.</li>
	<li>동물의 무게, 캡처, 선택한 소프트웨어에 무게를 기록 합니다. 확인을 선택 합니다.</li>
	<li>이 장치는 자연 스러운 행동을 측정 하기 때문에 데이터 수집 전에 약 실에 쥐를 적응 하지 않습니다.</li>
	<li>테스트의 5 분의 기간에 대 한 챔버에 마우스를 놓습니다. 동물 약 실에 있을 때 시작을 선택 합니다. 소프트웨어가이 시간 동안에 동물의 활동을 기록, 비디오 캡처 및 센서 데이터와 동기화 되며 analyzable 및 비 analyzable 세그먼트에이 비디오를 자동으로 파티션. 참고: 소프트웨어 세그먼트 analyzable 때 고려 하나 이상의 안정 영역 감지 합니다. 안정적인 영역 센서 감지 ≥1 g 및 영역의 체중 분배는 0.38 보다 더 안정 한 인접 한 센서의 최소 하나의 센서에 ≥2 g 만들어집니다 s.</li>
	<li>시리즈의 첫 번째 분석 하기 전에 쉽게 득점 하 고 독립적인 발 설정을선택 합니다. 참고: 쉬운 득점 세그먼트 안정 영역 변경 되지 않습니다 유효성 검사 반복 그 세그먼트의 첫 번째 안정 영역 유효성 검사에 따라 수 있습니다. 독립적인 발 설정 관찰자를 각 발의 개별 식별을 허용 하는 바로 가기 키에 대 한 액세스를 제공 합니다. 오른쪽 뒷 다리 처럼 최소한의 기준을 충족, 왼쪽 뒷 다리, 오른쪽 앞, 앞, 왼쪽 forepaws, 다른 신체 부분, 또는의 비디오 및 축소 지도 당 세그먼트 위로 커서를 누른 바로 가기 키를 사용 하 여 영역을 무시 하는 관찰자 할당 영역 활성화 센서입니다.</li>
	<li>선택 >> 첫 번째 analyzable 세그먼트 이동. 안정적인 영역 않습니다 하지 식별 올바른 발 다음 해당 영역에 커서를 잡고 있고 바로 가기를 누릅니다 (오른쪽 뒷 다리, 왼쪽된 뒷 다리,오른쪽 앞, w, 왼쪽 앞, q, 두 forepaws e; 다른 섹션 z, 신체의 영역, x무시) 올바른 신체 일부와 해당. 참고: analyzable 시간의 1.5 분의 최소 분석 임계값을 충족 하기 위해 필요 합니다. 분석 된 세그먼트는 추가 하 고 소프트웨어에 의해 자동으로 출력의 paw(s) 당 평균.</li>
	<li>ADWB 소프트웨어 다음 자동으로 계산 분석 시간 비율 및 비율 몸 무게 (g) 각각의 4 개의 사지 옵션에의 합니다. 경우에 처음 다섯 요약 라인 수출 한다, 결과, 내보내기, 선택 예 프롬프트 질문 요청을 선택 하 고 출력의 위치를 선택 하 여 새 스프레드시트에 이러한 값을 내보냅니다.</li>
	<li>CO2 흡입 thoracotomy 연구 기간의 끝에 다음으로 동물을 안락사.</li>
	<li>같은 그룹에 있는 각 추가 동물, 새로 하 고 독특한 동물 이름을 입력 하지만 프로젝트 이름을 변경 하지 마십시오. 비디오 캡처 사용 을 선택 하 고 확인을 선택 합니다 확인, 다음선택 합니다. 첫 번째 동물 5.5에서 5.12 단계를 따릅니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

관절 통증 염증 성 관절염과 퇴행 성 관절 질환의 전 임상 모델에서의 측정은 관절염 통증 및 관절 기능9,10복원에 대 한 새로운 치료법을 평가 하는 점점 더 유용한 도구. 만성 퇴행 성 관절 질환으로 마우스에 고통 행동을 측정 하는 것은 도전적 이다. Quadrupeds로 그들은 다른 3 개의 사지 또는 꼬리의 조합으로 고통 스러운 사지 오프 로드할 수 있습니다. 한 다리에 감소 기능 분명히 그것은 보 행 인간으로 표시 되지 않을 수 있습니다. 동물 먹이, 마우스 생존 혜택을 통증 동작을 최소화 하기 위해 있다.
이 보고서는 간단 하 고 상대적으로 저렴 한 방법으로 다른 pathologic 메커니즘에서 관절 통 쥐에서 측정 될 수 있다 보여줍니다. 염증 성 관절 통증 체중 베어링 시간과 유통에에서 큰 변화를 발생 하 고 따라서 진통의 검출에 대 한 더 중요 한 모델이 될 수 있습니다. 그러나, 관절 통증의 다른 모델 있을 것입니다 중요 한 통증 시작 및 유지 관리의 메커니즘은 가능성이 이후 새로운 잠재적인 진통제를 평가할 때 다른 병 리와 다른. 우리는 남성과 여성 사이 관절염 통증의 다른 모델 가운데 오프 로딩 패턴에 차이 발견.
그것은 거기 변형 될 뿐 아니라 수 있습니다 성별 마우스14,,1516고통 동작에 차이 인식 하는 것이 중요. 고통 임계값에 뚜렷한 변형 차이 것이 라고도 합니다. 우리 C57/Bl6 마우스에서 여성 만성 퇴행 성 관절 통 (그림 2 및 그림 3)와 남성 쥐 보다 훨씬 더 자연 스러운 통증 행동 (증가 무게와 앞 발에 시간) 설명 발견. 우리는 그래서 우리가이 우리의 결과에 어떤 영향을 미쳤다 하지만 다른 발 정기 단계 C57/Bl6 마우스17에서 관찰 된 섹스 차이 설명 하지 않았다 결정 여부를 말할 수 없다 이러한 여성 쥐의 발 정기 단계를 결정 하지 않았다.
갖는 통증 행동 모든 종류의 테스트는 관절 통증에 민감한 고 좋은 재현성을 있다. 그것은 일관 되 고 표준화 촉진 압력을 제공 하 여 통증 아픔과 진통 감지 하 행동의 범위를 허용 하는 일관 된 구속 메서드를 사용 하 여 시험관 훈련은 중요 합니다. 그것은 항상 정상적인 무릎 크로스 오버 효과 때문에 고통 응답을 최소화 하 고 정상적이 고 고통 스러운 무릎 고통 응답에서 차이 극대화를 먼저 정상적인 무릎을 검사 하는 것이 중요. 시험관 일관 된 촉진에 초점을 맞추고 있으며 vocalizations과 싸움 지속적으로 청산을 고통 응답 EPS 구성 하는 두 번째 관찰자를 사용 하 여 필요 하다. 그것은 되도록 동물 통증을 적절 하 게 반응 수 있는 고통 응답 희석 되므로 너무 쉽게 반응 하지 않는 특히 구속 메서드를 연습 해야 합니다. EPS 측정의 장점은 유사한 공동 아픈 인간 환자에서 측정 하는 것입니다.
우리는 이러한 메서드는 기존의 방법 보다 그들이 직접 마우스의 무릎 관절에서 오는 통증을 측정, monoarthritis 통증의 다른 모델에 사용할 수 있습니다, 그들은 모두 자연과 갖는 고통 응답을 포함 하 고 상대적으로 느낀다 하지만 신뢰할 수 있는 저렴 하 고 재현할 수 있습니다. 치료 보다 효과적으로 관절염 치료에 개발 되, 이러한 방법을 실제로 관절염, 통증의 가장 해제 결과 대 한 효과적인 치료 인지 확인 하는 데 유용 있을 것입니다.
우리의 방법에는 몇 가지 제한이 있습니다. 주로, EPS 측정 단일 심사 관 및 관찰자와 아주 일관 된 기술에 대 한 필요에 의해 제한 됩니다. 갖는 통증 측정 더 자동화 되 고 관찰자 간 차이 적용 되지 않습니다. EPS 측정의 더 구체화 vocalizations vocalizations을 계산 하는 박쥐가 초음파 탐지기를 사용 하 여 촉진에 대 한 응답에서을 계산을 위한 자동화 된 방법을 포함할 수 있습니다. 이 방법은 널리 구현 될 수 전에 민감도 특이성을 확인 우리의 현재 방법에 비해 할 것 이다.
요약 하자면, 우리는 쥐에서 관절 통 측정에 대 한 두 개의 다른 통증 행동 조치를 설명 합니다. 성별 및 스트레인 차이 실험 모델을 선택 하기 전에 고려 되어야 한다. 갖는 통증의 측정 심사 관에 의해 주의 깊은 훈련 및 일관 된 구현 필요합니다. 모두 자연과 갖는 통증 행동 통증 심각도 및 기능 제한 평가 하는 것이 좋습니다 하 고 완전히 새로운 잠재적인 진통제의 효과 평가 하기 위해 활용 합니다.

통증은 관절염1,2에서 장애의 주요 원인입니다. 현재 사용할 수 있는 진통제는 종종 비 효과, 독성, 그리고 잠재적으로 전국 마약 문제3에 기여할. 수술은 항상 특히 여러 공동 morbidities 수 있는 노인에서에서 말기 관절염에 대 한 옵션이 아닙니다. 관절 내 스테로이드와 viscosupplementation 이른 질병에 효과가 있을 수 있지만 일반적으로 늦게 단계 질병4에 그들의 효과 잃게됩니다. 현재 사용할 수 있는 치료로 해결할 수 없는 관절염 통증에 대 한 효과적인 진통제에 대 한 큰 충족 되지 필요가 있다.
전 임상 모델 제한 독성, 예측 및 통증 치료의 행동의 메커니즘을 이해 하는 데 유용 하지만 동물에 통증 측정은5도전. 직접적이 고 자연 스러운 고통 조치 될 수 있습니다 (정적 또는 동적 베어링 무게, 자세, 걸음 걸이 분석, 자발적인 운동 및 기계적 또는 열 감도 발) 또는 간접/갖는 (뒷 다리 철수 테스트, 무릎 압축 힘, 또는 두뇌 화상 진 찰) 6. monoarthritis의 가벼운 형태, 걸음 걸이 분석은 민감한 고 일관성7부족. 정적 무게 베어링 쥐 hindlimbs에 통증을 측정 하는 데 유용 하지만 쥐에 어려울 수 있습니다. 폰 Frey 테스트와 같은 기계적 감도 측정 간접적으로 무릎 관절염의 설정에서 발 패드의 민감성을 감지 하지만 무릎 통증을 직접 측정 하지 않습니다 있으며 수행 하는 성가신. 무릎 압축 힘 P.A.M. (압력 응용 측정) 장치 측정으로 쥐에서 사용 될 수 있지만 큰 장치는 반드시 고통을8을 반영 하지 않는 부정적인 행동을 생산 하지 않고 마우스에서 사용 하기 어려운.
민감하고 고통 심각도 및 내부 관절 치료9, 의 진통 효과 측정 재현성 있는 murine 관절염의 세 가지 모델에 측정 자연과 갖는 고통에 대 한 방법을 개발 했습니다 10. 우리 또한 인간에서 가능 하지 않을 것이 고 화면 조사 가능한 약물의 다른 더 마커 통증을 상호 연결할 수 있습니다. 우리는 더 효과적인 조합 치료를 식별 하기 위해 겸손 하 게 효과적인 진통제의 성분을 평가할 수 있다. 갖는 고 자발적인 고통에 대 한 검증 된 방법을 이용해 서, 우리는 고통 동작 하지만 하지 다른와 더 밀접 하 게 인간11거울 통증 측정의 한 종류에 반영 되어 통증을 식별 하기 위해 실패의 함정 피할. 제한 함으로써 두 방법론에 통증 평가, 우리는 고통을 동작에 영향을 하 고 실험실의 생산성을 극대화할 수 있는 동물에 대 한 스트레스를 최소화.

<table><tbody><tr><td>고급 동적 체중 부하 장치</td><td>Bioseb In Vivo 연구 기기, Vitrolles, 프랑스</td><td>모델: BIO-DWB-M - 생</td><td></td></tr>쥐 <tr><td>C57/Bl6 생쥐 (남성 및 여성)</td><td>용 Jackson Labs, Bar Harbor ME</td><td>재고 번호:&nbsp; 000664&nbsp;|&nbsp; Black 6</td><td></td></tr><tr><td>Carrageenan</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td>22049-5G-F</td><td></td></tr><tr><td>Complete Freund's Adjuvant</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td>F5881</td><td></td></tr><tr><td>팔포미터</td><td>Palpometer Systems, Inc. Victoria, B.C</td><td>사용할 수 없음 - 더 이상 사업</td><td></td>하지 않음</tr><tr><td>Type IV Collagenase</td><td>Worthington Biomedical Corp, Lakeville, NJ</td><td>LS004210</td><td></td></tr></tbody></table>

murine 모델 monoarticular 무릎 통증의 통증의 자연과 갖는 측정

Spontaneous and Evoked Measures of Pain in Murine Models of Monoarticular Knee Pain

통증은 관절염에서 장애의 주요 원인입니다. 현재 관절염 통증에 대 한 적절 한 치료에 대 한 unmet 필요가 있다. 전 임상 모델은 필요 하 고 유용한 통증의 메커니즘을 연구 하 고 관절염 치료의 효능을 평가 하기 위한. 관절염의 동물 모델에 통증을 측정 하는 것은 도전적 이다. Murine 관절염의 3 가지 모델에 갖는 고 자발적인 통증을 측정 하기 위한 방법을 개발 했습니다. 우리는 고통 스러운 무릎의 회사 촉진 대상이 쥐의 evoked 고통 응답을 quantitate. 우리 또한 무게의 비율에 의해 자발적인 통증을 평가 하 고 1 개의 무릎에 관절염 통증의 유도 후 4 그들의 사지의 각에 배치 하는 시간. 이 마우스 모델에서 관절 통 갖는 고통 응답에 상당한 증가 체중 베어링에서 변경 생성합니다. 마우스 quadrupeds 이기 때문에, 그들은 앞 발, 또는 어떤 조합을 contralateral 사지에 고통 스러운 사지를 오프 로드 합니다. 이러한 방법은 간단 하, 필요 최소한의 장비, 고 재현 하 고 통증 감지에 대 한 민감한. 그들은 질병 수정 관절염 트리 트 먼 트 및 마우스에서 진통제를 공부 하는 데 유용입니다.

급성과 만성 염증 및 만성 퇴행 성 관절 통 통증 평가 위에서 설명한 프로토콜을 사용 하 여 이전 C57BL/6J 남성 및 여성 쥐의 왼쪽된 무릎에 IA 주입에 의해 제작 되었다. 관절 통으로 갖는 통증 점수 (EPS)와 자발적인 고통 행동 측정 측정 되었다 고급 동적 체중 베어링 (ADWB) 장치. 이 보고서의 목적에 대 한 개별 비교 학생의 t 시험을 사용 하 여 만들어졌다. 진통제 복용량을 비교 되는 실험, ANOVA는 더 적절 한 통계 비교 있을 수 있습니다.
EPS (표로 싸움 vocalizations의 합계)는 모든 세 가지 유형의 관절 통 (그림 1)으로 증가 했다. % 체중 순진한 쥐에 비해 왼쪽된 뒷 다리에 베어링의 ADWB 측정은 급성과 만성 염증 성 관절 통에 감소 되었다. 여성만 하지과 남성 만성 퇴행 성 합동 ADWB 대책 (그림 2A) 통증 (COL) 보여 유사한 감소. 급성 염증 성 관절 통 남성 순진한 동물 보다 앞 발에 더 많은 무게를 전송. 앞 발에 베어링 무게 순에 비해 여성 쥐에 만성 퇴행 성 관절 통 (COL) (그림 2B) 남성만을 증가 했다. ADWB 측정 시간의 백분율 감소 영향을 받는 왼쪽된 뒷 다리에 급성과 만성 염증 성 관절 통, 하지만이 순진한 쥐에서에 비해 통계적으로 중요 한 되지 않았습니다. 이 동물 오른쪽 뒷 다리에 보다 왼쪽된 뒷 다리에 훨씬 적은 시간을 할애 했다. 남성과 여성 모두 만성 퇴행 성 관절 통, 순에 비해 왼쪽된 뒷 다리에 소요 된 시간에 차이가 없었다. 여성 만성 퇴행 성 관절 통 순 (그림 3A)에 비해 nonarthritic 오른쪽 뒷 다리에 더 많은 시간을 보냈다. 마우스와 급성 염증 성 만성 퇴행 성 관절 통 크게 순진한 동물 (그림 3B) 보다 앞 발에 더 많은 시간을 보냈다 고 통과 여성 합동.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig1.jpg"> 그림 1 . 왼쪽 (파란색 열) 및 오른쪽 (빨간색 열) 뒷 다리 사지 통증 점수를 불러 일으켰다. 오른쪽 뒷 다리 사지 내부 통제로 봉사 하 고 모든 IA 주사를 받게 하지 않았다. 측정은 다음과 같은 조건에서 촬영 했다: 순 (남성과 여성), 급성 염증 성 carrageenan 유도 관절염 (자동차), 만성 염증 성 완료 Freund의 보조 제 유발 관절염 (CFA) uninjected과 만성 noninflammatory 콜라 유도 관절염 (열-남성과 여성). 순진한 동물에서 왼쪽된 뒷 무릎의 EPS 되었고 하지 통계적으로 남성의 오른쪽에서 다른 여성에만 최소한 다른 (* *P = 0.038) 가능성이 일부 인해 검사 무릎에 고통 응답을 증가 (왼쪽) 크로스 오버 통증으로 인해 두 번째 응답입니다. 모든 관절염 그룹에서 관절염 왼쪽된 무릎 EPS nonarthritic contralateral 오른쪽 무릎 보다 상당히 큰 했다. 순진한 동물 관절염 그룹의 왼쪽된 무릎의 EPS를 비교할 때 모든 관절염 그룹 순진한 왼쪽된 무릎에 비해 관절염 왼쪽된 무릎에 상당히 큰 EPS 점수를 했다. 이것은 남성과 여성 모두 사실 이었다. P &lt; 남성 순에 비해 0.05, #P &lt; 0.05 순진한 여성에 비해. 모든 오차 막대는 모든 수치에서 SEM을 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig2.jpg"> 그림 2 : 자발적인 고통 행동 사지에 부담 하는 퍼센트 몸 무게 측정. (A) 자연 통증 행동 왼쪽 (파란색 열) 및 오른쪽 (빨간색 열) 뒷 다리 사지에 총 퍼센트 몸 무게 측정. 둘 다 남성과 여성의 순진한 동물에서 왼쪽 및 오른쪽 뒷 다리 사지에 부담 하는 퍼센트 무게 사이 상당한 차이가 있었습니다. 자동차와 CFA 남성 쥐 관절 통을 유발 하 고 유도 열 관절 통 여성 순진한에 비해 왼쪽된 뒷 다리에 훨씬 적은 무게를 낳았다. P &lt; 남성 순에 비해 0.05, #P &lt; 0.05 순진한 여성에 비해. (B) 자발적인 고통 행동 총 % 체중은 앞 발에 의해 측정. 자동차 유도 급성 관절 통 남성과 여성에서 열 유도 만성 관절 통, 체중을 앞 발에 부담 금액 크게 증가 했다. 이 CFA와 남성에 본적이 아니 었 또는 열 유도 관절 통증. 순진한 여성 naïve 남성 보다 앞 발에 더 많은 무게를 지지 하는 경향이 (P = 0.02). 추가 무게 꼬리 또는 엉덩이 같은 다른 신체 부위 부담 될 수 있습니다. 이들은 일반적으로 최소한의 고 통증 반응의 이해에 크게 기여 하지 않았다 되었고 따라서 표시 되지 않습니다. P &lt; 남성 순에 비해 0.05, #P &lt; 0.05 순진한 여성에 비해 forelimb weightbearing에서 남성 4 주 열. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59024/59024fig3.jpg"> 그림 3: % 시간에 의해 측정 자발적인 고통 행동 사지에 보냈다. (A) 자연 통증 행동 총 백분율 시간 왼쪽 (파란색 열) 및 오른쪽 (빨간색 열) 뒷 다리 사지에 의해 측정. 다리에 소요 된 시간에 관하여 남성과 여성의 순진한 생쥐에서 오른쪽과 왼쪽 뒷 다리 사지 사이 상당한 차이가 있었습니다. 자동차와 CFA 남성 쥐 유도 관절염 지출 적은 시간 weightbearing는 관절염으로 순 진, 하지만이에 비해 왼쪽된 뒷 다리는 통계적으로 중요 한 것 때문이 쥐에 있는이 측정에서 가변성 증가 등장. 오른쪽 뒷 다리는 왼쪽 보다 더 많은 총 시간 weightbearing 보냈다 왼쪽 오른쪽 비교이 동물에 상당한 차이가 있었다. 열 유도 관절염 여성, 오른쪽 뒷 다리 weightbearing 순진한 여성에서 보다 시간 더 큰 비율을 했다. P 앞 발에 &lt; 0.05 비교 오른쪽 왼쪽된, #P &lt; 0.05 순진한 여성에 비해 남성 4 주 열 시간에서을 보냈다. 앞 발에 소요 되는 시간의 총계에 의해 측정 (B) 자발적인 고통 행동. 자동차 유도 관절염과 남성 및 여성 열 유도 관절염에 쥐 보다 순진한 동물 앞 사지에 훨씬 더 많은 시간 weightbearing을 보냈다. 여성 순 쥐 남성 순진한 동물 보다 앞 발에 더 많은 시간을 보냈다. P &lt; 남성 순에 비해 0.05, #P &lt; 0.05 순진한 여성에 비해. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59024/59024fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

우리 관절염 통증의 갖는 측정을 개발 하 고 화학적으로 유발 된 관절염의 다른 murine 모델에 자발적인 통증을 측정 하기 위한 표준화 된 방법으로 그것을 결합. 이러한 측정값은 민감하고 관절 통증의 종류에 대 한 재현입니다.

Murine 모델 Monoarticular 무릎 통증의 통증의 자연과 갖는 측정

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are ...

관절염의 전임상 모델에서 통증의 측정은 어렵지만 재생 및 진통 치료의 평가에 필수적입니다. 우리의 프로토콜은 유발된 및 자발적인 통증 행동을 측정하기 위해 민감하고 재현할 수 있습니다. 그리고 그것은 간단하고 상대적으로 저렴합니다.관절염은 장애에 가장 큰 기여이며 통증은 장애의 주요 원인입니다. 관절염의 치료는 현재 부적당합니다. 전임상 모델은 치료 개발의 중요한 부분입니다.이 절차를 시연하는 것은 기술자인 크리스토퍼 도먼과 제 실험실의 직원 과학자인 산드라 프리젤입니다. 바늘이 너무 깊게 삽입되고 관절을 후방으로 나가는 것을 방지하기 위해, 바늘의 2.5 밀리미터가 칼집밖으로 튀어 나올 때까지 폴리에틸렌 튜브의 칼집으로 점 5 인치 바늘을 덮습니다. 다음으로, 마취된 마우스의 무릎에서 털을 면도하여 주입하고, 포비도요오드 스크럽으로 노출된 피부를 살균한다.그런 다음 슬개골 힘줄을 통해 중간선에 있는 관절에 피진 바늘을 삽입하여 슬개골의 하부 가장자리로 열등하고 관심 있는 물질을 주입합니다. 호출된 관절 통증을 평가하기 전에 고도계 레벨 4를 사용하여 일관되고 확고한 압력의 700 그램 힘을 1센티미터 로 적용하는 연습을하십시오. 적절한 수준의 압력이 가해지면 장치가 4개의 비프음을 방출합니다.적절한 압력을 안정적으로 적용할 수 있는 경우, 검지 손가락과 엄지 손가락으로 목에 마우스를 가볍게 두르면 캐주얼한 움직임을 방지할 수 있습니다. 그리고 꼬리를 억제하기 위해 네 번째와 다섯 번째 손가락을 사용합니다. 마우스는 노력과 자극 할 때 이산, 짧은 움직임을 만들 수 있어야하지만, 자유롭게 또는 지속적으로 이동할 수 없습니다.1분 동안 초당 1회 관절라인에서 프리핸드의 엄지손가락과 검지 손가락으로 각 무릎의 측면 및 내측에 동시에 반복된 단단한 심푸를 투여한다. 그리고 관찰자가 이 1 분 압력 적용 기간 동안 구속을 피하기 위해 동물의 보컬과 싸움의 수를 계산합니다. 물린 발성의 합계는 호출 통증 점수로 간주됩니다.고급 동적 중량 베어링 소프트웨어 프로그램을 열고 마우스를 센서 유형으로 선택합니다. 각 실험에 앞서 교정 메뉴에서 전체 교정을 선택합니다. 그리고 tare 값에 대해 0"을 입력합니다.그리고 폼 패드, 중간 밀도 섬유 보드, 플라스틱 비커 및 물의 무게는 교정 중량으로. 다음을 선택"과 tare"그리고 폼 패드, 중간 밀도 섬유 보드, 물의 플라스틱 비커와 센서 패드를 커버. 모든 재료가 센서 패드에 배치되었을 때 게인 미리 보기를 선택하십시오"그리고 개별 센서에 고르게 분포될 때까지 교정 중량을 조정합니다.교정 표시기의 값이 95이상인 경우 게인 정의를 선택하여 개별 센서에 대한 정규화된 평균을 생성하고 센서의 무결성을 확인합니다. 그런 다음 다음을 선택하고 교정 폴더에 교정 파일을 저장합니다. 새 마우스를 선택하고 테스트할 첫 번째 마우스에 대한 프로젝트 및 동물 이름을 입력합니다.찾아보기를 선택하고 프로젝트에 대해 만들어진 교정 파일을 엽니다. 그런 다음 다음 "비디오 캡처를 사용하도록 설정"이 선택되어 있는지 확인하고 확인을 선택합니다. 캡처를 선택하고 소프트웨어의 무게를 기록합니다.확인을 선택한 후"5 분 동안 챔버에 마우스를 배치합니다. 그리고 시작"소프트웨어를 선택하면 동물의 활동을 기록하고 비디오를 캡처하고 센서 데이터와 동기화하고 비디오를 분석 가능하고 분석 할 수없는 세그먼트로 자동으로 분할합니다. 분석 기간이 끝나면 쉽게 득점할 수 있는 것을 선택합니다"라고 독립적인 일시 정지 설정"과 "빨리 선택하여 첫 번째 분석 가능한 세그먼트로 이동합니다.안정 영역이 올바른 발이 식별되지 않은 경우 해당 영역에 커서를 잡고 올바른 신체 부위에 해당하는 적절한 바로 가기 키를 누릅니다. 고급 동적 중량 베어링 소프트웨어는 분석된 시간 의 백분율과 4개의 사지 각각에 배치된 체중의 백분율을 자동으로 계산합니다. 그런 다음 결과를 선택 "내보내기"와 예"적절한 스프레드 시트 프로그램에 데이터의 처음 5 요약 라인을 내보냅니다.같은 그룹의 각 추가 동물에 대해 새 동물을 선택하고 프로젝트 이름을 변경하지 않고 고유한 동물 이름을 입력합니다. 그런 다음 방금 설명한 것처럼 각 동물의 활동을 챔버에서 캡처합니다. 급성 염증성 치료-a-유전자 유도 관절염에 대한 통증 점수, 만성 염증성 완전 f-roy-nes 첨가자드-자브-인 유도 관절염, 만성 비염증성 콜-ag-in-a 유도된 관절염은 3가지 유형의 관절통 모두에 대해 순진한 주입되지 않은 동물을 관찰한 관절염에 비해 증가한다.만성 퇴행성 관절 통증을 가진 남성은 아니지만 여성은 급성 및 만성 염증 성 관절 통증의 순진한 마우스에 비해 사전 동적 체중 베어링 측정에서 유사한 감소를 보여줍니다. 급성 염증 성 관절 통증을 가진 남성은 순진한 동물보다 4 사지에 더 많은 무게를 전달합니다. 4 개의 사지에 무게 베어링은 순진한 동물에 비해 여성 마우스에서 증가하지만 만성 퇴행성 관절 통증을 가진 남성에서는 증가하지 않습니다.만성 퇴행성 관절 통증을 가진 남성과 여성 모두에서, 순진한 동물에 비해 왼쪽 뒷다리에 보내는 시간에 차이가 없습니다. 그리고 만성 퇴행성 관절 통증을 가진 여성은 주입되지 않은 마우스에 비해 비 관절염 오른쪽 뒷다리에 더 많은 시간을 보낸다. 마지막으로, 급성 염증 성 관절 통증을 가진 남성 마우스, 만성 퇴행성 관절 통증을 가진 여성, 순진한 동물보다 그들의 4 사지에 훨씬 더 많은 시간을 보내고.그것은 신체와 관련하여 동물의 발 의 후방을 올바르게 식별하는 것은 매우 중요합니다. 머리보다는 동물의 후방에 초점을 맞춥니다. 이 방법을 통해, 우리는 새로운 관절 간 진통의 정서를 테스트 할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

골관절염 (OA) 또는 퇴행성 관절 질환, 부분적으로 만 가능한 진통제 통증 제어 유지와 관련된 쇠약 상태이다. 동물 모델은 OA 관련 통증 메커니즘에 대한 이해를 향상시키기 위해 개발되고있다. 여기에서 우리는 마우스의 OA 통증의 monoiodoacetate 모델에 대한 방법을 설명합니다.

마우스에서 관절염 통증의 Monoiodoacetate 모델

이 문서에서 우리는 생산 방법과 IL4-10 재조합 융합 단백질의 품질 관리에 대 한 세부 정보를 제공합니다. 우리는 또한 마우스 모델 염증 성 통증의 고통을 해결 하기 위해이 단백질의 효과 테스트 하는 방법을 보여줍니다.

만성 통증 치료에 재조합 단백질의 개발

이 연구는 쥐에서 모노 요오드 아세테이트의 관절 내 주사 방법을 설명하고 그로 인한 통증 관련 행동 및 조직 병리학 적 변화에 대해 논의하여 향후 적용을위한 참고 자료를 제공합니다.

랫트에서 모노요오도아세테이트의 관절내 주사에 의해 유도된 골관절염 통증 모델

수정된 수술은 생쥐 또는 쥐 보존 신경 손상 모델에 대한 단순화된 방법으로, 일반 비골 신경과 천성 신경을 모두 손상시키기 위해 한 번의 결찰과 한 번의 절개만으로 됩니다.

마우스의 신경병증성 통증에 대한 수정된 보존 신경 손상 수술 모델

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

마우스에서 요통 모델의 간단하고 신속한 유도를 위한 방법은 요로 플라스미노겐 활성제의 인대 내 주입을 사용하여 여기에서 제공됩니다.

우로키나아제(Urokinase)형 플라스미노겐 활성제(Plasminogen Activator)에 의한 생쥐 요통 모델

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

여기에서는 진통 효과를 평가하기 위해 양쪽 뒷발 카라기난 주사를 사용한 수정된 염증성 통증 모델을 제시합니다.

생쥐의 진통 효과를 연구하기 위해 수정된 염증성 통증 모델

이 프로토콜은 교합력과 머리 철수 역치를 측정하여 CFA(Complete Freund's Adjuvant)로 유발된 염증성 턱관절(TMJ) 통증의 통증 행동을 포착할 수 있는 방법을 설명합니다.

마우스의 Bite Force 및 Von Frey 필라멘트 분석에 의한 턱관절 통증 측정

이 프로토콜은 마우스에서 무릎 통각 과민을 측정하는 방법을 설명합니다. 우리는 급성 무릎 통증의 마우스 모델과 골관절염(OA) 모델의 예를 보여줍니다.

Pressure Application Measurement를 사용한 마우스의 무릎 통각 과민 평가

학습하세요 생쥐 관절염 모델에서 유발 통증과 자발적 통증을 측정하는 민감하고 재현 가능한 방법을. 동적 체중 부하 소프트웨어와 압력 자극을 활용하여 통증 행동을 정량화하고 새로운 진통제 및 재생 치료법을 평가하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

Murine 모델 Monoarticular 무릎 통증의 통증의 자연과 갖는 측정

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