Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Melaku Garsamo; Yun Zhou; Xing Liu

doi:10.3791/59038

체 외 형광 공명 에너지 전달에 밀리초 시간 규모에서 단백질 복합물의 역학을 공부 하는 사용 하 여

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Biochemistry

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Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

체 외 형광 공명 에너지 전달에 밀리초 시간 규모에서 단백질 복합물의 역학을 공부 하는 사용 하 여

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10:50 min

March 14, 2019

DOI: 10.3791/59038-v

Melaku Garsamo^1,3, Yun Zhou^2,3, Xing Liu^1,3

¹Department of Biochemistry,Purdue University, ²Department of Botany and Plant Pathology,Purdue University, ³Center for Plant Biology,Purdue University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

단백질 단백질 상호 작용은 생물 학적 시스템에 대 한 중요 한 고 단백질 복합물의 기능과 역학에 대 한 통찰력을 제공 하는 바인딩 활동의 연구. 형광 공명 에너지 전달 및 중지 흐름 기법을 사용 하 여 복잡 한 단백질의 운동 매개 변수를 수량화 하는 방법을 설명 합니다.

우리의 방법은 단백질 복합 체 형성의 운동학을 연구하는 데 도움이됩니다. 그것은 단백질 복합체가 얼마나 단단한지, 그리고 단백질 복합체 형성이 그밖 단백질에 의해 방해되는 경우에 기술합니다. 이 기술은 리포터로서 형광을 사용하여 정량적 방법으로 단백질 상호 작용을 연구할 수 있게 해주며, 우리의 분석법은 실시간으로 단백질 복합체의 연관성과 분리를 모니터링할 수 있습니다.

먼저 단백질 데이터베이스에서 COL1 CAND1 복합체에 대한 데이터부터 시작하는 FRET 분석방법을 설계합니다. PyMOL에서 구조를 로드한 다음 마법사 메뉴로 이동하여 측정 기능을 사용하여 CAND1의 첫 번째 아미노산과 COL1의 마지막 아미노산 사이의 거리를 추정합니다. 그런 다음 온라인 스펙트럼 뷰어를 로드하고 7-아미노-4-메틸쿠마린과 FlASH의 흥분 및 방출 스펙트럼을 동시에 볼 수 있습니다.

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