Name: 쥐에 폐 고혈압의 모델로 Monocrotaline 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 Pneumonectomy (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: 학습하세요 쥐의 왼쪽 폐절제술을 이용한 폐동맥 고혈압 모델 수립 방법을. 이 기법은 인간 환자의 병변을 재현하며 혈관 내피 손상 메커니즘 연구와 치료제 개발에 활용됩니다.

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이 원고는 NIH에 의해 지원 되었다 7R01 HL083078-10 미국 심장 협회 AHA-17SDG33370112와는 국립 연구소의 건강 NIH K01 HL135474와이 스 하 고는 국립 연구소의 건강 R01 HL133554 L.H.에 부여 부여

아래 설명 하는 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)는 아이 칸의 학부의 마운트 시 나이에 의해 승인 되었습니다. 모든 쥐 시내산 "관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드" 준수 인도적인 치료를 받았다.
1입니다. 수술을 위한 준비
<ol><li>고압 쿨 리-마요 곡선가 위 (대 위), 직선 아이리스가 위 (작은 위), 맥 퍼 슨 욕실이 아이리스가 위 (뒤가 위), Wangensteen 조직 집게 (겸 자 atraumatic), 제럴드 조직 겸 자, 일반 와이어 검 (자기 유지 견인), 작은 그릇 cauterizer, 거 즈, 더블 엔드 프로브, 얇은 혈관 바늘 홀더, 그리고 마이크로-제이콥 슨 모기 hemostatic 집게 (모기).</li>
</ol>2. 준비 및 쥐의 삽 관 법
<ol><li>6-8 주 오래 된 남성, Sprague-Dawley 쥐, 수술 전에 30 분 buprenorphine 진통 (0.1 mg/kg)의 피하 주사를 관리 합니다.</li>
	<li>챔버는 쥐 제대로 마 취 때까지 isoflurane 4%와 3-4 분 동안 산소 (1 L/min)에 노출에 쥐를 개별적으로 배치 (즉, 무 의식, 호흡을 천천히, 그리고 만지거나 소리에 응답).</li>
	<li>
쥐의 삽 관 법
	<ol>
<li>상공에서 쥐를 제거 하 고 보드에 쥐 쥐 보드의 가장자리에서 입으로의 뒷면에 평평 낳는다 그래서 테이프. 문자열을 사용 하 여 목 플랫/똑바로 되도록 두 앞 니로 쥐를 저장할.</li>
		<li>후 두 섬유 광섬유 거 위 광원 목 위에 놓고, 하 고 손가락으로 혀를 잡고 들어올린 이동 성 대를 시각화 하는 후두개. 기도 성 대; 뒤에 밝게 점화 해야 한다 기도 밝은 때까지 빛의 위치를 조정 합니다.</li>
		<li>60 내 후 두에 16 G 카 테 터를 삽입 하 여 쥐를 넣어야 s 그들은 신속 하 게 일어나 약 실에서 쥐를 제거. 쥐 차려 면 성공적인 삽 관 법 전에, 다시 쥐를 넣어 하 고 반복 합니다.</li>
		<li>즉시 isoflurane 및 산소 배달 다시 호흡에 쥐를 연결 합니다. 삽 관 법 테에서 exhaled 호흡에 습도 응축을 관찰 하는 콜드 미러를 사용 하 여 확인 합니다. 동물은 여전히 가슴의 확장에 의해 호흡 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>호흡기에 쥐를 연결 합니다. 산소 1 L/분에 흐름을 환기 비율 0.35-0.45의 해 양으로 70 호흡/분을 설정 설정 mL. 2-4 cm H22-3%를 오 감소 isoflurane 긍정적 최종 내쉬는 숨 압력 (우는 소리)을 설정 합니다.</li>
	<li>위치에서 37 ° c.에가 열 패드 오른쪽 decubitus 위치에 현미경 쥐 아래로 앞 다리를 테이프. 클리퍼 스와 흉 곽의 끝까지 앞 다리 뒤에 왼쪽된 가슴을 면도. 거 즈 및 10 %povidone-요오드 솔루션, 70% 에탄올 (세 번) 다음으로 외과 영역을 청소.</li>
	<li>쥐의 발에 펄스 산소 농도계를 놓고 심장 박동 및 산소 포화는 수술을 통해 모니터링 합니다. 심장 박동 bpm 및 산소 포화 해야 200-500 사이 여야 합니다 > 95%.</li>
</ol>3입니다. 살 균 환경 준비
<ol><li>현미경 수술 영역을 시각화. 이 수행 되어야 합니다 먼저 환경 살 균 되는 현미경을 조정할 수 없습니다 때문에.</li>
	<li>살 균, 수술 장갑에 넣어. 소독된 기기, 외과 커튼 및 쥐의 시체의 외과 영역 외 아무것도 만지지 마십시오.</li>
	<li>쥐의 시체와 무 균 환경을 만들기 위해 악기 트레이에 무 균 드 레이프를 배치 합니다.</li>
	<li>멸 균 장갑, 멸 균 장비 살 균 계기 쟁반에 장소.</li>
</ol>4. 왼쪽된 Pneumonectomy 수술
<ol><li>쿨 리-마요 위와 제럴드 조직 겸 자 사용 하 여 수술 드 레이프에 작은 구멍을 뚫고. 구멍 약 2-3 cm 직경을 완전히 절 개를 시각화 해야 하지만 너무 큰 있도록만 피부 소독은 노출.</li>
	<li>외과 블레이드를 사용 하 여 왼쪽된 가슴에 2 cm 긴 측면 절 개를 확인 합니다. 거 즈와 electrocautery 펜 hemostasis 출혈/유지 관리를 사용 합니다. 쿨 리-마요가 위를 사용 하 여 늑 골 및 늑 근육 노출 때까지 조직의 각 레이어를 잘라.</li>
	<li>
있는 공간을 입력
	<ol>
<li>모기를 사용 하 여 세 번째 있는 공간의 근육을 통해 구멍을 만들기 위하여.</li>
		<li>더블-엔드 프로브를 사용 하 여 폐 동맥을 시각화 하는 방법 폐를 이동. 조사는 폐 동맥을 액세스할 수 없는 경우 다른 있는 공간을 입력할 수 있습니다.</li>
		<li>사용 아이리스가 위 및 맥 퍼 슨 욕실이 아이리스가 위 (뒤가 위) 있는 근육에 약 1-2 cm. 여 electrocautery 펜을 사용 하 여 어떤 출혈을 멈추게.</li>
		<li>자기 갈비뼈를 견인을 유지, 작은 장소 및 근육 열.</li>
	</ol>
</li>
	<li>왼쪽된 늑 막만 열고 왼쪽된 폐는 폐 동맥과 기관지에 액세스할 수 있도록 복 부에 낮은 아래로 이동 합니다. Ligating 클립 주걱으로 중간 hemoclip를 로드 합니다.</li>
	<li>
좌 주요 기관지와 왼쪽된 주 폐 동맥의 결 찰
	<ol>
<li>폐 동맥을 노출 Wangensteen atraumatic 집게로 왼쪽된 폐의 상단 부분을 신중 하 게 들어올립니다.</li>
		<li>클립을 클립 하 고 어플리케이터는 동맥 주위를 폐쇄 하 여 폐 동맥. 하지 닫거나 왼쪽된 azygos 정 맥 파열을 주의 해야 합니다. 마십시오 하지 클램프 너무 강력 하 게 그렇지 않으면, 혈관 파열 할 수 있다.</li>
		<li>근육 섬유를 분리 하기 위하여 편도 사용 하 여 추가 하는 절 개를 엽니다.</li>
		<li>준비 되도록 다른 중간 hemoclip ligating 클립 주걱으로 로드 합니다.</li>
		<li>Atraumatic 집게를 사용 하 여 왼쪽된 주요 기관지와 왼쪽된 폐 정 맥 시각까지 절 개에서 폐의 아래 부분을 들어. Atraumatic 집게 해야 풀을 사용 이동 폐 절 개에서. 폐 조직을 찢 어 하지 않고 한 모션에서 꺼내 수 너무 큰 이기 때문에, 문제 집게는 atraumatic 집게 더 많은 폐를 꺼내 신중 하 게 사용 하는 동안 장소에 폐를 잡아 필요 합니다.</li>
		<li>그들 주위 주걱 여 좌 주요 기관지와 왼쪽된 주요 폐 정 맥 함께 선. 정 맥 및 기관지 너무 강력 하 게 그렇지 않으면 클램프 하지 마십시오, 혈관 파열 할 수 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>가 위 폐를 제거 합니다. 잘라내거나 클립 밖으로 눈물을 하지 됩니다. 멸 균 거 즈의 작은 조각을 사용 하 여 어떤 혈액을 흡수 하 고 있는지 확인 거기 아무 출혈.</li>
	<li>
갈비뼈와 있는 근육의 폐쇄
	<ol>
<li>있는 근육을 닫기 전에 수술 절 개에서 흉 강에 그리고 일곱 번째 있는 공간으로 16 G 카 테 터를 삽입 합니다. 탐정을 어떤 중요 한 장기 나 혈관을 찌르는 바늘을 시각화 수 다는 것을 확인 하십시오.</li>
		<li>즉시 자리에 테를 떠나 바늘을 제거 합니다. 이 가슴 튜브로 사용 될 것입니다.</li>
		<li>늑 골 및 늑 근육 4-0 prolene 봉합을 닫습니다.</li>
		<li>피부와 피하 공간 실행 5-0 봉합 (자료 테이블)을 닫습니다.</li>
		<li>장소 5-0 봉합 (자료 테이블) 피부와 가슴 주위 튜브 구멍 연결 되어 가슴 관을 제거 하면 그래서 종료.</li>
	</ol>
</li>
	<li>흉부에 부정적인 정상적인 압력을 회복 하기 위해 카 테 터를 통해 3 mL 주사기로 흉 막 캐비티에서 공기를 철수. 즉시 다시 흉 강에 들어가기에서 공기를 방지 하기 위해 바늘 홀더를 가진 카 테 터를 클램프. 신속 하 게 카 테 터를 제거 하 고 구멍을 봉합 넥타이.</li>
</ol>5. 수술 후 회복
<ol><li>Sternal 위치에 동물을 놓습니다. isoflurane 끄십시오 그러나 endotracheal 튜브를 통해 쥐 산소를 주는 계속. 두지 마십시오 동물 무인 어느 시점에서 그것은 ambulate에 충분 한 의식 회복 이며 동물의 감 금 소에 안전 하 게 될 때까지.</li>
	<li>살 균 lactated 벨의 솔루션의 2-3 mL을 피하 관리 합니다.</li>
	<li>심장 박동 (≈200-500 bpm), 산소 포화 (≥95%), 모니터 하 고 확인 동물을 동물 색상 잘 호흡.</li>
	<li>때 동물 자발적인 호흡 동작과 목 움직임 만들기 시작 및 테 밖으로 당겨 extubate 동물 (확대 눈, 코, 귀 소리에 응답 등), 물리적 자극에 응답을 호흡기를 분리 합니다.</li>
	<li>빈 감 금 소, 다른 동물의 회사에서 하는 동물을 반환 합니다. 동물 적어도 3 일 동안 혼자 해야 합니다.</li>
	<li>통증 제어를 위한 3 일 동안 0.1 mg/kg Buprenorphine의 피하 모든 12 h를 관리 합니다.</li>
</ol>6. 관리의 "두 번째" MCT 또는 Sugen
<ol><li>피하 주사, 수술 후 1 주 통해 1 mL MCT (60 mg/kg) 또는 Sugen (25 mg/kg)의 1 mL를 관리 합니다.</li>
</ol>7. 터미널 수확
<ol><li>MCT 또는 Sugen 관리 후 7 주 흐르는 산소 (1 L/min)와 4 %isoflurane 챔버에 동물을 놓습니다.</li>
	<li>원뿔을 통해 호흡기에 동물을 연결 합니다. 산소 흐름 유지 및 isoflurane 2.5-3%. 그의 뒤로 모든 사지 아래 테이프에 동물을 하다.</li>
	<li>전체 복 부를 따라 동물을 면도.</li>
	<li>
가슴을 열고
	<ol>
<li>xyphoid에 subclavian 노치에서 메스와 가슴 아래로 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>조직을 겸 자는 xyphoid를 사용 합니다. 심장 및 폐 동맥은 완전히 액세스할 수 때까지 쿨 리 메이 위는 흉 골을 통해 잘라. 출혈을 멈추게 하는 electrocautery를 사용 합니다. 갈비뼈는 견인으로 열고 잡으십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>폐 동맥을 식별 합니다. 밑에 거 즈를 추가 하 여, 마음의 방향의 필요한 경우 조정 합니다. 20 G 4 카 테 터를 사용 하 여 폐 동맥 폐 밸브 사이의 주 폐 동맥의 분기를 펑크. 동맥에만 20g 카 테 터를 미리 하 고 바늘을 제거 합니다. 폐 동맥에 있는 IV 카 테 터에 1.2 Fr transonic 압력 카 테 터를 사전. PA 곡선 안정 되 면, 기록 압력 적어도 10 미 반복에 대 한 우 심 실에 있는 압력을 기록 하려면 다음이 단계.</li>
	<li>심 혼 및 폐를 제거 합니다. 파라핀에 고정 하 여 hematoxylin와 오신 스테인드 포 르 말린에 폐의 조각을 놓으십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자 아무 잠재적인 이해 충돌 있다.

PAH-영향을 받는 폐 혈관 확산 neointimal 형성 및 폐 동맥의 말살 심각한 hemodynamic 변경, 오른쪽 심 실 실패 및 초기 사망률7,8발생할. 혈관 벽에 변화 저항 동맥 및 오른쪽 심 실 압력 증가 혈액 흐름을 증가. PAH의 초기 단계에서 일반적으로 MCT 또는 Sugen, 관리 후 3 주 쥐 개발 중간 비 대, adventitial 두껍게 그리고 작은 동맥 arterioles의 muscularization 같은 일반적인 조직학 변화. 이러한 변경 내용을 잠재적으로 되돌릴 수 있습니다. 나중 단계에서 MCT 또는 Sugen, 관리 후 약 6-8 주 쥐의 폐는 neointimal와 방해 하 고 매체 및 작은 폐 동맥 arterioles, 세포 내 확산을 없애다 plexiform vasculopathy와 동심 내 섬유 증입니다. Plexiform 병 변은 일반적으로 내 피 세포와 myofibroblasts ...

폐 동맥 고혈압 (PAH)는 진보 및 치명적인 질병 폐 혈, 혈관 저항 증가, 염증, 및 개장 하는 작은 폐 혈관1의 증가 의해 특징 이다. 이 리 모델링을 일반적으로 방해 하 고 작은 폐 동맥, vasoconstriction을 일으키는 원인이 되 고 우 심 실 afterload2증가 없애다 혈관 병 변 발생 합니다. PAH의 몇 가지 성공적인 약리 치료 존재; 결과적으로, PAH 관련 사망률 남아 높은. Angio 확산을 증가 폐 혈의 역할 간주 됩니다 폐의 개발에 중요 한 방 아 쇠로 혈관의 메커니즘으로 폐 고혈압의 pathobiology에 대 한 연구의 초점을 이동 하는 최근, 3,4리 모델링.
폐 고혈압의 동물 모델은 질병의 이상 설명 하 고 약물, 세포, 유전자, 및 단백질 배달을 위한 플랫폼으로 봉사 하는 데 도움이 중요 한 통찰력을 제공 합니다. 전통적으로, 만성 저 산소 증 유발 폐 고혈압 모델 및 MCT 폐 상해 모델 메인 모델 PAH 이상5를 공부 하는 데 사용 되었습니다. 그러나, 그들은 인간 환자에서 설명 하는 변경에 비해 리 모델링의 증가 폐 혈액 흐름과 neointimal 패턴을 생산 하기 위해 충분 하지 않습니다. 만성 저 산소 증 모델에서 설치류 angio 말살 하지 않고 hypoxic vasoconstriction 혈관 벽의 두껍게 작은 폐 혈관6의. 또한, hypoxia 조건은 이다 가역. 따라서, hypoxia 모델은 또한 심각한 PAH를 생산 하기에 충분 하지. MCT 폐 상해 모델은 좀 내 피 기능 장애를 유도 하지만 심각한 주요 PAH와 인간에서 발견 복잡 한 혈관 obliterative 병 변 쥐2개발 하지 않습니다. 또한, MCT 치료 쥐 PAH2아닌 MCT 유도 폐 독성, veno 폐색 간 질환과 심근 염에서 죽는 경향이 있다. 마지막으로, 혼자 pneumonectomy 시간의 짧은 기간에 작은 폐 혈관 병 변 neointimal를 생산 하기 위해 충분 하지 않습니다. Pneumonectomy, 후 폐 동맥 압력7에서 최소한의 상승이 이다. 인간에서는, pneumonectomy는 contralateral 폐는 건강 한7때 잘 용납입니다.
그러나, MCT 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 pneumonectomy 절차 증가 폐 혈액의 흐름을 모방 하 고 폐 혈관 개장에 심한 임상 PAH 비교 결과 있기 때문에 유리 하다. pneumonectomy는 1 엽, 왼쪽된 폐에 보다는 4 개의 돌출부 오른쪽에 수행 됩니다. 오른쪽 폐는 제거 하는 경우 동물 것 호흡기 부족에 대 한 보상 수 없습니다. Pneumonectomy-MCT 모델에 neointimal 패턴 개장 운영-동물 치료7의 90% 이상에서 발전 한다. 마찬가지로, Sugen 및 pneumonectomy 결과 심각한 PAH, angio obliterative 혈관 병 변, 증식, apoptosis, 및 RV 부전8특징의 조합입니다. 또한 왼쪽된 pneumonectomy 절차는 PAH를 유도 하기 위해 다른 수술에 비해 유리 합니다. 이전 쥐 폐에 폐 혈 류 량 증가를에서 설명된 모델 aorto caval 션트 또는 하-폐 동맥 문 합 포함 됩니다. 이 모델은 매우 복잡 한7,9,,1011. Aorto-caval 션트를 수행 하려면 동물의 복 부를 열 수 있다. 우회로 그냥 폐 대신 모든 복 부 장기에 혈액 흐름을 증가 하는 복 부 대동맥에 배치 됩니다, 그리고 따라서, PAH 개발을 훨씬 더 오래 걸립니다. 또한, 그것 어렵습니다 우회로 통해 혈액의 흐름을 결정 하는 pneumonectomy와 혈액 흐름 나머지 폐 복식을 하는 반면. 하-폐 동맥 문 합은 또한 많은 합병증을 있다. 혈관에 동맥 혈액의 흐름 문 합과 출혈의 혈전 증으로 이어질 수 있습니다. Aorto-caval 션트 처럼는 문 합을 통해 혈액의 흐름을 결정 하기가 어렵습니다. 또한, 혈관 외과 기술을 요구 하는 비싸고 어려운 기법입니다. 일방적인 왼쪽된 pneumonectomy 혈액 흐름과 contralateral 폐에 전단 응력을 두 배로 하 고, MCT 또는 Sugen와 함께, 내 피 세포 손상8, 는 PAH의 전형적인 hemodynamic 및 histopathological 결과 발생 12.
이 원고 참신 왼쪽된 pneumonectomy 쥐 및 이러한 모델의 기술 및 생리 적 과제의 토론의 매우 상세 하 고 포괄적인 수술 프로토콜에서 제공 됩니다. 이 프로토콜은 현재 사용할 수 없습니다, 때문에 많은 조사 모델은 너무 어려운 사용 믿습니다. 왼쪽된 pneumonectomy 수행한 조사 높은 사망률과 병 적 속도 관련 된 동물, 과학적인 평가 타협의 불필요 한 손실과 직면. 대신, 많은 PAH를 만들려고 MCT 주입,-만성 저 산소 증, 또는 그냥 pneumonectomy 클래식 모델을 사용 합니다. 그러나,이 모델은 왼쪽된 pneumonectomy와 MCT 또는 Sugen의 조합 보다 훨씬 효과적입니다. 이 문서의 주된 목적은 쥐에서 왼쪽된 일방적인 pneumonectomy에 대 한 먼저 상세 하 고 재현할 수 수술 프로토콜을 제공 하 여 PAH의 최고의 외과 모델 제공입니다. MCT 또는 SU5416 왼쪽된 일방적인 pneumonectomy 위한이 프로토콜을 결합 수 사관이 치명적인 질병의 병 인 연구 심각한 PAH의 훨씬 더 효과적이 고 임상으로 관련 된 모델을 만들 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>외과 용 블레이드</td><td>Bard-Parker</td><td>371215</td><td>절개</td></tr><tr><td>Forane (Isoflurane, USP)</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-360-40</td><td>마취</td></tr><tr><td>BD Angiocath 16 G</td><td>BD</td><td>381157</td><td>삽관 튜브, 흉관</td></tr><tr><td>BD 1 mL 인슐린 주사기</td><td>BD</td><td>329652</td><td>수술 후 buprinex 투여</td></tr><tr><td>바이오 젤 외과 의사 수술 장갑</td><td>바이오 젤</td><td>30460-01</td><td>멸균 수술용 장갑</td></tr><tr><td>Wahl BravMini+ 트리머</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-41590 P</td><td>면도 수술 부위</td></tr><tr><td>SU5416</td><td>Cayman Chemical</td><td>13342</td><td>Sugen&nbsp;</td></tr><tr><td>삽관 용</td> <td>광섬유 조명기</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-41723-02</td> 조명</tr><tr><td>Surgipro II 4-0 봉합</td>사 <td>Covidien</td><td>VP831X</td><td>폐쇄 늑간 근육</td></tr><tr><td>Polysorb 5-0 봉합사</td><td>Covidien</td><td>GL-885</td><td>폐쇄 피부</td></tr><tr><td>중간 슬라이드 상단 유도 챔버</td><td>DRE 수의학</td><td>12570</td><td>산소 및 이소 플루란 전달</td></tr><tr><td>DRE 컴팩트 150 설치류 마취 기계</td><td>DRE 수의학</td><td>373</td><td>산소 및 이소플루란 전달</td></tr><tr><td>소형 용기 소작</td> 장비 <td>미세 과학 도구</td><td>18000-00</td><td>출혈을 최소화하는 소작</td></tr><tr><td>VentElite 소형 동물 인공 호흡기</td><td>하버드 장치</td><td>55-7040</td><td>인공 호흡기</td></tr><tr><td>MouseSTAT Jr</td><td>Kent Scientific</td><td>MSTAT-JR</td><td>맥박 산소 측정기 및 심박수 모니터</td></tr><tr><td>마우스 발 맥박 산소 농도계 센서</td><td>Kent Scientific</td><td>SPO2-MSE</td><td>맥박 산소 농도계 및 심박수 발 센서</td></tr><tr><td>PhysioSuite RightTemp</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-02</td><td>온도 패드</td></tr><tr><td>PVP 준비 솔루션</td><td>Medline</td><td>MDS093944</td><td>수술 부위 청소</td></tr><tr><td>폴리 라이닝 드레이프</td><td>Medline</td><td>NON21002Z</td><td>커버 동물</td></tr><tr><td>3 mL 주사기</td><td>Medline</td><td>수술 후 수액을 투여</td>하는 <td>SYR103010</td></tr><tr><td>Microsurgical Kits, Integra&nbsp;</td><td>Miltex</td><td>95042-540</td><td>수술 도구: 일반 와이어 검경, 양단 프로브, McPherson-Vannas 아이리스 가위 스트레이트, 스트레이트 아이리스 가위</td></tr><tr><td>지혈 집게 - 마이크로 제이콥슨-모기</td><td>Miltex</td><td>17-2602</td><td>모기</td></tr><tr><td>부프레노르프린 HCl 0.3 mg/mL</td><td>파 제약</td><td>NDC 42023-179-01</td><td>통증 완화</td></tr><tr><td>Cooley-Mayo 곡선 가위</td><td>필링</td><td>352090</td><td>대형 가위</td></tr><tr><td>Gerald 조직 집게</td><td>필링</td><td>351900</td><td>집게</td></tr><tr><td>Wangesnsteen 조직 집게</td><td>필링</td><td>342929</td><td>외상성 집게</td></tr> 필링 <tr><td>얇은 혈관 바늘 홀더</td><td>필링</td><td>354962DG</td><td>바늘 홀더</td></tr><tr><td>크로탈린</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>C2401-1G</td><td>MCT</td></tr><tr><td>Surflash 20 G IV 카테터</td><td>테루 모</td><td>SR * FF2051</td><td>장기 적출 중 압력 판독</td></tr><tr><td>ADVantage PV 시스템 1.2 Fr 카테터</td><td>Transonic Inc</td><td>ADV500</td><td>기록 폐동맥 및 우심실 압력</td></tr><tr><td>매체 Hemoclip</td><td>Weck</td><td>523700</td><td>인대 혈관</td></tr><tr><td>오픈 결찰 클립 애플리케이터; 중간, 곡선</td><td>Weck Horizon</td><td>237081</td><td>hemoclip 어플리케이터</td></tr><tr><td>수술 현미경</td><td>Zeiss OPMI MD</td><td>1808</td><td>배율</td></tr></tbody></table>

쥐에 폐 고혈압의 모델로 monocrotaline 또는 sugen와 함께 왼쪽된 pneumonectomy

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

이 프로토콜에서 우리 세부 올바른 절차 단계 및 성공적으로 수행 하는 왼쪽된 pneumonectomy 고 monocrotaline (MCT)의 추가 관리와 쥐에서 PAH를 유도 필요한 조치 또는 SU5416 (Sugen). 우리는 또한 연구에 일반적으로 사용 되는 다른 PAH 모델을 이러한 두 가지 모델을 비교 합니다. 지난 몇 년 동안, 동물 PAH 모델의 초점 plexiform 병 변, 있는 증가 폐 혈의 역할 이라고 여겨진다 심각한의 개발에 중요 한 방 아 쇠로 폐의 angioproliferation의 메커니즘을 공부 쪽으로 이동 했습니다. 관 리 모델링입니다. 증가 폐 흐름의 가장 유망한 설치류 모델 중 하나입니다 일방적인 왼쪽된 pneumonectomy MCT 또는 Sugen의 "두번째 명 중"와 함께. 왼쪽된 폐의 제거 및 사나운 폐 혈액의 흐름과 혈관 개장 이끌어 낸다. 현재, 쥐에 pneumonectomy 수술의 더 상세한 절차가입니다. 이 문서는 pneumonectomy 수술 및 남성 Sprague-Dawley 쥐에 수술 치료의 단계별 프로토콜을 자세히 설명합니다. 간단히, 동물 마 취 하 고 가슴을 열. 일단 왼쪽된 폐 동맥, 폐 정 맥, 그리고 기관지는 시각, 그들은 출혈 하 고 왼쪽된 폐 제거 됩니다. 가슴 다음 폐쇄 하 고 복구 하는 동물. 혈액 순환 우측 폐에만 강제로. 이 혈관 압력이 증가 하는 진보적인 개장 하는 작은 폐 동맥의 폐색 리드. MCT 또는 Sugen의 두 번째 히트 사용된 1 주일 후 수술 내 피 기능 장애를 유발 하는 것 이다. 폐 및 내 피 기능 장애에서 증가 혈액 흐름의 조합 하면 심각한 PAH. 이 절차의 기본 한계가 이다 일반적인 외과 기술을 요구 한다.

허용된 분류 시스템에 따라 폐 고혈압 정상 폐 동맥 압력 (즉, 25 mm Hg)의 상한 초과 평균 폐 동맥 압력 (mPAP)에 의해 특징입니다. Pneumonectomy + MCT 그룹에서 심각한 PAH 하루 21 증가 mPAP (그림 1)에 의해 개발. mPAP 수식에 의해 계산 됩니다.
<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59050/59050eq1.jpg">
수축 기 및 diastolic RV 및 PA 압력 장점은 태양광 시스템에 연결 된 주 폐 동맥에서 압력 카 테 터로 측정 했다. 평균 폐 동맥 압력 (mPAP) 위의 수식을 사용 하 여 계산 됩니다. 컨...

설치류 왼쪽된 pneumonectomy 폐 고혈압 연구에 귀중 한 기술 이다. 여기, 선물이 쥐 pneumonectomy 절차와 최소한의 사망률 및 사망을 보장 하기 위해 수술 후 치료를 설명 하는 프로토콜.

쥐에 폐 고혈압의 모델로 Monocrotaline 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 Pneumonectomy

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...

이 프로토콜은 폐 동맥 고혈압에 가장 적합한 모델을 생성하기 때문에 중요합니다. 다른 모델은 인간 PAH 환자에서 발견되는 플렉시폼 병변을 생성하지 않습니다. 주요 장점은 우리가 오른쪽 폐와 폐 동맥에 있는 혈액의 흐름을 두 배로, 내피 손상을 일으키는 원인이 되고 폐가 두 배 열심히 작동하도록 강요한다는 것입니다.우리 그룹은 치료법을 개발하기 위해 폐 동맥 고혈압의 매우 효율적인 모델을 개발했습니다. 폐 동맥 고혈압 이외에, 이 방법은 재생 의학에 도움이 될 수 있고 선천성 심장 결함 또는 후 폐렴 술 환자 같이 증가한 폐 흐름으로 그밖 질병에 통찰력을 줄 수 있었습니다. 이 기술을 수행 한 적이없는 사람을 위해, 내 조언은 프로토콜을 정확하게 따르고 외과 의사가 그들이하고있는 일을 정확하게 볼 수 있는지 확인하는 것입니다.4%의 이소플루란으로 쥐를 마취한 후, 동물은 광섬유 거위라이트를 사용하여 기관지 조명을 사용한다. 후두에 16 게이지 카테터를 삽입하고 차가운 거울을 사용하여 카테터에서 숨을 내쉬는 호흡에서 습도의 응축을 관찰하여 삽관을 확인합니다. 쥐를 인공호흡기에 연결하고 37도 의 섭씨 가열 패드에 오른쪽 디큐비투스 위치에 있는 현미경 아래에 쥐를 놓습니다.테이프로 앞다리를 고정하고 클리퍼를 사용하여 앞다리 뒤에서 흉곽끝까지 왼쪽 흉부를 면도합니다. 노출된 피부를 순차적으로 10%의 포비단 요오드 용액 과 70%에탄올 물티슈로 청소하고, 수술 내내 심박수와 산소 포화도를 모니터링하기 위해 쥐의 발에 맥박 옥시계를 놓습니다. 지금, 현미경을 조정하고 초점에 외과 보기를 가지고.그런 다음, 멸균 커튼을 쥐의 몸과 악기 트레이 위에 놓고 멸균 환경을 만듭니다. 그리고 마지막으로 멸균 기기 트레이에 멸균 기구를 놓습니다. 왼쪽 폐렴 절제술을 수행하려면 쿨리 마요 가위와 제럴드 조직 집게를 사용하여 수술 드레이프에 2 ~ 3 센티미터 구멍을 자르고 수술 블레이드를 사용하여 왼쪽 흉부에서 2 센티미터 길이의 측면 절개를 합니다.쿨리 마요 가위를 사용하여 갈비뼈와 늑간 근육이 노출 될 때까지 조직의 각 층을 잘라냅니다. 모기를 사용하여 세 번째 늑간 공간의 근육을 통해 구멍을 만듭니다. 이중 형 프로브를 사용하여 폐 동맥을 시각화하기 위해 폐를 이동하고 McPherson-Vannas 아이리스 가위를 사용하여 늑간 근육을 약 1 ~ 2 센티미터 너비로 엽니다.갈비뼈와 근육을 열어 놓고 왼쪽 폐를 왼쪽 폐를 낮게 움직여 폐 동맥과 기관지에 접근할 수 있도록 왼쪽 폐를 왼쪽 흉막에 놓습니다. 왼쪽 주 기관지 및 폐 동맥의 결찰을 위해 먼저 중간 크기의 헤모클립을 리깅 클립 어플리케이터에 넣고 Wangensteen 외상성 집게를 사용하여 왼쪽 폐의 상부를 조심스럽게 들어 올려 폐 동맥을 노출시합니다. 왼쪽 azygos 정맥을 닫거나 파열하지 않도록주의하여 동맥 주변의 클립과 어플리케이터를 닫습니다.그리고 편도선을 사용하여 절개를 더 열어 근육 섬유를 분리합니다. 다른 배지 헤모클립을 리깅 클립 어플리케이터에 적재한 후, 외상성 집게와 표준 조직 집게를 사용하여 왼쪽 주 기관지 및 좌측 폐 정맥이 시각화될 때까지 절개에서 폐의 하부를 들어 올립니다. 왼쪽 메인 기관지와 폐 정맥을 두 번째 헤모클립과 함께 조심스럽게 리게이트하고 가위를 사용하여 클립을 자르거나 찢지 않고 폐를 제거합니다.그런 다음, 모든 혈액을 흡수하고 출혈을 줄기 위해 멸균 거즈의 작은 조각을 사용합니다. 바늘 홀더와 4-0 프렌 봉합사를 사용하여 갈비뼈와 늑간 근육을 닫습니다. 늑간 근육을 닫기 전에 16 게이지 카테터를 외과 절개에서 벗어나 일곱 번째 늑간 공간에 흉부 구멍에 삽입하고 즉시 바늘을 제거하여 카테터를 제자리에 둡힙하십시오.가슴 튜브를 제거하면 구멍이 닫히도록 피부와 가슴 튜브 주위에 5-0 봉합사를 넣고 봉합사를 묶어 갈비뼈를 닫습니다. 5-0 봉합사로 피부와 피하 공간을 닫고, 3밀리리터 주사기를 사용하여 카테터를 통해 흉막 구멍에서 공기를 배출하여 흉부에서 정상적인 음압을 회복시다. 바늘 홀더를 사용하여 카테터를 즉시 고정하여 공기가 흉부 구멍으로 다시 돌아가는 것을 방지하십시오.카테터를 제거하고 봉합사를 묶어 구멍을 닫습니다. 폐렴절제술 및 단크로알린 군에서, 가혹한 폐 고혈압은 처리되지 않은 가짜 동물을 통제하기 에 비해 평균 폐 동맥 압력의 증가에 의해 입증된 바와 같이, 21일까지 발전합니다. 폐렴절제술플러스 수겐군에서는, 평균 폐동맥 압력은 대조군보다 3배 높다.오른쪽 심실 수축기 압력은 대조군에 비해 단크로알린 및 수겐 처리 동물 모두에서 훨씬 더 높습니다. 헤마톡시린과 에신은 일반 쥐 폐 조직 섹션에서 폐포와 폐포 구조 사이의 공간이 명백하며 혈관은 맑고 정상적인 두께가 있습니다. 폐 동맥 고혈압 폐에서는 리모델링, 혈관 벽의 두껍게, 혈관의 심한 수축, 염증 및 초점 폐 동맥염의 증거가 있습니다.동물은 폐를 잃는 것에 대해 보상해야하므로 회복 기간 동안 인내심을 가져야합니다. 활력 징후를 모니터링하고 필요에 따라 추가 산소 또는 폐 볼륨을 제공합니다. 수겐은 내피 성 동맥 고혈압의 임상 관련 징후인 내피 성 석멸을 만듭니다.설치류의 왼쪽 폐렴 절제술 모델은 과학자들이 흐름 이상을 연구하고 폐 동맥 고혈압에 대한 새로운 치료법을 개발할 수 있는 길을 열었습니다. 이 모델에서 이소플루란, 수겐 및/또는 MCT를 사용하므로 개인 보호 장비는 항상 착용해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

폐동맥고혈압(PAH)은 폐동맥의 소멸과 우심실 부전의 발병을 유발하는 폐동맥 질환입니다. PAH의 설치류 모델은 PAH의 병태생리학을 이해하는 데 중요합니다. 여기에서는 마우스와 쥐에서 우측 심장 카테터 삽입 및 심장 초음파 검사를 통한 혈류역학적 특성을 보여줍니다.

폐동맥 고혈압의 설치류 모델의 혈역학 특성

이 프로토콜은 쥐에서 흐름 유도 폐동맥 고혈압(PAH)에 대한 모델을 만들기 위한 수술 절차와 이 모델에서 주요 혈역학적 및 조직학적 끝점을 분석하는 절차를 설명합니다.

흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측

우리는 바로 심 실 비 대와 쥐에 있는 실패를 유발 하는 수술 방법 제시.

압력 과부하의 모델 밴딩 폐 트렁크 유도 오른쪽 심 실 비 대 및 실패

여기, 선물이 비보 전 폐 암 모델을 모방한 종양 진행의 단계 및 기본 종양을 격리 하는 데 도움이 프로토콜 순환 종양 세포, 및 전이성 병 변.

Acellular과 세포 폐 종양 전이 연구 모델

왼쪽된 심 방 협 (라스)은 그룹 2 폐 고혈압 (PH) 및 폐 정 맥 arterialization 기본 메커니즘 연구는 소설 외과 기술입니다. 여기, 선물이 폐 정 맥 arterialization를 일으키는 원인이 되 고 쥐에서 PH를 알 맞도록 하는 티타늄 클립을 사용 하 여 좌 심 수축 하는 프로토콜.

왼쪽된 심 방 협 유발 쥐에서 그룹 2 폐 동맥 고혈압과 폐 정 맥 Arterialization

이 프로토콜은 저산소증에 노출및 VEGF 수용체 길항제의 주입에 근거하여 마우스에 있는 폐 고혈압 (PH)의 유도를 기술합니다. 동물은 프로토콜의 개시 후에 PH 및 오른쪽 심실 (RV) 비대 3 주를 개발합니다. 모델의 기능적 및 형태특성도 표시됩니다.

저산소증/SU5416 모델을 사용하여 마우스에서 폐 고혈압의 유도 및 특성화

여기에서는 결과를 개선하는 데 도움이 되는 쥐 폐 이식 모델에 대한 최적화를 제시합니다. 체중에 따른 커프스 사이즈 가이드, 4차 늑간 공간을 확인하기 위한 측정 전략, 상처 봉합 및 BAL(기관지폐포 세척) 체액 및 조직 수집 방법을 제공합니다.

온난 허혈/재관류 손상의 쥐 폐 이식 모델: 결과 개선을 위한 최적화

우심부전(RHF)은 우측 심장 확장과 비대가 특징이며, 심실 및 심방 기능 부전을 유발합니다. RHF와 관련된 심폐 질환은 심장 부정맥의 위험 증가를 동반합니다. 이 논문은 향상된 심실 및 심방 부정맥 형성과 관련된 폐동맥 밴딩 유도 RHF의 표준화된 모델을 설명합니다.

폐동맥 밴딩을 이용한 우측 심장 리모델링 및 부정맥의 쥐 모델

본 연구에서는 블레오마이신을 기도에 주입하여 폐섬유증(PF-PH) 랫트 모델과 관련된 폐동맥 고혈압을 유발하는 방법을 소개합니다. 또한 이 동물 모델을 검증하기 위한 단계별 접근 방식을 제공합니다.

Lung Arterial Hypertension Associated with Pulmonary Fibrosis의 쥐 모델 수립 및 검증

이 프로토콜은 쥐의 정소성 좌측 폐 이식을 위한 개선된 기술을 설명하며, 수술의 어려움을 줄이고 생존율을 개선하는 데 중점을 둡니다.

쥐의 정소성 좌측 폐 이식

학습하세요 쥐의 왼쪽 폐절제술을 이용한 폐동맥 고혈압 모델 수립 방법을. 이 기법은 인간 환자의 병변을 재현하며 혈관 내피 손상 메커니즘 연구와 치료제 개발에 활용됩니다.

쥐에 폐 고혈압의 모델로 Monocrotaline 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 Pneumonectomy

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