플루오레세인 이소티오차네이트-폴리수크로오스 70을 가진 마우스에서 사구체 투과성의 고감도 측정

이 방법은 신장 병에서 구체 투과성의 역할에 관하여 신장학 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 형광 납 라벨 추적자를 사용하여 구체 투과성의 작고 일시적인 증가가 검출된다는 것입니다. 마취 후, 여성 마우스에 오줌 카테터를 놓습니다.

마우스를 등갈 에 배치합니다. 하복부를 조이고 요도 타튬을 찾습니다. 22 G angiocatheter의 카테터의 플라스틱 부분을 얻고 실로카인 젤로 윤활합니다.

왼쪽 검지 손가락을 사용하여 하복부에 주의 깊은 장력을 배치하고 탈모 요도 축을 평행화하면서 도도 오스트리움에 3 밀리미터카테터를 도입하십시오. 요도 오골 내의 팁을 유지하고 요도의 축을 유지하여 앙미오카테터 180도의 상단을 돌립니다. 그런 다음 카테터를 마우스에 7밀리미터 더 도입하여 방광 내에 배치되도록 합니다.

소변을 수집하기 위해 앙뇨시카테터 위에 1.5 밀리리터 브라운 튜브를 놓습니다. 소변 생산을 향상시키기 위해 염화 나트륨 0.9 %의 1 밀리리터를 피하로 적용하십시오. 마우스의 목을 면도하고 외과 의사를 향해 머리와 함께 수납에 배치합니다.

하이퍼는 테이프로 마우스의 머리를 확장합니다. 70%의 이소프로판올로 목을 소독합니다. 트위저와 가위를 사용하면 턱선 아래 5밀리미터 의 피부 절개를 합니다.

흉골 의 중간에 도달 할 때까지 흉골 방향으로 약 1 센티미터 피부를 잘라. 가위 한 켤레를 사용하십시오. 조심스럽게 목의 오른쪽에 피부를 해부.

목의 연조직을 노출시키기 위해 피부에 직사각형 절개를 오른쪽으로 만듭니다. 경정맥을 손상시키지 않도록 주의하십시오. 가위 한 켤레와 트위저를 사용하여 두 개의 클램프로 피부 플랩을 고정합니다.

미세 트위저의 끝을 사용하여 무딘 준비로 경정맥을 조심스럽게 노출시합니다. 필요한 경우 미세 가위로 조직을 제거하십시오. 정맥 가지에 부상을 피하십시오.

마우스 의 머리를 향해 보이는 경정맥의 말단 부분에 실크 실로 합자를 놓고 닫습니다. 실크 실을 테이프로 고정하여 합자에 장력을 더합니다. 이것은 경정맥에 약간의 긴장을 보장합니다.

경정맥의 근위 부분 주위의 합자를 준비한다. 그 후, 평형 및 융합 용액으로 카테터를 채웁니다. 카테터가 경정맥을 정렬할 수 있도록 카테터를 테이프로 고정합니다.

공기 색전증을 피하기 위해 거품에 대한 제어. 삽입 부위에 미세 핀셋으로 경정맥을 들어 올립니다. 경정맥에 평행하게 튜빙을 정렬하고 루멘을 목표로 경정맥을 뚫는다.

경정맥의 축을 평행하여 약 2~4밀리미터 에 삽입합니다. 활발한 움직임을 피하십시오. 합자를 닫아 카테터를 수정합니다.

현미경을 통해 주의 깊게 볼 수 있도록 합자의 압박감을 제어합니다. 수술 부위에 젖은 면봉을 놓습니다. 마우스가 등쪽 회기에 누워있는 동안 꼬리 커프를 마우스 꼬리 의 바닥에 놓습니다.

측정을 시작하고 시간 당 10 번 반복합니다. 혈압 측정이 정확하지 않고 잘못된 데이터가 생성되면 꼬리 커프의 위치를 조정하십시오. 평형 단계 전에 오줌 수집 튜브를 변경하고 얼음에 놓습니다.

면봉을 접어 경정맥에 도입된 작은 용기 카테터 주위에 놓습니다. 역행 된 혈류 또는 공기 색전증을 폐지하기 위해 면봉 위에 클램프를 놓습니다. FITC 볼루스로 채워진 1밀리리터 주사기와 함께 27 G 바늘을 작은 용기 카테터 의 끝에 연결합니다.

클램프를 열고 100 마이크로리터 FITC 볼러스를 적용합니다. 클램프를 다시 닫고 더 큰 카테터를 더 작은 카테터와 연결합니다. 클램프를 다시 열고 분당 0.008 밀리리터의 유량으로 주사기 펌프를 시작합니다.

60분 동안 주입을 계속합니다. 이 단계에서, 구체 파마 선택성에 효과적인 약은 조사됩니다. 또 다른 1.5 밀리리터 갈색 튜브로 오줌 튜브 양식 시간 점 0 분 변경합니다.

작은 선박 카테터 주위에 면봉을 넣고 작은 선박 카테터에서 큰 카테터를 분리합니다. 주사기를 실험단계 용액으로 채웁니다. 주사기 펌프에 넣고 주입 펌프가 작동하여 대형 카테터가 실험상 용액으로 채워지도록 합니다.

공기 색전증을 피하면서 카테터를 다시 연결하고 클램프를 다시 엽니다. 분당 0.008 밀리리터의 유량으로 주사기 펌프를 시작합니다. 주사기 펌프를 60분 동안 계속 가동하고 그 후 오줌관 내에서 소변을 수집합니다.

소변 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 이 연구에서는, 네이티브 마우스 소변의 형광 검사는 395 나노미터에서 피크를 보여줍니다. FITC 폴리수크로오스 70은 마우스 소변에서 밀리리터당 40 마이크로그램의 농도로 525나노미터의 형광을 최대로 나타낸다.

마우스 소변은 FITC 다각형 제 70의 형광 측정을 방해하지 않습니다. FITC 다각형산제(70)의 농도를 증가시켜 525나노미터의 입학시 형광 강도가 증가한다. 이 방법은 또한 구체 투과성의 차이를 감지 할 수있다.

백색 기둥은 실험 단계에서 안지오텐신 II 자극이 시작되기 전에 FITC 다당류 70 레벨을 나타낸다. 60 분 동안 투여 한 후, 사구체 투과성이 대조군에 비해 증가했습니다. 안지오텐신 II는 구체 투과성을 감소 시폐합니다.

FITC 다당류 70 레벨은 안지오텐신 II 자극의 추가 60 분 또는 안지오텐신 II 세척60 분 후에 감소했습니다. 안지오텐신 II로 인한 사구체 투과성의 증가는 안지오텐신 II 수용체 차단제에 의해 차단될 수 있다. 꼬리 커프 방법에 의해 모니터링되는 혈압은 대조군과 안지오텐신 II 치료군 사이에 유의한 차이를 나타내지 않았다.

이 절차를 시도하는 동안 주입 솔루션을 변경할 때 공기 색전증을 피하는 것이 중요합니다.