Name: 멕시코 Cavefish에서 유전자 기능 조작 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: 배우세요 멕시코 동굴어류 Astyanax mexicanus에서 Tol2 전이, CRISPR/Cas9 유전자편집, 모르폴리노 유전자침묵 기법을 활용한 유전자 기능 조작 방법을. 이 기법들은 표면어류와 동굴어류 간 형질 변이의 유전적 기초를 연구하는 데 필수적입니다.

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저자는 유전형에 oca2 돌연변이 물고기 그림2 이미징 그녀의 지원에 대 한 Sunishka Thakur 감사 합니다. 이 작품은 국립 과학 재단 (NSF) 수상 1656574 A.C.K., NSF 상을 조 앤을 A.C.K., 1754321 및 국립 보건원 (NIH) 수상 R21NS105071 A.C.K. 및 E.R.D.에 의해 지원 되었다

저자는 공개 없다.

여기, 우리는 morpholinos, CRISPR/Cas9 유전자 편집, transgenesis 방법론을 사용 하 여 유전자 기능을 조작 하기 위한 방법론을 제공 합니다. 유전자 기술의 부와 제 브라에서 이러한 시스템의 최적화 이러한 도구를 쉽게52와 A. mexicanus 에 이전 하면 가능성이 있습니다. 최근 연구 결과 A. mexicanus를 이러한 방식을 사용 하지만 그들은이 시스템30,,3642 에 다양 한 형태학, 발달, 및 행동 특성 조사에 충분히 남아 , 53.
Morpholinos는 최저 유전자 표현의 zebrafish 연구에 널리 사용 되어 왔습니다. 접근 손쉬...

다윈의 종의 기원1, 이후 과학자 들은 어떻게 특성 정의 된 환경 및 생태 압력, 동굴 생물2덕분에 진화론 모양에 대 한 깊은 통찰력을 얻고 있다. 멕시코 tetra, A. mexicanus, 강 멕시코와 남부 텍사스 살고 눈된 조상 '표면' 인구와 파생된 동굴 변경해 거주 시에라 델 Abra의 적어도 29 지리적으로 고립 된 인구 구성 및 북동 멕시코3의 다른 지역입니다. A. mexicanus, 바꾸 인된 산소 소비, depigmentation, 눈를 포함 하 여 그리고 유와 구하고 행동4,,56, 변경에 확인 된 동굴 관련 된 특성의 수 7,,89. A. mexicanus 선물 잘 정의 된 진화 역사, 생태 환경, 상세한 특성화 및의 존재로 인해 수렴 진화의 메커니즘을 독립적으로 조사를 위한 강력한 모델 진화 동굴 인구10,11. 많은 눈의 손실을 포함 한 cavefish에, 손실 자, 먹이, 훈련의 손실 증가, 침략, 및 스트레스 응답을 감소, 감소 독립 기원, 자주 활용을 통해 여러 번 진화 하는 동굴에서 파생 된 특성은 다른 유전 통로 사이 동굴8,12,13,,1415. 이 반복은 A. mexicanus 시스템의 강력한 측면 이다 진화와 비슷한 고기를 생성 하 어떻게 유전자 시스템의 보다 일반적인 질문에 대 한 통찰력을 불안정 수 있습니다 제공할 수 있습니다.
유전자 기능의 기계 조사에 대 한 유전자 기술의 응용 ( A. mexicanus를 포함 하 여) 많은 물고기 종에 제한 되어는 제 브라의 최근 발전 제공 기준 물고기에서 유전자 기술 개발 16,17,18,19,20. 수많은 도구는에서 널리 이용 되 zebrafish 유전자 발현, 조작 하 고 이러한 절차의 구현 표준화 오래 있다. 예를 들어 단일 셀 단계에서 morpholino oligos (MOs)의 주입은 선택적으로 RNA를 차단 하 고 개발21,22동안 간단한 임시 창에 대 한 번역을 방지. 또한, 유전자 편집 방법, 정기적으로 클러스터 된 같이 interspaced 짧은 구조 반복 (CRISPR) / CRISPR-관련 단백질 9 (Cas9) 및 녹음 방송 활성 제 같은 이펙터 nuclease (TALEN), 정의 된 삭제의 세대에 대 한 허용 또는, 경우에 따라 게놈19,20,,2324에서 재결합을 통해 삽입. Transgenesis 셀 형식을 특정 방식으로 안정적인 유전자 발현 또는 기능을 조작 하는 데 사용 됩니다. Tol2 시스템은 transposase coinjecting에 의해 유전자 변형 동물을 생성 하기 위해 효과적으로 사용 transgene25,26를 포함 하는 Tol2 DNA 플라스 미드와 mRNA. Tol2 시스템 생성 유전자 변형 construct17의 안정적인 생식 삽입 하 메 다카의 Tol2 transposase를 사용 합니다. Tol2 제 닉 생성 coinjecting Tol2 transposase17 Tol2 통합 사이트 및 mRNA에 의해 형벌 transgene를 포함 하는 플라스 미드 포함 됩니다. 이 시스템 zebrafish에 유전자 변형 라인의 배열을 생성 하는 데 사용 되었습니다 및 사용 시 클 리드, 송사리, stickleback를 포함 하 여 추가 긴급 모델 시스템을 최근 확장 했다 그리고, 최근에, 멕시코 cavefish27, 28,29,30.
cavefish 특성이 진화의 elucidating 메커니즘에 대 한 매혹적인 생물 학적 시스템은, 진화 모델로 서의 전체 능력은 하지 되었습니다 완전히 무력화. 이것은 부분적으로 유전자를 조작 하는 무 능력 때문 이었고 휴대 기능 직접31. 양적 특성 loci (QTL) 연구를 사용 하 여 복잡 한 특성을 조절 하는 후보 유전자 확인 되었습니다 하지만이 후보 유전자의 유효성 검사는 어려운32,33,34되었습니다. 최근, morpholinos, CRISPR 및 TALEN 시스템 및 Tol2를 사용 하 여를 사용 하 여 편집 하는 유전자를 사용 하 여 일시적인 최저-중재 transgenesis 유전으로 기본 특성35,36,37의 수를 조사 하는 데 사용 되었습니다 ,38. 구현 및 이러한 기술의 표준화의 생물 학적 특성, 유전자 기능, 정의 된 세포 인구의 라벨의 조작을 포함 한 분자 및 신경 토대를 심문 하는 조작에 대 한 수 고 식 기능 기자입니다. 반면 유전자 또는 세포 기능 하 유전 이러한 도구를 성공적으로 구현 응급 모델 시스템에서 입증 되었습니다, 상세한 프로토콜은 여전히 A. mexicanus부족.
A. mexicanus 변화 하는 환경에 대 한 응답에서 진화의 메커니즘에 대 한 중요 한 통찰력을 제공 하 고 다양 한 특성을 조절 하는 새로운 유전자를 식별 하는 기회. 요인의 수는 A. mexicanus 는 쉽게 큰 무리 크기는 실험실에서 물고기를 유지 하는 기능을 포함 하 여 설립된 유전자 모델에서 현재 사용할 수 있는 설립된 게놈 도구를 적용 하기 위한 매우 온순한 모델 제안 투명성, 시퀀스 된 게놈 및 정의 된 행동 분석39. 여기, 우리는 morpholinos, transgenesis, A. mexicanus의 표면 및 동굴 인구에서 유전자 편집의 사용에 대 한 방법론을 설명 합니다. A. mexicanus 에서 이러한 도구의 광범위 한 응용 프로그램의 발달, 생리, 및 행동 차이 cavefish 및 표면 물고기의 진화를 기본 분자 과정에 기계 조사에 대 한 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Fish breeding & egging supplies </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fine mesh fish net</td><td>Penn Plax</td><td>BN4</td><td></td></tr><tr><td>어항 히터</td><td>Aqueon</td><td>100106108</td><td></td></tr><tr><td>Egg 트랩</td><td>맞춤형</td><td>NA</td><td>계란을 보호하기 위해 탱크 바닥에 놓을 플라스틱 화격자 디자인 및 생성</td></tr><tr><td>유리 피</td><td>펫 Fisher Scientific</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>피펫 전구</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-21</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Agarose Fisher Scientific</td><td>BP160-500</td><td></td></tr><tr><td>난형</td><td>적응형 과학 도구</td><td>TU-1</td><td></td></tr><tr><td>Morpholino 용품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Control Morpholino</td><td>Gene Tools, LLC</td><td>표준 제어 olio</td><td></td></tr><tr><td>사용자 정의 Morpholino</td><td>Gene Tools, LLC</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>페놀 레드</td><td>시그마 Aldrich</td><td>P0290-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CRISPR 공급</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cas9 플라스미드</td><td>AddGene</td><td>46757</td><td></td></tr><tr><td>GoTaq DNA 중합효소</td><td>Promega</td><td>M3001</td><td></td></tr><tr><td>KOD 핫 스타트 Taq</td><td>EMD Millipore</td><td>71-842-3</td><td></td></tr><tr><td>프라이머</td><td>통합 DNA 기술</td><td>맞춤형</td><td></td></tr><tr><td>T7 메가스크립트 키트</td><td>Ambion/Thermofisher</td><td>AM1333</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy 키트</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>mMessage mMachine T3 키트</td><td>Ambion/Thermofisher</td><td>AM1348</td><td></td></tr><tr><td>MinElute 키트</td><td>Qiagen</td><td>28204</td><td></td></tr><tr><td>Tol2 형질전환 공급</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pCS-zT2TP 플라스미드</td><td>Kawakami et al., 2004</td><td>선임 저자</td><td></td>의 요청</tr><tr><td>CutSmart Buffer</td><td>New England Biolabs</td><td>B7204</td><td></td></tr><tr><td>NotI-HF 제한 효소</td><td>New England Biolabs</td><td>R3189</td><td></td></tr><tr><td>PCR 정제 키트</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>SP6 mMessenger Kit</td><td>Ambion/Thermofisher</td><td>AM1340</td><td></td></tr><tr><td>Microinjection supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass Capillary Tubes</td><td>Sutter Instruments</td><td>BF100-58-10</td><td></td></tr><tr><td>피펫 풀러</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Picoinjector</td><td>워너 인스트루먼트</td><td>PLI-100A</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 매니퓰레이터</td><td>월드 정밀 머신</td><td>M3301R</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 매니퓰레이터 스탠드</td><td>월드 정밀 머신</td><td>M10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터 베이스</td><td>월드 정밀 기기</td><td>강판 베이스, 10 lbs</td><td></td></tr></tbody></table>

멕시코 cavefish에서 유전자 기능 조작

Manipulation of Gene Function in Mexican Cavefish

동굴 동물 진화 메커니즘 및 기본 변경 눈 변성, 獸, 수 면 감소, hyperphagia, 및 감각 처리를 포함 하 여 수많은 복잡 한 특색에 유전 기초 조사를 위한 경쟁력 있는 시스템을 제공 합니다. 세계 각국에서 cavefish의 종 다른 동굴 시스템 간의 공유 환경 압력 때문에 형태학과 행동 특성의 수렴 진화를 표시합니다. 다양 한 동굴 종 실험실 조정에서 공부 되었습니다 했다. 시력, 눈 먼 형태와 멕시코 tetra Astyanax mexicanus, 밑에 복잡 한 특성의 진화 생물학과 분자 프로세스에 대 한 독특한 통찰력을 제공 하고있다 그리고 신흥 모델 시스템으로 잘 태세입니다. 다양 한 생물 학적 과정의 진화를 규제 하는 후보 유전자 A. mexicanus에 확인 되었습니다, 하는 동안 개별 유전자에 대 한 역할의 유효성을 검사 하는 기능 제한 되었습니다. Transgenesis 및 유전자 편집 기술을의 적용이 중요 한 장애를 극복 하 고 복잡 한 특성의 진화를 기본 메커니즘을 조사 가능성이 있다. 여기, A. mexicanus에서 유전자 발현을 조작 하기 위한 다른 방법을 설명 합니다. Morpholinos, Tol2 transgenesis의 사용을 포함 하는 접근 하 고 유전자 편집 시스템, 제 브라에서 일반적으로 사용 되 고 다른 물고기 모형, A. mexicanus에서 유전자 기능을 조작 하. 이러한 프로토콜 초과 사육 절차에 대 한 자세한 설명, 수정 된 계란, 주사, 그리고 유전자 변형된 동물의 선택의 컬렉션을 포함합니다. 이 방법론 접근 A. mexicanus에서 다양 한 특성의 진화를 기본 유전과 신경 메커니즘의 조사에 대 한 수 있습니다.

동굴 주거 A. mexicanus 의 여러 인구 감소 수 면과 깨어/활동 그들의 표면-주거 conspecifics14상대적 증가 보여줍니다. Hypocretin/orexin (HCRT)는 깨어 증가, 높은 보존된 neuropeptide 이며 HCRT 통로에서 착오 발생 narcolepsy 인간과 다른 포유류47,48에. 우리는 이전 그 동굴을 증명 하고있다 A. mexicanus 이 펩 티이 드의 증가 식 cavefish38수 면의 손실을 기초 수 있습니다 제안 하는 HCRT 펩 티 드의 식을 증가 했다. Hcrt 식의 모 최저 직접 중재 cavefish 수 면의 손실 증가 hcrt 식의 효과 조사 하기 위한 강력한 접근 방식을 제공 합니다.
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진화 모델 시스템 Astyanax mexicanus유전자의 조작 방법을 설명합니다. 세 가지 다른 기술 설명: 중재 하는 Tol2 transgenesis, CRISPR/Cas9, 및 morpholinos를 사용 하 여 식의 최저 사용 하 여 게놈의 타겟된 조작. 이 도구는 기본 표면 및 동굴 주거 형태 사이의 변형 유전자의 직접 조사를 용이 해야.

멕시코 Cavefish에서 유전자 기능 조작

Cave animals provide a compelling system for investigating the evolutionary mechanisms and genetic bases underlying changes in numerous complex traits, ...

동굴 동물은 다양한 형태학, 발달 및 행동 특성을 조사하기위한 강력한 시스템을 제공합니다. 그러나 이 모형 시스템을 설치하는 한계 요인의 한은 우리가 유전자 기능을 조작하는 것을 허용하는 유전 공구의 부족입니다. 여기에서 우리는 멕시코 동굴 물고기, Astyanax 멕시코에서 유전자 기능을 조작하는 세 가지 다른 접근 법을 보여줍니다.이 공구는 표면 물고기와 동굴 물고기 사이 자연적인 변이의 근본적인 유전자의 조사를 가능하게 하고 표현형과 어떻게 관련되는지. 베다니 스탈, 내 실험실에서 재능있는 postdoc이 절차를 보여줍니다. 시술을 시작하기 전에, 물고기 시스템 물에 용해 된 따뜻한 3 %의 아가로즈로 100 밀리리터 페트리 접시를 채우고 조심스럽게 45도 각도로 아가로즈에 계란 사출 몰드를 넣고 곰팡이 아래에 공기를 포획하지 않도록 아가로즈로 천천히 낮추십시오.아가로즈가 고화되면 금형을 조심스럽게 제거한 다음 최대 1주일 동안 섭씨 4도에 플레이트를 보관하십시오. 그런 다음 제조업체의 지침에 따라 보로실리케이트 유리 모세 혈관과 전극 바늘 풀러에서 바늘을 가져옵니다. 주사 당일, 유리 파이펫을 사용하여 단일 세포 계란을 주사 판으로 옮기고 행당 30~40개의 계란으로 최대 5열의 주사판을 채웁니다.소량의 생선 계통물로 수분을 공급하는 계란을 유지하십시오. 얼음에 Morpholino를 해동하고 포몰리노의 400 picograms가 긴 마이크로 로더 파이펫 팁을 사용하거나 끝에 2 ~ 4 마이크로 리터 볼러스를 추가하여 계란 당 주입되도록 주입 솔루션을 준비합니다. 모든 바늘이 로드되었을 때, 집게를 사용하여 주사 바늘 끝에서 초과 길이를 손질하고 첫 번째 바늘을 피콜리터 마이크로 인젝터에 연결된 미세 조작기로 장착하십시오.그런 다음, 분사 접시를 해부 현미경 아래에 놓고 마이크로 조작기를 사용하여 모폴리노 주입 용액 1 나노리터를 노른자에 직접 주입하기 전에 바늘로 각 계란을 관통합니다. CRISPR 주입의 경우, 가이드 RNA 25 피코그램을 CRISPR 관련 단백질 9 메신저 RNA의 300 피코그램과 혼합하고 생성된 RNA 용액의 2나노리터를 각 배아에 주입한다. Tol2 transposase 및 Tol2 측면 플라스미드 주사의 경우 Tol2 메신저 RNA의 마이크로리터 당 25 나노그램과 Tol2 플라스미드 구조의 마이크로리터 당 25 나노그램, RNase 가없는 물에 페놀 레드를 결합합니다.그런 다음 각 배아에 용액 1 나노리터를 주입하면 방금 입증되었습니다. 모폴리노 주입 후 4일 후 주사시 스크리닝을 하기 위해, 스테레오 현미경으로 물고기 애벌레를 시각화하여 주입된 동물의 표현형을 관찰하거나 비디오 기록을 사용하여 행동을 측정한다. CRISPR indels를 검사하기 위해 CRISPR 주입된 배아를 PCR 튜브로 이송하고 폴리머라제 연쇄 반응 또는 PCR 분석을 위한 표준 DNA 추출 프로토콜에 따라 DNA를 추출합니다.돌연변이 발생을 평가하려면 3시간 동안 70볼트에서 3%의 아가로즈 젤에 PCR 제품의 5마이크로리터를 실행합니다. 야생형, 비돌연변이 DNA는 뚜렷한 대역을 초래하며 돌연변이 DNA는 얼룩밴드가 생성됩니다. 동굴 제어 모르폴리노주입 멕시코는 스크램블 모폴리노주입된 표면 물고기에 비해 24시간 동안 훨씬 더 많은 운동 활동과 수면 감소를 나타낸다.저규경 오렉스 소림모폴리노의 주사는 제어 주입 물고기에 비해 표면 물고기의 수면에 거의 영향을 미치지 않습니다. 대조적으로, Morpholino 주입을 통해 hypocretin orexin 녹다운은 동굴 주거 물고기에 있는 잠에 중요한 효력이 있습니다, hypocretin orexin 발현과 잠 손실 사이 직접적인 링크를 제공하. 표면 물고기에서 백색증 유전자 OCA2의 CRPSR 매개 돌연변이 발생은 야생 형 OCA2 양성 대립유전자에 대한 일부 개인 에게 homozygous 결과, 그리고 CRISPR 돌연변이 OCA2 음성 대립 유전자의 두 복사본을 가지고 개인은 albino, 돌연변이 OCA2 유전자 사이의 직접적인 연결을 제공하는 반면, 색소 침착을 항구와 관련이있다.안정적인 F1 라인을 생성하기 위해 Tol2 전송된 변형유전자에 대한 F0의 포티브를 선택하여 야생 형으로 크로스합니다. 이를 통해 신경 활동의 차이를 밝히고, 동굴 환경의 행동 변화를 중재하고, A mexicanus에서 유전자 기능을 특성화하고 조작하기 위해 많은 추가 전분의 발현을 위한 기초를 마련할 수 있습니다. 기억해야 할 가장 중요한 것은 접시에 계란을 단단히 싣고 바늘을 제대로 다듬고 미세 주입을 최적화하는 것입니다.성공적인 유전 적 녹다운 후, 유전자 통합, 또는 CRISPR 중재 유전자 편집, 이러한 물고기는 개발, 행동, 및 뇌 활동 분석에 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

이 동영상은 동굴 물고기의 단세포 단계에 미세주입된 번역 차단 모르폴리노를 사용하는 유전자 넉다운 기술을 설명합니다. 모르폴리노(Morpholinos)는 표적 mRNA의 상보적 염기서열에 결합하여 단백질로의 번역을 차단하는 DNA 올리고뉴클레오티드입니다. 결과적으로, 모르폴리노는 유전자의 발현을 일시적으로 멈추거나 감소시키는 분자 도구로 사용됩니다.

Morpholino 매개 유전자 편집: 단세포 동굴물고기 알에서 번역 차단 모르폴리노 올리고뉴클레오티드를 사용한 유전자 녹다운 기술

이 문서에서는, 우리는 안티센스 모르의 올리고 뉴클레오티드를 이용하여 성인 제브라 피쉬 telencephalon의 심실 세포에서 유전자 발현을 조작하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성인 척추 뇌 기능 연구에 사용할 수있는 효율적이고 빠른 프로토콜로이 방법을 제시한다.

모르 올리고 뉴클레오티드의 Cerebroventricular 미세 주입을 사용하여 성인 Zebrafish의 두뇌에서 유전자 발현의 미세 조작

우리는 창고 기의 미 수정 난자에 여기 mRNA의 주입 후 형광 단백질의 강력하고 효율적인 표현을보고합니다. 이 기초 척색에 미세 주입 기술의 개발은,이 새로운 모델 시스템에서 기술 혁신을 광범위한 생체 내 이미징 및 유전자 특이 조작을 포함하여있는 길을 만들어 줄 것입니다.

형광 단백질의 발현에 창고 기 미 수정 난자에 mRNA의 주입에 의한

트랜스 제닉 조작 게놈 편집 기능적 유전자 및 시스 - 규정 요소의 역할을 테스트하기 위해 중요하다. 여기에 (TOL2 매개 형광 리포터 유전자 구조, TALENs 및 CRISPRs 포함) 유전자 변형의 발생에 대한 자세한 미세 주입 프로토콜은 긴급 모델 물고기의 큰가시 고기에 대한 표시됩니다.

Threespine 큰가시 고기과에 형질 전환 및 게놈 편집에 대한 미세 주입

유전자 돌연변이는 유전자 타겟팅 편집 기법을 사용하여 유기체의 광범위한 이제 가능하다. 여기, 우리는 아 스티 아낙 스 mexicanus, 표면 물고기와 cavefish를 포함 물고기의 종 이펙터 뉴 클레아 제 (TALENs) 등의 전사 활성을 이용하여 표적 유전자의 돌연변이 유발을위한 프로토콜을 보여줍니다.

의 게놈 편집<em&gt; 아 스티 아낙 스의 mexicanus</em&gt; 사용 전사 활성제와 같은 이펙터 뉴 클레아 제 (TALENs)

이 프로토콜에서 우리 Astyanax mexicanus 성인 사육, 애벌레, 인상 하는 방법을 보여 하 고 표면의 고기를 비교 하 여 morphotypes 동굴 후 애벌레 물고기에 전체 마운트 immunohistochemistry를 수행 합니다.

Post-larval 고기 분석 및 전체 마운트 Immunohistochemistry 멕시코 Tetra Astyanax mexicanus 를 높이

여기, 선물이 멕시코 cavefish의 일련의 높은 처리량 연구 방법 행동 및 mechanosensory 시스템의 중요 한 얼룩. 이러한 방법 사용 무료 소프트웨어 및 맞춤 스크립트, 행동의 연구에 대 한 실용적이 고 비용 효율적인 방법을 제공 하.

행동 추적 및 멕시코 Cavefish의 Neuromast 이미징

이 프로토콜에는 배아 Astyanax cavefish에 유전자 발현의 시각화 수 있습니다. 이 방법은 일반적인 배경 얼룩을 최소화 하면서 진 식 신호를 극대화 하는 목적으로 개발 되었습니다.

Wholemount Astyanax 배아에 대 한 제자리 교 잡

이 프로토콜 운동 동작 및 멕시코 cavefish 수 면 측정 방법을 자세히 설명 합니다. 이전 분석은 사회적으로 지 내게 물고기에 이러한 행동을 측정 하기 위해 확장 됩니다. 이 시스템은 수 면과 다른 물고기 종에 있는 활동 연구에 널리 적용할 수 있습니다.

수 면과 운동 활동 멕시코 Cavefish에서의 자동화 된 측정

체외 수정은 실험실 인구를 유지하고 다운스트림 응용을 위한 동기화된 배아를 생성하기 위하여 모형 유기체의 다양한 통용되는 기술입니다. 여기에서는 멕시코 테트라 물고기인 Astyanax멕시코어의 다양한 개체군에 대해 이 기술을 구현하는 프로토콜을 제시합니다.

아스티야낙스 멕시코의 게임테 컬렉션 및 체외 수정

이 기사에서는 발달 및 진화 연구를 위한 새로운 모델인 멕시코 테트라 Astyanax mexicanus에서최대 산란을 자극하기 위한 증분 온도 정권에 대한 기본 실험실 조건 및 프로토콜을 설명합니다.

아스티야낙스 멕시코인의 막시달 번식과 산란에 대한 증분 온도 변화

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멕시코 Cavefish에서 유전자 기능 조작

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