포스트스테인링 방법을 통해 폴리아크릴아미드 겔에서 망고 태그RNA의 형광 시각화

여기에서 입증된 망고 태그겔 화상 진찰 방법론은 견고하고 감도 및 특이성의 관점에서 단순히 확장될 수 있을 것으로 예상됩니다. 이것은 관심있는 RNA에 망고 태그를 추가하는 간단한 편법으로 생물학적으로 중요한 RNA 및 RNA 복합체의 일상적인 정화를 더욱 단순화할 것입니다. RNA는 점점 더 많은 질병에 연루되고 있으며, 이 포스트 데이트 방법은 RNA를 추적하고 시각화할 수 있는 쉽고 빠른 방법입니다.

젤이 깨지기 쉽고 깨지기 쉽기 때문에 젤을 한 곳에서 다른 곳으로 옮기는 데 추가주의가 필요합니다. 30 밀리리터 데나딩 젤을 준비하려면 먼저 적절한 브로모페놀 블루와 함께 폴리아크릴아미드 백분율을 선택하고, 높은 대역 분리를 보장하기 위해 관심 있는 RNA에 비해 자일렌 시안올 염료를 선택한다. 그런 다음 표 하나에 따라 솔루션 A, B 및 C를 혼합하고 APS 및 timud를 추가합니다.

즉시 적절한 젤 주조 장치에 젤 용액을 부어. 원하는 콘을 삽입하고 약 30 분 동안 중합체에 젤을 둡니다. 1 개의 XTBE 용액을 사용하여 젤 탱크를 구성하고 조심스럽게 콘을 제거하십시오.

젤을 조심스럽게 들어 올리고 젤 장치에 장착하고 바인더 클립을 사용하여 안전합니다. 주사기를 사용하여 시료 적재 직전에 우물을 흡인합니다. 관심 있는 RNA 샘플에 2X 데나링 젤 로딩 솔루션을 추가하여 1X RNA 샘플을 준비합니다.

열순환기를 사용하여 샘플을 섭씨 95도에서 5분간 가열합니다. 그런 다음, 냉각 된 샘플을 젤 로딩 팁을 사용하여 각 우물의 바닥에 로드합니다. 그리고 음실 온도에서 젤은 전력이 효과적으로 낮은 겔 장치의 유리 판을 균열하지 않습니다 보장합니다.

젤에 편안하게 맞을 수 있을 만큼 넓은 깨끗한 유리 용기에 원고에 따라 1X 젤 염색 용액을 준비합니다. 용기에 충분한 1X 젤 염색 용액을 추가하여 궤도 회전기에 젤이 완전히 가려지도록 합니다. 젤이 실행이 끝나면 장치에서 젤을 제거하고 우물을 잘라내고 겔 모서리를 잘라 방향을 결정하십시오.

그런 다음 젤을 1X 젤 염색 용액으로 조심스럽게 전달합니다. 이미징을 수행하려면 염색 용액을 조심스럽게 데칭하고 물로 젤을 빠르게 헹구습니다. 마지막으로, 젤을 트레이에 조심스럽게 전달하여 이미저에 넣습니다.

갇힌 거품과 과도한 액체를 제거하기 위해 젤 위에 유리 파이펫을 굴립니다. 그리고 젤 이미지를 복용진행. 망고 압타머 1, 2, 3, 4는 약 1 개의 어류 농도까지 데우라에 실질적으로 저항했다.

20~40분 염색 시간은 최대 젤 플로레시언에 충분했다. 그들은 젤에서 확산하기 시작으로 더 긴 시간은이 연구에서 사용되는 작은 RNA에 적합하지 않았다. 불소계 분석에 따르면 우레아가 있는 망고 약층은 1, 2, 3명이 4점보다 더 빠르게 접을 수 있는 것으로 나타났다.

우레아가 없을 때, 접는 것이 예상대로 훨씬 빨랐습니다. 포스트 염색 방법의 감도는 네이티브 및 데니밍 젤의 각각에 대해 잘 접힌 RNA에 대응하는 단일 밴드에 의해 표시되었으며, 나중에 약간 덜 민감성을 갖는다. 네이티브 젤의 정량화는 망고 1, 2, 4가 망고 3보다 더 선형적인 방식으로 행동하면서 약 1배 이상의 크기로 선형으로 기록되었다.

데마잉 젤의 정량화는 데니밍 젤에 우레아의 존재가 TO1 비오틴 염색 용액에 배치되면 aptamers를 접는 보다 균일한 방법을 제공할 수 있음을 시사하는 보다 선형적이었습니다. 망고 태그 RNA는 SG 염색에 비해 TO1 비오틴 염색을 사용하여 총 RNA의 존재에서 검출될 수 있다. 젤 염색 용기가 젤에 맞을 만큼 충분히 크지 않도록 주의하십시오.

RNA 샘플은 한 곳에서 다른 곳으로 전달됩니다. 데니어링 젤과 유사하게, 이 방법은 네이티브 젤을 위해 수행될 수 있다. 기본 조건을 유지하기 위해 낮은 와트에서 차가운 방에서 젤을 실행합니다.