Name: 무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: 학습하세요 생존 가능한 간 생검 기법을 사용하여 쥐의 비알코올성 지방간염(NASH)에서 치료제 효능을 평가하는 방법을. 이 절차는 임상시험 설계를 모방하여 약물 효과를 정확하게 측정합니다.

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저자는 기꺼이 조직 처리 및 immunohistochemistry 전문성 샐리 리와 홀리 Koelkebeck의 도움을 인정합니다. 저자는 또한 기술 절차 및 축산 및 그들의 지원에 대 한도 나 Goldsteen 및 실험실 동물 자원 직원 (MedImmune, 버스, 메릴랜드) 감사합니다.

모든 생체 조건 실험 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) MedImmune, LLC의와 가이드와의 정책에 따라 관리 및 실험 동물의 사용, 8 판 (2011)에 대 한 실시 했다. 남성 C57BL6J 마우스는 고 지방, 고과 당, 높은 콜레스테롤 AMLN 다이어트에 배치 했다. 간 생 검 약리학 내정간섭의 시작에 앞서 3 주 다이어트, 26 주 후 수행 했다.
1. 고 수술 재료 준비
<ol><li>오토 클레이 브 멸 균 악기 (작은 지적 팁이 위, 무딘 팁 집게, 면봉, 거 즈 사각형, 7mm 스테이플/상처 클립과 스테이플러).</li>
	<li>취득, 복 벽 (PC 1 바늘으로 5-0 코팅된 흡수 봉합 적당 하다), (hemostatic 목적을 위해 사용 될)을 압축 하는 흡수 젤라틴 스폰지, 무 균 커튼 및 장갑, 요오드 기반 스크럽과 70% 에탄올 면봉/물티슈를 폐쇄 살 균 봉합 buprenorphine (0.05-0.1 mg/kg 복용량 당 마우스, 마우스 당 적어도 3 복용량) 및 외과 눈 연 고/윤 활.</li>
	<li>마 취 기화 isoflurane 함께 작성 하 여 준비.</li>
	<li>동물 사이의 빠른 악기 살 균을 위해 비드 소독 기를 켭니다.</li>
	<li>지구 온난화 표면 또는 동물 복구에 사용할 난방 패드를 켭니다.</li>
	<li>돈 적절 한 개인 보호 장비 (PPE) (즉, 마스크, 가운, 머리 모자, 장갑).</li>
</ol>2. 미리 수술 준비
<ol><li>효과 2-3 %isoflurane 흐름 유도 챔버에 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>발가락-핀치에 응답의 부족은 마 취의 깊이 적절 한 확인 될 때까지 마우스를 관찰 합니다.</li>
	<li>눈 연 고를 사용 하 여 마 취와 관련 된 각 막의 건조를 방지 하기 위해.</li>
	<li>피하 buprenorphine를 관리 (0.05-0.1 mg/kg).</li>
	<li>즉시 동물 클리퍼 스를 사용 하 여 칼 프로세스의 꼬리 수술 부위의 면도.</li>
	<li>수술 부위의 면도 후 온수 표면 (37 ° C)에 마우스를 이동 합니다. 등 쪽 표면 아래로, 그리고 복 부 노출 되도록 하는 방식에 마우스를 놓습니다. 2-3%의 유량에서 isoflurane에의 납품을 촉진 하기 위하여 마 취 코 콘에는 마우스의 코를 삽입 합니다.</li>
	<li>깨끗 한 betadine과 70% 에탄올의 교체 면봉으로 수술 사이트 (3 회).</li>
	<li>연 무 균 수술 도구를 설정 합니다.</li>
	<li>장갑 제거 하 고 살 균 외과 장갑 바꿉니다.</li>
</ol>3. 수술
<ol><li>가 위 (1-2 cm), 칼 과정의 고 복 부 피부에 마우스의 왼쪽에 약간 즉시 꼬리 세로 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>무뚝뚝한 집게와가 위를 사용 하 여 복 벽에서 피부를 해 부.</li>
	<li>복 부 벽 고 밑 간 시각화.</li>
	<li>사용 하 여 살 균 메스 블레이드 만들기 (1-2 cm) 절 개 복 부 벽에 왼쪽 측면 엽 (LLL) 간의 시각화. 참고: 연구에 걸쳐 일관 된 수 있습니다. 관심의 다른 일반적인 돌출부는 오른쪽 중간 엽 (RML) 왼쪽 중간 엽 (내 인생을 사랑).</li>
	<li>절 개를 통해 왼쪽된 측면 엽 외부화</li>
	<li>옵션 1: 가볍게 엄지 및 집게 손가락은 LLL의 일부를 노출 하는 복 부 마사지.</li>
	<li>옵션 2: 장소 일부 꺼내 부드럽게 LLL 아래 멸 균 면봉 노출 될 수 있습니다.</li>
	<li>아래에 거짓말을 간 대 한 살 균과 수산화 표면 수 있도록 LLL 거 즈의 멸 균 식 염 수에 젖은 조각을 넣으십시오.</li>
	<li>살 균가 위 두 컷 하 여는 LLL에서 간 모양 조각을 잘라. 참고: 간 제거의 대략적인 크기는 30-50 밀리 그램 (< 쥐에 간 5%).</li>
	<li>간 쐐기 조각에 젤라틴 스폰지의 조각 크기에 비슷한 잘라. 집게를 사용 하 여 간의 컷된 부분에 스폰지를 삽입 합니다.</li>
	<li>집게와 장소에 스폰지를 보유 하 고 그것의 표면에 고착 하 고 hemostasis 달성 때까지 간 접촉을 유지.</li>
	<li>적절 한 관으로 간 생 검 조각 장소 (즉, 동결, 정착 액, 등.).</li>
	<li>부드럽게 하도록 스펀지를 방해 하지 않는 복 부 구멍으로 다시 간 장소.</li>
	<li>5-0 코팅된 흡수 봉합 시작 하 고 끝나는 전체 스퀘어 매듭으로 복 벽을 봉합.</li>
	<li>7mm 상처 클립 (또는 스테이플) 피부를 닫습니다.</li>
	<li>절 개의 완전 한 폐쇄는 되도록 상처 클립을 검사 합니다.</li>
	<li>코 콘에서 마우스를 제거 하 고 온수 표면에 깨끗 한 케이지를 넣습니다.</li>
	<li>장소 악기 구슬 소독 기 쥐 사이 10-20 미에 대 한 모든 유기 물질을 제거 하 여 유리 구슬 소독 기에 배치 하기 전에 멸 균 식 염 수를 사용 하 여 계기에서 한다 다는 것을 확인 하십시오.</li>
</ol>4. 수술 치료
<ol><li>의식 회복 자체를 마우스 오른쪽 수 있습니다 때까지 마우스를 모니터링 합니다.</li>
	<li>수술 후 관찰 기록 하 고 매일 dehiscence에 대 한 마우스를 확인.</li>
	<li>Buprenorphine의 두 번째 및 세 번째 복용량 관리 (0.05-0.1 mg/kg) 피하 6-8 시간 수술 후 및 다시 수술 24 시간 후.</li>
	<li>수술 후 7-10 일에 상처 클립을 제거 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Brunt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+%28NAFLD%29+activity+score+and+the+histopathologic+diagnosis+in+NAFLD%3A+distinct+clinicopathologic+meanings%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings.</a> Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).</li>
<li>Brunt, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Pathology of nonalcoholic fatty liver disease.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).</li>
<li>Kleiner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+histological+scoring+system+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.</a> Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).</li>
<li>Diehl, A. M., Cause Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis%2C+and+Treatment+of+Nonalcoholic+Steatohepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li>
<li>Golabi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+complications+and+challenges+in+nonalcoholic+steatohepatitis+screening+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis.</a> Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).</li>
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<li>Kristiansen, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obese+diet-induced+mouse+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis-tracking+disease+by+liver+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Obese diet-induced mouse models of nonalcoholic steatohepatitis-tracking disease by liver biopsy.</a> World Journal of Hepatology. 8 (16), 673-684 (2016).</li>
<li>Trevaskis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon-like+peptide-1+receptor+agonism+improves+metabolic%2C+biochemical%2C+and+histopathological+indices+of+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).</li>
<li>Tolbol, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+and+hepatic+effects+of+liraglutide%2C+obeticholic+acid+and+elafibranor+in+diet-induced+obese+mouse+models+of+biopsy-confirmed+nonalcoholic+steatohepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).</li>
<li>Clapper, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+mouse+model+of+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis+reflecting+clinical+disease+progression+and+methods+of+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).</li>
<li>Armstrong, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liraglutide+safety+and+efficacy+in+patients+with+non-alcoholic+steatohepatitis+%28LEAN%29%3A+a+multicentre%2C+double-blind%2C+randomised%2C+placebo-controlled+phase+2+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study.</a> Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).</li>
</ol>

S.O. C.R. 있으며 현재 직원 및 주주 MedImmune/아 스 트 라의. JLT은 직원 주주 MedImmune/아 스 트 라의 당시이 실험을 실시 했다.

여기 우리 마우스 간 생 검 절차 처음 추 외10, 설명 하 고 내 쉬, 이전 보고서6,9와 비슷한의 마우스 모델에서 자사의 유틸리티를 예증 하는 세부 사항에 설명 합니다. 간 생 검 절차는 내 쉬 형 사전 및 임상 치료에서 비슷한 방식으로 후 처리를 평가 하기 위한 유용한 도구입니다. 생 검 수 있습니다 직접 비교를 위해 각 주제에 대 한 즉, 두 시간 포인트 같은 마우스를 사용할 수 있습니다. 우리는 또한 변환의 가능성을 보여 줍니다. 생 검에서 입증 된 내 쉬 과목의 임상 실험에서 liraglutide 우리의 연구에서 우리는 향상 된 NAS에 대 한 66% 응답 속도 관찰 하는 반면 NAS에 39% 응답 속도 개선 (환자)을 elicited. 또한, 환자의 26% 악화, 대 14%와 36% 위약 팔에 각각119% 향상 된 섬유 증 점수를 했다. 우리의 연구에서 liraglutide 치료 17% 향상 속도 관찰합니다. 이러한 비교 기준 간 생 검의 힘을 강조 하 고 치료의이 클래스에 대 한 잠재적인 변환 이해를 적어도 확인 합니다.
그것은 제대로 조직학 특징을 분석 하는 생 검 절차 중 간 조직의 충분히 큰 조각 수확 중요 하지만 또한 너무 큰 간 간 기능 손상에 한 조각의. 이 수술 사망률 0 관찰 그리고 정상적인 식사 행동의 재개와 함께 1 일 이내 동물 완벽 하 게 복구 된. 따라서, 생 검 및 개입 연구의 시작 사이의 시간 동물 복구 하지 제한 이지만 샘플 처리, 분석, 및 후속 랜덤 시간에 의해 가능성이.
개입 마우스를 완벽 하 게 유도 하는 AMLN 내 쉬 다이어트의 결과로 간 섬유 증의 어떤 정도 개발 하지 않았다를 제외를 우리의 연구에 있는 가변성을 감소 도움이 되기 전에 섬유 증의 확인의 방법으로 간 생 검 절차를 활용 합니다. 또한, 터미널 간 샘플 및 내 쉬 점수 반대만 가능한 내 쉬 개선 개입의 영향을 이해 하는 우리의 기능 향상. 때까지 새 비-침략 적 기술을 더 탐험 널리 허용, 간 생 검은 유일한 내 쉬를 결정 하는 방법 입증 된.

무알코올 steatohepatitis (NASH) 진보적인 간 질병, 그리고 무 알콜 지방 간 질병 (NAFLD), 비만과 2 형 당뇨병의 그것의 협회 때문에 점점 유행 되 고 있는의 더 심각한 형태 이다. NAFLD/NASH, 또는 승인 된 생체 쉽게 질병의 진행을 평가에 대 한 승인된 없는 요법이 있다. 내 쉬 진단 조직학 염증, 평가 하 여 간 지질 (steatosis), 열기구, hepatocyte 및 섬유 증1,2,,34를 초과. 임상 시험에서 이러한 끝점 간 샘플 수집, 생 검을 통해 두 번째 간 생 검에서 일정 치료 기간 후에 연구 전에 평가 됩니다. 따라서, 테스트 에이전트의 효율성 평가 과목에 간 병리학에서 변화를 통해 이전 식별 계량 (즉, 생 검-입증 된) 치료 그룹에 무작위로 내 쉬. 이 같은 더 끝점은 잠재적인 내 쉬 치료제 전 임상 연구, 하지만 안락사 쥐에서 그리고 이렇게 효능 기준선 및 무 능력의 정도 대 한 이해 없이 터미널 조직에만 평가 하는 설치류 모델에서 자주 사용 제어 하려면 초기 질병 상태 치료 그룹 간의 차이 대 한.
NAFLD와 성인의 25% 상승된 한 혈 청 aminotransferase 레벨에 따라 내 쉬를 추정은, 비록 조직학 증거4이외의 내 쉬를 확인 없습니다 대체 확실 한 방법이 있다. 비 침 투 적인 방법, 방사선 modalities (초음파, 컴퓨터 단층 촬영 및 자기 공명 영상) 등 간 steatosis 감지 하도록 개발 되었습니다 하지만 그 방법을 내 쉬를 진단 하거나 섬유 증의 결정 수 없습니다. 일시적인 elastography는 유망한 비-침략 적 형식 간 강성을 측정 하기 위한 제공 합니다. 그것은 차별화 섬유 증 단계에서 정확 하 게 표시 되었습니다. 그러나, 정확도 더 높은 몸 질량 색인 (BMI)와 지방 조직 감소합니다. 5 이것은 NASH 환자 비만의 대다수 때문에 문제 이다. 이러한 방법의 임상 관련성 넘어 이러한 형식은 전 임상 연구에 활용 됩니다.
이 극복 하기 위해 닥터 조나단 로스의 연구 그룹 내 쉬6,,78의 Amylin 내 쉬 (AMLN) 마우스 모델에서 간 생 검 절차를 구현 하는 첫번째 이었다. 그들은 내 쉬 질병의 학위와 함께 생 검 및 대사 질환의 예측 타당성을 설명합니다. 내 쉬의 AMLN 모델에서 간 생 검 절차 및 치료 설정에서 특히 liraglutide의 효능을 평가 하기 위해 그 유틸리티 여기 우리가 자세히 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Henry Schein</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>5-0 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>J834G</td><td></td></tr><tr><td>7 mm 상처 클립</td><td>Reflex</td><td>203-1000</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 젤라틴 스폰지 (GelFoam)</td><td>Pfizer</td><td>09-0353-01</td><td>압축, 모든 크기의</td></tr><tr><td>알코올 준비 패드</td><td>VWR</td><td>75856-902</td><td></td></tr><tr><td>동물 가위</td><td>Oster</td><td>78005010002</td><td>사이즈 40</td></tr><tr><td>블레이드 인공 눈물</td><td>Henry Schein</td><td>048272</td><td>관</td></tr><tr><td>부프레노르핀 (부프레넥스)</td><td>Reckitt Benckiser&nbsp;</td><td>NDC 12496-0757-5</td><td></td></tr><tr><td>요오드 준비 패드</td><td>Nice Pak Products</td><td>C12400</td><td></td></tr><tr><td>멸균 드레이프</td><td>도둑</td>질 <td>50981</td><td></td></tr><tr><td>수술 장갑</td><td>Medline</td><td>54720</td><td></td></tr></tbody></table>

무알코올 steatohepatitis (nash) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

무알코올 steatohepatitis (NASH)의 치료에 대 한 치료를 평가 하는 임상 시험 관련 기준 및 연구 간 생 검, 그리고 질병 끝점, 종종 개선, 각 치료 팔의 %로 반영에 있는 개선의 평가의 끝 악화 또는 변하지 않게 남아 있었다. 상 상속 내 쉬 요법에 대 한 전통적인 전 임상 설치류 연구 종종 모르고 간 질환/내 쉬 존재 같이 쉽게 측정 가능한 끝점에 치료 그룹 randomizing 대신 치료 개입의 시작의 수준에 의해 제한 됩니다. 몸 무게, 신진 대사 상태 또는 유사한. 여기, 다이어트 유발 된 내 쉬 마우스 모델에서 섬유 증을 전시 하지 않는 마우스를 제외 처리 그룹 사이 유사한 섬유 증과 동물 동등 하 게 배포 하 고 초기 간 질환의 평가 대 한 간 생 검 기술을 설명 합니다. 이 수준은 다음 vivo에서 약리 효과 대 한 진정한 이해에 대 한 터미널, 사후 개입 수준 비교 될 수 있다 따라서 더 정확 하 게 임상 시험 디자인 전략을 반영 하 고. 마우스는 제대로 취 하 고 살 균 조건을 사용 하 여 수술에 대 한 준비. 작은 절 개는 복 부 상단에 고 간 왼쪽된 측면 엽 노출. 간의 수술로 제거 하 고 비슷한 크기의 조각을 흡수 젤라틴의 어떤 출혈을 멈추게 하는 그 자리에 들어가게 된다. 마우스는 수술 봉합 하 고 붙인 폐쇄 하 고 1 일 이내 다시 정상으로 회복 됩니다. 전체 프로세스는 마우스 마다 5-10 분 걸립니다. 여기 우리는 글 루카 곤 같은 펩 티 드-1 (GLP-1) 수용 체 주 작동 근 liraglutide 쥐에 내 쉬 끝점에의 영향을 평가 하기 위해 사전 연구 생을 활용 하 여이 절차의 유틸리티를 예증.

이 연구를 위해 쥐 치료 그룹에 무작위로 했다 (n = 12/그룹) 사전 연구 생 증 등급 및 몸 무게에 따라. 마우스 관리 되었다 차량 (PBS) 또는 liraglutide (nmol/5kg) 42 일 (차량 또는 복합 관리 10 mL/kg 피하, 일단 매일 볼륨을 복용량). 42 일에 쥐 비 금식 상태, 간 excised 및 조직학에 대 한 처리 (CO2 흡입)를 통해 안락사 되었다.
생 검 및 터미널 간 조각 하룻밤 10% 포 르 말린, 고정 했다 다음 hematoxylin 및 오신, 시리우스 레드, 표준 프로토콜9통해 얼룩 처리 되 고 포함 된 파라핀. 조직 섹션 내 쉬 활동 점수 (NAS) 시스템1,2에 따르면 병리학 자에 의해 멀게 방식에서 평가 됐다. NAS는 앞에서 설명한9steatosis, lobular 염증 및 hepatocyte 열기구 (0-3의 점수를 주어진 각 매개)에 대 한 질병의 정도 반영 합니다.
간 생 검을 허용 기준 (전 생 검) 섬유 증 점수에 대 한이 연구의 디자인으로 통합. 총 118 쥐 내 쉬 다이어트의 26 주 후 biopsied 되었고 간 섬유 증 및 steatosis 각 생 검 (그림 1)에 대 한 득점 했다. 이러한 118 마우스의 49 마우스는 낮은 섬유 증에 따라 제외 된 (0의 점수), 높은 섬유 증 (비정상적인 병 리 전시 4의 점수), 비정상적인 체중 감소 및 상처 치유. 69 마우스에 대 한 허용이 제외 기준 연구 그룹으로 할당 하 고 내 쉬 형 개선 치료 (그림 1) 보살을 왼쪽.
마우스는 6 주 동안 차량 또는 GLP 1R 주 작동 근 liraglutide (5 nmol/kg)로 치료 했다. 차량 처리 그룹에서 1 마우스 전시 악화 섬유 증 및 4 쥐 악화 NAS 점수를 보였다 (그림 2A-B). Liraglutide 치료 증 (그림 2C)의 전반적인 개선, 치료 그룹 개선의 17%와 변경 되지 않은 나머지 83% 연관 되었다. 마찬가지로, liraglutide 치료 향상 전반적인 NAS (그림 2D) 점수, 그룹의 66% 변동 NAS 점수와 33% 향상 된 데.
또한, liraglutide 치료 염증 개선, 그룹의 75%와 낮은 염증 점수 및 25% 변경된 (그림 3B)을 남아 있었다. 차량 치료 악화 염증, 더 높은 염증 점수를 갖는 그룹의 17%와 83% 변하지 않게 남아 있었다 (그림 3A). 베이스 라인 끝에서 변하지 않게 남아 있었다 steatosis 점수 모두 차량 및 liraglutide 처리 그룹 (그림 3A, B)에 연구. 염증 및 열기구 매개 변수 개별 마우스도 (그림 3C-F)을 표시 됩니다에 대 한 후 생 검 비교 대 사전.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig1.jpg"> 그림 1: 사전 심사 간 생 검 섬유 증 및 NAS 점수 . (A) 섬유 증, 간 생 검을 통해에 대 한 검사 했다 모든 118 쥐의 표현입니다. (B 와 C) 표시 초기 섬유 증 및 NAS 점수, 각각, 후 자격이 쥐 연구 그룹으로 분류 했다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig2.jpg"> 그림 2: 섬유 증 및 NAS 점수, 사전 생 검 및 사후 개입. 차량 (A, C) 또는 liraglutide 처리 (B, D) 마우스, 기준선 간 생 검 끝에서 측정에 대 한 백분율 응답자 분석 연구 간 섬유 증 단계 (A, B)에 대 한 샘플의 및 NAS (C, D). 각 그룹에 대 한 사전 연구에서 변경 후 연구 생 검 선으로 표시 됩니다. 각 단계 마다 득점 포인트는 약간 동물의 시각적 분리 수 있도록 이동,이 시각화 용도로 점수에 어떤 차이 반영 하지 않습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig3.jpg"> 그림 3: Steatosis, 염증 및 열기구, 전 생 검 및 사후 개입. 차량 (A, C, E) 또는 liraglutide 처리 (B, D, F) 쥐, 기준선 간 생 검 끝에서 측정에 대 한 백분율 응답자 분석 연구 간 샘플 steatosis의 점수 (A, B), (C, D) 염증과 열기구 (E, F). 각 그룹에 대 한 사전 연구에서 변경 후 연구 생 검 선으로 표시 됩니다. 각 단계 마다 득점 포인트는 약간 동물의 시각적 분리 수 있도록 이동,이 시각화 용도로 점수에 어떤 차이 반영 하지 않습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

간 생 검 임상 설정에서 무알코올 steatohepatitis (steatosis, 염증, 열기구, hepatocyte 및 섬유 증)의 단계를 평가 하는 데 사용 됩니다. 여기, 우리는 평가 방식으로 더 많은 치료제의 임상 시험 정렬 있도록 조직학 분석을 위해 사용 될 수 있는 쥐에 지속 가능 간 생 검을 보여 줍니다.

무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

비알코올성 염간염 또는 NASH를 가진 마우스에 있는 이 생존가능한 간 생검 절차는 NASH가 없는 동물의 배제 및 내정간섭에 대한 반응의 정확한 측정을 둘 다 허용합니다. 이 절차는 간과의 사후 치료 병리학을 비교하고 약물 효능의 보다 정확한 평가를 허용하는 NASH 연구를 위한 임상 시험 설계를 밀접하게 모방합니다. 간 엽을 노출하는 것은 처음에 도전이 될 수 있습니다.손가락이나 면에 기울어진 어플리케이터로 조직을 먼저 노출하여 가장 적합한 것을 찾아보십시오. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 1 - 2 센티미터, 세로 복부 피부 절개는 즉시 심경화 과정과 마취 마우스의 왼쪽에 약간 caudal합니다. 집게와 가위를 사용하여 복벽이 노출되고 간이 근육 조직 아래에 시각화 될 때까지 피부를 해부하십시오.멸균 메스 블레이드를 사용하여, 복부 벽에 1-2센티미터 절개를 하여 간 좌측 측삭 엽을 노출시키고, 왼쪽 측면 엽 아래에 멸균 면봉을 놓아 절개를 통해 노출되는 부분을 부드럽게 추출한다. 멸균식 식염수에 흠뻑 젖은 거즈 조각을 노출된 엽 아래에 놓고 멸균 가위를 사용하여 추출된 간에서 30-50밀리그램의 쐐기 모양의 조직을 소비합니다. 간 웨지 조각과 비슷한 크기의 흡수성 젤라틴 압축 스폰지 조각을 자르고 멸균 집게를 사용하여 스폰지를 간 절단 부위에 삽입합니다.젤라틴이 간 표면에 부착될 때까지 집게와 함께 스폰지를 제자리에 고정하고 혈청은 간 생검을 다운스트림 분석을 위한 적절한 용기에 넣기 전에 달성됩니다. 간을 복부로 부드럽게 돌려보내 스폰지를 방해하지 않도록 주의하고, 전체 정사각형 매듭으로 시작하고 끝나는 것은 5-0 코팅 된 흡수성 봉합사로 복부 벽을 봉합합니다. 그런 다음 7mm 상처 클립으로 피부를 닫고 배치 후 완전한 폐쇄를 확인하고 마우스를 완전한 회복이 될 때까지 모니터링하여 가열 된 표면의 깨끗한 케이지로 되돌릴 수 있습니다.이 대표적인 실험에서, 118 마우스는 NASH를 유도하기 위하여 지방, 과당 및 콜레스테롤에서 높은 관습 규정식에 29 주 후에 생검되었습니다. 섬유증과 스테토시스의 수준은 각 생검에 대해 다음 득점했다. 마우스는 저또는 높은 섬유증과 비정상적인 체중 감소 또는 상처 치유에 기초하여 연구에서 제외되었고, 나머지 마우스는 6주 동안 차량 또는 글루카곤 과 같은 펩티드-1 수용체 작용제 리라글루티드로 치료되었다.차량 처리 군에서, 1개의 마우스는 섬유증에 있는 증가를 보여주었고 4개의 마우스는 NASH 활동 점수에 있는 증가를 보여주었습니다. Liraglutide 처리는 섬유증의 전반적인 개선과 연관되었습니다, 와 17% 치료 단 개선 및 83% 변경되지 않은 남아. 마찬가지로, 리라글루티드 치료는 전체 NASH 점수를 향상, 와 함께 66% 향상 된 NASH 활동 점수를 나타내는, 33%는 변경되지 않은 남아.또한, liraglutide 치료는 염증을 개선, 와 함께 75% 치료 후 낮은 염증 점수를 가진 그룹의, 차량 치료 동물 염증의 증가 경험 하는 동안. Steatosis는 고뇌증 처리에 의해 영향을 받지 않았고, 개입 전후에 두 그룹에서 변경되지 않았습니다. 간을 과도하게 손상시키지 않도록 주의하여 필요에 맞게 적절하게 분석할 수 있도록 하십시오.이 절차는 NASH 간에서 새로운 치료법의 전 및 후 치료 효과를 비교하여 임상 시험 설계를 모방하는 데 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

여기에서는 간 지방증의 생체 내 및 체외 모델을 생성하고 지방질 표현형 및 관련 생리학적 매개변수를 분석하기 위한 최적화된 방법에 대해 설명합니다.

의 최적화 분석<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 체외</em&gt; 간 지방증

간단 하 고 신뢰할 수 있는 식이 유발 설치류 동물 모델에 대 한 무 알콜 지방 각 막 염 (내 쉬)에 대 한 설명, 동물의 비 SPF 주택을 통해 달성 하 고 특정 높은 뚱뚱한 다이어트의 관리. 우리는 마우스를 환경 세균에 노출 시 킴으로써 인간 면 역학적 조건을 다시 캡처하는 간 및 지방 면역 세포 하위 세트의 식별을 설명 합니다.

타입-2 당뇨병과 관련 하 여 무 알콜 수 막 염을 위한 진보 된 뮤 린 모형

리보솜 친화도 정제(TRAP)를 번역하면 세포 유형별 번역 mRNA를 신속하고 효율적으로 분리할 수 있습니다. 여기서, 우리는 간 재모독 및 TRAP의 마우스 모델에서 유체역학적 꼬리 정맥 주입을 결합하여 간세포를 재채우는 발현 프로필을 검사하는 방법을 입증한다.

마우스 간에서 세포 유형 별 유전자 발현 프로파일링

이 프로토콜은 비침습적으로 비 알코올 성 지방 간 질환의 설치류 모델에서 간 조직 변화를 관찰하고 정량화하기 위해 향상된 초음파 기술의 사용을 설명합니다.

NAFLD/NASH의 쥐 모형에 초음파 및 전단 파 단층 사진 의 응용

현재 프로토콜은 비알코올성 지방간염(NASH) 동안 세포외 기질(ECM) 리모델링의 역학을 시각화하기 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 구축하기 위해 간 상피내 관류/탈세포화 및 이광자 현미경 방법을 최적화합니다.

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

이 프로토콜은 포털 정맥 관류를 통한 대사 연구를 위해 손상되지 않은 마우스 간을 절제하는 간단한 방법을 설명합니다.

Ex Vivo 마우스의 포털 정맥을 통한 간 관류

지질이 함유된 간세포는 간 재생에 내재되어 있지만 일반적으로 밀도 구배 원심분리 시 손실됩니다. 여기에서 우리는 지방성 간세포를 유지하는 최적화된 세포 분리 프로토콜을 제시하여 마우스에서 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 대표적인 집단을 생성합니다.

생쥐의 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 분리

단계적 간절제술(ALPPS)을 위한 간 분할 및 문맥 결찰술의 연관성은 1단계 수술 후 몇 주 후에 놀라운 간 재생을 초래하는 것으로 나타났습니다. ALPPS를 받은 동물 모델은 잠재적인 간 재생 능력을 탐색하고 유리한 임상 결과를 달성하기 위해 개발되었습니다.

현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델

부분 2/3(66%) 간절제술의 마우스 모델은 문헌에 잘 설명되어 있지만, 간 이식 후 소형 증후군을 모방한 더 확장된 간절제술은 거의 사용되지 않았습니다. 우리는 건강한 마우스에서 약 50%의 수술 후 치사율을 초래하는 마우스 모델에서 확장된 78% 간 절제술 절차에 대해 설명합니다.

마우스 수술 모델에서 확장된 78% 간절제술

대사 기능 장애, 간 유전자 발현 변화 및 진행성 섬유증 3기로 진행되는 섬유증을 포함하여 인간 MASLD와 유사한 간 조직병리학적 변화를 동반한 대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환(MASLD)의 마우스 모델. 이 모델은 MASLD 병태생리학 연구 및 새로운 치료법의 전임상 연구에 사용할 수 있습니다.

섬유증을 동반한 대사성 기능 장애 관련 지방성 간 질환의 마우스 모델

이 프로토콜은 간별 세포 형태를 온전한 간 조직에서 시각화하고 모델링하기 위한 포괄적인 영상 파이프라인을 제공합니다. 이 접근법은 마우스 유전학을 이용한 형광 표 지, 현장 간 관류 기반 조직 준비, 그리고 광학 투명성을 달성하기 위한 수정된 iDISCO 조직 클리어링 방법을 결합합니다.

간 섬유증 마우스 모델에서 간 별형 세포 형태 매핑

학습하세요 생존 가능한 간 생검 기법을 사용하여 쥐의 비알코올성 지방간염(NASH)에서 치료제 효능을 평가하는 방법을. 이 절차는 임상시험 설계를 모방하여 약물 효과를 정확하게 측정합니다.

무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의

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